Kromatografi Lapis Tipis Preparative

download Kromatografi Lapis Tipis Preparative

of 17

Transcript of Kromatografi Lapis Tipis Preparative

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    1/17

    LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA 2

    ISOLASI SENYAWA KIMIA MENGGUNAKAN KROMATOGRAFILAPISTIPIS PREPARATIF PADA FRAKSI DAUN KELOR(Moringa

    oleiferaLam.)ASAL DESAMANGGALUNGKECAMATANMANDALLEKABUPATEN PANGKEP

    Oleh :

    NAMA : ARIN RIZKI TALIBSTAMBUK : 1521!"2KELOMPOK : 2 (DUA)KELAS : C#!ASISTEN : MUS MUALIM$S#F%&'#

    PROGRAM STUDI FARMASILABORATORIUM FARMAKOGNOSIFITOKIMIAFAKULTAS FARMASI

    UNIERSITAS MUSLIM INDONESIAMAKASSAR

    21*

    BAB I

    PENDA+ULUAN

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    2/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    A# L%,%& Bel%-%./

    Kromatografi adalah tehnik untuk memisahkan campuran menjadi

    suatu komponen dengan bantuan dari suatu perbedaan dari sifat fisik

    masing-masing komponen.

    Dari berbagai metode kromatogarfi dapat memberikan suatu cara

    pemisahan paling baik. Karena pemanfaatan yang luas untuk pemisahan

    analitik dan preparatif. Untuk kromatografi analitik dipakai pada tahap

    permulaan pada semua cuplikan, sedangkan kromatografi preparatif 

    hanya untuk fraksi murni dari suatu campuran tanaman.

    Salah satu pendekatan untuk penelitian tumbuhan obat adalah

    penapis senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman. Cara

    ini digunakan metode Kromatografi apis !ipis "K!# untuk

    mengidentifikasi senyawa yang terkandung didalam suatu sampel

    tanaman obat yang nantinya akan diteliti selanjutnya.

    Sifat utama yang terlibat dalam pemisahan secara kromatografi ada

    $ yaitu% ". Kecenderungan suatu molekul untuk melarut dalam cairan

    "kelarutan#, "'#. Kecenderungan molekul untuk melekat pada permukaan

    serbuk halus "adsorpsi, penjerapan# dan "$#. Kecenderungan molekul

    untuk menguap atau berubah kekeadaan uap "keatsirian#.

    !erjadinya pemisahan dikarenakan adanya komponen suatu

    cuplikan yang bergerak dengan jarak yang berbeda akibat adanya

    perbedaan partisi dari komponen yang dipisahkan. (emisahan dan

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    3/17

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    4/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    Moringa oleifera . # dengan menggunkan eluen n-+eksan dan til setat

    reaksi sehingga diperoleh senyawa murni.

    BAB II

    TIN7AUAN PUSTAKA

    A# U&%8%. T'h%.

    1# Kl%0898-%08 (R4l499 et al $ 2)egnum % (lantaeDi)ision % SpermatophytaSubdi)isio % ngiospermaeClassis % DicotyledoneaeSubclassis % Dialypetalae/rdo % hoeadales "0rassicales#1amilia % *oringaceae2enus % *oringaSpecies % Moringa Oleifera

    2# M4&94l4/8

    Kelor "Moringa oleifera# tumbuh di dataran rendah maupun dataran

    tinggi sampai di ketinggian 3 &444 dpl. Kelor banyak ditanam sebagai

    tapal batas atau pagar di halaman rumah atau ladang. Daun kelor 

    dapat dipanen setelah tanaman tumbuh &,5 hingga ' meter yang

    biasanya memakan waktu $ sampai 6 bulan. 7amun dalam budidaya

    intensif yang bertujuan untuk produksi daunnya, kelor dipelihara

    dengan ketinggian tidak lebih dari & meter. (emanenan dilakukan

    dengan cara memetik batang daun dari cabang atau dengan

    memotong cabangnya dengan jarak '4 sampai 84 cm di atas tanah

    "Kurniasih, '4&$#.

    !# N%'% D%e&%h

    http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Moringa%20oleiferahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Moringa%20oleifera

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    5/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    !anaman kelor mempunyai nama lokal yaitu kelor "9awa, Sunda,

    0ali, ampung#, Kerol "0uru#, *arangghi "*adura#, *oltong "1lores#,

    Kelo "2orontalo#, Keloro "0ugis#, Kawano " Sumba#, /ngge "0ima#,

    +au fo "!imor# "liya,'446#.

