Informe Analisis 2..Jdllg

7/26/2019 Informe Analisis 2..Jdllg

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PRACTICA N° 9

DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS

I. INTRODUCCION

Los triglicéridos son el principal tipo de grasa transportado por el organismo.

Recibe el nombre de su estructura química. Luego de comer, el organismo digiere

las grasas de los alimentos y libera triglicéridos a la sangre. Estos son

transportados a todo el organismo para dar energía o para ser almacenados como

grasa.

El hígado también produce triglicéridos y cambia algunos a colesterol. El hígado

puede cambiar cualquier fuente de exceso de calorías en triglicéridos.

Cuando la persona come, los triglicéridos se combinan con una proteína en su

sangre para formar lo que se llama lipoproteínas de alta y baja densidad. Estas

partículas de lipoproteínas contienen colesterol. ara formar triglicéridos en el

hígado el proceso es similar! el hígado toma los carbohidratos y proteínas

sobrantes de la comida y los cambia a grasa. Esta grasa entonces se combina con

proteína y colesterol para formar lipoproteínas de muy baja densidad, que son

liberadas al torrente circulatorio.

Los ni"eles altos de triglicéridos pueden deberse a cualquiera de las siguientes

causas#

Cirrosis

$aja proteína en la dieta y alta en carbohidratos

%ipotiroidismo

ancreatitis &iabetes mal controlada

'ientras tanto, los ni"eles bajos de triglicéridos pueden deberse a lo siguiente#

&ieta baja en grasas

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000255.htm














%ipertiroidismo

(índrome de malabsorci)n

&esnutrici)n

II. OBJETIVOS:

oder determinar la cantidad de triglicéridos en sangre.

(aber dar un diagn)stico acertado leyendo los ni"eles de triglicéridos en la

sangre y poder hallar el ni"el de *L&L.

III. FUNDAMENTO DEL METODO ENZIMATICO

Los triglicéridos presentes en la muestra son hidroli+ados por una lipasamicrobiana, a glicerol y acidos grasos libres. EL glicerol resultante en presencia

de -, 'agnesio y de licerol quinasa es fosforilado a glicerol / fosfato, el cual

es oxidado posteriormente por la glicerol fosfato oxidasa gener0ndose per)xido de

hidrogeno.

osteriormente el per)xido de hidrogeno es determinado cuantitati"amente por la

reacci)n de la 12amino antipirina, para producir por medio de la peroxidasa un

compuesto coloreado de color rojo de inoneimina que se cuantifica a 343 nm.

IV. PROCEDIMIENTO

1. Blanco

$lanco (tandard &esconocidoSuero 2 2 /4uL

Sta!ar! 2 /4 uL 2Rea"t#$o

e%#&'t#"o/ mL /mL /mL

Me%"(ar) #"u*ar a +,°C -or &#uto/A0ua !e/t#(a!a 5 mL 5 mL 5 mL

Leer a 1 &







En un tubo de ensayo colocamos /ml de reacti"o en+im0tico, lle"amos a

incubaci)n por 3 minutos a 678C. 9inalmente agregamos 5ml de agua destilada y

lle"amos a espectrofot)metro para calibraci)n. Leer a

354nm.

2. Standard

En un tubo de ensayo colocamos /4 uL de suero est0ndar, luego agregamos /mldel reacti"o en+im0tico. :ncubamos por 3 minutos a 678C, y finalmente agregamos

5 ml de agua destilada. Leer a 354 nm.

A*/or*a"#a !e( Sta!ar!3 1.456

+. Desconocido

En un tubo de ensayo colocamos /4 uL de suero desconocido, luego agregamos

/ml del reacti"o en+im0tico. :ncubamos durante 3 minutos a 678C, y finalmente

agregamos 5 ml de agua destilada. Leer a 354 nm.



A*/or*a"#a !e( De/"oo"#!o3 1.166

IV. CALCULOS PARA DETERMINAR TRIGLICERIDOS

Formula: | D||S|

x200

Valores de referencia: ; /34 mg<dL

Reemplazando:

f= 4.411<4./>1 x 544

TG &07!L 3 +.5

V. CONCLUSION

(eg?n los resultados obtenidos, se concluye que los ni"eles de triglicéridos en el

paciente est0n dentro del rango normal establecido.



