Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
1/7
V o l . 2 4 , N o .
1
N F E C T I O N AND
I M M U N I T Y ,
A p r .
1 9 7 9 , p .
2 6 9 - 2 7 5
0 0 1 9 - 9 5 6 7 / 7 9 / 0 4 - 0 2 6 9 / 0 7 0 2 . 0 0 / 0
L o c a l
A n t i b o d y
R e s p o n s e
i n
C h i c k e n s :
A n a l y s i s o f A n t i b o d y
S y n t h e s i s
t o N e w c a s t l e
D i s e a s e
V i r u s b y
S o l i d - P h a s e
R a d i o i m m u n o a s s a y
a n d I m m u n o f l u o r e s c e n c e
w i t h
C l a s s -
S p e c i f i c
A n t i b o d y
f o r
C h i c k e n
I m m u n o g l o b u l i n s
DONALD
L .
EWERT,t*
BRUCE 0.
BARGER,
AND
CASWELL
S .
EIDSON
P o u l t r y
D i s e a s e R e s e a r c h C e n t e r ,
D e p a r t m e n t o f A v i a n
M e d i c i n e ,
C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,
U n i v e r s i t y o f
G e o r g i a ,
A t h e n s ,
G e o r g i a 3 0 6 0 5
R e c e i v e d
f o r
p u b l i c a t i o n
1 4
J a n u a r y
1 9 7 9
The a n t i b o d y
response
t o N e w c a s t l e
d i s e a s e v i r u s
was
m o n i t o r e d i n
t h e
sera
a n d
s a l i v a s
o f a d u l t
c h i c k e n s
i m m u n i z e d
b y
two
m e t h o d s :
i )
c o m b i n e d
i n t r a t r a -
c h e a l - i n t r a n a s a l v a c c i n a t i o n f o l l o w e d
b y
i n t r a t r a c h e a l
r e v a c c i n a t i o n
or
i i )
i n t r a -
m u s c u l a r
v a c c i n a t i o n
f o l l o w e d
b y
i nt r a t r a c h e a l r e va c c i n a t io n .
By
s o l i d - p h a s e
r a d i o i m m u n o a s s a y , o n l y i m m u n o g l o b u l i n
G
( I g G )
a n d
I g A
a n t i b o d i e s t o
N e w c a s -
t l e d i s e a s e
v i r u s were
d e t e c t e d
i n
t h e
s a l i v a s ,
w h e r e a s
I g A
a n d
Ig M
a n t i b o d i e s
were p r e s e n t
i n
e g g w h i t e s . The
f i r s t
m e t h o d
p r o d u c e d t h e h i g h e s t a n t i b o d y
l e v e l s
i n b o t h serum
a n d
s a l i v a
a n d ,
i n
a d d i t i o n , p r e v e n t e d d e t e c t a b l e
v i r u s m u l t i p l i c a -
t i o n
i n t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t s
upon
r e v a c c i n a t i o n
4
w e e k s
l a t e r . P l a s m a c e l l s
o f a l l
t h r e e
c l a s s e s
were d i s t r i b u t e d
t h r o u g h o u t
t h e t i s s u e s
l i n i n g
t h e o r a l
c a v i t i e s . Th e
h i g h e s t
d e n s i t i e s
o f
p l a s m a
c e l l s were
i n t h e
H a r d e r i a n
g l a n d s ; I g G
was t h e
p r e d o m i n a n t c l a s s ,
w h e r e a s
I g A
a n d
Ig M
p l a s m a
c e l l s
were
p r e s e n t
i n
a l m o s t
e q u a l
b u t
l o w e r
n u m b e r s .
Th e
H a r d e r i a n
p l a s m a
c e l l s were t h e most
l i k e l y
source
o f
t h e
a n t i b o d y
f o u n d
i n
s a l i v a .
The
i m p o r t a n c e
o f
l o c a l l y
p r o d u c e d
a n t i b o d -
i e s
i n
t h e
d e f e n s e
o f
m u c o s a l s u r f a c e s
a g a i n s t
v i r a l
i n f e c t i o n s
h a s
b e e n
w e l l
d o c u m e n t e d
i n
humans
a n d
a n i m a l s
( 1 2 ,
2 4 , 2 6 , 2 7 ) .
S e v e r a l
r e p o r t s
h a v e
d e m o n s t r a t e d
t h e
i m p o r t a n c e
o f
s u c h
a n t i b o d i e s
i n t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t s
o f
c h i c k -
e n s
s u b j e c t e d
t o l o c a l
a p p l i c a t i o n
o f
a n t i g e n 2 ,
1 3 , 2 3 ,
3 0 , 3 5 , 3 6 ) .
I n
p a r t i c u l a r ,
s i n c e
t h e
p r i m a r y
s i t e
o f i n f e c t i o n
o f
N e w c a s t l e
d i s e a s e v i r u s
N D V )
i s t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t
( 1 7 , 1 8 ) ,
e m p h a s i s
h a s
b e e n
p l a c e d
o n
t h e
l o c a l
a p p l i c a t i o n
o f
NDV
v a c c i n e s
b y e y e d r o p
a n d
a e r o s o l
m e t h o d s
2 , 3 ,
3 0 ) . H o w e v e r , a n a l y s i s
o f
t h e l o c a l
a n t i b o d y
r e -
s p o n s e
h a s
b e e n f r u s t r a t e d
b y
t h e
p a u c i t y
o f
a n t i b o d y p r o d u c e d
a n d t h e
d i f f i c u l t y
o f
q u a n t i -
t a t i v e l y c o l l e c t i n g
s a m p l e s . C o n s e q u e n t l y ,
d e -
s p i t e
i n d i c a t i o n s
t h a t u n d e r
g i v e n
c o n d i t i o n s
l o c a l
i m m u n i t y
i n t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t
may
d e -
v e l o p
i n
t h e
a b s e n c e
o f
s e r u m
a n t i b o d y ,
t h e
p r i m a r y
i n d i c a t o r
o f t h e
e f f i c a c y
o f
v a c c i n a t i o n
m e t h o d s
h a s b e e n s e r u m
h e m a g g l u t i n a t i o n
i n -
h i b i t i o n t i t e r s .
The
a i m s
o f t h e
p r e s e n t w o r k
w e r e
t o
d e t e r -
m i n e t h e e f f e c t t h a t t h e
r o u t e o f
p r i m a r y
v a c c i -
n a t i o n h a s
o n
t h e
a p p e a r a n c e o f a n t i b o d y o f
e a c h
i m m u n o g l o b u l i n
c l a s s
i n
s e c r e t i o n s
b o t h
t
P r e s e n t a d d r e s s : L u r l e n e W a l l a c e Tumor
I n s t i t u t e ,
U n i -
v e r s i t y o f
A l a b a m a , B i r m i n g h a m ,
A L 3 5 2 9 4 .
b e f o r e a n d
a f t e r
r e e x p o s u r e b y
t h e
r e s p i r a t o r y
r o u t e ,
t h e d u r a t i on
o f t h e l o c a l
r e s p o n s e ,
a n d
t h e
c o r r e l a t i o n
o f
t h e
d e v e l o p m e n t
o f l o c a l
a n t i b o d y
l e v e l s
w i t h s e r u m
a n t i b o d y .
A
s e n s i t i v e s o l i d -
p h a s e r a d i o i m m u n o a s s a y
w a s
d e v e l o p e d i n
t h i s
l a b o r a t o r y
t o
p e r m i t q u a n t i t a t i o n
o f
l o w
l e v e l s
o f
a n t i b o d y
i n s e c r e t i o n s .
MATERIALS
A N D METHODS
A n i m a l s . F i f t e e n
W h i t e
L e g h o r n
c h i c k e n s
w e r e
h a t c h e d f r o m
e g g s
p u r c h a s e d f r o m
S p e c i f i c
P a t h o g e n
F r e e
A v i a n
S u p p l y ,
N o r w i c h , C o n n . The b i r d s
w e r e
r a i s e d
i n
b a t t e r i e s m a i n t a i n e d
i n
r o o m s
s u p p l i e d
w i t h
f i l t e r e d
a i r
a n d
u n d e r
n e g a t i v e
p r e s s u r e .
T r e a t m e n t . A t
6 w e e k s o f a g e , t h e b i r d s
w e r e
d i v i d e d i n t o t h r e e
s e p a r a t e
g r o u p s
o f
f i v e e a c h :
i )
f i v e
w e r e
i n o c u l a t e d
i n t r a m u s c u l a r l y
( i . m . ) w i t h 0 . 2
m l
o f
a s t o c k
B - i - t y p e
L a s o t a
s t r a i n o f ND
c o n t a i n i n g
1 0 8 4
5 0
e f f e c t i v e l e t h a l d o s e s
p e r
m l ; i i )
f i v e
w e r e i n o c u -
l a t e d
i n t r a t r a c h e a l l y i . t . )
a n d
i n t r a n a s a l l y w i t h 0 . 4
a n d
0 . 1
m l ,
r e s p e c t i v e l y ,
o f t h e s a m e
s t o c k
o f v i r u s
d i l u t e d 1 : 1 0 i n
s t e r i l e p h o s p h a t e - b u f f e r e d
s a l i n e
P B S ) ;
a n d
i i i )
f i v e
r e m a i n e d
u n e x p o s e d
t o NDV
a n d s e r v e d
a s
c o n t r o l s .
