LASER CAPTURE MICRODISSECTION (LCM). Microdissecção a Laser 1996 – National Cancer Institute dos...
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LASER CAPTURE MICRODISSECTION (LCM)
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Microdissecção a Laser•1996 – National Cancer Institute dos EUA (Emmert-Buck MR et al, 1996)
•Tornou-se uma ferramenta extremamente importante na pesquisa biológica, potencialmente ampliando o uso de técnicas já existentes de Biologia Molecular.
•Assim, a área de aplicação desta tecnologia reúne vários grupos como: a Patologia, as Neurociências, a Genética, a Botânica e a Medicina Forense entre outras
Leica LMD6000Laser microdissection system
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•Arcturus - PixCell IIe™ LCM Station
Animação 1
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Gravidade
•Lâmina contém um filme transparente termoplástico (ethylene vinyl acetate polymer)
•Laser de dióxido de carbono
Animação2
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Animação 4Animação 3
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Microdissecção a Laser
•Muito preciso,•Sem contato mecânico, •As espécies são coletadas com baixo risco de contaminação
•O contato com o laser preserva a morfologia das células e seu material genético, permitindo análise molecular.
•Extração de populações celulares homogêneas, garantindo que apenas as células de interesse sejam isoladas (células epiteliais, por exemplo)
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Microdissecção a Laser•O material extraído pode ser previamente fixado em parafina (material de arquivo) ou congelado
•TÉCNICAS:•Avaliar a expressão gênica (RNA ou DNA), •Western blotting•Técnicas protêomicas
•Quantidade de material•Extração de RNA, por exemplo de 10 células a 15000 células•50.000 células para análise em gel 2-D •20.000 células para Western Blot
•ISOLAR: •Grupos de células semelhantes, •Estruturas multicelulares•Células únicas•Cromossomos
•IDENTIFICAÇÃO DAS CÉLULAS E/OU TECIDO
•Coloração de rotina HE, AT•Imunocitoquímica,•Imunofluorescencia•DIC (diferencial de contraste de interferencia)
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Dificuldades
• Preservação do material
MORFOLOGIA
INTEGRIDADEDNA,RNA,PROTEÍNAS
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E
ED
Citoquímica de lectina DBA
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http://www.direxlim.fm.usp.br/Coordenador(es) Thais MauadChin Jia LinLuiz Fernando Ferraz da Silva