Management Kolom Hplc
-
Upload
la-ode-muhammad-fitrawan -
Category
Documents
-
view
294 -
download
1
Transcript of Management Kolom Hplc
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 1/20
ManajemenKolom HPLC
ManajemenKolom HPLC
Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 2/20
2HPLC KOLOM
Literatur
Literatur
Ahuja, S. and. Dong, M.W., 2005, Handbookof Pharmaceutical Anal!i! b HP"#,
$olume %, Se&aration Science and
'echnolog, (l!e$ier Academic Pre!!,Am!terdam.
Snder, ".)., *irkland, +.+., and lajch, -/,Practical HP"# Method De$elo&ment,Second (dition, +ohn Wile Son!
1nc., e3 4ork.
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 3/20
3HPLC KOLOM
Jumlah Lempeng Teoritis (N)
Jumlah Lempeng Teoritis (N)
meru&akan karakteri!tik &enting !uatukolom
dideni!ikan !ebagai6
7 kemam&uan kolom untuk mengha!ilkan
&uncak kromatogram ang tajam, !em&ituntuk menca&ai &emi!ahan dengan baik,
dengan nilai α kecil
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 4/20
4HPLC KOLOM
Penggantian Kolom
Penggantian Kolom
*olom haru! diganti a&abila6
7 tidak bi!a lagi menunjukkan kinerja ang
diinginkan7 nilai berkurang 508
7 nilai re!olu!i tinggal 9 nilai original
: )! ; 2 )! ; -,5 <7 nilai a!imetri -,5
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 5/20
5HPLC KOLOM
Pencatatan Kolom
Pencatatan Kolom
Pencatatan kolom !ecara !i!temati!dilakukan dengan cara6
7 kolom ang dio&era!ikan dengan bufer
di&i!ah dengan ang tan&a bufer
7 menacatat jumlah &enginjek!ian &ada
kolom ang digunakan
7 u!ia kolom berki!ar antara = > 2? bulan
atau -000 > =000 &enginjek!ian
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 6/20
6HPLC KOLOM
Kolom
Kolom
Performance kolom menurun !eiring denganlamana 3aktu &enggunaan, ang ditandai
dengan &eningkatan @back&re!!ure dan
lebar &uncak kromatogram
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 7/20 7HPLC KOLOM
Pengoperasian KolomPengoperasian Kolom
Bntuk kolom @)e$er!ed7Pha!e :#C, #-C,fenil, dll<, gunakan &etunjuk berikut6
7 !im&an kolom dalam a!etonitril atau metanol
atau cam&uran air dan &elarut organik
7 jangan mengo&era!ikan kolom melebihi &H
ang di&erbolehkan untuk kolom berba!i!
!ilika, di!arankan &H 2,5 > CE.
&H F C !ilika terlarut
&H G 2 bonded !ilika terhidroli!i!
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 8/20 8HPLC KOLOM
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 9/20 9HPLC KOLOM
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 10/20 10HPLC KOLOM
+angan mengo&era!ikan kolom melebihi bata!!uhu ang diijinkan, bia!ana %0 > C0 0#
tan&a kon!ulta!i &enjual kolomE
Pro!edur regenera!i atau @back7u!hing mungkin da&at mem&erbaiki !ebagian
&erformance kolom.
1ngat bah3a, '1DA* !emua kolom da&at diback7u!hed, karena @the inlet frit! mungkin
memiliki ukuran &ori ang lebih be!ar untuk
meminimalkan ma!alah &enumbatan
Pengoperasian KolomPengoperasian Kolom
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 11/20 11HPLC KOLOM
Kolom (fase diam)Kolom (fase diam)masuk
keluar
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 12/20 12HPLC KOLOM
Selalu u!h aliriE kolom dengan &elarut kuat!trong !ol$entE !e&erti metanol !ebelum
digunakan untuk mengelimina!i !etia& anlit
ang tertahan kuat
+angan &ernah biarkan kom&onen bufertertinggal dalam dalam &om&a atau kolom,karena kom&onen bufer da&at mengenda&
dan menimbulkan keru!akan
Pengoperasian KolomPengoperasian Kolom
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 13/20 13HPLC KOLOM
Kunci Suses pada HPLCKunci Suses pada HPLC
-. Pelihara dan kalibra!i !i!tem HP"# !ecara&eriodik. Pemeliharaan &re$entif di!arankan
dilakukan oleh tekni!i ahli !etia& tahunan dan
kalibra!i !i!tem dilakukan !etia& % bulan
2. Perik!a kinerja !i!tem menggunakan !am&el!tandar dengan &arameter ang didokumen7
ta!ikan
=. Selalu lakukan $erika!i !ebelum menganali!i!!am&el bah3a tekanan &om&a dan ba!eline
adalah normal
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 14/20
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 15/20 15HPLC KOLOM
+ika &elarut !am&el akhir lebih kuatdibanding fa!e gerak, injek!ikan $olumeang lebih kecil untuk meminimalkan di!tor!i
&uncak kromato7gram
Perik!a &om&a dan cuci kolom dengan&elarut ang kuat !ebelum menganali!i!
!am&el
#uci kolomJ!i!tem !ebelum mematikan alatHP"#
Kunci Suses pada HPLCKunci Suses pada HPLC
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 16/20
16HPLC KOLOM
Pencucian KolomPencucian Kolom
Ier!ihkan kolom dengan !ol$en ang kuat.
7 Bntuk kolom )e$er!ed7&ha!e6
gunakan cam&uran %8 diklorometan dan ?8
metanol dengan 0,-8 amonium hidrok!ida
7 Bntuk kolom ormal7&ha!e6
gunakan metanol
Pada keadaan ang !ulit6
7 lakukan @back7u!hing kolom dengan kece7
&atan alir rendah : bila di&erbolehkan KKK <
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 17/20
17HPLC KOLOM
Bntuk &encucian kolom, gunakan aliran 0,5m"Jmin atau kurang untuk mencegah tekanan
berlebih
+ika kolom !ele!ai dio&era!ika dengan fa!egerak ang mengandung bufer, cucilah dengan
air !ecuku&na, kemudian dengan metanol
Bntuk menghilangkan bahan7bahan angter!era& dari bagian ata! kolom, cucilahdengan tetrahidrofuran atau koloroform
Pencucian KolomPencucian Kolom
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 18/20
18HPLC KOLOM
+ika kolom !ele!ai dio&era!ikan menggu7nakan fa!e gerak ang ditambah6
7 trietilamin
7 tetarabutilamonium
maka lakukan6
7 &encucian kolom dengan cam&uran antara
metanol dan 0,058 a!am fo!fat 50 6 50E, baru kemudian dengan metanol
- Jangan aliri kolom hanya dengan air saja !!!
Pencucian KolomPencucian Kolom
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 19/20
19HPLC KOLOM
Pada normal &ha!e6
7 #ucilah kolom dengan i!o&ro&anol, dengan
aliran 0,5 m"Jmin untuk mencegah tekanan
berlebih
Pencucian KolomPencucian Kolom
7/23/2019 Management Kolom Hplc
http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 20/20
20HPLC KOLOM