On
d a y s 4 , 7 , 1 0 , 1 4 , 2 1 ,
a n d
2 8 a f t e r v a c c i n a t i o n ,
s a l i v a a n d
b l o od w e r e o b t a i n e d f r o m
e a c h b i r d . T h i r t y
d a y s
a f t e r
p r i m a r y
e x p o s u r e
t o N DV,
b o t h
g r o u p s
w e r e
r e i n o c u l a t e d i . t . w i t h t h e
s a m e s t r a i n
o f NDV
a s
t h a t
d e s c r i b e d
a b o v e . A 0 . 6 - m l
a m o u n t
o f
t h e
v a c c i n e
s t o c k d i l u t e d
1 : 3 i n
PBS w a s
i n j e c t e d
i n t o t h e
t r a c h e a
2 6 9
onM
ay4
,2
01
6
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
2/7
2 7 0 EWERT,
BARGER,
AND
EIDSON
o f e a c h
b i r d . S e r u m
a n d s a l i v a r y
s a m p l e s
w e r e
o b -
t a i n e d f r o m
e a c h b i r d o n
t h e s a m e s c h e d u l e
a s
t h a t
a f t e r p r i m a r y e x p o s u r e .
C o l l e c t i o n
and
t e s t i n g
o f
s a m p l e s .
B l o o d
w a s
o b t a i n e d
f r o m
t h e
w i n g
v e i n a n d s e r u m
w a s
e x t r a c t e d
f r o m
c l o t t e d b l o o d .
E a c h
c h i c k e n
w a s
i n d u c e d
t o
s a l i -
v a t e b y i n j e c t i n g
0 . 5 t o 0 . 7
m l
o f
a 1 s o l u t i o n o f
p i l o c a r p i n e
n i t r a t e
S i g m a
C h e m i c a l
C o . ,
S t
L o u i s ,
M o . )
i n PBS v i a t h e
w i n g
v e i n . S a l i v a
w a s
a s p i r a t e d
f r o m t h e o r a l
c a v i t y
w i t h
a
1 0 - m l s y r i n g e
w i t h a s h o r t
p i e c e
o f
p l a s t i c t u b i n g e x t e n d i n g
f r o m a n
1 8 - g a u g e
n e e d l e .
B e t w e e n 0 . 5 a n d 1 . 0 m l o f
t h e f i r s t
s a l i v a
a s p i r a t e d
w a s
p l a c e d
i n
a
t u b e
o n
i c e ,
d i l u t e d f o u r f o l d
w i t h
P B S ,
a n d s u b j e c t e d
t o
s o n i c
t r e a t m e n t f o r 0 . 5
m i n a t
s e t t i n g
n o .
3
( S o n i f i e r
m o d e l
W 1 8 5 ;
H e a t
S y s -
t e m s - U l t r a s o n i c s ,
I n c . ,
P l a i n v i e w , N . Y . ) t o b r e a k
u p
t h e
m u c i n .
The
s a m p l e
w a s
c e n t r i f u g e d
a t
5 0 0
x
g
f o r
1 5
m i n t o
r e m o v e s o l i d
d e b r i s ,
a n d
t h e
s u p e r n a t a n t
w a s
t r a n s f e r r e d
t o
v i a l s
a n d
f r o z e n
u n t i l
a s s a y e d .
S e r u m
a n t i - N D V
a n t i b o d y
w a s
q u a n t i t a t e d b y t h e
h e m a g g l u t i n a t i o n
i n h i b i t i o n
( H I ) a s s a y ( 2 5 ) , u s i n g
4 U
o f
a n t i g e n . S a l i v a r y
a n t i - N D V
a n t i b o d y
w a s
a s s a y e d
b y
t h e p l a q u e
n e u t r a l i z a t i o n t e s t
8 ) .
The
l e v e l s o f
g i v e n
c l a s s e s
o f a n t i - N D V a n t i b o d y
i n
s a l i v a ,
u n d i l u t e d
a n d d i l u t e d
1 : 2 ,
w e r e
d e t e r m i n e d
b y
t h e
r a d i o i m m u -
n o a s s a y
d e s c r i b e d
b e l o w .
S a l i v a r y
s a m p l e s
w e r e
t e s t e d
f o r t h e
p r e s e n c e
o f
i m m u n o g l o b u l i n s b y
t h e O u c h t e r -
l o n y
m e t h o d
( 2 9 ) ,
u s i n g
1
a g a r o s e g e l c o n t a i n i n g
2
p o l y e t h y l e n e
g l y c o l ( 6 , 0 0 0
m o l e c u l a r
w e i g h t )
a n d
c l a s s - s p e c i f i c
a n t i s e r a .
R a d i o i m m u n o a s s a y .
T h e
s o l i d - p h a s e
r a d i o i m -
m u n o a s s a y
d e s c r i b e d
p r e v i o u s l y
7 ,
1 4 - 1 6 ,
3 2 )
w a s
m o d i f i e d
f o r
q u a n t i t a t i o n
o f
c l a s s - s p e c i f i c
a n t i - N D V
i m m u n o g l o b u l i n s
i n
c h i c k e n s
( t e c h n i q u e t o
b e
r e -
p o r t e d e l s e w h e r e ) .
B r i e f l y ,
s t o c k s o f NDV
a n t i g e n
w e r e
p r e p a r e d
i n
c e l l c u l t u r e .
M o n o l a y e r s
o f
V e r o
m o n k e y k i d n e y
c e l l s w e r e
i n o c u l a t e d w i t h a s t r a i n o f
NDV
a d a p t e d
t o
g r o w t h
i n V e r o c e l l s
( k i n d l y s u p p l i e d
b y
P .
L u k e r t , D e p a r t m e n t
o f M e d i c a l
M i c r o b i o l o g y ,
U n i v e r s i t y
o f
G e o r g i a , A t h e n s ) .
A f t e r
5
d a y s
o f i n c u -
b a t i o n ,
w h e n a b o u t
5 0 o f
t h e
m o n o l a y e r
s h o w e d
c y t o p a t h i c e f f e c t s ,
t h e
medium
a n d c e l l s
w e r e f r o z e n
a n d t h a w e d t h r e e
t i m e s
a n d
s u b j e c t e d
t o s o n i c
t r e a t -
ment
f o r
1
m i n
o n
s e t t i n g
n o .
5 ,
a n d
t h e v i r u s
w a s
i n a c t i v a t e d
w i t h
f i - p r o p i o l a c t o n e .
T h e
p r e p a r a t i o n
w a s
c l a r i f i e d ,
a n d
t h e
s u p e r n a t a n t
was
h a r v e s t e d
a n d
f r o -
z e n . S t o c k s
o f
n o n v i r a l
a n t i g e n s
w e r e
p r e p a r e d
t o s e r v e
a s
n e g a t i v e
c o n t r o l s .
A l l a n t o i c
f l u i d
c o n t a i n i n g
some
w h i t e s w a s
a s p i r a t e d
f r o m
e g g s
l a i d
b y
d a m s
f r e e
o f
NDV
a n t i b o d y ,
c l a r i f i e d
b y c e n t r i f u g a t i o n ,
a n d
f r o z e n .
N o n i n f e c t e d
V e r o
m o n k e y k i d n e y
c e l l s w e r e
g r o w n
a n d
p r o c e s s e d
a s
d e s c r i b e d
a b o v e
e x c e p t
t h a t t h e c e l l
p e l l e t
w a s w a s h e d
t w o
more
t i m e s ,
r e s u s p e n d e d
i n
P B S ,
a n d
f r o z e n . P r ot ei n c o n c e nt r a t i on s w e r e
d e t e r -
m i n e d
b y
t h e
m e t h o d o f
L o w r y
e t
a l .
( 2 2 ) .
F l a t - b o t t o m
p o l y v i n y l
m i c r o t i t e r
p l a t e s
w e r e
t r e a t e d
w i t h a w a t e r - s o l u b l e
s o l u t i o n
o f
s i l i c o n e
S i l i -
c l a d ;
C l a y - A d a m s ,
I n c . ,
P a r s i p p a n y ,
N . J . ) .
