Criopreservação de espermatozóides eqüinos

comparando duas curvas de congelamento combinadas

com diluentes comerciais: uma análise laboratorial

Cryopreservation of equine spermatozoa comparing

different freezing rates combined with commercial

extenders: laboratorial analysis

Terraciano et. al; Ciência Rural, 2008

Introdução

BiotécnicasReprodutivas

Preservação e armazenamento

de sêmen

Animais de alto valor zootécnico

Transporte de sêmen

Seguro biológico

Introdução

• Bovinos

Baixos índices de fertilidade

• Lesões celulares

• Desidratação

• Cristais

Curva de congelamento • Leite x ovo

• Amida x glicerol

Modificações

(PARKS & GRAHAM, 1992)(MOORE et al., 2006) (PALMER 1984, VIDAMENT et al.,

2001, ALVARENGA et al., 2005)

Objetivo

Duas curas

Dois diluentes

Estruturais e funcionais

Material e Métodos

Material e Métodos

Puro Sangue Inglês6 anos de idade

Mestiço30 anos de idade

- A cada 3 dias- 10 coletas - Outubro – Dezembro 2006

1ml congelamento

Gel

Material e Métodos

20 µl Motilidade progressiva Motilidade total

Contrate de fase 200x

Material e Métodos

Integridade física da membrana

400 µl sêmen

3 µl PI

2 µl CFDA

- 37°C- 8 minutos

Fluorescência 1000x 100 SPTZ Verde

Material e Métodos

Integridade funcional da membrana

Teste hiposmótico

100mOsmol kg-1

400 x

Enrolamento de cauda

Material e Metodos

FR-1®

Botu-Sêmen®

Botu-Sêmen®

FR-1®

650 G10 min.

- 0,5 ml

A B

Material e Métodos

Curva A

24°C 5°C

(0,3°C min-1)

5°C a -15°C

(10°C min-1)

-15°C até -100°C

(-25°C min-1)

-100°C

(30°C min-)

Palhetas horizontalmente

Estante 3cm acima do nitrogênio

20 minutos imediatamente

-70°C min-1

Curva B

(SPRECKELS, 1994) (KNEIßL, 1993)

Descongeladas a 37°C

Motilidade total Motilidade progressiva Integridade da membrana plasmática Funcionalidade da membrana

plasmática

Material e Métodos

Analise de variância

Teste de Turkey 5%

Minitab 14.1

Analise estatística

Resultados

Parâmetros Avaliados Médias

Motilidade Progressiva 14,2% 6,9

Motilidade Total 70% 18,2

Integridade física da membrana 81,9% 8,9

Integridade funcional da

membrana

71,5% 10,1

Resultados

Quadro 1. Médias dos parâmetros analisados para o sêmen fresco

Resultados

Figura 1. Valores da média e desvio padrão da motilidade progressiva, motilidade total, integridade e

funcionalidade da membrana espermática do sêmen criopreservado com curva automatizada (A) e curva não-

automatizada (B), e os diluentes Botucrio e FR-5. * e # significam diferença significativa entre os diluentes

(P<0,05); & significa diferença significativa entre as curvas de congelamento (P<0,05).

Criopreservação de espermatozóides eqüinos

comparando duas curvas de congelamento combinadas

com diluentes comerciais: uma análise laboratorial

Cryopreservation of equine spermatozoa comparing

different freezing rates combined with commercial

extenders: laboratorial analysis

Terraciano et. al; Ciência Rural, 2008