PRACTICA N° 41

DETERMINACION DE LDL COLESTEROL

I. INTRODUCCION.

El colesterol es una sustancia grasa natural presente en todas las células del

cuerpo humano necesaria para el normal funcionamiento del organismo. La mayor

parte del colesterol se produce en el hígado, aunque también se obtiene a tra"és

de algunos alimentos.

-ambién el colesterol se considera @bueno@ y alguno se considera @malo@. (e

necesitan ex0menes de sangre diferentes para medir cada tipo de colesterol

indi"idualmente.

Las partículas de L&L transportan el colesterol a las células. El colesterol L&L amenudo se denomina Acolesterol maloB porque se cree que los ni"eles ele"ados

de esta sustancia contribuyen a la enfermedad cardio"ascular. n exceso de L&L

en la sangre da lugar a una acumulaci)n de grasa Ddenominada AplacaB en las

paredes de las arterias, la cual inicia el proceso de la enfermedad ateroscler)tica.

Cuando se acumula placa en las arterias coronarias que riegan el cora+)n,

aumenta el riesgo de sufrir un ataque cardíaco. Los ni"eles de L&L pueden ser

ele"ados en personas cuya alimentaci)n tiene un alto contenido de grasa

saturada, colesterol o ambas cosas. "eces una gl0ndula tiroides hipoacti"a Dlo

que se denomina AhipotiroidismoB también puede ele"ar los ni"eles de L&L.

(i sus ni"eles en sangre se ele"an producen hipercolesterolemia. Est0

demostrado que las personas con ni"eles de colesterol en sangre de 514 tienen el

doble de riesgo de sufrir un infarto de miocardio que aquellas con cifras de 544.



II. OBJETIVOS

Conocer la técnica para hallar los ni"eles de colesterol total en la sangre. &eterminar la concentraci)n de colesterol total y L&L en sangre.

III. MATERIALES 8 EUIPOS

• 'uestra# (uero• / -ubo de ensaye de /6 F/44mm.• / 'icropipeta de /4uL• -ics para micro pipeta.• radilla.• guja nG 5/• Ligadura• lcohol y algod)n• gua destilada• Reacti"o de trabajo

• Espectrofot)metro• Centrifuga

IV. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA

Las proteínas de baja densidad o L&L se separan del suero a tra"és de la

precipitaci)n de los polímeros de bajo peso molecular. Luego de centrifugar queda

en el sobrenadante las dem0s lipoproteínas como la *L&L y %&L. El colesterol

ligado a ellos se determina mediante los reacti"os en+im0ticos.

V. PROCEDIMIENTO

O*te"#; !e( /o*rea!ate

rimero agregar 544 uL de suero. Luego agregar 54 uL de Reacti"o precipitante.

'e+clar agitando por 54 segundos. Reposar /4 minutos. Centrifugar /3 minutos a

1444 rpm. (e puede utili+ar hasta /4 minutos después.



Co(or#&etr<a

$lanco (tandard &esconocidoL&L

&esconocidoColesterol total

So*rea!ate 2 2 /4uL 2Sta!ar! 2 /4 uL 2 2

Suero 2 2 2 /4uLRea"t#$o

e%#&'t#"o/ mL /mL /mL /mL

Me%"(ar) #"u*ar a +,°C -or 41 &#uto/A0ua !e/t#(a!a 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL

VI. RESULTADOS

For&u(a/:

ColesterolSobrenadante(mg /dL)=| D| LDL

|S| x62.4

LDL" &07!L 3 CT = CS

Va(ore/ !e re>ere"#a:

$R# ; /14 mg<dL

(ostenidos# /142/H4 mg<dL

Ele"ados# I /H4 mg<dL

C'("u(o/:

Colesterol Total:

Absorbancia de Colesterol total = 0.047

Absorbancia del Standard = 0.093

Colesterol Total mg/dL 1!1

Colesterol So"renadante:

Absorbancia del standard = 0.096

Absorbancia Desconocido LDL = 0.029



Colesterol So"renadante mg/dL 1#.#

LDL Colesterol:

Colesterol Total – Colesterol Sobrenadante = 101 – 18.8

LDL" 3 ?2.2 &07!L

VII. CONCLUSION

&e acuerdo a los resultados obtenidos, obser"amos que el CJLE(-ERJL

-J-L hallado est0 dentro de los "alores referenciales normales.