A n
e x p e r i -
m e n t a l l y
d e t e r m i n e d
o p t i m u m
d i l u t i o n o f
a n t i g e n
was
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P B S ,
a n d 0 . 0 5
m l
was
p l a c e d
i n
e a c h
w e l l .
The
a n t i g e n s
w e r e d r i e d
i n
t h e
w e l l s
o v e r n i g h t
a t
room
t e m p e r a t u r e .
The
a n t i g e n s
w e r e f i x e d
b y
f i l l i n g
t h e
w e l l s w i t h a
c o l d s o l u t i o n
o f 1 0
F o r m a l i n i n PBS
a n d
i n c u b a t i n g
t h e
p l a t e s
a t
4 C
f o r
1 5 m i n .
The F o r m a l i n
s o l u t i o n
was
r e m o v e d ,
a n d
t h e
p l a t e s
were
w a s h e d
I N F E C T .
I M M U N .
t h r e e
t i m e s w i t h PBS
c o n t a i n i n g
1 0 f e t a l c a l f s e r u m
a n d
0 . 5
T w e e n - 2 0 ( b u f f e r 1 ) b e f o r e
u s e .
S a m p l e s o f
s e r u m o r
s a l i v a w e r e d i l u t e d i n b u f f e r 1 .
A 0 . 0 2 5 - m l
p o r t i o n o f
e a c h d i l u t i o n
w a s p l a c e d
i n
d u p l i c a t e w e l l s o f v i r a l a n d
c o n t r o l a n t i g e n s . The
p l a t e s
w e r e
i n c u b a t e d
i n
a h u m i d i f i e d
c h a m b e r
a t
3 7 C
f o r
1 h . The
s a m p l e s w e r e
r e m o v e d ,
a n d t h e p l a t e s
w e r e
w a s h e d t h r e e
t i m e s w i t h PBS
c o n t a i n i n g
1 f e t a l
c a l f
s e r u m a n d
0 . 0 5 T w e e n - 2 0
( b u f f e r
2 ) .
T h e n
0 . 0 2 5
m l o f
a n o p t i m a l d i l u t i o n o f 1 2 5 I - l a b e l e d a n t i - i m m u n o -
g l o b u l i n a n t i b o d y ( i n
b u f f e r
2 )
w a s
a d d e d t o e a c h
w e l l ,
i n c u b a t e d
a s b e f o r e f o r
1
h , a n d t h e n w a s h e d t h o r -
o u g h l y
w i t h PBS
a n d
a i r d r i e d .
The w e l l s
w e r e
c u t
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a n d
e a c h o n e
w a s
p l a c e d
i n a
7 - m l s c i n t i l l a t i o n
v i a l . F o u r
m i l l i l i t e r s o f
s c i n t i l l a t i o n c o c k t a i l ,
0 . 0 5
2 a 7 0
R e s e a r c h
P r o d u c t s
I n t e r n a t i o n a l
C o r p . ,
E l k
G r o v e
V i l l a g e , I l l . )
i n
s c i n t i l l a t i o n
g r a d e T o l u e n e ,
w a s
a d d e d t o e a c h
v i a l ,
a n d
t h e
r a d i o a c t i v i t y
w a s
c o u n t e d
i n
a
P a c k a r d
T r i - C a r b
l i q u i d s c i n t i l l a t i o n
s p e c t r o p h o -
t o m e t e r ,
m o d e l 3 3 8 0 .
N o n s p e c i f i c a d s o r p t i o n s
o f
b o t h
a n t i b o d y
a n d
1 2 5 1 I
l a b e l e d
a n t i - i m m u n o g l o b u l i n
w e r e a s s e s s e d
b y
p l a c i n g
d u p l i c a t e
a m o u n t s o f e a c h
d i l u t i o n i n w e l l s
c o n t a i n i n g
c o n c e n t r a t i o n s o f n o n v i r a l
p r o te in a n ti g e n e q u a l t o
t h o s e
p l a c e d
i n t h e
v i r a l
a n t i g e n
w e l l s .
P r e p a r a t i o n
o f
a n t i s e r a .
A f f i n i t y - p u r i f i e d , c l a s s -
s p e c i f i c g o a t
a n t i b o d i e s t o
c h i c k e n
i m m u n o g l o b u l i n s
i m m u n o g l o b u l i n
G
[ I g G ]
a n d
I g M
f r o m
s e r u m a n d
I g A
f r o m
b i l e )
w e r e
p r e p a r e d , t e s t e d f o r s p e c i f i c i t y ,
a n d
c o n j u g a t e d
w i t h f l u o r o c h r o m e s a s d e s c r i b e d
p r e -
v i o u s l y
9 ,
1 0 ) . M o n o s p e c i f i c
a n t i b o d y
w a s
i o d i n a t e d
w i t h
1 2 5 1 I
b y
t h e
c h l o r a m i n e - T
o x i d a t i o n
p r o c e d u r e
( 1 1 ) .
I m m u n o h i s t o l o g i c a l
m e t h o d s . A f t e r c o l l e c t i o n
o f
t h e l a s t s a l i v a
s a m p l e s ,
t w o
b i r d s
f r o m
e a c h v a c c i n a -
t i o n
g r o u p
w e r e s a c r i f i c e d . T i s s u e s
f r o m t h e u p p e r
r e s p i r a t o r y
t r a c t ,
o r a l
c a v i t i e s ,
a n d
o r b i t s
o f
n o r m a l
a d u l t
c h ic k en s w e r e
p r o c e s s e d
f o r
i m m u n o h i s t o l o g i c a l
e x a m i n a t i o n
b y
t h e
p a r a f f i n
e m b e d d i n g t e c h n i q u e o f
S a i n t e - M a r i e
( 3 3 ) .
F o u r - m i c r o m e t e r
s e c t i o n s
o f
e a c h
s p e c i m e n
w e r e
m o u n t e d
o n
g l a s s
s l i d e s , d e p a r a f f i n i z e d ,
a n d
r e h y d r a t e d
i n
PBS
b e f o r e
s t a i n i n g .
E a c h
s e c t i o n
w a s c o v e r e d
w i t h
a
d r o p o f
f l u o r e s c e i n -
o r r h o d a m i n e -
c o n j u g a t e d a n t i b o d y
t o
y , u
o r
a
c h a i n s a n d i n c u b a t e d
i n
a
h u m i d i f i e d
c h a m b e r
f o r
1
h
a t
3 7 C .
U n b o u n d
a n t i b o d y
was
r i n s e d
o f f
i n
a
s t a i n i n g
d i s h w i t h
t h r e e
c h a n g e s
o f
P B S ,
1 5 m i n
e a c h ,
a n d
t h e
s l i d e s
w e r e a i r
d r i e d .
S p e c i m e n s
w e r e
m o u n t e d
w i t h a 1 0
E l v a n o l
m o u n t i n g
m e d i u m
a n d
e x a m i n e d w i t h
a
s e r i e s
1 0 M i -
c r o s t a r
m ic r o s c o p e A m e r i c a n
O p t i c a l C o r p . , B u f f a l o ,
N . Y . ) e q u i p p e d
w i t h a n
i n c i d e n t - l i g h t f l u o r e s c e n t
i l -
l u m i n a t o r .
A p p r o p r i a t e
e x c i t e r a n d b a r r i e r f i l t e r s w e r e
u s e d
f o r
o b s e r v i n g
f l u o r e s c e i n a n d r h o d a m i n e
c o n j u -
g a t e s . P h o t o g r a p h s
w e r e
t a k e n
w i t h P a n a t o m i c X f i l m
E a s t m a n
K o d a k
C o . , R o c h e s t e r , N . Y . ) .
RESULTS
A n t i b o d y
i n egg
w h i t e s .
D u r i n g
p r e l i m i -
n a r y e x p e r i m e n t s ,
NDV
a n t i g e n s g r o w n
i n
e m -
b r y o n a t e d e g g s
a n d
a l l a n t o i c f l u i d
p r o v e d
t o b e
s u i t a b l e a s v i r u s
a n d
c o n t r o l
a n t i g e n s ,
r e s p e c -
t i v e l y ,
i n
t h e
r a d i o i m m u n o a s s a y . H o w e v e r , when
r a d i o l a b e l e d
a n t i - I g A
o r
- I g M
a n t i s e r a
w e r e
t e s t e d
i n t h i s
s y s t e m , h i g h
l e v e l s
o f
b a c k g r o u n d
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
3/7
LOCAL A N T I BOD Y R E SPON SE
I N CHICKENS
2 7 1
a c t i v i t y w e r e
o b t a i n e d
i n t h e
c o n t r o l
a n t i g e n
w e l l s .
E x a m i n a t i o n
o f t h e a l l a n t o i c
f l u i d o f 1 2
e g g s f o r t h e presence
o f
i m m u n o g l o b u l i n s
b y
t h e
d o u b l e
d i f f u s i o n
t e s t i n
g e l
w i t h
c l a s s - s p e c i f i c
a n t i s e r a r e v e a l e d
t h e
presence
o f
b o t h
I g A
a n d
I g M ,
b u t
no
I g G .