    ;# K%../%. K8'8%

    Kelor "Moringa oleifera# mempunyai kandungan senyawa

    8":rhamnopyranosylo;y# ben

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    6/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    Salah satu metode pemisahan yang memerlukan biaya paling

    murah dan memakai peralatan sangat sederhana ialah kromatografi lapis

    tipis preparatif "K!(#.Walaupun K!( dapat memisahkan dalam jumlah

    gram,sebagian besar pemakaian hanya dalam jumlah miligram. K!

    preparatif dilakukan dengan menggunakan lapisan tebal "sampai & mm#

    sebagai pengganti lapisan penyerap yang tipis "+arborne, &=>?#.

    Preparatif thin- layer chromatography   "(!C# atau kromatografi

    lapis tipis preparati)e "K!(# merupakan metode isolasi yang sudah lama

    popular karena digunakan secara uni)ersal oleh mahasiswa dan peneliti

    khususnya bahan alam. (opularitas metode ini berkurang setelah muncul

    metode high pressure liquid chromatography  "+(C# dan counter current 

    chromatography "CCC# "2ritter, &==.

    Kromatografi apis !ipis @ preparati)e adalah salah satu metode

    yang paling sederhana dan murah untuk mengisolasi komponen kimia

    dari suatu bahan alam. *eskipun pengerjaannya intensif dan hanya

    sedikit isolate yang diperlukan dari tiap prosedur fraksinasi "usli,'445#.

    (emisahan komponen kimia dengan Kromatografi apis !ipis

    preparati)e pada dasarnya sama dengan K! biasa namun perbedaannya

    ialah K!-preparatif menggunakan lempeng yang besar "ukuran '4 ; '4

    cm dan '4 ; 84 cm# dengan ketebalan 4,5-'mm. Dan sampel ditotolkan

    berupa garis lurus pada salah satu sisi lempeng. (enjerap yang paling

    umum digunakan ialah silica gel 64 dan dipakai untuk pemisahan

    campuran senyawa lipofil maupun senyawa hidrofil "2ritter, &==.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    7/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    1raksi aktif dilarutkan sedikit demi sedikit sebelum ditotolkan pada

    pelat K!(. (elarut yang baik adalah pelarut atsiri "heksan, diklometer, etil

    asetat# karena jika bukan pelarut atsiri akan menyebabkan pelebaran pita.

    Konsentrasi fraksi harus sekitar 5-&4 A. 1raksi ditotol sesempit mungkin

    untuk menghindari pita yang terbentuk. (enotolan dapat dilakukan dengan

    cara "pipa kapiler tetapi baik dengan penotolan otomatis B camay desage#

    atau mikropipet "2ritter,&==.

    (ada K!(, kebanyakan penjerap mengandung indikator 

    flouresensi untuk membantu deteksi kedudukan pita yang terpisah

    sepanjang senyawa tersebut menyerap sinar U "2ritter,&==.

    (ada kromatografi lapis tipis preparatif, cuplikan yang akan

    dipisahkan ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi pelat lapisan besar 

    dan dikembangkan secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga

    campuran akan terpisah menjadi beberapa pita. (ita ditampakkan dengan

    cara yang tidak merusak jika senyawa itu tanwarna, dan penyerap yang

    mengandung senyawa pita dikerok dari pelat kaca. Kemudian cuplikan

    dielusi dari penyerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna untuk

    memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni untuk

    telaah pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan analisis, untuk meneliti

    bahan alam yang la

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    8/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    (engembangan plat K!( biasanya dilakukan dalam bejana

    kaca yang dapat menampung beberapa plat. Keefisienan pemisahan

    dapat ditingkatkan dengan cara pengembangan berulang. +arus

    diperhatikan bahwa semakin lama senyawa berkontak dengan penyerap

    maka semakin besar kemungkinan penguraian "+ostettman, &==5#.

    Dalam perkembangan selanjutnya metode K! tidak hanya

    digunakan untuk mengidentifikasi noda akan tetapi juga untuk mengisolasi

    ekstrak, metode ini kemudian dikenal sebagai K! preparatif. *etode ini

    merupakan salah satu metode yang paling sederhana dan murah untuk

    mengisolasi komponen kimia dari suatu bahan alam. (rinsip kerjanya

    yaitu adsorpsi dan partisi, dengan menggunakan lempeng yang besar "'4

    '4# "2ritter, &==.