Con respecto a los ni"eles de L&L CJLE(-ERJL del paciente, concluimos

que se encuentran dentro del rango normal establecido. Esto significa que

la persona tiene un bajo riesgo de obtener una enfermedad cardiaca

coronaria.



PRACTICA N° 44

DETERMINACION DE @DL COLESTEROL

I. INTRODUCCION

Las (#-o-rote<a/ !e a(ta !e/#!a! D@DL) son aquellas lipoproteínas que

transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado.

&ebido a que las %&L pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de

"uelta al hígado para su excreci)n, se les conoce como el colesterol o

lipoproteína "uena. Cuando se miden los ni"eles de colesterol, el contenido en las

partículas, no es una amena+a para la salud cardio"ascular del cuerpo Den

contraposici)n con el L&L o colesterol malo.

%&L son las lipoproteínas m0s pequeKas y m0s densas, est0n compuestas de una

alta proporci)n de proteínas. El hígado sinteti+a estas lipoproteínas como

proteínas "acías y, tras recoger el colesterol, incrementan su tamaKo al circular a

tra"és del torrente sanguíneo.

En cada lipoproteína hay "arias apolipoproteínas periféricas, en el caso de las

%&L las principales apolipoproteínas son 2lipoproteínas designadas con la letra .

Estudios epidemiol)gicos muestran que altas concentraciones de %&L Dsuperiores

a >4 mg<dL tienen una car0cter protector contra las enfermedades

cardio"asculares Dcomo la cardiopatía isquémica e infarto de miocardio. $ajas

concentraciones de %&L Dpor debajo de 63 mg<dL suponen un aumento del riesgo

de estas enfermedades, especialmente para las mujeres.

%ay 6 tipos de %&L# %&L/, %&L5 y %&L6.

http://es.wikipedia.org/wiki/Lipoprote%C3%ADna

http://es.wikipedia.org/wiki/Colesterol

http://es.wikipedia.org/wiki/H%C3%ADgado

http://es.wikipedia.org/wiki/Arteria

http://es.wikipedia.org/wiki/LDL


http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna

http://es.wikipedia.org/wiki/Miligramo

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=DL&action=edit&redlink=1

http://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad_cardiovascular


http://es.wikipedia.org/wiki/Cardiopat%C3%ADa_isqu%C3%A9mica


http://es.wikipedia.org/wiki/Lipoprote%C3%ADna

http://es.wikipedia.org/wiki/Colesterol

http://es.wikipedia.org/wiki/H%C3%ADgado

http://es.wikipedia.org/wiki/Arteria


http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna

http://es.wikipedia.org/wiki/Miligramo

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=DL&action=edit&redlink=1






L#-o-rote<a D#'&etro & De/#!a! 07&( !e Prote<a/ !e L<-#!o/

@DL4 54253 /.4/H2/.4>6 65 >M

@DL2 /4254 /.4>62/./53 66 >7

@DL+ 32/4 /./532/.5/4 37 16

II. OBJETIVOS

&eterminar la concentraci)n de colesterol L&L en sangre.

III. MATERIALES 8 EUIPOS

• 'uestra# (uero• -ubos de ensayo.• / 'icropipeta de /4uL• -ics para micro pipeta.• radilla.• guja nG 5/• Ligadura• lcohol y algod)n• gua destilada•

Reacti"o de trabajo• Espectrofot)metro• Centrifuga

IV. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA

La %&L colesterol en soluci)n se determina por acci)n de las en+imas Colesterol2

ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. roduciéndose Colestocia y er)xido de

%idrogeno, bajo la acci)n de la eroxidasa y la 12aminofena+ona, produciendo$en+oquinona de color rojo, cuya intensidad de color es directamente proporcional

a la concentraci)n de colesterol %&L.

V. PROCEDIMIENTO

O*te"#; !e /o*rea!ate



rimero agregar 544 uL de suero. Luego agregar 4.3 mL de Reacti"o precipitante.

%omogeni+ar por 54 segundos. Reposar /4 minutos. Centrifugar /3 minutos a

1444 rpm.

Co(or#&etr<a

$lanco (tandard &esconocidoSo*rea!ate 2 2 /44uL

Sta!ar! 2 /4uL 2Rea"t#$o e%#&'t#"o /mL /mL /mL

A0ua !e/t#(a!a 5mL 5mL 5mLMe%"(ar) #"u*ar 41 &#uto/ a +,°C. Leer a 1 &.