A
f u r t h e r
a n a l y s i s
was
made
o f
t h e
e g g
w h i t e s
o b t a i n e d
f r o m dams f r e e
o f
serum
a n t i - N D V a n t i b o d y
a n d
dams
p o s s e s s i n g
serum
a n t i - N D V n e u t r a l i z i n g a n t i b o d y .
The
w h i t e s
f r o m
6 eg gs
o f
e a c h source
were
i n d i v i d u a l l y
e x t r a c t e d ,
a n d
t h e
p r o t e i n
o f e a c h was
p r e c i p i -
t a t e d
b y
a d d i t i o n
o f an
e q u a l
volume
o f s a t u -
r a t e d
ammonium
s u l f a t e . Th e
p r e c i p i t a t e
was
r e s u s p e n d e d
i n
1 / 5
t h e
o r i g i n a l
v o l u m e o f
e g g
w h i t e .
A f t e r
d i a l y s i s
a g a i n s t
P B S ,
e a c h
s a m p l e
was
t e s t e d
f o r
NDV
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g a c t i v i t y .
A l l 6 o f t h e e g g
w h i t e
s a m p l e s
o b t a i n e d f r o m
d a m s h a v i n g
a n t i - N D V
a n t i b o d y
had
t i t e r s
o f
1 :
8 .
N o
n e u t r a l i z i n g a c t i v i t y
was
d e t e c t e d
i n
un-
d i l u t e d
c o n c e n t r a t e s
o f
e g g
w h i t e s f r o m
a n t i -
b o d y - f r e e
b i r d s .
C o n s e q u e n t l y ,
t o
a v o i d
i n t e r f e r -
ence
b y
e i t h e r
s p e c i f i c
or
n o n s p e c i f i c
a n t i b o d i e s
i n t h e
e g g w h i t e s ,
r a d i o i m m u n o a s s a y s
were
per-
f o r m e d
w i t h
v i r u s
p r o p a g a t e d
i n V e r o
monkey
c e l l s
a n d
e x t r a c t s o f n o n i n f e c t e d c e l l s
as
v i r a l
a n d
c o n t r o l
a n t i g e n s ,
r e s p e c t i v e l y .
Development
o f
a n t i b o d y
i n
a d u l t
c h i c k e n
salivas.
Th e l e v e l s o f
s p e c i f i c
c l a s s e s
o f
a n t i - N D V
a n t i b o d y
and
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g
a n t i b o d y
f o u n d i n s a l i v a
a n d
HI
a n t i b o d y
f o u n d
i n serum
o f
b i r d s v a c c i n a t e d e i t h e r
i . t .
and i n t r a -
n a s a l l y
or
i . m . w i t h
NDV are
g i v e n
i n T a b l e
1
a n d
F i g .
1 a n d
2 . HI a n d
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g
t i t e r s
were
e a c h
p l o t t e d
as t h e
g e o m e t r i c
mean
0
70
40 ~
:J
..
20
.
3
Z ~ ~
F I G .
1 . Anioylvl
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n
0
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0 _
CP 3
20
4.0
40
.4
-2
a )
0 4 7
10
14
2 1
28
34
3740
44
5 58
4
DAYS
POST
VACCINATION
FIG. 1.
Antibody
levels in
serum
HI
titer
and
s a l i v a
p l a q u e n e u t r a l i z a t i o n ,
I g G , and I g A ) o f
c h i c k -
ens
v a c c i n a t e d l o c a l l y
w i t h NDV f o l l o w e d b y
l o c a l
r e v a c c i n a t i o n
a r r o w ) .
GMT, G e o m e t r i c mean
t i t e r .
70 140
60O
-
1
20
5 0 . - 5 0
A
1 0 0 . ,
0
W~~~~~~~~~~~~~
471014 2 1
2 8
343740 44
1
58
DAYS
POST
VACCINATION
FIG.
2. Antibody
response in serum
HI t it er
and
saliva
plaque
neutralization, IgG, andIgA of
chick-
ens vaccinated
im.
with
NDV
followed
by
local
re-
v a c c i n a t i o n a r r o w ) .
GMT Geometric
mean t i t e r .
TABLE
1 .
Anti-NDV
a n t i b o d y
l e v e l s i n s e r u m
and
s a l i v a
o f
c h i c k e n s
v a c c i n a t e d
i . m .
o r
l o c a l l y ,
v i a
t h e
r e s p i r a t o r y t r a c t , f o l l o w e d
b y
l o c a l
r e v a c c i n a t i o n a t
3 0
d a y s
a f t e r
i n i t i a l
e x p o s u r e
Days
Serum HI t i t e r '
S a l i v a
a f t e r
P l a q u e
n e u t r a l i z a t i o n
Anti-NDV
I g A
( r e l a t i v e
Anti-NDV
I g G
( r e l a t i v e
i m .nit ial l
P l a q u t i t e r a
a c t i v i t y )
b
a c t i v i t y )
b
e x p o -
i . m .
L o c a l
s u r e
i . m .
L o c a l
i . m . L o c a l
i . m .
L o c a l
0 0
0
0
0
0 0
0
0
4
0 0
0 0 1 2 3 . 0
334.7
72.3
293.9
7 20 1 . 8 46 1 . 4
4
2 . 3
55
1 . 8
11
2 . 7
57 8 . 8 114.2
506.7
1 0
6 1
1 . 9 1 3 9
1 . 4 8
1 . 8
5 6
1 . 8 2 5
4 . 5 4 7
1 0 . 4
5 0
1 . 2
1 0 0
7 . 1
1 4 7 0
1 . 4
1 1 3
1 . 5 6
1 . 6
7 6
1 . 4 1 8
1 . 7
5 8
6 . 4
2 4
2 . 6
83
1 0 . 6
2 1
19
4 . 5
9 2
1 . 4
41.8 32 1 . 0 0 . 2 0 . 3 49 5 . 1
18 2 . 8 100
1 0 . 3
2 8 17 1 . 4 53
1 . 5
4
2 . 2 2 2
1 . 5 8 1 . 0
2 1
3 . 7
6
1 . 5
669.2
3 4
8
2 . 0 53
1 . 6
4
1 . 2 2 5
1 . 4
1 1
1 . 4
2 2
4 . 0
2
0 . 3
36
6 . 8
3 7 2 4
3 . 3 5 7
1 . 5 8
3 . 8
3 7
2 . 1
1 5 2 . 5 2 3
3 . 0
2 1
+
2 . 0
5 6
5 . 8
4 0
1 1 3 3 . 8
702.1
1 3
1 . 5
24
1 . 9
2 9 3 . 6
224.4
9 7
1 1 . 7
6 4
1 1 . 4
4 4 1 3 5
1 . 9 1 2 2
3 . 2
1 1
2 . 0
3 7
2 . 5 1 6 2 . 9
3 2
7 . 2
1 0 0
2 0 . 5
6 6
8 . 5
5 1
1 0 1
2 . 2 80
2 . 7 1 6
2 . 1 2 7 1 . 9 16 3 . 8 2 2
7 . 3 1 1 2 2 3 . 1 6 7 7 . 6
5 8
5 7
4 . 4
80 3 . 5
3 1
2 . 1
3 2
1 . 7 13 2 . 5 25 7 . 5
70 5 . 4
7 9
8 . 9
a
G e o m e t r i c mean
t i t e r
s t a n d a r d
e r r o r .
b
A v e r a g e
s t a n d a r d
e r r o r
o f
t h e
r e l a t i v e a c t i v i t y
a v e r a g e
c o u n t s p e r
m i n u t e )
o f t h e s a m p l e d i v i d e d
b y t h e
a c t i v i t y
o f a
s a l i v a s t a n d a r d
m u l t i p l i e d b y 1 0 0 ) .
V O L .
2 4 ,
1 9 7 9
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
4/7
2 7 2
E W E R T , B A R G E R ,
A N D
EIDSON
t i t e r o f
f o u r o r
f i v e
s a m p l e s c o l l e c t e d
o n a g i v e n
d a y . The l e v e l s o f a n t i - N D V
I g G a n d a n t i - N D V
I g A w e r e e a c h
r e p r e s e n t e d a s t h e
a r i t h m e t i c
mean o f t h e
c o u n t i n g r a t i o s
( t h e
p e r c e n t a g e
o f
t h e
a c t i v i t y
o f a
t e s t
s a m p l e
d i v i d e d
b y
t h e
a c t i v i t y
o f
a
s a l i v a
s t a n d a r d )
f o r
s a m p l e s
c o l -
l e c t e d o n a g i v e n d a y
a f t e r
v a c c i n a t i o n .
