ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium

www.eurofins.com

ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske

Laboratorium

Susanne Nielsen

Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009

MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015

2Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009

Source presentation EDR:

Source modification date: 09/06/2009

Hvad er IDF

Standardisering af Mikrobiologiske Metoder

Udvikling af en Analyse Standard

Igangværende og måske kommende projekter

Hvorfor Standardisering

MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015


Source presentation EDR:

Source modification date: 09/06/2009

FIL-IDF: Federation Internationale de Laiterie- International Dairy Federation

Uafhængig, non-profit, non- politisk Forening

Grundlagt i 1903 i Bruxelles i forbindelse med den første Internationale Mejeri Kongres

Arbejdsområder:

Animal health and welfare

Dairy Science and Technology

Economics, Policies and Marketing

Environment

Farm Management

Food Standards

Hygiene and Safety

Methods of Analysis and Sampling

Nutrition


IDF er organiseret i National Kommitéer

Den Danske National Komité’s formål

•er omdrejningspunktet for nationale input til IDF

•viderebringer resultatet af arbejdet i FIL-IDF Danmark

•nominerer repræsentanter til IDF's stående komitéer

•virker til at fremme IDF inden for mejeriindustrien

•er ansvarlig for at formidle det nationale bidrag til IDF's finansiering (via

Mejeriforeningen)

Sekræter for den danske kommitè: Sanne Bastholm Rasmussen [email protected]

PT er 46 lande medlemmer og repræsenteret ved en National Komité

F.eks. Zimbabwe, Mongoliet og Norge

Under National Komitéen er en række arbejdsgrupper

mailto:[email protected]


IDF’s organisation

Science and Programme

Coordination Committee

SPCC

Methods Standards Steering

Group

MSSG

Food Standards Steering

Group

FSSG

SCHMMHarmonization

of

Microbiological

Methods

SCAMDMAnalytical

Methods for

Dairy

Microorganisms

PG D07

Lb

casei/paracasei

PG D06

QUA LAB

Flowcytometri


Standardisering og harmonisering af Mikrobiologiske Metoder

FIL-IDF

ISO

CEN


Udvikling af en Analyse Standard

Stage 0: Undersøgelse af et emne, f.eks en ny analyse teknik, som endnu ikke er

klar til de næste trin

Stage 1: New Work Item (NWI)

Forslag til ny metode sendes typisk fra en National komité til IDF

Forslaget skal indeholde en Working Draft eller min. en klar beskrivelse OG forslag

til Projektleder

NWI accepteres efter afstemning

Krav: Min. 50% af medlemslandene skal svare på afstemningen og min. 50% af

svarene skal være positive

Stage 2: Udabejdelse af Committee Draft (CD) og fremsendelse til kommentering

bland Projektgruppens medlemmer og SC

Bearbejdning af kommentarer, udarbejdelse af rapport med indkomne kommentarer

og PL ‘s svar på kommentarer, planlægning af et ‘Interlaboratory study’ til

fastlæggelse af præcisionsdata

Stage 2 slutter når resultaterne fra dette studie er godkendt af PG og SC


Interlaboratory Study 2007 ISO 22964 Detection of Cronobacter

spp.

67 prøver

CSB

CB- 44°C

CB- 41,5°C

mLST

ESIA

mDFI

ESPM

mDFI

ESIA

ESIA

ESPM

ESPM

mDFI

ESIA

mDFI

ESPM

804 resultater

x 12

laboratorier

9648

resultater !


I 2013 ny ILS med Standardens endelige media

Milk based Infant Formula

Soy based Infant Formula

Lactose

Starch

Environmental Samples


Stage 3:

EN Draft International Standard (DIS) udarbejdes på engelsk og evt. fransk

DIS sendes til National Komitéer for godkendelse

IDF og ISO udarbejder rapporter der inkluderer alle indkomne kommentarer

Stage 3 afsluttes med at PL sender den godkendte og afsluttede DIS (nu FDIS)

sammen med kommentarer og svar til IDF’s og ISO’s sekretariat

Stage 4:

Iht. ISO procedurer skal FDIS til afstemning internt i ISO før udgivelse

Der afgives ja/nej stemme og kun stavefejl/trykfejl kan rettes

IDF godkender DIS versioner til direkte udgivelse

Stage 5:

Standarden gennemgåes en sidste gang for trykfejl etc. hvorefter den udgives.