VI. RESULTADOS

For&u(a:

HDLc(mg /dL)=| D||S|

x 76.24

Va(ore/ !e re>ere"#a:

E!a! @o&*re/ Muere/

&07!L

1=49 642>3 6427421=29 63274 63273+1=+9 642>3 632M461=69 642>3 142H31=9 642>3 632M3

:ntensidad del color rojodirectamente proporcional concentraci)n de %&L



Ra0o 64274 642H3

C'("u(o/: bsorbancia del standard = 4.4>3

bsorbancia del &esconocido = 4.46H@DL" 3 6.1, &07!L

VII. CONCLUSION

&e acuerdo a los resultados obtenidos en la pr0ctica, concluimos que los

ni"eles de colesterol %&L en el paciente, est0n dentro del rango normal

establecido, de acuerdo a la edad y a su sexo.

PRACTICA N° 42

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDADA ENZIMATICA DE LA GOT 8 LA GPT

I.= INTRODUCCIN

El hígado tiene di"ersas transaminasas para sinteti+ar y di"idir

los amino0cidos e intercon"ertirlos en moléculas de almacenaje de energía.

Las concentraciones de transaminasas en el suero Dla parte no celular de la

sangre son normalmente bajas. (in embargo, si el hígado est0 daKado, la

http://www.muydelgada.com/wiki/H%C3%ADgado/

http://www.muydelgada.com/wiki/Amino%C3%A1cidos_esenciales/

http://www.muydelgada.com/wiki/H%C3%ADgado/

http://www.muydelgada.com/wiki/Amino%C3%A1cidos_esenciales/



membrana celular de los hepatocitos se hace m0s permeable, y

algunas en+imas se filtran en la corriente sanguínea.

Las dos transaminasas que se miden son la alanina transaminasa DL- y la

aspartato transaminasa D(-.

Las (- est0n presentes dentro de la célula, enla+adas a las mitocondrias,

mientras las L- se encuentran sobre todo libres en el citoplasma. Los ni"eles

ele"ados de estas en+imas son indicadores de daKo hep0tico! sin embargo,

también pueden ser ele"ados debido a otros trastornos. La L- no suele

encontrarse fuera del hígado. La (- est0 presente en el hígado, pero

también en cantidades significati"as en el m?sculo esquelético cardíaco. &e

hecho, solía usarse para diagnosticar ataques cardíacos, aunque actualmente

hay en+imas y proteínas que son m0s específicas para el daKo cardíaco.En general, cualquier daKo al hígado causar0 ele"aciones medias en estas

transaminasas Dllamadas @en+imas del hígado@, aunque por supuesto no son

las ?nicas en+imas en el hígado. El diagn)stico requiere la síntesis de

muchas informaciones, incluidas la historia del paciente, examen físico y,

posiblemente, im0genes u otros ex0menes de laboratorio.

Las ele"aciones muy altas de transaminasas sugieren daKo se"ero en el

hígado, como los pro"ocados por hepatitis "iral Dmononucleosis infecciosa,

falta de flujo sanguíneo al hígado o por la ingesta de medicamentos o toxinas

Dcomo el alcohol. La mayor parte de las enfermedades hacen que la L- se

ele"e m0s que la (-. Los ni"eles de (- dobles o triples a los de la L- son

consistentes con una enfermedad de hígado pro"ocada por el alcohol.

radualmente se "uel"e a los "alores normales de transaminasas en sangre

conforme se produce la curaci)n de estas enfermedades. ero es necesario

subrayar que cuando el daKo hep0tico se ha establecido de modo cr)nico o se

ha producido una rotura notable de células hep0ticas, con transformaci)n

cirr)tica, la bajada de las transaminasas no indica curaci)n sino que es seKal

de que ya no hay m0s células hep0ticas que "iertan estas en+imas en la

sangre Díndice de pron)stico negati"o.

http://www.muydelgada.com/wiki/Enzimas/






II.= OBJETIVOS:

Reali+ar la determinaci)n de J- y - séricos en una muestra biol)gica

con un método en+im0tico.

&estacar la importancia de las transaminasas DJ- y - en el

metabolismo humano y su relaci)n con di"ersas patologías.