N o
Ig M
w a s d e t e c t e d i n
f r e s h ,
u n d i l u t e d
s a l i v a s a m p l e s
b y
t h e
O u c h t e r l o n y m e t h o d .
A l s o , i n a
p r e l i m i -
n a r y s tu d y w i t h
2 5 I - l a b e l e d a n t i - I g M
a n t i b o d y ,
a n t i b o d y
a g a i n s t
NDV
c o u l d
n o t
b e
d e t e c t e d i n
f r e s h s a l i v a s o b t a i n e d f r o m
b i r d s 7
a n d
1 4
d a y s
a f t e r i . t .
v a c c i n a t i o n . B o t h o f
t h e a b o v e t e s t s
r e v e a l e d
t h e
p r e s e n c e
o f
I g G
a n d
I g A
a n t i b o d i e s
i n
s a l i v a .
T h e r e f o r e , f u r t h e r
a s s a y s f o r
a n t i - N D V
Ig M w e r e
n o t
p e r f o r m e d i n
t h i s
s t u d y .
Among t h e
b i r d s
v a c c i n a t e d
i . t .
a n d
i n t r a n a -
s a l l y ,
t h e
l e v e l s
o f
a n t i b o d y
a c t i v i t y
f o l l o w e d
e a c h
o t h e r
v e r y c l o s e l y . A f t e r
r e a c h i n g m a x i -
mum v a l u e s
b e t w e e n 1 0 a n d 1 4
d a y s p o s t v a c c i n -
a t i o n ,
t h e l e v e l s
d r o p p e d
o n
d a y 2 8 . A f t e r
i t
r e v a c c i n a t i o n ,
t h e r e
w a s
a
s l i g h t
r i s e i n
t h e s e -
rum HI
t i t e r ,
w h i c h
r e a c h e d a
maximum
a r o u n d
2
w e e k s a f t e r
r e e x p o s u r e a n d t h e n
r e t u r n e d
t o
a
l e v e l
s l i g h t l y h i g h e r
t h a n
t h a t s e e n
b e f o r e
r e v a c -
c i n a t i o n .
A n t i b o d y
l e v e l s i n
s a l i v a
r e m a i n e d
e s -
s e n t i a l l y u n c h a n g e d
a f t e r
r e v a c c i n a t i o n .
A n t i b o d y
l e v e l s
o f
t h e
i . m . - v a c c i n a t e d
b i r d s
r e a c h e d
maximums
a b o u t
1 0
t o 1 4
d a y s
a f t e r
e x p o s u r e
a n d
t h e n
d r o p p e d
t o
b a r e l y
d e t e c t a b l e
l e v e l s
b y
d a y 2 1 . Wh en
c o m p a r e d w i t h t h e
i . t . -
v a c c i n a t e d g r o u p ,
t h e l e v e l s
o f s e r u m HI a n t i -
b o d y ,
s a l i v a r y
a n t i - N D V
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g
a n -
t i b o d y , a n d
I g G
a n t i b o d y w e r e a b o u t
h a l f
a s
h i g h
a s t h e i r
maximum
l e v e l s . S a l i v a r y
a n t i -
NDV
I g A w a s
b a r e l y
d e t e c t a b l e . L i v e
v i r u s w a s
d e t e c t e d i n
s a l i v a r y
s a m p l e s u p
t o 7
d a y s
a f t e r
i . t . r e v a c c i n a t i o n
o f t h e
i . m . - v a c c i n a t e d
b i r d s .
The v a c c i n e
v i r u s
w a s r e c o g n i z e d
b y
t h e a p p e a r -
a n c e
o f
p l a q u e s
2
d a y s
a f t e r
t h e p l a q u e s
o f t h e
v e l o g e n i c
s t r a i n s o f
NDV
h a d
a p p e a r e d
i n
t h e
n e u t r a l i z a t i o n
t e s t .
No
l i v e
v a c c i n e v i r u s
w a s
d e t e c t e d
i n
s a l i v a s
o f
i . t . - r e v a c c i n a t e d
b i r d s
w h i c h
h a d
b e e n
p r e v i o u s l y
v a c c i n a t e d i t
A f t e r
i . t .
r e v a c c i n a t i o n
o f t h e
i . m . - v a c c i n a t e d
g r o u p , a
m a r k e d r i s e i n
s e r u m HI a n t i b o d y
a n d
s a l i v a r y a n t i - N D V
I g G o c c u r r e d ,
r e a c h i n g a
p e a k
a b o u t 1 4
d a y s a f t e r
r e e x p o s u r e .
O n l y a
s l i g h t
r i s e
i n
s a l i v a r y
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g a c t i v i t y
a n d
a
g r a d u a l
r i s e
i n
s p e c i f i c
s a l i v a r y
I g A o c -
c u r r e d
a f t e r
r e v a c c i n a t i o n .
I m m u n o h i s t o l o g y .
T i s s u e s
f r o m
c h i c k e n s o f
e a c h
v a c c i n a t i o n
g r o u p
w e r e
e x a m i n e d
f o r
p l a s m a
c e l l s
w i t h
f l u o r o c h r o m e - l a b e l e d a n t i b o d -
i e s t o
I
y ,
a n d a
c h a i n s
t o
d e t e r m i n e
t h e
s o u r c e
o f
t h e
a n t i b o d y
f o u n d
i n
s a l i v a r y
s e c r e t i o n s .
A
s p a r s e
d i s t r i b u t i o n o f
p l a s m a c e l l s
w a s
f o u n d i n
t h e l a m i n a
p r o p r i a
o f t h e
r o o f
a n d
f l o o r
o f t h e
o r a l
c a v i t y
a n d t h e
t o n g u e . T h e s e c e l l s
w e r e
p r i m a r i l y o f
t h e
I g G a n d Ig M
c l a s s e s ,
w i t h f e w
I g A - p o s i t i v e
p l a s m a c e l l s b e i n g d e t e c t e d .
S a l i -
v a r y g l a n d s i n t h e
a b o v e
t i s s u e s ,
h o w e v e r , c o n -
t a i n e d
e x c l u s i v e l y I g A - p o s i t i v e
p l a s m a
c e l l s
w i t h in t h e
i n t e r a c i n o u s
s p a c e s . The
l a r g e s t n u m -
b e r s
o f
p l a s m a
c e l l s
f o u n d
i n
t h e
h e a d
r e g i o n s o f
t h e
c h i c k e n s
w e r e i n t h e
H a r d e r i a n
g l a n d s .
A l l
t h r e e c l a s s e s
o f
i m m u n o g l o b u l i n - p r o d u c i n g
p l a s m a
c e l l s w e r e
f o u n d
i n
t h e i n t e r a c i n o u s
s p a c e s o f
t h e
g l a n d s
( F i g . 3 ) .
The m a j o r i t y
o f
t h e s e
c e l l s
c o n t a i n e d
I g G , w h e r e a s
I g M -
a n d
I g A - c o n t a i n i n g
p l a s m a c e l l s
r e p r e s e n t e d o n l y a
s m a l l
p r o p o r t i o n
o f t h e
c e l l s
p r e s e n t .
DISCUSSION
O b s e r v a t i o n s
r e p o r t e d
i n t h i s
s t u d y
i n d i c a t e
t h a t I g G
a n d
I g A
a r e
t h e
p r e d o m i n a n t
i m m u -
n o g l o b u l i n s
i n s a l i v a .
T h e s e
f i n d i n g s
a r e
i n
a g r e e m e n t
w i t h s e v e r a l
o t h e r
r e p o r t s
( 1 9 - 2 1 , 2 8 ) .
I m m u n o h i s t o l o g i c a l
e x a m i n a t i o n o f v a r i o u s
t i s -
s u e s
o f
u p p e r
r e s p i r a t o r y
t r a c t s r e v e a l e d
t h a t
I g G - c o n t a i n i n g
p l a s m a c e l l s
c o m p r i s e
t h e
m a j o r
p o r t i o n
o f
t h e
p l a s m a
c e l l s
p r e s e n t
i n
r e i m m u -
n i z e d
b i r d s . B o t h
I g A -
a n d
I g M - c o n t a i n i n g c e l l s ,
w h i c h
w e r e a b o u t
e q u a l l y p r e v a l e n t ,
r e p r e s e n t e d
o n l y
a s m a l l
p r o p o r t i o n
o f t h e t o t a l
n u m b e r o f
p l a s m a
. c e l l s .
O f
a l l
t h e
t i s s u e s
e x a m i n e d ,
t h e
H a r d e r i a n
g l a n d
c o n t a i n e d
t h e
h i g h e s t
d e n s i t y
o f
p l a s m a
c e l l s
o f
a l l
t h r e e
c l a s s e s .