    *etode kerjanya meliputi penotolen ekstrak bahan alam dalam

    bentuk pita pada lempeng. +al ini memungkinkang sampel dalam jumlah

    besar dapat muat pada lempeng K!, lempeng dikembangkan dalam

    pelarut yang telah diketahui mampu memisahkan komponen, yang paling

    penting adalah harus digunakan metode deteksi yang tidak merusak

    sampel "7ajib, '4&$#.

    Kromatografi preparatif dipakai untuk memperoleh komponen

    campuran dalam jumlah yang memadai "mg sampai g# dalam keadaan

    murni sehingga komponen itu dapat dicirikan lebih lengkap atau dipakai

    pada reaksi berikutnya "2ritter, &==

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    9/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    *eski banyak terdapat metode seperti yang telah disebutkan di

    atas, terdapat metode lain yang pembiayaannya paling murah dan

    memakai peralatan paling dasar yaitu Kromatografi apis !ipis (reparatif 

    "K!(#. adsorben yang paling banyak digunakan yaitu silika gel yang

    dipakai untuk pemisahan campuran lipofil maupun senyawa hidrofil.

    ketebalan adsorben yang paling sering digunakan ialah 4,5 @ ' mm.

    pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran plat sudah tentu mengurangi

     jumlah bahan yang dapat dipisahkan dengan K!(. Ukuran partikel dan

    porinya kurang lebih sama dengan ukuran tingkat mutu K! "*aston,

    &=>6#.

    BAB III

    METODE PRAKTIKUM

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    10/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    A Al%, %. B%h%.1 Al%,

     lat yang digunakan pada praktikum ini adalah lat penyemprot

    D((+, 0atang pengaduk panjang, Chamber K!(, 2elas ukur,emari

     sam, *istar, (ipa kapiler, dan Sendok besi.

    2 B%h%.

    0ahan yang digunakan pada praktikum ini adalah luminium foil,

    D((+,til setat, 1raksi aktif KKK dan KC, empeng kaca, Kapas, n-

    +eksan, dan tissu.

    B C%&% Ke&6%

    Disiapkan alat dan bahan. Dipilih hasil fraksi yang terelusi dengan

    baik pada kromatografi kolom kon)ensional dan kromatografi kolom cair 

    )akum. Kemudian masing-masing fraksi yang telah dipilih dilarutkan

    dengan eluen dan ditotolkan pada lempeng K!( menggunakan pipa

    kapiler. Selanjutnya dielusi dalam chamber yang berisi eluen n-heksan%etil

    "?%$# yang telah jenuh. Kemudian dibiarkan terelusi, selanjutnya diamati

    penampakan bercak noda pada lampu U '58 dan $66 nm. Dan

    dilakukan uji antioksidan dengan pereaksi D((+.

    BAB I

    +ASIL PENGAMATAN

    A# T%el Pe./%'%,%.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    11/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    F&%-08 7'l%h P8,% W%&.%Pe.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    12/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    lurus pada salah satu sisi lempeng. Dan setelah itu pada bagian langkah

    akhir silica akan dikeruk yang mana disebut sebagai isolate.

    Cara kerja dari metode ini diambil fraksi aktif dari hasil KKK dan

    fraksi aktif dari hasil KC kemudian ditotolkan berbentuk pita garis

    penotolan yang telah dibuat sebelumnya. empeng yang digunakan

    berukuran '4 ; '4 cm. setelah sampel ditotolkan, disemprotkan dengan

    D((+ kemudian dikembangkan dengan eluen kloroform etanol

    ?%$ didalam chamber K!(. Setelah pengelusian, lempeng-lempeng dan

    diaamati di bawah lampu U. Kemudian pita-pita tersebut dideteksi dan

    diberi bawah lampu U. Kemudian pita-pita tersebut dideteksi dan diberi

    tanda kemudian dikeruk yang selanjutnya disebut sebagai isolate.

    Senyawa dideteksi adalah fla)onoid yang ditandai dengan noda yang

    berpendar di bawah U $66 nm

    Dari hasil yang di dapatkan bahwa bahwa fraksi &> pada =%&

    "KKK# dan fraksi 6%8 "KC# merupakan senyawa yang sangat efektif 

    sebagai antioksidan yg ditandai dengan terbentuknya pita berwarna biru

    "U '58# dan warna kuning "U $66# pada lempeng K!( dimana

    senyawa tersebut merupakan isolat murniBtunggal yg nantinya akan

    digunakan pada praktikum K! multi eluen dan dua dimensi.