III.= MATERIALES 8 EUIPO

Eu#-o/

• Espectrofot)metro o anali+ador para lecturas de 374 nm.• Centrifuga.

Rea"t#$o/

• -ransaminasas J-#• Reacti"o # soluci)n con /44 m' de l2aspartato y 5 m' de cetoglutarato

en buffer fosfatos /44 m', p% 7,1.• -ransaminasas -#• Reacti"o # soluci)n con 544 m' de dl2alanina y 5 m' de 2cetoglutarato

en buffer fosfatos /44 m', p% 7,1.• Reacti"o $# soluci)n conteniendo / mmol de 5,12dinitrofenilhidracina D5,12

&N9% en 0cido clorhídrico / mol<l.• Reacti"o C# soluci)n de hidr)xido de sodio 1 mol<l.

Mater#a(

• /-ubo de ensayo de /6 F/44mm.

• / 'icropipeta de /4uL.

• untas para micropipeta.

• radilla.

• guja nG 5/

•

Ligadura• lcohol y algod)n

IV.= FUNDAMENTO TERICO

$%T&D& D' R('T$)* + FR)*,'L.



La determinaci)n de la reacci)n transaminasa se basa en la siguiente reacci)n#

La J- catali+a la siguiente reacci)n#

aspartato O 2cetoglutarato 222222222I oxalacetato O glutamato

La - catali+a la siguiente reacci)n#

alanina O 2cetoglutarato 222222222222I piru"ato O glutamato

El oxalacetato o piru"ato formado reacciona con la dinitrofenilhidracina

generando en medio alcalino, una hidra+ona coloreado que se absorbe a 343

nm.

LCT!"A #D$A%T C!"&A' se desarrolla mediante la comparaci)n de

absorbancias con equi"alencias.

PROCEDIMIENTO

Mto!o ut#(#%a!o

B=GOT D=GOT B=GPT D=GPTSu/trato GOT 4,3ml 4,3ml 2 2

Su/trato GPT 2 2 4,3ml 4,3mlI"u*ar a +,H" -or + &#uto/

A0ua !e/t#(a!a 4,/ml 4,/ml 4,/ml 4,/ml

Suero 2 /44 ul 2 /44 ul

I"u*ar a +, H" -or +1 &#uto/Rea"t#$o "o(or 4,3ml 4,3ml 4,3ml 4,3ml



I"u*ar a te&-eratura a&*#ete -or 21 &#uto/NAO@ 1.6N 3ml 3ml 3ml 3ml

Leer a 1 &.

Va(ore/ !e Re>ere"#a: J-# 3 P 14 <dl -# 3 P 13 <dl

4. (e extrae la muestra de sangre se deja reposar por unos 6 o 1 minutos, se

rompe el coagulo y luego se lle"a a centrifugar para obtener el suero.

2. (e preparan los tubos blanco y est0ndar, bas0ndonos de la tabla.

+. (e extrae el suero del tubo centrifugado, con una micropipeta, y se traspasa a

otro tubo para reali+ar el respecti"o an0lisis siguiendo la técnica indicada.

• l nue"o tubo se le agrega 53 ul del suero a anali+ar y / ml de reacti"o.• (e lo lle"a a incubar a temperatura ambiente por 3 minutos.

• l término de los 3 minutos, se le agrega 5 ml de agua destilada



6. (e calibra el espectrofot)metro con el blanco! después se procede leer la

soluci)n est0ndar y por ?ltimo se reali+a la lectura de las soluciones desconocidas.

V.= RESULTADOS

Con los datos obtenidos en el espectrofot)metro la lectura se reali+a con la cur"a.

)"sor"ancia del desconocido -&T: !.!



0 22 55 95 150 215

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

AA*/or*a"#a !e( !e/"oo"#!o GPT: 1.19,

0 25 50 83 126 135

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.099



VI.= CONCLUSIONES

(e lle") a cabo correctamente el procedimiento para la pr0ctica obteniendo

"alores que se anali+aron con ayuda de la cur"a. (e determin) que la concentraci)n de c. Qrico en la muestra de suero es

de

dl

mg /¿5,2¿

.

-omando en cuenta los "alores de referencia podemos deducir que el "alor obtenido est0 dentro de los par0metros de referencia de normalidad.

0.099

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