I n
u n i m m u -
n i z e d
b i r d s , t h e
p r o p o r t i o n s
o f
c e l l s
c o n t a i n i n g
e a c h o f
t h e
t h r e e c l a s s e s o f
i m m u n o g l o b u l i n
a r e
a b o u t
e q u a l
i n
t h e
H a r d e r i a n
g l a n d
u n p u b l i s h e d
d a t a ) .
The
a p p a r e n t
h i g h e r p r o p o r t i o n
o f
I g G -
c o n t a i n i n g
p l a s m a
c e l l s
o b s e r v e d
i n
t h i s
s t u d y
may
h a v e b e e n a r e s u l t o f
l o c a l
i m m u n i z a t i o n .
B i e n e n s t o c k e t a l .
( 4 )
l i k e w i s e
f o u n d
t h e
H a r -
d e r i a n
g l a n d
t o
c o n t a i n
a s m a l l
p r o p o r t i o n
o f
I g A - s y n t h e s i z i n g
p l a s m a
c e l l s ;
b u t
t h e y
r e p o r t e d
t h a t
IgM
c e l l s
w e r e
m o r e
p r e v a l e n t
t h a n
I g G -
c o n t a i n i n g
c e l l s .
T h i s d e n s e
c o n c e n t r a t i o n
o f
p l a s m a
c e l l s
i n
t h e
H a r d e r i a n
g l a n d s
a n d
t h e
d u c t s
o f
t h e l a t e r a l
n a s a l
g l a n d 1 )
a s w e l l a s
t h o s e
d i s t r i b u t e d
t h r o u g h o u t
t h e
i n t e r a c i n o u s
s p a c e s
o f
s a l i v a r y
g l a n d s
a n d
t h e l a m i n a
p r o p r i a
o f t h e
o r a l
c a v i t y
m o s t
l i k e l y
c o n t r i b u t e t o
t h e
s e c r e t i o n s w h i c h
d i s c h a r g e
i n t o t h e
e y e s , m o u t h ,
a n d
n a s a l
v e s t i b u l e ,
t h u s
b a t h i n g
t h e
u p p e r
r e s -
p i r a t o r y
t r a c t
a n d
p o s s i b l y
t h e a n t e r i o r
e n d
o f
t h e t r a c h e a
w i t h
a n t i b o d y .
M u e l l e r e t a l .
( 2 4 )
r e p o r t e d
t h a t
s h e e p
e r y t h r o c y t e s
w h i c h
w e r e
d r o p p e d
i n t o t h e
e y e
o f
a
b i r d
c o u l d
a l m o s t
i m m e d i a t e l y
b e
d e t e c t e d i n t h e
m o u t h . T h e r e -
f o r e ,
t h e
s e c r e t i o n s
a n d
c e l l s
d i s c h a r g e d
f r o m
t h e
H a r d e r i a n
g l a n d s ,
w h i c h
e m p t y
i n t o t h e
o r b i t ,
c a n
q u i c k l y
f i n d
p a s s a g e
t o
t h e
n a s a l a n d
o r a l
c a v i t i e s
v i a
t h e
l a c r y m a l
d u c t s .
T h i s
same
g r o u p
d e m o n s t r a t e d t h a t
a n t i b o d y - p r o d u c i n g
c e l l s
a p -
p e a r e d
i n
t h e H a r d e r i a n
g l a n d s
when
a n t i g e n
w a s
i n t r o d u c e d
i n
t h e
e y e
b u t
n o t when i t was
I N F E C T . IMMUN
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
5/7
LOCAL
A N T IBO DY RESPONSE
I N CHICKENS 273
.
oS.S
F I G . 3 .
S e c t i o n s
o f
H a r d e r i a n
g l a n d s
f r o m
N D V - r e v a c c i n a t e d
c h i c k e n s ,
s t a i n e d w i t h
f l u o r o c h r o m e - l a b e l e d
a n t i b o d y
t o
a , b )
y
c h a i n s ,
c ,
d )
, u
c h a i n s ,
and
e ,
/ )
a c h a i n s .
M a g n i f i c a t i o n s :
( a ) x l 1 0 , b )
x 4 0 0 , c ) x 8 0 ,
d )
x 3 7 0 , e )
x 9 5 ,
( D
x 3 7 0 .
g i v e n
i n t r a v e n o u s l y , t h u s i n d i c a t i n g t h e l o c a l
n a t u r e
o f t h i s
l y m p h o i d
s y s t e m .
The
e f f e c t s o f v a c c i n a t i o n a n d
r e v a c c i n a t i o n
w i t h
r e s p e c t
t o t h e
s e r u m
a n t i b o d y
r e s p o n s e
a r e
c o m p a r a b l e
t o t h o s e o b t a i n e d
i n
a s i m i l a r
s t u d y
c o n d u c t e d
b y
B e a r d a n d
E a s t e r d a y
2 ) ,
i n
w h i c h
i . m .
a n d
a e r o s o l m e t h o d s
o f
v a c c i n a t i o n
a n d
a e r o s o l
c h a l l e n g e
w e r e
u s e d .
B i r d s v a c c in a t e d
b y
t h e
r e s p i r a t o r y
r o u t e h a d
h i g h e r
HI
t i t e r s t h a n
d i d t h e i . m . - v a c c i n a t e d
b i r d s . A f t e r a e r o s o l c h a l -
l e n g e , t h e y
d e t e c t e d n o
a p p r e c i a b l e
r i s e
i n
s e r u m
a n t i b o d y
l e v e l s
i n
t h e a e r o s o l - v a c c i n a t e d b i r d s
b u t
f o u n d
a
p r o n o u n c e d
i n c r e a s e
i n
t h e i . m . -
v a c c i n a t e d
g r o u p .
I n t h e
p r e s e n t
s t u d y ,
t h e p e -
r i o d
b e t w e e n
p r i m a r y
v a c c i n a t i o n a n d
r e e x p o -
s u r e
w a s ,
7
d a y s
l o n g e r
t h a n
t h a t
i n
t h e i r
s t u d y ;
c o n s e q u e n t l y ,
t h e
s e r u m
a n t i b o d y
d r o p p e d
t o
r e l a t i v e l y
l o w e r
l e v e l s ,
b u t
t h e
c h a n g e
i n t h e s e
l e v e l s
a f t e r v a c c i n a t i o n
c o r r e s p o n d s
t o t h e i r f i n d -
i n g s .
T h e y
a l s o o b s e r v e d
t h a t
a l t h o u g h
n o v i r u s
c o u l d
b e i s o l a t e d
f r o m t h e t r a c h e a s
o f
a e r o s o l -
v a c c i n a t e d
b i r d s
f r o m
1
h
t o
8
d a y s
a f t e r c h a l -
l e n g e ,
v i r u s
w a s
i s o l a t e d
f r o m
i . m . - v a c c i n a t e d
b i r d s
f r o m 8 h
t o
4
d a y s
a f t e r
c h a l l e n g e .
T a k e n
t o g e t h e r ,
t h e s e
o b s e r v a t i o n s
p r o v i d e
a
s t r o n g
a r g u m e n t
f o r
t h e
p r o t e c t i o n
o f t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t
b y
l o c a l
immune m e c h a n i s m s
w h i c h
a r e
a c t i v a t e d
b y
l o c a l
a p p l i c a t i o n
o f
a n t i g e n
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V O L .
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
6/7
2 7 4 EWERT, BARGER, A N D
EIDSON
w h i c h n e u t r a l i z e v i r u s u p o n r e e x p o s u r e , i n t h e
a b s e n c e
o f d e t e c t a b l e
s y s t e m i c a n t i b o d y s y n t h e -
s i s . The
d a t a p r es e n t e d h e r e i n
s u g g e st t h at t h i s
p r o t e c t i o n
i s
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p a r t
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b y
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b o d y o f
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I g A
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I g G c l a s s e s f o u n d
i n t h e
s e c r e t i o n s
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r e s p i r a t o r y
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i . t .
v a c c i n a t i o n p r o d u c e d
a h i g h e r
s u s t a i n e d
l e v e l o f
a n t i b o d y
i n
s a l i v a
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n a t i o n .
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f a i l u r e
t o d e t e c t a
s i g n i f i c a n t
r i s e
i n
l o c a l
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b i r d s a f t e r
r e v a c c i n a t i o n i s
m o s t l i k e l y
d u e t o t h e n e u t r a l i -
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o f
v i r u s b y a n t i b o d y w h i c h w a s p r e s e n t a t
t h e
t i m e o f c h a l l e n g e , b u t i t
may
a l s o b e d u e t o
t h e
f a i l u r e
o f
t h e
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t o
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s e c o n d a r y a n t i b o d y
r e s p o n s e .
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o f
p a r t i c u l a r i n t e r e s t
a n d
w o r t h y
o f f u r t h e r
s t u d y
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a n d
r e s i s t a n c e
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b y
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t h i s
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p o r t ( 2 ) p e r s i s t e d f o r a t l e a s t 4
a n d
3
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r e s p e c t i v e l y .