    K!( memiliki keuntungan yaitu sebagai salah satu metode

    pemisahan yang memerlukan pembiayaan paling murah dan memakai

    peralatan dasar. Sedangkan kerugian K!( yaitu pengambilan senyawa

    dari plat yang dilanjutkan dengan pengekstraksian penjerap memerlukan

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    13/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    waktu lama dan jika senyawa beracun harus dikeruk dari plat akan

    meningmbulkan banyak masalah terus.

    BAB

    PENUTUP

    A Ke08'=l%.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    14/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    0erdasarkan data yg dihasilkan, dapat disimpulkan bahwa fraksi

    &> pada =%& "KKK# dan fraksi 6%8 "KC# merupakan senyawa yang

    sangat efektif sebagai antioksidan yg ditandai dengan terbentuknya pita

    berwarna biru "U '58# dan warna kuning "U $66# pada lempeng K!(

    dimana senyawa tersebut merupakan isolat murniBtunggal yg nantinya

    akan digunakan pada praktikum K! multi eluen dan dua dimensi.

    B S%&%.

      0imbingan dari asisten sangat kami harapkan dalam melakukan

    suatu praktikum agar praktikan dapat mengerjakan praktikum dengan baik

    DAFTAR PUSTAKA

     nonim. '4&6. “Penuntun dan Buku er!a Praktikum "itokimia i#$ . U*I%*akassar.

     liya. '446. Mengenal %eknik Pen!ernihan &ir . Semarang % C neka Ilmu.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    15/17

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    2ritter, roy. &==&. GPengantar kromatografi$' I!0% 0andung.

    usli.'445. GPenuntun praktikum fitokimia #$' aboratorium fitokimiafakultas farmasi U*I% *akassar.

    +ostetmann and *anson,&=>6, C K/*!/21I ((!I1,I!0, 0andung

    Kurniasih. '4&$. hasiat dan Manfaat (aun elor .Jogyakarta% (ustaka0aru (ress

    Krisnadi, . Dudi. '4&$. Kelor Super 7utrisi. embaga Swadaya*asyarakat @ *edia (eduli ingkungan "S*-*(I72#.Kunduran. Jogya.

    *unson, 9ames,., &==&, 7ISIS 1*SI, irlangga Uni)ersity(ress, Surabaya

    7ajib, dkk. '4&$. Penuntun Praktikum "itokimia ##'  1akultas 1armasi

    Uni)ersitas *uslim Indonesia % *akassar.

    7ugraha, ., '4&$. G0I/K!II!S KS!K DU7 K/ "Moringaoleifera# !+D( )schericia coli (7J00 K/I0SI/SIS(D 00IH . 1akultas Kedokteran +ewan., Uni)ersitas Udayana %Denpasar

    oloff, ., +. eisgerber., U. ang., 0. Stimm. '44=. Moringa oleifera*&M ., &?>5. IJ-C+ erlag 2mb+ L Co. K2a, einheim.

    oth, +erman, 9., 0laschike, 2., &=>>, 7ISIS 1*SI, 2adjah *adaUni)ersity (ress, Jogya

    LAMPIRAN

    S-e'% Ke&6%

    Disiapkan alat dan bahan

    Dipilih hasil fraksi yang terelusi baik pada KC dan KKK

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    16/17

         K     K     K

    KCVK 

    Pita

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    Kemudian masing-masing fraksi dilarutkan dengan eluen dan totolkanpada K!( pada sisi yang berbeda "lempeng K!( yang telah dibagi dua

    sisi# menggunakan pipa kapiler 

    Dielusi dalam chamber yang berisi eluen n-heksan %etil asetat ">%'# yang

    telah jenuh

    Diamati penampakan pita yang terbentu pada lampu U '58 dan U $66

    nm

    empeng K!( disemprot menggunakan pereksi D((+ untuk pengujianantioksidan

    Diamati lagi penampakan pita yang terbentuk pada lampu U '58 dan U

    $66 nm

    F4,4 Pe./%'%,%.

  • 8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative

    17/17

    Lempeng Kaca

    KKK 

    KCVK 

    Pita

    KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE

    U !**

    U 25;