“Introducción a las Técnicas de la Edición Génica y su ...
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“Introducción a las Técnicas de la Edición Génica y su Aplicación”.
Paul Chavarriaga
Plataforma de Mejoramiento Avanzado
Alianza de Bioversity Internacional y [email protected]
18/Nov/2020
Que es editar un genoma?
Producir cambios/mutaciones planeadas,permanentes y heredables, en un sitioespecífico del genoma, mediados por lossistemas de reparación del ADN en la célula,con la menor probabilidad de cometererrores (off-targets) y sin dejar secuenciasde ADN foráneo.
El Sistema Inmune Adaptativo Bacteriano• CRISPR-Cas9: Clustered, Regularly Interspaced, Short, Palindromic Repeats.
• Sistema immune adaptativo de las Archeas y Bacterias.
(http://rna.berkeley.edu/crispr.html)
Jennifer Doudna
University of California, Berkeley, USA Howard Hughes Medical Institute
Emmanuelle Charpentier
Max Planck Unit for the Science of Pathogens, Berlin, Germany
Como funciona CRISPR/Cas9
Validación de genes Obtención de nuevas variedades
Recombinación no homologa
X
Mejoramiento Convencional
Élite Donante
Cruzamientos Mutagénesis
Variedad Élite Nueva
Protoplastos Transgénesis
Trans-OGM Cis/Intra-OGM
Cis/Intra-génesis
Transgénesis
Quién es Quién?
Edición con CRISPR/Cas9
Editado
1. Gene Editing Tests
Cacao Yuca Arroz Frijol
GE Embryos Rooting in vitro
GUS+ Staminode-derived callus
2. GE for Cadmium Tolerance
Putative GE Embryos
1. Waxy plants in field
2. Haploid Inducer (anthers)
1. Male sterility
2. Grain Number
3. Waxy
4. HBRV Two Genes Validated
1. In vitro culture and GT
3. Four transformable genotypes
2. Stachyose/Raffinose GE
5. >30 transformable genotypesOriza glaberrima included
P1
ICA
P2
CC
Cas
9+
Cas9+ Bean Plants
Pipeline de Edición de Genoma en la Alianza Bioversity-CIAT
wt
HI
wt
waxy
wt Gn1a
wt waxy
1kB p40 p46 p47 p48 p49 p50 p51 p52 p53 p54 p55 p56 p57 p58 p60 p61 n59 n34 n33 fd50 2000 H20
Fedearroz 2000 linesPlantas
enfermas(%)
Os-2016-68-11-1 55.0
Os 2016-33-13-1 67.0
Fedearroz 2000 Control 3.0
AGO 4 TDF1
1kB p1 p2 p3 p4 p5 p6 p7 p8 p9 p10 p11 p12 p13 p14 p15 p16 p1 p18 p19 p20 IR64 H20
TDF1-P2 TDF1-P4 TDF1-P1 TDF1-P5 IR64
WAXY
3 4 5 6 7 8 9 10 15 16 18 26 WT WT 24 36 40
wt 3
87
Pru
eba
de
Yod
o
Validación de genes
SCIENCE VOL 309 29 JULY 2005
Mayor número de granos por panícula
Obtención de Variedades
https://repository.agrosavia.co/handle/20.500.12324/11506
Mayor número de granos por panícula
sgRNA2
Wolf Frommer. Universitat Dusserldorf
OsSWEET11, OsSWEET13 y OsSWEET14Chu Z, Yuan M, Yao J, et al.. Genes Dev. 2006;20(10):1250–1255. doi:10.1101/gad.1416306
Resistencia a Xanthomonas oryzae en arroz
Resistencia a Xanthomonas oryzae
https://www.nature.com/articles/s41587-019-0267-z
Nombre de las líneas (Oliva
et al 2019)
Nombre de las líneas Cepas de Xoo usadas en Pruebas de Patogenicidad SWEET11 EBE SWEET13 EBE SWEET14 EBEs
T3 IR64-IRS1132 PXO99 PXO339 PXO86 PXO99ATalC PXO99ATalF PthXo1 PthXo2 TalC AvrXa7
IR64-5d IR64-IRS1132-5-55-1-8 R R R NP NP +1,T Hetero +2,AA -1 -1,C
IR64-7a IR64-IRS1132-7-18-1-2 MS R R NP NP +1,A -1 -1,A/-61bp +1,A/-61bp
IR64-7b IR64-IRS1132-007-45-1-3 MR R R R MR +1,T +2,AA -3 -6
IR64-9a IR64-IRS1132-9-32-1-2 MS R RNP NP
+1,A +1,A -61bp
IR64-9a IR64-IRS1132-009-32-1-24 R R R R R +1,A +1,A -44 +1,A
IR64-134a IR64-IRS1132-134-4-1-2 R R RNP NP
+2, TT -7 -6 -7
IR64-134a IR64-IRS1132-134-4-1-4 R R R R R +2, TT -7 -6 -7
IR64-134a IR64-IRS1132-134-4-1-8 R R RNP NP
+2, TT -7 -6 -7
IR64-134b IR64-IRS1132-134-37-1-2 R R R
NP NP
+54/ -19 -8 -13 +1
IR64-IRS1132-134-37-1-20 R R R R MR-MS
+35 bp -8 -11 +1,T
IR64-IRS1132-134-53-1-8 R R R R MR
+2,TT -7 -6 -7
IR64-136 IR64-IRS1132-136-3-1-2 R R RNP NP
+1,T +1,T -62
wt_IR64 (parental silvestre) S S S
NP NP
#Alliance4Science@BiovIntCIAT_eng@BiovIntCIAT_esp
Primer arroz resistente a Xoo editado liberado en el sur del mundo (fuera de China)
Foto: Michael Selvaraj; ABC
Cultivares EDITADOS son Cultivares CONVENCIONALES
• Mejoramiento, Remediación, etc…
• Problema en arroz y cacao, y otros cultivos…?• Origen Geológico en Latinoamerica• Codex Alimentarius & EU lo regulan• 52K familias cultivadoras afectadas• Varios Genes
• Cacao: Complejo, Esfuerzo a largo plazo• 14 Genomas en CIAT
Cacao y Cadmio: Amenza para la salud humana/animal
Árboles cacao Botones Florales Estaminodios Callo embriogénico Embriones
Variedades Comerciales• Copas y Portas
Biolistic DNA-Free
Plantulas Evaluación por hidroponíaMultiplicación clonal Pruebas en campo
CIAT
CACAO
October 17 & 18
December 12-16, 2016
March 13-16, 2018
Evolución del
Panorama de la
Edición de Genomas
en la Agricultura
EMBO Rep, First published: 19 May 2020,
DOI: (10.15252/embr.202050680)
Guatemala, Costa Rica & HondurasCase-by-case: If no foreign DNA likely non-GMO
La edición de genes y genomas realmente eshacer mejoramiento convencional a través demutaciones, introduciendo cambios/mutacionesdirigidos y precisos, no al azar.
“Los Editores…del ADN”
Gracias