A f t e r
v a c c i n a t i o n , t h e
a p p e a r a n c e
o f
s p e c i f i c
I g G
a n d
I g A
a n t i b o d y
c o i n c i d e s w i t h t h a t o f
p l a q u e - n e u t r a l i z i n g a c t i v i t y
i n
s a l i v a .
A l t h o u g h
t h e
i n i t i a l
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i n
a n t i b o d y
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t h e
r e s u l t
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t h e
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l e v e l s
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a n t i b o d y
w h i c h w e r e
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t h e
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m o s t
l i k e l y
d u e
t o l o c a l
p r o d u c t i o n
o f
a n t i b o d y .
The
c o n t r i b u t i o n o f
I g G
a n d I g A
t o
t h e
s a l i v a r y a n t i bo d y c o r r e s p o n ds
t o
t h e
r e l a t i v e o c c u r r e n c e
o f t h e s e
p l a s m a
c e l l s
t h r o u g h o u t
t h e
u p p e r
r e s p i r a t o r y
t r a c t s o f b i r d s
v a c c i n a t e d
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i n t r a n a s a l l y .
T h e s e
d a t a
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n o t d e f i n e
a r o l e f o r t h e
I g M - s e c r e t i n g c e l l s ,
w h i c h we
k n o w
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p r e s e n t
i n
t h e
H a r d e r i a n
g l a n d
i n a b o u t
e q u a l
p r o p o r t i o n s
t o t h e
I g A -
a n d
I g G - s e c r e t i n g
c e l l s b e f o r e
a n t i g e n
c h a l l e n g e .
T h a t
i t
i s
m i n i m a l c a n
b e
d i s c e r n e d
f r o m
t h e
l a c k
o f
p r o l i f e r a t i o n
o f
t h e
I g M
c e l l s
a f t e r c h a l -
l e n g e
a n d
t h e
a b s e n c e
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I g M
i n
t h e
s a l i v a ,
a s
d e t e r m i n e d
b y
a
s e n s i t i v e
r a d i o a s s a y .
D e f i n i t i o n
o f
t h e i r
r o l e
r e q u i r e s
f u r t h e r
s t u d y .
The o b s e r v a t i o n s
r e p o r t e d
h e r e i n
e m p h a s i z e
t h e
i m p o r t a n c e
o f
a p p l y i n g
v a c c i n e t o
t h e
u p p e r
r e s p i r a t o r y
t r a c t .
T h i s
r e g i o n
a p p e a r s
t o
b e
p a r -
t i c u l a r l y
e n d o w e d
w i t h
a
d e n s e
p o p u l a t i o n
o f
B
c e l l s
w h i c h a r e
e a s i l y
a c c e s s i b l e
t o s t i m u l a t i o n
b y
l o c a l
a p p l i c a t i o n
o f
a n t i g e n s .
I n
t h e
c a s e
o f
a e r o s o l
v a c c i n a t i o n , d r o p l e t
s i z e s s h o u l d
b e u s e d
w h i c h
c a n b e
e a s i l y
r e t a i n e d
i n
t h e
u p p e r r e s p i -
r a t o r y
t r a c t .
S m a l l
d r o p l e t s
m ay
e a s i l y
p e n e t r a t e
t o
t h e l o w e r
r e g i o n s
o f t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t
a n d
t h e r e b y
s t i m u l a t e
a h u m o r a l
immune
r e s p o n s e
( 3 4 )
b u t
f a i l
t o
a c t i v a t e
i m m u n o c y t e s
i n t h e
u p p e r r e s p i r a t o r y
t r a c t .
C o n s e q u e n t l y ,
a e r o s o l
g e n e r a t o r s
w h i c h
p r o d u c e
a
w i d e
r a n g e
o f
d r o p -
l e t
s i z e s
m ay
e f f e c t
t h e
b e s t
o v e r a l l s t i m u l a t i o n
o f
b o t h l o c a l
a n d
h u m o r a l
i m m u n i t i e s .
I N F E C T .
I M M U N .
The d e t e c t i o n
o f Ig M
a n d
I g A b u t
n o t I g G
i n
t h e w h i t e s o f u n e m b r y o n a t e d e g g s i s c o n s i s t e n t
w i t h t h e f i n d i n g s o f
R o s e
e t a l . ( 3 1 ) . H o w e v e r ,
t h e
d e t e c t i o n o f
a n t i - N D V
a c t i v i t y
i n
e g g
w h i t e s
h a s
n o t
b e e n
p r e v i o u s l y
r e p o r t e d . B r a d l y e t a l .
( 6 )
w e r e
n o t
a b l e
t o
d e t e c t
N D V - n e u t r a l i z i n g
a c t i v i t y
i n d i l u t e d ( f i v e t i m e s ) e g g
w h i t e s
o b -
t a i n e d f r o m
e g g s
o f i m m u n i z e d h e n s ,
a l t h o u g h
h i g h
l e v e l s
o f a c t i v i t y
w e r e f o u n d
i n
t h e y o l k s .
A l s o ,
B o r n s t e i n e t a l .
( 5 ) f a i l e d t o d e t e c t HI
a n t i b o d y
i n
w h i t e s o f
e g g s f r o m
i m m u n i z e d
h e n s
I n t h e
f i r s t r e p o r t
i t
i s
l i k e l y t h a t a n y
a n t i - N D V
a c t i v i t y ,
i f
p r e s e n t , may
h a v e b e e n
d i l u t e d
b e -
y o n d d e t e c t i o n , a n d
i n t h e s e c o n d
r e p o r t
t h e t e s t
u s e d
f o r
d e t e c t i o n w a s
n o t
s e n s i t i v e
e n o u g h .
S i mi l a r n e g a ti ve r e s u l t s
w e r e o b t a i n e d
i n
t h i s
s t u d y
w h e n
e g g w h i t e s w e r e a s s a y e d f o r
HI
a c t i v i t y .
T h i s
f u r t h e r
c o n f i r m s t h e
s e n s i t i v i t y
o f
t h e
r a d i o i m m u n o a s s a y d e s c r i b e d
h e r e i n .
The
r e s u l t s
r e p o r t e d h e r ei n s u gg e s t t h a t i n
b i r d s ,
a s i n m a m m a l s , m a t e r n a l a n t i b o d y
p r i -
m a r i l y o f t h e
I g A
a n d
Ig M
c l a s s e s
may
b e a c -
q u i r e d
b y o f f s p r i n g
b y i n g e s t i o n r a t h e r
t h a n
b y
d i r e c t a b s o r p t i o n
i n t o
t h e f e t a l
c i r c u l a t i o n .
Ma-
t e r n a l
I g A
a n d
Ig M p r e s e n t i n t h e o vi du c t
a n d
i n c o r p o r a t e d
i n
t h e e g g w h it e s m i x w i t h t h e
a m n i o t i c
f l u i d a n d b a t h e t h e
e x t e r n a l a n d
i n t e r -
n a l s u r f a c e s o f
t h e e m b r y o , p r o v i d i n g
t r a n s i e n t
p r o t e c t i o n
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t h e
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C u n n i n g h a m ,
C .
H .
1 9 6 6 . A
l a b o r a t o r y
g u i d e
t o
v i r o l o g y ,
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7/26/2019 Infect. Immun.-1979-Ewert-269-75.pdf
7/7
LOCAL
A N T IBO DY
RESPONSE
IN
CHICKENS
2 75
6 t h e d . B u r g e s s P u b l i s h i n g
C o . , M i n n e a p o l i s .
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c h i c ke ns w i t h
N e w c a s -
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d i s e a s e v i r u s . I n f e c t . I m m u n .
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E w e r t ,
D .
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S .
E i d s o n ,
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D .
L .
Dawe.
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c h e a l
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A r c h .
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4 3 : 2 3 5 - 2 4 1 .
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H u t c h i n s o n ,
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D . ,
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D .
W.
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1 9 7 2 .
S i m p l i f i e d
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d i a g n o s t i c s e r o l o g y . A p p l . M i c r o -
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s p e c i m e n s .
J .
C h i n . M i c r o b i o l . 1 : 4 2 9 - 4 3 3 .
1 7 .
J u n g h e r r ,
E . L .
1 9 6 4 .
P a t h o g e n i c i t y
o f N e w c a s t l e
d i s e a s e
v i r u s
f o r
t h e
c h i c k e n ,
p .
2 5 7 - 2 7 2 .
I n R .
P .
H a n s o n
e d . ) ,
N e w c a s t l e d i s e a s e v i r u s :
a n
e v o l v i n g
p a t h o g e n .
U n i v e r -
s i t y
o f
W i s c o n s i n
P r e s s ,
M a d i s o n .