Projektgruppen nedlægges herefter

Review:

Senest 3 år efter udgivelse skal Standarden revurderes og herefter hvert 5. år


Igangværende projekter

2 Stående komitéer:

SCAMDM: Analytical Methods for Dairy Microorganisms- de gode bakterier

SCHMM: Harmonization of Microbiological Methods- de onde bakterier


Project D06

PL : S Casani (DK)

Quantification of Lactic acid bacteria by Flow Cytometry

Project D07

PL : G Fischer (DE)

and A Galat (FR)

Enumeration of Lactobacillus casei/paracasei in fermented milks and

starter cultures

SCAMDM Igangværende Projekter

NWI

Project D08

PL : TBD Quantification of LAB (Lactic acid bacteria) by use of qPCR or v-qPCR

PL Report

Project D09

PL : T Odamaki (JP) Revision of ISO 29981 | IDF 220 – Enumeration of bifidobacteria

PL Report


Forslag til revision af ISO 22981/IDF 220 Enumeration of presumptive

Bifidobacteria

Our results suggested that the suspension conditions including diluents, retention time and shaking had much impact on enumeration of bifidobacteria. We found that in

comparison to ISO 29981|IDF 220 method, lower temperature for suspension without retention and shaking with a rotary blender using Mitsuoka’s buffer, a diluent devised and reported by Professor Mitsuoka who received IDF Elie Metchnikoff Prize 2007,

could provide stable and adequate counts for enumeration of bifidobacteria.

- Brug Mitsuoka’s buffer i stedet for Ringers

- Temperatur under opløsning skal være 35°C

- Brug blender til opløsning

‘Til næste gang’:

- Lav sammenligning mellem Mitsuoka’s buffer og MRD

istedet for Ringers (som ingen bruger)

- Start med -2 fortynding for at få bedre opløsning

istedet for at bruge en blender


SCHMM Igangværende Projekter

Project H03 IDF representative: H Joosten (CH)

ISO/TS 22964 | IDF/RM 210. (revision to horizontal IS) New title: Detection of Cronobacter spp.) – CEN TC275 WG6 TAG 14 (Revision of EN ISO 22964)

Project H17 IDF representative & PG co-convenor:

B Gerten

ISO/TC 34/SC 9-WG 16 - Yeasts and moulds (Revision of EN ISO 21527-1/-2)

Ask SC5/IDF delegates about the possible change in ISO 6611 of YGC to DRBC Decide to perform the revision with these recommendations: Base the revision on previous ISO 7954 from SC9 or ISO 6611 from SC5, and update all parts such media performance, if we take ISO 6611 we can harmonize with SC5. choose between DRBC or YGC, choose between surface inoculation or pour plate, maintain a general assay with YGC/DRBC and put an annex for DG18 and products for aw between 0.95 and 0.6 For product below aw<0.6, Management? No real media For WG3, data of validation are enough or not to establish this standard.

Ny standard senest Oktober 2016


Project – new (tbd) IDF representative: TBD

ISO/TC 34/SC 9-WG 20 – Confirmation of Bacillus cereus (Revision of EN ISO 7932)

Project – new (tbd) IDF representative: TBD

ISO/TC 34/SC 9-WG 26 – Detection of Clostridium botulinum toxins

Den selektive opformering udgår


Does ISO/TC34/SC9 agree with following WG 20 proposal:

- To not include additional tests for differentiation of Bacillus

thuringiensis from presumptive B. cereus in the revision of ISO

7932;

- To not include additional tests for confirmation of B. cereus sensu

stricto;

- To investigate possible additional tests to identify pathogenicity of

presumptive B. cereus colonies.

Proposed recommendations to be approved by ISO/TC 34/SC 9

To revise EN ISO 7932:2004 by adding in the confirmation stage PCR

detection of 2 specific genes, as optional tests on isolated colonies:

- Cytk1, specific of the new B. cytotoxicus species, an emerging and

virulent pathogen from the B. cereus group;

- Cereulide genes, harboured by emetic toxin producing strains of B.

cereus (sensu lato).

Benefits and limitations of such additional tests should be added in the

standard.