1 8 .
K o h n ,
A .
1 9 5 5 .
Q u a n t i t a t i v e
a s p e c t s
o f N e w c a s t l e
d i s e a s e
v i r u s
i n
i n f e c t i o n : e f f e c t
o f
r o u t e o f
i n f e c t i o n s o n
t h e
s u s c e p t i b i l i t y
o f
c h i c k s . Am.
J . V e t .
R e s .
1 6 : 4 5 0 - 4 5 7 .
1 9 .
L e b a c q - V e r h e y d e n ,
A .
M
J .
P .
V a e r m a n ,
and
J . F .
H e r e m a n s . 1 9 7 4 .
Q u a n t i f i c a t i o n
a n d
d i s t r i b u t i o n o f
c h i c k e n
i m m u n o g l o b u l i n s I g A , Ig M
a n d
I g G
i n s e r u m
a n d s e c r e t i o n s .
I m m u n o l o g y
2 7 : 6 8 3 - 6 9 2 .
2 0 .
L e s l i e ,
G .
A . ,
a n d
L N .
M a r t i n . 1 9 7 3 .
S t u d i e s o n t h e
s e c r e t a r y
i m m u n o l o g i c s y s t e m
o f f o w l .
I I I . S e r u m a n d
s e c r e t a r y I g A
o f
t h e
c h i c k e n . J .
I m m u n o l .
1 1 0 : 1 - 9 .
2 1 .
L e s l i e ,
G .
A . ,
and
L
N .
M a r t i n .
1 9 7 4 .
The
s e c r e t a r y
i m m u n o l o g i c s y s t e m
o f
f o w l .
I V .
S e r u m
a n d
s a l i v a r y
i m m u n o g l o b u l i n s i n
n o r m a l ,
a g a mm a g l o b u l i n e mi c a n d
d y s g a m m a g l o b u l i n e m i c c h i c k e n s . I n t .
A r c h .
A l l e r g y
A p p l . I m m u n o l . 4 6 : 8 3 4 - 8 4 1 .
2 2 .
L o w r y , 0 .
H . , N . J .
R o s e b r o u g h ,
A .
L .
F a r r ,
and
R . J .
R a n d a l l . 1 9 5 1 .
P r o t e i n
m e a s u r e m e n t
w i t h t h e F o l i n
p h e n o l
r e a g e n t .
J .
B i o l .
C h e m .
1 9 3 : 2 6 5 - 2 7 5 .
2 3 . M a l k i n s o n ,
M . ,
and
P .
A . S m a l l ,
J r .
1 9 7 7 .
L o c a l
i m -
m u n i t y
a g a i n s t N e w c a s t l e d i s e a s e v i r u s
i n t h e n e w l y
h a t c h e d
c h i c k e n ' s r e s p i r a t o r y
t r a c t .
I n f e c t .
I m m u n .
1 6 :
5 8 7 - 5 9 2 .
2 4 .
M u e l l e r , A . P . ,
K .
S a t o ,
and
B .
G l i c k . 1 9 7 1 .
The
c h i c k e n
l a c r i m a l g l a n d ,
g l a n d
o f
H a r d e r ,
c a e c a l
t o n s i l ,
a n d a c -
c e s s o r y
s p l e e n s a s
s o u r c e s
o f
a n t i b o d y - p r o d u c i n g
c e l l s .
C e l l .
I m m u n o l . 2 : 1 4 0 - 1 5 2 .
2 5 .
N a t i o n a l
R e s e a r c h C o u n c i l . 1 9 7 1 . M e t h o d s f o r e x a m -
i n i n g
p o u l t r y
b i o l o g i c s
a n d
f o r
i d e n t i f y i n g
a n d
q u a n t i -
f y i n g a v ia n p a th o g en s .
N a t i o n a l
Academy
o f S c i e n c e s ,
W a s h i n g t o n , D . C .
2 6 .
O g r a ,
P .
L ,
and
D .
T .
K a r z o n .
1 9 7 0 . R o l e
o f i m m u n o -
g l o b u l i n s
i n
t h e
m e c h a n i s m o f
m u c o s a l
i m m u n i t y t o
v i r u s
i n f e c t i o n .
P e d i a t r .
C l i n . N o r t h
Am. 1 7 : 3 8 5 - 4 0 0 .
2 7 .
O g r a ,
P
L ,
R .
B .
W a l l a c e ,
G .
Vmana,
S . S .
O g r a ,
D .
K e r r - G r a n t ,
and
A .
M o r g g .
1 9 7 4 .
I m p l i c a t i o n o f
s e -
c r e t o r y
immune
s y s t e m ,
p .
2 7 1 - 2 8 2 .
I n
J .
M e s t e c k y
a n d
A .
R .
L a w t o n
H I
( e d . ) ,
The
i m m u n o g l o b u l i n
A
s y s t e m .
P l e n u m
P u b l i s h i n g
C o r p . ,
N e w Y o r k .
2 8 .
O r l a n s , E . ,
and
M. E . R o s e . 1 9 7 2 .
An
I g A - l i k e i m m u n o -
g l o b u l i n i n t h e f o w l .
I m m u n o c h e m i s t r y 9 : 8 3 3 - 8 3 8 .
2 9 .
O u c h t e r l o n y ,
0 .
1 9 4 9 .
A n t i g e n - a n t i b o d y
r e a c t i o n s
i n
g e l s .
A c t a P a t h o l . M i c r o b i o l .
S c a n d . 2 6 : 5 0 7 - 5 1 5 .
3 0 . P a r r y , S . H . , and I . D . A i t k e n . 1 9 7 3 .
I m m u n o g l o b u l i n
A
i n
t h e
r e s p i r a t o r y
t r a c t o f
t h e c h i c k e n
f o l l o w i n g e x p o -
s u r e t o
N e w c a s t l e
d i s e a s e v i r u s .
V e t . R e c .
6 3 : 2 5 8 - 2 5 9 .
3 1 .
R o s e ,
M.
E . ,
E .
O r l a n s ,
and
N .
B u t t r e s s . 1 9 7 4 . Immu-
n o g l o b u l i n
c l a s s e s
i n
t h e h e n ' s e g g s : t h e i r
s e g r e g a t i o n i n
y o l k
a n d
w h i t e .
E u r . J .
I m m u n o l .
4 : 5 2 1 - 5 2 3 .
3 2 .
R o s e n t h a l ,
J .
D . ,
K .
H a y a s h i ,
and A . L .
N o t k i n s .
1 9 7 3 .
C o m p a r i s o n
o f
d i r e c t a n d i n d i r e c t
s o l i d - p h a s e
m i c r o r a -
d i o i m m u n o a s s a y s
f o r
t h e
d e t e c t i o n
o f
v i r a l
a n t i g e n s
a n d
a n t i v i r a l
a n t i b o d y .
A p p l .
M i c r o b i o l .
2 5 : 5 6 7 - 5 7 3 .
3 3 .
S a i n t e - M a r i e , G .
1 9 6 2 .
A p a r a f f i n
e m b e d d i n g
t e c h n i q u e
f o r
s t u d i e s
e m p l o y i n g
i m m u n o f l u o r e s c e n c e .
J .
H i s t o -
c h e m .
C y t o c h e m .
1 0 : 2 5 0 - 2 5 6 .
3 4 . Waldman, R .
H . ,
and
R . G a n g u l y . 1 9 7 4 .
T h e r o l e o f t h e
s e c r e t a r y
immune
s y s t e m
i n
p r o t e c t i o n
a g a i n s t
a g e n t s
w h i c h
i n f e c t
t h e
r e s p i r a t o r y t r a c t , p . 2 8 3 - 2 9 4 .
I n
J .
M e s t e c k y
a n d
A .
R .
L a w t o n
I I I
( e d . ) ,
The
i m m u n o g l o b -
u l i n
A
s y s t e m .
P l e n u m
P u b l i s h i n g C o r p . , N e w
Y o r k .
3 5 .
Z a k a y - R o n e s , Z . , and
R .
L e v y .
1 9 7 3 .
I m m u n o l o g i c r e -
s p o n s e
o f
c h i c k s t o i n a c t i v a t e d
N e w c a s t l e
d i s e a s e v i r u s .
A v i a n D i s .
1 7 : 4 5 0 - 4 5 2 .
3 6 .
Z a k a y - R o n e s ,
Z . ,
R .
L e v y , and G .
S p i r a .
1 9 7 1 L o c a l
i m m u n o l o g i c
r e s p o n s e
t o
i m m u n i z a t i o n
w i t h
i n a c t i -
v a t e d N e w c a s t l e
d i s e a s e v i r u s . J .
I m m u n o l .
1 0 7 : 1 1 8 0 -
1 1 8 3 .
VOL.
2 4 ,
1 9 7 9
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