Problem: Tilstedeværelsen af visse Mælkesyrebakterier og Bifidobakterier

hæmmer væksten af Enterobacteriaceae, Cronobacter spp., Salmonella spp

Improvement of enrichment procedure for Enterobacteriaceae (incl. Salmonella and

Cronobacter).

• Previous work with an alternative buffer (tricine)

addition of iron citrate and application of a higher initial pH was unsuccessful.

• Poor recovery was associated with strong acidification (final pH often below <5)

• A new pre-enrichment broth is proposed based on BPW with a six-fold increased

phosphate buffer strength (“xsBPW”)

• Study of growth kinetics of Salmonella and Cronobacter in xsBPW shows major

improvement.

• LOD50 values below 1 cell per 25 g sample were obtained with the most

demanding matrices

• Cost xsBPW similar to that of “double strength BPW”

• Variability of growth potential among different Enterobacteriaceae raises concern

about current validation requirements


Revideret standard forventes ved udgang 2016

Væsentligste ændringer:

Inkubationstider, herunder mulighed for inkubation af hel Fraser i 24 timer i

stedet for 48, såfremt fokus er Listeria monocytogenes

Konfirmerings og identifikations trin

Præcisionsdata fra ILS fremgår af standarden


Hvorfor er standardiserede analysemetoder en god idé?

- Et analyseresultat er en funktion af forekomst og fordeling af den givne parameter,

den anvendte metode og metodens usikkerhed

- Et mikrobiologisk kriterie bør altid bestå af en fastsat værdi og en analysemetode

BEK om mælkeprodukter m.v. Nr. 2 af 04/01/2013


Case: Bestemmelse af L. delbrueckii subsp. bulgaricus i fermenteret produkt.

Metode: ISO 7889/IDF 117:2003

Problem: Udover L. delbrueckii subsp. bulgaricus indeholdt produkt også L. acidophilus

L. acidophilus vokser udmærket i substratet og kolonier ligner

Løsning: Udfør MALDI-TOF identifikation på 5-10 kolonier

Resultat: Alle kolonier (20 ialt) blev identificeret som L. rhamnosus!

MALDI-TOF resultat blev efterfølgende konfirmeret ved 16S seq


Case: E. coli


Case: Aerobe sporedannere

Problem: Kunde hævder vi finder væsentligt færre sporedannere end de selv og

deres kunde gør i udvalgte produkter

3 metoder:

Metode Forbe-

handling

Udsæd Substrat Inkubations

tid

Inkubations

temp.

FVST

2007

80°C/

10 min

overflade Blodagar 6 døgn 30

NMKL

189

80°C/

10 min

overflade Blodagar 8 døgn 30

‘Tysk-

metode’

80°C/

10 min

overflade TSA 3 døgn 30


Analyseresultater metode sammenligning

Prøve

Aerobe mesofile sporedannere/g

FVST 2007 NMKL 189 ‘Tysk metode’

1 270 230 420

2 270 300 390

3 370 520 530

4 380 150 560

5 200 220 310

6 440 370 770


Tilsyneladende overensstemmende resultater- men stadigvæk for lavt- nu på alle metoder

Prøve pH i 10% opl. Aerobe sporer cfu/g,

FVST 2007

10 g prøve 1a + 90 g SPO 4,36 310

10 g prøve 1a + 90 g BPW 6,66 4600

10 g prøve 1b + 90 g SPO 4,36 190

10 g prøve 1b + 90 g BPW 6,66 3600

10 g prøve 1c + 90 g SPO 4,36 150

10 g prøve 1c + 90 g BPW 6,66 3800

10 g prøve 2 + 90 g SPO 5,36 7400

10 g prøve 2 + 90 g BPW 6,56 6300


ISO-IDF metoder er referencemetoder

Brug kun alternative metoder der er valideret iht. ISO 16140 eller tilsvarende

overfor referencemetoden

Når du udarbejder specifikationer for dine produkter:

Referer til analysestandard

Vær specifik vedr.

- Prøveudtagning- repræsentativ, kun overflade, kun indre etc.

- Prøveforberedelse

Vær bevidst om de kritiske step i metoden


TAK FOR OPMÆRKSOMHEDEN

ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium

Documents

Transcript of ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium