IMMULITE:IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG

Toxoplasma Quantitative IgG

For the Quantitative Measurement of IgG Antibodies to Toxoplasma gondii in Human Serum

For use on the IMMULITE and IMMULITE 1000 systems

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG

2 IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG (PILKTXP-12, 2006-08-08)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE and IMMULITE 1000 Analyzers for the quantitative measurement of IgG antibodies to Toxoplasma gondii (toxoplasma) in human serum, as an aid in the determination of serological status to Toxoplasma gondii.

This kit is not FDA-cleared for use in the testing (i.e. screening) of blood or plasma donors.

Catalog Number: LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Test Code: TXP Color: Light Gray CDC Analyte Identifier Code: 6113 CDC Test System Identifier Code: 10159 CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and Explanation Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite capable of infecting most mammals, including humans. The organism is transmitted through ingestion of insufficiently cooked meat. Throughout the world, 1 to 90 percent of populations may be infected,7 with 25 to 30 percent of the adult population infected in the United States.3 While toxoplasmosis may be manifested in several forms, infections are usually clinically inapparent, and latent infections usually persist for life.2 Overt clinical symptoms are similar to infectious mononucleosis, with lymphadenopathy, fever, headache, malaise and sometimes pneumonia and myocarditis.6

As with other latent infections, acute toxoplasma infection can pose a serious threat to immunocompromised individuals and newborns who acquire the infection in utero. Immunosuppressed patients may develop encephalitis, myocarditis or pneumonitis.3 Congenital infections usually result as a consequence of asymptomatic acute maternal infection. This infection can cause premature delivery, spontaneous abortion or

stillbirth.4,6 Neonates may manifest chorioretinitis, hydrocephaly, microcephaly, cerebral calcification and psychomotor retardation.1 The majority of congenitally infected children will not exhibit any symptoms until later in life.4

Management of toxoplasmosis requires serological monitoring of infected individuals,3 as the organism is not readily available for culture. Quantitative testing for the presence of toxoplasma IgG can be useful to determine prior infection and indicate reactivation of the infection. Accurate diagnostic information is important, particularly during pregnancy, as treatment with spiramycin can reduce the risk to the fetus.5

Principle of the Procedure IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG is a solid-phase, sequential chemiluminescent immunoassay. Incubation Cycles: 2 30 minutes.

Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG (PILKTXP-12, 2006-08-08) 3

Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 L of the prediluted patient sample (1-in-21 dilution). (Sample cup must contain at least 100 L more than the total volume required.) Storage: 3 days at 28C or 6 months at 20C.13 Patient Sample Dilution: Serum samples must be prediluted 1-in-21 in IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2). This dilution must be performed manually e.g. by adding 20 L pf patient sample to 400 L of Sample Diluent (LIGZ2, supplied in the kit). Alternatively, the IMMULITE 1000 Windows system performs the dilution on board, automatically, using LIGW (provided in the IgG/IgM Sample Diluent Module, L1KIGW1,5). Printed results have been corrected for the 1-in-21 dilution.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 28C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. The bead is coated with inactivated toxoplasma antigen. However, caution is advised because of the possible presence of residual organism when working with, or disposing of, the materials supplied. The anti-toxoplasma IgG results determined for a given specimen with

assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably."

Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay.

Toxoplasma Quantitative IgG Test Units (LTXP1) Each barcode-labeled unit contains one bead coated with inactivated, partially purified Toxoplasma gondii antigen (RH strain tachyzoites from mouse peritoneum). Stable at 28C until expiration date. LKTXP1: 100 units. LKTXP5: 500 units. Allow the Test Unit bags to come to room temperature before opening. Open by cutting along the top edge, leaving the ziplock ridge intact. Reseal the bags to protect from moisture.

Toxoplasma Quantitative IgG Reagent Wedges (LTXPA, LTXPB) With barcodes. LTXPA: 7.5 mL of a protein-based buffer, with preservative. LTXPB: 7.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer, with preservative. Store capped and refrigerated: stable at 28C until expiration date. Recommended usage is within 30 days after opening when stored as indicated. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 5 sets.

Toxoplasma Quantitative IgG Adjustors (LTXPL, LTXPH) Two vials (Low and High), 4 mL each, of human serum with IgG reactive to toxoplasma, in buffer, with preservative. (No predilution is required.) Stable at 28C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 sets.


Toxoplasma Quantitative IgG Controls (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Three vials (Negative, Low Positive and Positive), 2 mL each. LTXPC1 (Negative Control): One vial containing human serum with IgG nonreactive to toxoplasma, with preservative. LTXPC2, LTXPC3 (Low Positive Control, Positive Control): Two vials containing human serum with IgG reactive to toxoplasma, with preservative. Stable at 28C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 sets. IMMULITE: Toxoplasma IgG controls require the same manual 1-in-21 predilution as patient samples, with IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2). IMMULITE 1000: The IMMULITE 1000 software performs automatic on-board dilution of patient and control samples. Enter controls as controls. Refer to the control insert for concentration levels.

IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2) For the manual dilution of patient samples and controls. 100 mL nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 28C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20C. LKTXP1: 1 vial. LKTXP5: 3 vials. For on-board dilution of patient samples using IMMULITE 1000 Windows, refer to the Kit Components Supplied Separately section.

Kit Components Supplied Separately

IgG/IgM Sample Diluent Module (L1KIGW1,5) Required for the on-board dilution of patient samples and controls using IMMULITE 1000 Windows. Sample Diluent wedges (LIGW) containing concentrated (2.5X) non-human protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 28C until expiration date. L1KIGW1: 2 Wedges. L1KIGW5: 10 Wedges. LSUBX: Chemiluminescent Substrate LPWS2: Probe Wash Module LKPM: Probe Cleaning Kit LCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded)

LSCP: Sample Cups (disposable) LSCC: Sample Cup Caps (optional) DCHS: Dilution Cup Holders (barcoded) for IMMULITE 1000 Windows on-board dilutions. Also Required Sample transfer pipets, distilled or deionized water.

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE or IMMULITE 1000 Operator's Manual. See the IMMULITE or IMMULITE 1000 Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Visually inspect each Test Unit for the presence of a bead before loading it onto the system. Note that both Reagent Wedges A and B must be loaded on the carousel to run this assay. For IMMULITE 1000 Windows, the Sample Diluent Wedge must also be loaded on the carousel. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. The negative and positive controls are intended to monitor for substantial reagent failure. The positive control provided will not ensure precision of the cut-off. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls to cover the upper range of the assay. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state and/or federal regulations or accrediting organizations.12

It is also recommended that known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step.

Interpretation of Results IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG assay is standardized in terms of the World Health Organization's


Third International Standard for Anti-Toxoplasma Serum. The assay's cutoff is determined from representative positive and negative samples (confirmed by an ELISA method) using the ROC (Receiver Operating Characteristic) technique. Positive: A result greater than or equal to 8 IU/mL is indicative of a past infection. Negative: A result less than 6.5 IU/mL is considered to be negative. Results less than 6.5 IU/mL should be reported as Negative only, and no numerical concentration should be reported. Indeterminate: A result greater than or equal to 6.5 IU/mL and less than 8 IU/mL is considered indeterminate. Samples greater than 250 IU/mL should be reported as "greater than 250 IU/mL". Specimens reporting a result of greater than 250 IU/mL, when tested at the required 1-in-21 dilution, may be further diluted with the IgG/IgM Sample Diluent. The presence of IgG antibodies to Toxoplasma gondii is an indication of previous exposure to the organism. A single specimen can be used to estimate the serological status of the individual. A result of "indeterminate" indicates an intermediate level of Toxoplasma gondii antibodies in the sample: the sample should therefore be retested. Samples which still test as "indeterminate" should be examined by an alternate method, or a second sample should be collected, if possible, within a reasonable period of time (e.g. one week). Any interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the Quality Control section. The magnitude of the reported IgG level cannot be correlated to an endpoint titer. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably."

Expected Values Individuals with the toxoplasma organism may not exhibit detectable levels of IgG antibody in the early stages of infection.

Levels of IgG antibody to Toxoplasma gondii begin to rise one or two weeks after infection. Peak levels are reached in 6 to 8 weeks, then gradually decline over a period of months or even years. Low titers are generally detectable for life. The antibody titer does not correlate with severity of illness.2,4,6 The prevalence of IgG antibody to Toxoplasma gondii will vary with age and geographical location. Studies were conducted with specimens from presumed healthy, asymptomatic subjects from the northwestern US. The subjects consisted of 69 individuals with ages ranging from 15 to 64 years. (Samples had been previously collected and stored frozen at 20C). The prevalence of toxoplasma reactivity, based on the results from the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay, was found to be 56% at this geographical location. Additional studies were conducted with specimens from 42 pregnant women from the same geographical location, with ages ranging from 16 to 41 years. (Samples had been previously collected and stored frozen at 20C). The prevalence of toxoplasma reactivity for this specific population was 5%, based on the results from the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay. (See Expected Values graph.) Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.

Limitations The use of IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG to diagnose recent infection by testing paired sera has not been validated. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. The presence of IgG antibodies in a single specimen is not sufficient to distinguish between active and past infection. Patients suspected of having a primary or active toxoplasma infection should be tested for the presence of IgM antibodies to Toxoplasma gondii. For the determination of seroconversion from nonreactive to reactive, a second


serum sample should be drawn three to four weeks after the acute, nonreactive sample, during the convalescent stage of the infection. The acute phase sample should be stored and tested in parallel with the convalescent sample. Individuals with an acute toxoplasma infection may not exhibit any detectable IgG antibodies at the early stage of infection. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from neonates, cord blood, pretransplant patients, or body fluids other than serum, such as urine, saliva or amniotic fluid. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in IU/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: 5.0 to 250 IU/mL. Standardized in terms of WHO 3rd IS for Anti-Toxoplasma Serum, Human.

Analytical Sensitivity: 5.0 IU/mL. Precision: Statistics were calculated for controls and samples processed in 5

replicates each on five separate days. (See Intraassay Precision table and Interassay Precision table.) Note that the negative control and Sample 1 were consistently below 5 IU/mL (the lower limit of the assay's calibration range) for all replicates in every run. Specificity: The specificity of IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay was evaluated by testing 50 specimens positive for cytomegalovirus (CMV), varicella-zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), Mycoplasma pneumoniae and parvovirus B19. With these specimens, IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG and a commercially available enzyme immunoassay for Toxoplasma IgG (Kit D) showed 96% agreement (48/50). Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 16 volunteers into plain, heparinized and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure, with the following results. (Heparin) = 1.02 (Serum) + 0.13 IU/mL r = 1.00

(SST) = 0.98 (Plain Tubes) 0.06 IU/mL r = 1.00

Means: 4.4 IU/mL (Serum) 4.6 IU/mL (Heparin) 4.2 IU/mL (SST)

In another experiment, blood was collected from 16 laboratory volunteers into plain and EDTA and vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure, with the following results. (EDTA) = 0.93 (Serum) 0.003 IU/mL r = 1.00 Means: 5.3 IU/mL (EDTA) 5.6 IU/mL (Serum)

Clinical Performance The clinical performance of the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay was studied using a total of 199 serum specimens, assayed at each of three sites, two of which were outside the US. Of the 199 specimens (previously collected and stored frozen at 20C), 61 were obtained


from women who presented for obstetric and gynecological examination, 42 were obtained from pregnant women, and the remainder were obtained from patients with miscellaneous diseases and conditions (AIDS, anemia, arthritis, fatigue, headache, lymphoma, meningitis, pneumonia and others). There were 37 male and 162 female subjects, with ages ranging from 15 to 68 years. One of the retrospective studies was conducted at a university medical center in the northwestern US. The 199 specimens were evaluated nonconcurrently with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure and Kit A, a commercially available Toxoplasma IgG enzyme-linked fluorescent immunoassay (ELFA).

IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG

Kit A

Pos

Neg

Relative Sensitivity

Relative Specificity

Positive 52 2

Negative 0 145

96.3%

100%

Agreement: 99.0% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 87.3% 99.5% and 97.5% 100%. (Confidence limits by exact test.)

The two discordant specimens, negative by IMMULITE but positive by Kit A, were further evaluated by Kit B, a commercially available Toxoplasma IgG microparticle enzyme immunoassay (MEIA), and found to be positive. In the second retrospective study, conducted outside the US, 194 of the 199 specimens (insufficient sample volume for 5 specimens) were evaluated with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay and Kit B.


Kit B

Pos

Neg



Positive 46 5

Negative 2 141

90.2%

98.6%

Agreement: 96.4% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 78.6% 96.7% and 95.0% 99.8%. (Confidence limits by exact test.)

Of the seven discordant specimens, three of the five negative by IMMULITE but

positive by Kit B were negative by Kit A. The two specimens positive by IMMULITE but negative by Kit B were positive by Kit A. In the third retrospective study, also conducted outside the US, 160 of the 199 specimens (insufficient sample volume for 39 specimens) were evaluated with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay and Kit C, a commercially available enzyme immunoassay.


Kit C

Pos

Neg



Positive 32 2

Equivocal 0 4

Negative 2 120

94.1%

98.4%

Agreement: 97.4% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 80.3% 99.3% and 94.2% 99.8%. (Confidence limits by exact test).

The two cases positive by the IMMULITE but negative by Kit C, were positive by Kit A. Of the two cases negative by IMMULITE but positive by Kit C, one was positive by Kit A and the other negative by Kit A. The four cases negative by IMMULITE but equivocal by Kit C were all negative by Kit A. Thus, the IMMULITE results agree with Kit A in seven of the eight cases of discordance with Kit C.

References 1) Daffos F. Prenatal management of 746 pregnancies at risk for congenital toxoplasmosis. N Engl J Med 1988;318: 271-5. 2) Krick JA, Remington JS. Toxoplasmosis in the adult: an overview. N Engl J Med 1978;298: 550-3. 3) Krogstad DJ, et al. Blood and tissue protozoa. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical microbiology. 4th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1985: 612-30. 4) McCabe RE, Remington JS. Toxoplasma gondii. In: Mandell, Douglas, Bennett, editors. Principles and practice of infectious diseases. 2nd ed. New York: John Wiley, 1985. 5) Jeannel D, et al. What is known about the prevention of congenital toxoplasmosis? Lancet 1990;336:359-61. 6) Remington JS. McLeod R. Toxoplasmosis. In: Braude, editor. Microbiology and infectious diseases. Philadelphia: Saunders, 1981. 7) Walls KW. Toxoplasmosis. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of infectious diseases. New York: Springer-Verlag, 1988: 998-1017. 8) National Committee for


Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 9) Baltz ML, Searcy RL. Clinical significance and advanced serologic diagnosis of ToRCH infections. Am Clin Lab 1994 (Mar/Apr): 18-23. 10) Wilson M, et al. Seroepidemiology of toxoplasmosis in the United States. Abstract presented at the American Society for Microbiology, May 1994. 11) Approved standard procedures for the handling and processing of blood specimens, NCCLS Document H18-A, 1991. 12) International Quality Control testing: principles and definitions, NCCLS Document C24-A, 1991. 13) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358.

Technical Assistance In the United States, contact DPC's Technical Services department. Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828 Fax: 973.927.4101. Outside the United States, contact your National Distributor. The Quality System of Diagnostic Products Corporation is registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Intraassay Precision (IU/mL)

Mean1 SD2 CV3

Pos. Control4 18 0.95 5.3%

Neg. Control5


Italiano. intraassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione), 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione), 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.

Portugus. Intraassay Precision: 1Mdia, 2Desvio padro, 3Coeficiente de variao, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Mdia, 2Desvio padro, 3Coeficiente de variao, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.

Deutsch

Toxoplasma IgG quantitativ Anwendung: Fr in-vitro-diagnostische Tests mit dem Analysegert IMMULITE und IMMULITE 1000 zum quantitativen Nachweis von IgG-Antikrpern gegen Toxoplasma gondii (Toxoplasma) in Serum als Hilfestellung zur Bestimmung des serologischen Status gegen Toxoplasma gondii.

Dieses Testsystem ist von der US-amerikanischen Lebensmittel- und Medikamentenbehrde FDA nicht fr Screening-Tests mit Blut- oder Plasmaspendern freigegeben.

Artikelnummern: Catalog Number: LKTXP1 (100 Tests), LKTXP5 (500 Tests) Testcode: TXP Farbe: hellgrau

Klinische Relevanz Toxoplasma gondii ist ein obligater intrazellulrer Parasit, der die meisten Sugetiere einschlielich Menschen befllt und zu Infektionen fhrt. Der Erreger wird durch den Verzehr von ungengend gekochtem Fleisch bertragen. Weltweit sind mglicherweise zwischen 1 und 90 Prozent aller Populationen infiziert 7, in den USA sind es 2530 % der erwachsenen Bevlkerung.3 Toxoplasmosen knnen sich in

verschiedenen Formen manifestieren, normalerweise sind die Infektionen jedoch klinisch unauffllig und in ihrer latenten Form lebenslang prsent.2 Zu den offenen klinischen Symptomen zhlen infektise Mononukleosen mit Lymphadenopathien, Fieber, Kopfschmerzen, Unwohlsein und gelegentlich auch Lungenentzndungen und Myokarditiden.6

So wie andere latente Infektionen knnen auch akute Toxoplasmosen bei immungeschwchten Patienten und in utero infizierten Neugeborenen eine ernsthafte Bedrohung darstellen. Bei immunsupprimierten Patienten knnen Enzephalitis, Myokarditis oder Pneumonitis entstehen.3 Kongenitale Infektionen sind normalerweise das Resultat einer asymptomatischen akuten Infektion der Mutter. Diese Infektionen knen zu Frhgeburten, Spontanaborten oder Totgeburten fhren.4,6 Bei Neugeborenen knnen Chorioretinitiden, Hydrozephalie, Mikrozephalie, zerebrale Kalkablagerungen sowie psychomotorische Behinderungen auftreten.1 Die Mehrzahl der kongenital infizierten Kinder zeigt erst im spteren Leben Symptome.4

Da der Erreger von Toxoplasmosen nicht ohne weiteres kultiviert werden kann, mssen die infizierten Patienten serologisch berwacht werden.3 Quantitative Bestimmungen von Toxoplasma-IgG knnen ntzlich sein, um frhere und reaktivierte Infektionen anzuzeigen. Genaue diagnostische Daten sind vor allem bei Schwangerschaften wichtig, da eine Behandlung mit Spiramycin das Risiko fr den Fetus herabsetzen kann.5

Methodik Der IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG quantitativ ist ein Festphasen-, sequenzieller Chemilumineszens-Immunoassay. Inkubationszyklen: 2 30 minuten.

Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klrung von lipmischen Proben empfohlen.


Trbe oder partikelhaltige Proben sollten bei niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert werden, bis sie klar sind Die Zentrifugation der Serumproben vor dem vlligen Abschluss der Gerinnung kann zu Fibringerinnseln fhren. Um fehlerhaften Analysenergebnissen infolge von Gerinnseln vorzubeugen, ist sicherzustellen, dass die Gerinnung vor der Zentrifugation der Proben vollstndig abgeschlossen ist. Insbesondere Proben von Patienten unter Antikoagulantien-therapie knnen eine verlngerte Gerinnungszeit aufweisen. Blutentnahmerhrchen von verschiedenen Herstellern knnen differierende Werte verursachen. Dies hngt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder Antikoagulantien) ab. IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG quantitativ sind nicht mit allen mglichen Rhrchenvariationen ausgetestet worden. Details der getesteten Rhrchenarten sind dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu entnehmen. Erforderliche Menge: 10 l der vorverdnnten Patientenprobe (1:21 Verdnnen). (Inhalt der Probenschale muss mindestens 100 l ber der erforderlichen Gesamtmenge liegen.) Lagerung: 3 Tage bei 28C oder 6 Monate bei 20C.13 Verdnnung der Patientenproben: Serumproben mssen 1:21 im IgG/IgM Probenverdnnungsreagenz (LIGZ2) vorverdnnt werden. Diese Verdnnung ist manuell durchzufhren, z.B. durch Zugabe von 20 l der Patientenprobe in 400 l Probenverdnnungsreagenz (LIGZ2, im Kit enthalten). Alternativ, bei Verwendung des IMMULITE 1000 Windows, erfolgt die Verdnnung automatisch on-board. Das System verwendet LIGW, Inhalt des IgG/IgM Probenverdnnungsreagenz-Moduls (L1KIGW1,5). Die ausgedruckten Resultate entsprechend der 1:21 Verdnnung korrigiert sind.

Hinweise und Vorsichtsmanahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Bei 28C lagern. Unter Einhaltung der geltenden gesetzlichen Vorschriften entsorgen. Die generell geltenden Vorsichtsmanahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektis zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikrper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflchenantigen und Hepatitis-C-Antikrper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (


Im Lieferumfang enthalten Die Komponenten sind aufeinander abgestimmt. Die Barcode-Etiketten werden fr den Assay bentigt.

Toxoplasma quantitativ IgG Testeinheiten (LTXP1) Jede mit Barcode-Etikette versehene Einheit enthlt eine mit beschichtet mit inaktiviertem, teilweise gereinigtem Toxoplasma-gondii-Antigen (Tachyzoiten, Stamm RH, aus Mausperitoneum). beschichtete Kugel. Bei 28C bis zum Ablaufdatum haltbar. LKTXP1: 100 Testeinheiten. LKTXP5: 500 Testeinheiten. Verpackte Testeinheiten vor dem ffnen stehen lassen, bis sie Zimmertemperatur erreicht haben. Oben entlang der Kante aufschneiden, ohne den Plastikverschluss zu beschdigen. Verpackungen wieder dicht verschlieen, damit der Inhalt trocken bleibt.

Toxoplasma quantitativ IgG Reagenzbehlter (LTXPA, LTXPB) Mit Barcodes. LTXPA: 7,5 ml einer proteinbasierten Pufferlsung (mit Konservierungsmittel). LTXPB: 7,5 ml mit alkalischer Phosphatase (Rinderkalbsdarm) konjugierter monoklonaler antihumaner IgG Mausantikrper in Pufferlsung (mit Konservierungsmittel). Verschlossen und gekhlt aufbewahren: Bei 28C bis zum Ablaufdatum haltbar. Bei entsprechender Lagerung betrgt die empfohlene Aufbrauchsfrist nach dem ffnen 30 Tage. LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 5 Sets.

Toxoplasma quantitativ IgG - Kalibratoren (LTXPL, LTXPH) Zwei Flschchen (niedrig und hoch) mit 4 ml Tosoplasma-reaktivem IgG in einer Pufferlsung (mit Konservierungsmittel) (Muss nicht vorverdnnt werden.) 14 Tage nach dem ffnen bei 28C haltbar oder 6 Monate bei 20C (aliquotiert). LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 2 Sets.

Toxoplasma quantitativ IgG Kontrollen (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Drei Flschchen (Negative, Schwachpositiv und Positiv) jeweils mit 2 ml Kontrollen. LTXPC1 (Negativkontrolle): Ein Flschchen Humanserum mit Toxoplasma-nichtreaktivem IgG (mit

Konservierungsmittel). LTXPC2, LTXPC3 (Schwachpositivkontrolle, Positiv-kontrolle): Zwei Flschchen Humanserum mit Toxoplasma-reaktivem IgG (mit Konservierungsmittel). 14 Tage nach dem ffnen bei 28C haltbar oder 6 Monate bei 20C (aliquotiert). LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 2 Sets. IMMULITE: Fr die Toxoplasma IgG -Kontrollen ist die gleiche manuelle 1- in-21- Vorverdnnung mit der IgG/IgM-Probenverdnner wie fr die Patientenproben erforderlich (LIGZ2). IMMULITE 1000: Die IMMULITE 1000 Software fhrt eine automatische on-board-Verdnnung der Patienproben und der Kontrollen durch. Kontrollen als Kontrollen eingeben. Kontrollen als Kontrollen eingeben. Die Konzentrationen entnehmen Sie bitte der Beilage zu den Kontrollen.

IgG/IgMVerdnnungspuffer (LIGZ2) Zum manuellen Verdnnen der Patientenproben und Kontrollen. 100 ml Nichthumane Protein/Puffermatrix mit Konservierungsmittel. 30 Tage nach dem ffnen bei 28C oder 6 Monate bei 20 C haltbar (aliquotiert). LKTXP1: 1 Flschchen. LKTXP5: 3 Flschchen. Fr On-board-Verdnnungen mit IMMULITE 1000 Windows von Patientenproben ist die Liste der separat erhltlichen Testsystem-Komponenten heranzuziehen.

Separat erhltliche Testsystem-Komponenten

IgG/IgM Probenverdnnungsreagenz-Modul (L1KIGW1,5) Erforderlich fr die on-board Verdnnung der Patientenproben und Kontrollen bei Verwendung des Immulite 1000 Windows. Probenverdnnungsreagenz-Behlter (LIGW) enthalten konzentrierte (2,5fach) nicht-humane Protein/Puffer Matrix mit Konservierungsmittel. Haltbar bei 2-8C bis zum Verfallsdatum. L1KIGW1: 2 Behlter. L1KIGW5: 10 Behlter. LSUBX: Chemilumineszenz-Substratmodul LPWS2: Waschmodul


LKPM: Reinigungsmodul LCHx-y: Barcodierte Probentrger LSCP: Einmal-Probenrhrchen LSCC: Deckel fr Probenrhrchen DCHS: Verdnnungsgeftrger (barcodiert) fr die IMMULITE 1000 Windows on-board-Verdnnung. Ebenfalls bentigt: Transferpipetten fr die Proben; destilliertes bzw. deionisiertes Wasser.

Testdurchfhrung Fr eine optimale Funktion des Gertes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im IMMULITE oder IMMULITE 1000-Handbuch beschrieben, regelmig durchgefhrt werden. Das Handbuch fr das IMMULITE bzw. IMMULITE 1000 enthlt die Anweisungen fr: Vorbereitung, Gerteeinstellungen, Verdnnungen, Kalibrierung, Testdurchfhrung und Qualittskontrollen. berprfen Sie jedes Testeinheit auf das Vorhandensein der Polystyrol-Kugel vor dem Einsetzen in das Gert. Beachten Sie, dass zur Durchfhrung dieses Tests beide Reagenzbehlter (A und B) auf das Karussell geladen werden mssen. Beim IMMULITE 1000 Windows muss der Probenverdnnungsreagenz-Behlter ebenfalls auf dem Reagenzienkarussell platziert sein. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 4 Wochen. Proben zur Qualittskontrolle: Die im Lieferumfang enthaltenen Kontrolle(n) verwenden. Die Negativ- und Positivkontrollen dienen zur berwachung der Reagenzien auf wesentliche Mngel. Die gelieferte Positivkontrolle eignet sich nicht dazu, die Przision des Cutoff sicherzustellen. Zustzlich zu den gelieferten Kontrollen knnen zur Abdeckung des hheren Messbereiches weitere Kontrollen eingesetzt werden. Entsprechend den Richtlinien bzw. Vorschriften von regionalen bzw. staatlichen Behrden oder zertifizierenden Stellen knnen weitere Kontrollen getestet werden.12 Ferner empfiehlt es sich, regelmig Testanstze mit bekannten reaktiven und nichtreaktiven Proben durchzufhren, um

die Pipettiergenauigkeit fr den Verdnnungsschritt zu gewhrleisten.

Interpretation der Ergebnisse Das quantitative IMMULITE/IMMULITE 1000-Testsystem zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasma-IgG ist entsprechend der Dritten Internationalen WHO-Norm fr Anti-Toxoplasma-Serum standardisiert. Der Cutoff des Testsystems wird mit Hilfe der ROC-Technik (Receiver Operating Characteristic) aus reprsentativen positiven und negativen Proben (verifiziert mittels ELISA) ermittelt.

Positiv: Ein Ergebnis von 8 IU/ml weist auf eine vergangene Infektion hin. Negativ: Ein Ergebnis von unter 6,5 IU/ml gilt als negativ. Ergebnisse von unter 6,5 IU/ml sollten lediglich als negativ ausgewiesen werden, ohne dabei die gemessene Konzentration numerisch darzustellen. Grenzwertig: Ein Ergebnis von 6,5 IU/ml und < 8 IU/ml gilt als grenzwertig. Proben mit mehr als 250 IU/ml sollten dementsprechend (d.h. hher als 250 IU/ml) ausgewiesen werden. Proben, die bei der erforderlichen Autoverdnnung von 1:21 mehr als 250 IU/ml aufweisen, knnen mit dem IgG/IgM-Probenverdnner weiterverdnnt werden. Sind IgG-Antikrper gegen Toxoplasma gondii vorhanden, so deutet dies auf eine frhere Exposition gegen den Erreger hin. Einzelproben eignen sich ausschlielich zur Bewertung des serologischen Status der betreffenden Person. Ein indeterminate // unentschiedenes Ergebnis weist auf einen Zwischenwert bei den Antikrpern gegen Toxoplasma gondii in der Probe hin: Die Probe sollte daher erneut getestet werden. Ergebnis bringen, sind entweder mit einer alternativen Methode zu testen, oder, sofern dies mglich ist, innerhalb eines vernnftigen Zeitraums (z.B. eine Woche) mit einer neu entnommenen zweiten Probe zu ergnzen. Von einer Interpretation der Ergebnisse wird abgeraten, wenn die Positiv- oder Negativkontrollen auerhalb des im Abschnitt Quality Control //


Qualittskontrolle angegebenen Bereichs liegen. Die Grenordnung der ausgewiesenen IgG-Konzentration kann nicht mit einem Endtiter korreliert werden. Die vom Labor an den Arzt weitergegebenen Ergebnisse sollten daher den folgenden Passus enthalten: Die folgenden Ergebnisse wurden mit dem IMMULITE/IMMULITE 1000-Testsystem zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasmose-IgG erzielt." Sie sind nicht mit den Ergebnissen der Testsysteme anderer Hersteller austauschbar.

Referenzwerte Im Frhstadium einer Infektion mit dem Toxoplasma-Erreger sind mglicherweise keine nachweisbaren Konzentrationen an IgG-Antikrpern vorhanden. Die Konzentrationen an IgG-Antikrpern gegen Toxoplasma gondii steigen erstmals ein bis zwei Wochen nach der Primrinfektion an. Die Spitzenwerte werden innerhalb von 68 Wochen erreicht und fallen dann ber Monate oder sogar Jahre hinaus allmhlich wieder ab. Niedrige Titer bleiben generell fr den Rest des Lebens nachweisbar. Es besteht keine Korrelation zwischen Antikrpertiter und dem Schweregrad der Erkrankung.2,4,6 Die Prvalenz von IgG-Antikrpern fr Toxoplasma gondii kann abhngig vom Alter und der geographischen Lage variieren. Es wurden mit gesunden, asymptomatischen Patienten aus dem Nordwesten der USA Studien durchgefhrt. Die Patienten setzten sich aus 69 Personen im Alter zwischen 15 und 64 Jahren zusammen. (Die Proben wurden vorher gesammelt und bei 20C eingefroren gelagert). In dieser geographischen Gegend wurde eine Prvalenz der Toxoplasmosereaktivitt von 56% gefunden. Weiterhin wurden Studien mit Patientenseren von schwangeren Frauen im Alter zwischen 16 und 41 Jahren aus der gleichen geographischen Region durchgefhrt. (Die Proben wurden vorher gesammelt und bei 20C eingefroren gelagert). Die Prvalenz der Toxoplasmosereaktivitt dieser speziellen Bevlkerungsgruppe lag bei 5%, basierend auf den Resultaten des

IMMULITE Toxoplasma quantitativem IgG Test. (siehe grafik Grenzen der Methode) Betrachten Sie diese Grenzwerte nur als Richtlinien. Jedes Labor sollte eigene Referenzbereiche ermitteln.

Grenzen der Methode Der Einsatz des IMMULITE/IMMULITE 1000 Testsystems zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasma-IgG ist nicht validiert, was die Diagnose krzlicher Infektionen mittels gepaarten Seren betrifft. Die Testergebnisse sind vor dem Hintergrund der klinischen Anamnese, der Beschwerden des Patienten sowie weiterer Laborbefunde zu bewerten. Das Vorhandensein von IgG-Antikrpern in Einzelproben reicht nicht aus, um zwischen einer aktiven und einer vergangenen Infektion zu unterscheiden. Patienten mit Verdacht auf eine Primr- bzw. aktive Infektion sollten auf das Vorhandensein von IgM-Antikrpern gegen das Toxoplasma gondii untersucht werden. Zur Bestimmung einer Serokonversion von nichtreaktiv zu reaktiv sollte whrend der Rekonvaleszenzphase drei bis vier Wochen nach der akuten nichtreaktiven Probe eine zweite Serumprobe genommen werden. Die Probe aus der Akutphase sollte gelagert und parallel zur Rekonvaleszenzprobe getestet werden. Die Ergebnisse bei HIV-Patienten sowie behandlungs- oder krankheitsbedingt immunsupprimierten Patienten sollten zurckhaltend interpretiert werden. Im Frhstadium einer akuten Toxoplasmose sind mglicherweise keine nachweisbaren IgG-Antikrper vorhanden. Die Eckdaten dieses Testsystems wurden nicht fr den Gebrauch mit Proben von Neugeborenen, Nabelschnurblut, Patienten mit bevorstehender Organverpflanzung und nicht fr andere Krperflssigkeiten als Serum wie etwa Harn, Speichel oder Fruchtwasser etabliert. Heterophile Antikrper in Humanseren knnen mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und Interferenzerscheinungen innerhalb des in


vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die hufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, knnen die erwhnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten fhren. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch knnen potentiell Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden

Leistungsdaten Reprsentative Daten zum Test entnehmen Sie bitte den Tabellen und graphischen Darstellungen im englischen Teil dieser Anleitung. Die Ergebnisse sind in IU/ml angegeben. (Sofern nicht anders angegeben, wurden hierfr Serumproben in Rhrchen ohne Geltrennung und Gerinnungshilfen eingesetzt.) Messbereich: 5,0 250 IU/ml. Standardisiert nach der Dritten Internationalen WHO-Norm fr humane Anti-Toxoplasma-Seren.

Analytische Sensitivitt: 5,0 IU/ml Przision: Statisik aus einem einzelnen Testansatz mit 5 Proben verschiedener IgG-Konzentrationen in 5-facher Bestimmung am gleichen Tag. (Siehe Tabelle Intraassay / Interassay - Precision). Die Negativ-Kontrolle sowie Probe 1 zeigt durchgehend Werte unter 5 IU/ml. Spezifitt: Die Spezifitt des IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Tests wurde mit 50 Proben, die positiv fr Cytomegalie (CMV), Varizelle zoster (VZV), Epstein-Barr-Virus (EBV), Mycoplasma pneumoniae und Parvovirus B19 waren, evaluiert. Diese Proben zeigten mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test eine 96%ige bereinstimmung (48/50) mit einem kommerziell erhltlichen Toxoplasma IgG Enzymimmunotest. Alternativer Probentyp: Um die Auswirkungen von verschiedenen Probenarten zu untersuchen, wurde Blut von 16 Freiwilligen in Rhrchen ohne

Additiva, in Heparin- und Becton Dickinson SST Vacutainer-Rrchen gesammelt. Alle Proben wurden mit dem Toxoplasma IgG Verfahren fr den IMMULITE getestet, mit der folgenden Ergebnisse. (Heparin) = 1,02 (Serum) + 0,13 IU/ml r = 1,00

(SST) = 0,98 (einfachen Rhrchen) 0,06 IU/ml r = 1,00

Mittelwerte: 4,4 IU/ml (Serum) 4,6 IU/ml (Heparin) 4,2 IU/ml (SST)

In einer weiteren Studie wurde 16 Freiwilligen Blut entnommen. Als Abnahmegefe wurden Serumrhrchen ohne Zustze, Heparin-, und EDTA Vakutainer rhrchen verwendet. Alle Proben wurden mit dem Toxoplasma IgG Verfahren fr den IMMULITE getestet, mit der folgenden Ergebnisse. (EDTA) = 0,93 (Serum) 0,003 IU/ml r = 1,00

Mittelwerte: 5,3 IU/ml (EDTA) 5,6 IU/ml (Serum)

Klinische Studien Die klinischen Leistungsdaten des IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test wurdem mit 199 Serumproben aus drei verschiedenen Regionen, von denen zwei auerhalb der USA stammten, geprft. Die 199 Patientenproben (die Proben wurden vorher gesammelt und bei 20C eingefroren gelagert) wurden von Frauen erhalten, die aus derzeitigen Entbindungs- und gynkologischen Untersuchungen stammten. 42 Proben wurden von schwangeren Frauen erhalten, und die restlichen Proben stammten von Patienten mit unterschiedlichen Krankheiten und Gegebenheiten (AIDS, Anmie, Arthritis, Mdigkeitssyndrom, Kopfschmerzen, Lymphom, Meningitis, Lungenentzndung und andere Krankheiten). Es handelte sich um 37 mnnliche und 162 weibliche Patienten im Alter von 15 bis 68 Jahren. Eine der retrospektiven Studien wurde an einer Medizinischen Universitt im Nordwesten der USA durchgefhrt. Die 199 Blutproben wurden mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test und einem kommerziell erhltlichen


Toxoplasma IgG Enzymfluoresz Enzimmunoassay (ELFA) evaluiert.

IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG

Kit A

Positiv

Negativ

Relative Sensitivitt

Relative Spezifitt

Positiv 52 2

Negativ 0 145

96,3%

100%

bereinstimmung: 99,0% 95% Vertrauensbereich fr die relative Sensitivitt und Spezifitt (resp.: 87,3% - 99,5% und 97,5% - 100%).

Die zwei diskrepanten Blutproben, negativ im IMMULITE, aber positiv im Kit A, wurde desweiteren mit einem kommerziell erhltlichen Toxoplasma IgG Mikropartikelenzymimmunotest (MEIA) evaluiert und als positiv gemessen. In der zweiten retrospektiven Studie, die auerhalb der USA durchgefhrt wurde, wurden von 199 Proben 194 (5 Proben mit nicht ausreichendem Probenvolumen) mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG-Test und Kit B evaluiert.


Kit B

Positiv

Negativ


Relative Spezifitt

Positiv 46 5

Negativ 2 141

90,2%

98,6%

bereinstimmung: 96,4% 95% Vertrauensbereich fr die relative Sensititvt und Spezifitt, resp.: 78,6% - 96,7% und 95% - 99,8%.

Von den 7 diskrepanten Blutproben waren 3 der 5 negativ gefundenen Proben im IMMULITE und im Kit B positiv, negativ im Kit A. Zwei der positiv gemessenen Blutproben im IMMULITE, aber negativ gemessenen im Kit B, waren positiv im Kit A. In der dritten retrospektiven Studie, die ebenfalls auerhalb der USA durchgefhrt wurde, wurden von 199 Proben 160 (39 Blutproben mit nicht ausreichendem Probenvolumen) mit dem IMMULITE Toxoplasma IgG-Test und einem kommerziell erhltlichen Enzymimmunoassay Kit C, evaluiert.


Kit C

Positiv

Negativ


Relative Spezifitt

Positiv 32 2

grenzwertig 0 4

Negativ 2 120

94,1%

98,4%

bereinstimmung: 97,4% 95% Vertrauensbereich fr die relative Sensitivitt und Spezifitt, resp.: 80,3% 99,3% und 94,2% 99,8%.

In zwei Fllen mit positivem IMMULITE und negativem Kit C Ergebnis, waren ebenfalls positiv in Kit A. In den zwei Fllen, die negativ im IMMULITE und positiv in Kit C waren, war eine Probe positiv und eine negativ im Kit A. In vier Fllen mit negativem IMMULITE und grenzwertigen Ergebnis in Kit C, waren alle Proben negativ in Kit A. Demnach stimmen die IMMULITE Ergebnisse in sieben von acht Fllen mit Kit A berein, die diskrepant im Kit C liefen.

Anwendungsberatung Bei Rckfragen wenden Sie sich bitte an Ihre DPC Niederlassung. Das Qualittssystem der Diagnostic Products Corporation ist nach ISO 13485:2003 registriert.

Espaol

Toxoplasma Cuantitativo IgG Utilidad del anlisis: Para su uso en el diagnstico in vitro con los analizadores IMMULITE e IMMULITE 1000 para la medicin cuantitativa de anticuerpos IgG contra Toxoplasma gondii (toxoplasma), como una ayuda en la determinacin del estado serolgico para Toxoplasma gondii.

Este kit no tiene autorizacin de la FDA para su uso en pruebas (deteccin precoz) de donantes de sangre o plasma.

Nmeros de Catlogo: LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Cdigo del Test: TXP Color: Gris claro


Resumen y Explicacin del Test Toxoplasma gondii es un parsito intracelular obligado, capaz de infectar a la mayora de los mamferos, incluyendo al humano. El organismo se transmite por ingestin de carne poco cocinada. Por todo el mundo, del 1 al 90% de la poblacin puede ser infectada,7 con un 25 30 por ciento de la poblacin adulta de Estados Unidos infectada.3 Mientras que la toxoplasmosis puede manifestarse de diversas formas, las infecciones son normalmente clnicamente inaparentes, y las infecciones latentes persisten normalmente durante toda la vida.2 Los sntomas clnicos son similares a los de una infeccin por mononucleosis, con linfadenopata, fiebre, dolor de cabeza, malestar general y algunas veces neumoma y miocarditis. 6

Al igual que otras infecciones latentes, la infeccin aguda por toxoplasma puede presentar una serie amenaza para los individuos inmunocomprometidos y los recin nacidos, quienes adquieren la infeccin en el utero. Los individuos inmunosuprimidos pueden desarrollar encefalitis, miocarditis o neumonitis.3 Las infecciones congnitas normalmente resultan como consecuencia de una infeccin aguda asintomtica en la madre. Esta infeccin puede causar: parto prematuro, aborto espontneo o el nacimiento sin vida del feto.4,6 Los neonatos pueden presentar coriorretinitis, hidrocefalia, microcefala, calcificacin cerebral y retraso psicomotor.1 La mayora de los nios infectados congnitamente no mostrarn ningn sntoma hasta ms tarde.4

El seguimiento de la toxoplasmosis requiere el control serolgico de los individuos infectados,3 ya que el cultivo de este organismo no es posible. Un anlisis cuantitativo para estudiar la presencia de IgG contra toxoplasma puede ser til para determinar una infeccin anterior e indicar la reactivacin de la infeccin. Una informacin precisa del diagnstico es importante, especialmente durante el embarazo, puesto que el tratamiento con espiramicina puede reducir los riesgos para el feto.5

Principio del anlisis IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Cuantitativa IgG es un inmunoanlisis quimioluminiscente en fase slida secuencial. Ciclos de incubacin: 2 30 minutos.

Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrfuga para aclarar las muestras lipmicas. Las muestras que estn turbias o tengan un material particular deben aclararse mediante una centrifugacin a baja velocidad. La centrifugacion de las muestras de suero antes de que se forme el coagulo puede ocasionar la presencia de fibrina. Para evitar resultados erroneos debidos a la presencia de fibrina, asegurarse que se ha formado el coagulo completamente antes de centrifugar las muestras. Algunas muestras, particularmente aquellas de pacientes sometidos a terapia anticoagulante, pueden requerir mayor tiempo de coagulacion. Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras fsicas, activadores de la coagulacin y/o anticoagulantes. El IgG Cuantitativo para Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la seccin de Tipos de Muestras Alternativos. Volumen requerido: 10 l de la muestra de paciente prediluida (1 por 21 dilucin). (El recipiente de la muestre debe contener, como mnimo, 100 l ms que el volumen total requerido). Conservacin: 3 das a 28C, o 6 meses a 20C.13 Dilucin de Muestras de Pacientes: Las muestras de suero deben ser prediludas 1-en-21 con Diluyente de Muestra IgG/IgM (LIGZ2). Esta dilucin debe ser realizada manualmente, p.e. aadiendo 20 l de muestra del paciente con 400 l de Diluyente de Muestra (LIGZ2, suministrados en el kit).


Como alternativa, utilizando IMMULITE 1000 Windows, la dilucin la realiza el sistema automaticamente en el equipo usando LIGW, incluido en el Modulo de Diluyente de Muestra IgG/IgM (L1KIGW 1,5). Los resultados imprimidos han sido corregidos para una dilucin de 1-en-21.

Advertencias y Precauciones Para uso diagnstico in vitro. Reactivos: Mantener a 28C. Desechar de acuerdo con las normas aplicables. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sfilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antgeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado Azida sodica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacion, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitucion de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las caeras de cobre y plomo. Sustrato quimioluminiscente: evite la contaminacin y exposicin a la luz directa del sol. (Ver el prospecto.) Agua: Usar agua destilada o desionizada. La bola est recubierta con antgeno inactivado de toxoplasma. Sin embargo, se recomienda precaucin ante la posible presencia de organismo residual cuando trabajamos o deshechamos los materiales suministrados. La concentracin de IgG contra Toxoplasma en una muestra dada, determinada mediante ensayos de distintos fabricantes, puede variar debido a diferencias en los mtodos de los ensayos y a la especificidad del reactivo. Por lo tanto, en el informe de resultados del laboratorio para el mdico debe incluirse: "Los siguientes resultados se obtuvieron con EIA IgG Cuantitativo contra Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000. No es posible intercambiar los resultados obtenidos por mtodos de ensayo de otros fabricantes".

Materiales Suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo.

Unidades de anlisis de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXP1) Cada unidad etiquetada con cdigo de barras contiene una bola recubierta de antgeno inactivado, parcialmente purificado de Toxoplasma gondii (taquizoitos de cepa RH de peritoneo de ratn). Estable a 28C hasta la fecha de caducidad. LKTXP1: 100 unidades. LKTXP5: 500 unidades. Espere a que las bolsas de las unidades de anlisis alcancen la temperatura ambiente antes de abrirlas. bralas cortando por el extremo superior, dejando el borde del cierre de cremallera intacto. Vuelva a cerrar las bolsas hermticamente para protegerlas de la humedad.

Viales de reactivo de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPA, LTXPB) Con cdigos de barras. LTXPA: 7,5 ml de una matriz de protena en solucin tampn, con conservante. LTXPB: 7,5 ml de fosfatasa alcalina (de intestino de ternera) conjugada a anticuerpo monoclonal murino anti-IgG humana, en una solucin tampn, con conservante. Guardar tapado y refrigerado: estable a 28C hasta la fecha de caducidad. Se recomienda utilizarlo antes de que pasen 30 das despus de abrirlo cuando se guarda segn lo indicado. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 5 juegos.

Ajustadores de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPL, LTXPH) Dos viales (bajo y alto) de cada uno con 4 ml de suero humano con IgG reactivo para Toxoplasma, en solucin tampn, con conservante. (No es necesaria ninguna dilucin previa.) Estable a 28C durante 14 das despus de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a 20C. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 2 juegos.

Controles de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Tres viales (Negativo, Bajo Positivo y Positivo) de cada uno con 2 ml. LTXPC1 (Control negativo): Un vial que contiene


suero humano con IgG no reactivo para toxoplasma, con conservante. LTXPC2, LTXPC3 (Control bajo positivo, Control Positivo): contienen suero humano con IgG reactivo para toxoplasma, con conservante. Estable a 28C durante 14 das despus de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a 20C. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 2 juegos. IMMULITE: Los controles de Toxoplasma IgG requieren la misma predilucin manual 1-en-21 que las muestras de pacientes, con la diluyente de muestra para IgG e IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000: El software del IMMULITE 1000 realiza una dilucin automtica en el instrumento de las muestras de pacientes y de los controles. Introduzca los controles como controles. Consulte los niveles de concentracin en el prospecto del control.

Diluyente de IgG/IgM (LIGZ2) Para la dilucin manual de muestras de pacientes y controles. 100 ml matriz proteica no humana en solucin tampn, con conservante. Estable a 28C durante 30 das despus de abrise o estable a 20C durante 6 meses (alicuotados). LKTXP1: 1 vial. LKTXP5: 3 viales. Para diluciones de muestras de pacientes dentro del equipo usando IMMULITE 1000 Windows, remitirse a la seccin del Kit de Componentes Suministrados Aparte.

Componentes del kit que se suministran por separado

Mdulo de Diluyente de Muestra IgG/IgM (L1KIGW1,5) Requerido para la dilucin de muestras de pacientes y controles en el equipo utilizando IMMULITE 1000 Windows. Los Viales (LIGW) de Diluyente de Muestras contienen una matriz concentrada de protena/buffer (2.5X) no-humana, con conservante. Estable a 2-8C hasta la fecha de caducidad. L1KIGW1: 2 Viales. L1KIGW5: 10 Viales. LSUBX: Substrato quimioluminiscente LPWS2: Lavado de sonda LKPM: Kit de limpieza de sonda LCHx-y: Soportes de recipientes de muestras (con cdigos de barras)

LSCP: Recipientes de muestras (desechables) LSCC: Tapas para los recipientes de muestras (opcionales) DCHS: Cubetas de dilucin (con cdigo de barras) para diluciones en el equipo (IMMULITE 1000 Windows). Tambin necesario Pipetas de transferencia de muestras; agua destilada o desionizada.

Ensayo Aviso: para obtener el funcionamiento ptimo, es importante realizar todos los procedimientos del mantenimiento general segn lo definido en el manual del operador de IMMULITE o IMMULITE 1000. Ver el Manual del Operador del IMMULITE o IMMULITE 1000 para: preparacin, procesamiento, diluciones, ajuste, procedimientos de ensayo y control de calidad. Inspeccionar visulamente cada unidad de reccin para asegurarse de que hay una bola antes de introducirla en el Sistema. Tenga en cuenta que hay que cargar los viales de reactivos A y B en el carrusel para ejecutar este ensayo. Para el IMMULITE 1000 Windows, el Vial del Diluyente de la Muestra tambin debe estar cargado en el carrusel. Intervalo de ajuste recomendado: 4 semanas. Muestras de Control de Calidad: Los controles provistos con el kit debern usarse como control de calidad para monitorear el rendimiento del ensayo. Los controles positivo y negativo estn diseados para controlar un fallo importante del reactivo. El control positivo proporcionado no asegurar la precsin del valor de corte. Adems de los controles provistos, los usuarios pueden desear correr controles adicionales para cubrir el intervalo superior del ensayo. Pueden analizarse otros controles segn las directrices o requisitos de las normas locales, estatales o federales o de las organizaciones acreditadas.12 Tambin se recomienda analizar peridicamente muestras conocidas, reactivas o no reactivas, para asegurar la


precisin del pipeteado para el paso de dilucin.

Interpretacin de los Resultados El ensayo IgG Cuantitativo para Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 est estandarizado en trminos del Tercer Estndar Internacional para Suero de Anti-Toxoplasma de la Organizacin Mundial de la Salud. El valor de corte del ensayo se determin utilizando muestras positivas y negativas representativas (confirmadas por el mtodo ELISA) utilizando la tcnica ROC (Curva de rendimiento diagnstico). Positivo: Un resultado superior o igual a 8 IU/ml es indicativo de una infeccin pasada. Negativo: Un resultado inferior a 6,5 IU/ml es considerado negativo. Resultados inferiores a 6,5 IU/ml deben comunicarse solamente como Negativos, y no debe comunicarse la concentracin. Indeterminado: Un resultado superior o igual a 6,5 IU/ml e inferior a 8 IU/ml se considera indeterminado. Las muestras con valores superiores a 250 IU/ml deben comunicarse como superiores a 250 IU/ml". Las muestras que dieron resultados superiores a 250 IU/ml, cuando se examinan con la autodilucin necesaria 1-en-21, pueden necesitar diluciones adicionales con el diluyente para muestras IgG/IgM. La presencia de anticuerpos IgG contra Toxoplasma gondii es indicativo de una exposicin previa al organismo. Puede utilizarse slo una nica muestra para estimar el estado serolgico del individuo. Un resultado indeterminado indica un nivel intermedio de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en la muestra: la muestra debe volverse a analizarse. Las muestras que vuelvan a dar un resultado indeterminado deben examinarse por un mtodo alternativo, o debe recogerse una segunda muestra, si es posible, en un plazo de tiempo razonable (p.e. una semana). No se recomienda interpretar los resultados si el control positivo o negativo cae fuera del margen especificado en la Seccin Control de Calidad.

La magnitud del nivel de IgG comunicado no puede relacionarse con un ttulo final. Por lo tanto, en el informe de resultados del laboratorio para el mdico debe incluirse: "Los siguientes resultados se obtuvieron con EIA IgG Cuantitativo contra Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000." No es posible intercambiar los resultados obtenidos por mtodos de ensayo de otros fabricantes.

Valores Esperados Individuos con el organismo toxoplasma pueden no mostrar niveles de anticuerpo IgG detectables en las fases tempranas de la infeccin. Los niveles de IgG para Toxoplasma gondii empiezan a elevarse 1 o 2 semanas despus de la infeccin. Los niveles mximos se alcanzan en 6 8 semanas, despus descienden gradualmente en los meses y aos posteriores. Se detectan ttulos bajos generalmente durante toda la vida. El ttulo de anticuerpo no guarda relacin con la severidad de la enfermedad.2,4,6 La preponderancia de anticuerpos IgG anti-Toxoplasma gondii variar con la edad y la zona geogrfica. Se condujeron estudios con muestras tomadas de sujetos presumiblemente sanos y asintomticos del noroeste de los EE.UU. Este grupo de personas se compuso de 69 individuos de 15 a 64 aos de edad. (Las muestras fueron previamente recolectadas y guardadas congeladas a 20C). Se encontr que la preponderancia de reactividad al toxoplasma, basada en los resultados del ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE, fue de 56% en esta zona geogrfica. Se realizaron estudios adicionales con muestras provenientes de 42 mujeres embarazadas de 16 a 41 aos de edad de la misma zona geogrfica. (Las muestras fueron previamente recolectadas y guardadas congeladas a 20 C). La preponderancia de reactividad al toxoplasma para esta poblacin especfica fue del 5%, basndose en los resultados del ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE. (Ver el grfico de Expected Values), Estos lmites han de considerarse slo como una gua. Cada Laboratorio deber establecer sus propios rangos de referencia.


Limitaciones El uso de IgG Cuantitativo Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 para diagnosticar una infeccin reciente analizando parejas de sueros no se ha validado. Los resultados del anlisis deben contemplarse en el contexto del historial clnico de los pacientes, de su sintomatologa y de los dems hallazgos del laboratorio. La presencia de anticuerpos IgG en una sola muestra no es suficiente para distinguir entre una infeccin activa y una antigua. Los pacientes de los que se sospeche que padecen una infeccin primaria o activa deben analizarse para detectar la presencia de anticuerpos IgM para Toxoplasma gondii. Para determinar la seroconversin de no reactivo a reactivo, debe recogerse una segunda muestra de suero tres o cuatro semanas despus de la infeccin, muestra no reactiva, durante la etapa de convalecencia de la infeccin. La muestra de la fase aguda debe almacenarse y analizarse paralelamente a la muestra de la fase de convalecencia. Los individuos con infeccin aguda por toxoplasma puede que no presenten niveles detectables de anticuerpos IgG en la fase temprana de la infeccin. Los resultados en pacientes infectados con el virus VIH, pacientes bajo una terapia inmunosupresiva, o en pacientes con otros desrdenes que causen inmunosupresin, deben interpretarse con precaucin. No se han establecido las caractersticas de funcionamiento del ensayo para utilizarlo con muestras de neonatos, sangre del cordn umbilical, pacientes pretrasplante, u otros fluidos distintos del suero, tales como orina, saliva o lquido amnitico. Los anticuerpos heteroflicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del ensayo provocando interferencias con los inmunoanlisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente estn expuestos a animales o a productos

sricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anmalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anmalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinacin con el examen clnico, la historia mdica del paciente y cualquier otro dato clnico relevante.

Caractersticas Analticas Para ver resultados representativos de las cualidades del ensayo ver las tablas y los grficos. Los resultados se expresan en IU/ml. (A no ser que se indique lo contrario, todos los resultados fueron generados en muestras de suero recogidas en tubos sin geles o activadores de la coagulacin). Intervalo de calibracin: 5,0 250 IU/ml. Normalizado en trminos del tercer estndar WHO IS para Suero Humano Anti-Toxoplasma.

Sensibilidad: 5,0 IU/ml Precisin: Se han calculado datos estadsticos para las muestras a partir de los resultados de 5 replicados, cada uno en cinco das separados. (Ver las tablas de "Intraassay Precision" y Interassay Precision). Note que los controles negativos de la Muestra 1 siempre se encontraron por debajo de 5 IU/ml (el lmite inferior del intervalo de calibracin del ensayo) para todos los replicados de cada corrida. Especificidad: Se evalu la especificidad del ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE analizando 50 muestras positivas para citomegalovirus (CMV), virus de varicella-zoster (VZV), virus Epstein-Barr (EBV), Mycoplasma penumoniae y parvovirus B19. En estas muestras, el ensayo cuantitativo IgG anti-toxoplasma IMMULITE y un inmunoensayo enzimtico para IgG anti-Toxoplasma comercialmente disponible (Kit D) mostraron 96% de concordancia (48/50). Tipo de Muestra Alternativa: para evaluar el efecto de los diferentes tipos de muestras alternativos, se recogi sangre


de 16 voluntarios en tubos normales, tubos con Heparina y tubos vacutainer SST de Becton Dickinson. Todas las muestras se ensayo de IgG Cuantitativo para Toxoplasma de IMMULITE, obteniendo los siguientes resultados. (Heparina) = 1,02 (Suero) + 0,13 IU/ml r = 1,00

(SST) = 0,98 (tubos simples) 0,06 IU/ml r = 1,00

Medias: 4,4 IU/ml (Suero) 4,6 IU/ml (Heparina) 4,2 IU/ml (SST)

En otro estudio, la sangre de 16 voluntarios se recogi en tubos normales, y EDTA vacutainer. Todas las muestras se ensayo de IgG Cuantitativo para Toxoplasma de IMMULITE, obteniendo los siguientes resultados. (EDTA) = 0,93 (Suero) 0,003 IU/ml r = 1,00

Medias: 5,3 IU/ml (EDTA) 5,6 IU/ml (Suero)

Rendimiento Clnico Se estudi el rendimiento clnico del ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE, usando un total de 199 muestras de suero. Cada una de estas muestras fue analizada en tres sitios, dos de los cuales se encuentran fuera de los EE.UU. De las 199 muestras (previamente recolectadas y guardadas congeladas a 20C ), 61 se obtuvieron de mujeres que se presentaron para un examen obsttrico y ginecolgico, 42 se obtuvieron de mujeres embarazadas y el resto se obtuvo de pacientes con distintas enfermedades y afecciones (SIDA, anemia, arteritis, fatiga, dolor de cabeza, linfoma, meningitis, neumona y otros). El grupo consisti de 37 hombres y 162 mujeres de 15 a 68 aos de edad. Uno de los estudios retrospectivos fue conducido en el centro mdico de una universidad en el noroeste de los EE.UU. Las 199 muestras fueron evaluadas en forma no simultnea con el procedimiento cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE y el Kit A, un ensayo de inmunofluorescencia ligado a una enzima para IgG anti -Toxoplasma (ELFA) comercialmente disponible.

Ensayo Cuantitativo para IgG anti-

Toxoplasma IMMULITE

Kit A Pos Neg Sensibilidad

relativa Especificidad

relativaa

Positivo 52 2

Negativo 0 145 96,3% 100%

Concordancia: 99,0% 95% de lmites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 87,3% 99,5% y 97,5% 100%. (Lmites de confianza mediante anlisis exacto.)

Las dos muestras discordantes, negativas para IMMULITE pero positivas para el Kit A, fueron evaluadas con el Kit B, un inmunoensayo de micropartculas para IgG anti-Toxoplasma (MEIA) comercialmente disponible, el cual dio un resultado positivo. En el segundo estudio retrospectivo que se realiz fuera de los EE.UU., se evaluaron194 de las 199 muestras (5 muestras tuvieron insuficiente volumen de muestra) con el ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE y el Kit B.

Ensayo Cuantitativo IgG anti- Toxoplasma IMMULITE

Kit B Pos Neg Sensibilidad

relativa Especificidad

relativaa

Positivo 46 5

Negativo 2 141 90,2% 98,6%

Concordancia: 96,4% 95% de lmites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 78,6% 96,7% y 95,0% 99,8%. (Lmites de confianza mediante anlisis exacto.)

De las siete muestras discordantes, tres de las cinco que dieron negativas con IMMULITE pero positivas con el Kit B dieron negativas con el Kit A. Las dos muestras que dieron positivas con IMMULITE pero negativas con el Kit B dieron positivas con el Kit A. En el tercer estudio retrospectivo, tambin realizado fuera de los EE.UU., 160 de las 199 muestras (39 muestras tuvieron insuficiente volumen de muestra) fueron analizadas con el ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE y el Kit C, un inmunoensayo enzimtico comercialmente disponible.


Ensayo Cuantitativo IgG anti- Toxoplasma IMMULITE

Kit C Pos Neg Relative

Sensitivity Relative

Specificity

Positivo 32 2

Ambiguo 0 4

Negativo 2 120

94,1% 98,4%

Concordancia: 97,4% 95% de lmites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 80,3% 99,3% y 94,2% 99,8%. (Lmites de confianza mediante anlisis exacto).

Los dos casos positivos para el ensayo IMMULITE pero negativos para el Kit C dieron positivos para el Kit A. De los dos casos negativos para el ensayo IMMULITE pero positivos para el Kit C, uno dio positivo y el otro dio negativo con el Kit A. Los cuatro casos negativos para el ensayo IMMULITE, pero ambiguos para el Kit C, dieron todos negativos con el Kit A. Por lo tanto, los resultados de IMMULITE concuerdan con los del Kit A en siete de los ocho casos en que no hay concordancia con el Kit C.

Asistencia tcnica Contctese con su Distribuidor Nacional. El Sistema de Calidad de Diagnostic Products Corporation est registrado para la ISO 13485:2003.

Franais

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose quantitative IgG Domaine d'utilisation : Dosage quantitatif des IgG spcifiques diriges contre Toxoplasma gondii dans le srum. Rserv un usage diagnostique in vitro avec l'Analyseur IMMULITE et de IMMULITE 1000, ce test constitue une aide la dtermination du statut srologique vis--vis de Toxoplasma gondii.

Ce coffret n'est pas habilit auprs de la Food and Drug Administration amricaine pour le dpistage des donneurs de sang ou de plasma.

Ce ractif est enregistr auprs de l'AFSSAPS. Rfrence catalogue : LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Code produit : TXP Code couleur : gris clair

Introduction Toxoplasma gondii est un parasite intracellulaire capable d'infecter la plupart des mammifres, y compris l'homme. Le parasite se transmet par l'ingestion de viande insuffisamment cuite. Dans le monde, 1 90 % des populations est susceptible d'tre infect,7 25 30 % de la population adulte tant infect au Etats-Unis.3 Pour la France, 30 60 % de la population est infecte. Mme si la toxoplasmose peut se manifester sous plusieurs formes, les individus infects restent gnralement asymptomatiques et une infection latente persiste habituellement toute la vie.2 Les symptmes cliniques visibles sont similaires ceux de la mononuclose infectieuse, avec une lymphadnopathie, de la fivre, des cphales, une sensation de malaise et, parfois, une pneumonie et une myocardite.6

Comme toute infection latente, une infection aigu par Toxoplasma gondii peut reprsenter un risque srieux pour un individu immunodprim ou pour un nouveau-n infect in utero. Les patients immunodprims infects sont susceptibles de dvelopper une encphalite, une myocardite ou une pneumopathie inflammatoire.3 Les infections congnitales proviennent habituellement d'une infection maternelle aigu asymptomatique. Cette infection peut se traduire par une naissance prmature, un avortement spontan ou la naissance d'un enfant mort-n.4,6 Le nouveau-n peut prsenter une choriortinite, une hydrocphalie, une microcphalie, des calcifications intra-crbrales et un retard psychomoteur.1 La plupart des enfants infects in utero sont asymptomatiques dans les premiers temps de vie.4

Dans la mesure o le parasite n'est pas facile mettre en culture, la prise en charge de la toxoplasmose demande un contrle srologique rgulier des individus infects.3 Un dosage quantitatif d'IgG


spcifiques diriges contre Toxoplasma gondii peut tre utile pour mettre en vidence une infection antrieure et rvler une ractivation de l'infection. Un diagnostic prcis est important, en particulier au cours de la grossesse, puisqu'un traitement par la spiramycine pourra rduire les risques encourus par le ftus.5

Principe du test IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif est un immunodosage chimiluminescent squentiel, en phase solide. Cycles d'incubation : 2 30 minutes.

Recueil des chantillons Il est recommand de clarifier les chantillons hyperlipmiques par ultracentrifugation. Les chantillons troubles ou prsentant des particules en suspension devront tre clarifis par centrifugation vitesse rduite. La centrifugation des chantillons sriques avant la formation complte du caillot peut entraner la prsence de fibrine. Pour viter les rsultats errons ds la prsence de fibrine, s'assurer de la formation complte du caillot avant de centrifuger les chantillons. Certains chantillons, en particulier ceux provenant de patients sous anti-coagulants, peuvent ncessiter un temps plus long pour la formation du caillot. Des tubes pour prlvements sanguins provenant de fabricants diffrents peuvent donner des rsultats diffrents, selon les matriaux et additifs utiliss, y compris gels ou barrires physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le coffret Toxoplasmose IgG quantitatif IMMULITE/IMMULITE 1000 n'a pas t test sur tous les types de tubes possibles. Veuillez consulter le chapitre intitul Autres Types d'chantillons pour plus de renseignements sur les tubes qui ont t valus. Volume ncessaire : 10 l d 'chantillon pr-dilu (dilution au 1:21). (L'unit-chantillon doit contenir au moins 100 l de plus que le volume total ncessaire.)

Conservation : 3 jours +2C/+8C ou 6 mois 20C.13 Dilution des chantillons de patients : Les chantillons doivent tre dilus au 1/21me avec du diluant chantillon IgG/IgM (LIGZ2). Cette dilution doit tre faite manuellement. Exemple : ajouter 20 l d'chantillon 400 l de diluant chantillon (LIGZ2) fournis avec le coffret. Le systme IMMULITE 1000 Windows ralise galement les dilutions automatiquement, en utilisant le diluant chantillon IgG/IgM (LIGW) fourni dans le coffret (L1KIGW1,5). Les rsultats imprims ont t corrigs en tenant compte d'une dilution au 1/21me.

Prcautions d'emploi Rserv un usage diagnostique in vitro. Ractifs : conserver les ractifs +2/ +8 C. Eliminer les dchets conformment la rglementation en vigueur. Respecter les prcautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les ractifs drivs de produits humains et utiliss dans ce coffret ont subi un test srologique pour la Syphilis et des tests de dpistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigne de surface de l'hpatite B, qui se sont tous avrs ngatifs. De l'azide de sodium des concentrations infrieures 0,1 g/dl a t ajout comme conservateur ; lors de l'limination, l'vacuer avec de grandes quantits d'eau pour viter une accumulation d'azides mtalliques explosifs dans les canalisations. Substrat chimiluminescent : viter la contamination et l'exposition directe au soleil. (Voir notice). Eau : utiliser de l'eau distille ou dsionise. La bille est revtue d'antigne de Toxoplasma gondii inactiv. Cependant, des parasites ayant pu subsister, la prudence est recommande lors de l'utilisation ou de l'limination des produits fournis. Les rsultats d'IgG diriges contre Toxoplasma gondii obtenus sur un chantillon donn, avec les tests de


diffrents fabricants, pourront prsenter une disparit en raison de diffrences de mthodologie et de spcificit des ractifs. Par consquent, les rsultats communiqus au mdecin par le laboratoire devront comporter la mention suivante : Les rsultats suivant ont t obtenus avec le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif. Les rsultats obtenus avec des procds de dosage d'autres fabricants ne doivent pas y tre substitus.

Matriel fourni Les composants de la trousse ne peuvent tre utiliss que conjointement. Les tiquettes l'intrieur du coffret sont ncessaires au dosage.

Tests unitaires Toxoplasmose quantitative IgG (LTXP1) Avec code-barre. Chaque unit-test contient une bille revtue d'un antigne de Toxoplasma gondii inactiv, partiellement purifi (tachyzotes de souche RH, issus de pritoine de souris). Stable +2C/+8C jusqu' la date de premption. LKTXP1 : 100 units. LKTXP5 : 500 units. Porter les sachets temprature ambiante avant d'ouvrir. Ouvrir le sachet avec des ciseaux en prservant le dispositif de fermeture. Refermer les sachets pour les protger de l'humidit.

Cartouches de ractif Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPA, LTXPB) Avec code-barres. LTXPA : 7,5 ml de tampon base de protines, avec conservateur. LTXPB : 7,5 ml d'anticorps monoclonal murin anti-IgG humaines marqu la phosphatase alcaline dans un tampon avec conservateur. Conserver bouchs et rfrigrs : stables +2C/+8C jusqu' la date de premption. A utiliser de prfrence dans les 30 jours qui suivent l'ouverture, si les recommandations de stockage sont respectes. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 5 jeux.

Ajusteurs Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPL, LTXPH) 2 flacons (haut et bas), 4 ml chacun, contenant des IgG anti-Toxoplasma gondii dans du srum humain avec tampon avec

conservateur. (Il nest pas ncessaire de prdiluer.) Stable +2C/+8 C pendant 14 jours aprs ouverture ou 6 mois (aliquot) 20 C. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 2 jeux.

Contrles Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Trois flacons (Ngatif, Positif Faible et Positif), 2 ml chacun. LTXPC1 (Contrle ngatif) : un flacon de srum humain ne contenant pas d'IgG diriges contre Toxoplasma gondii, avec conservateur. LTXPC2, LTXPC3 (Contrle positif faible, Contrle positif) : deux flacons contenant des IgG diriges contre Toxoplasma gondii dans du srum humain avec conservateur. Stable +2C/+8C pendant 14 jours aprs ouverture ou 6 mois (aliquot) 20C. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 2 jeux. IMMULITE : Les contrles Toxoplasmose IgG ncessite la mme prdilution manuelle 1-dans-21 que les chantillons de patients, avec diluant chantillon IgG/ IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000 : Le logiciel de l'IMMULITE 1000 ralise automatiquement les dilutions bord des chantillons de patients et de contrles. Saisir les contrles comme des contrles. Se reporter la fiche technique du contrle pour les concentrations.

Diluant chantillon IgG/IgM (LIGZ2) Pour la dilution manuelle des chantillons de patients et des contrles. 100 ml matrice tampon/protines non-humaines avec conservateur. Stable +2C/+8C pendant 30 jours aprs ouverture ou 20C pendant 6 mois (aliquot). LKTXP1 : 1 flacon. LKTXP5 : 3 flacons. Pour la dilution bord automatique des chantillons de patients, avec IMMULITE 1000 Windows, se rfrer au chpitre Composants du Coffret fournis sparment .

Composants du coffret fournis sparment

Diluant chantillon IgG/IgM (L1KIGW1,5) Requis pour la dilution bord des chantillons de patients et des contrles


avec IMMULITE 1000 Windows. Les flacons de diluant chantillon (LIGW) contiennent une matrice protque non-humaine dans un tampon concentr (2.5X) avec un conservateur. Stable 28C jusqu' la date d'expiration. L1KIGW1 : 2 flacons. L1KIGW5 : 10 flacons. LSUBX : Substrat chimiluminescent LPWSM : Solution de lavage LKPM : Coffret de dcontamination de l'aiguille de prlvement LCHx-y : portoirs cupules ractionnelles (avec code-barre) LSCP : cupules ractionnelles ( usage unique) LSCC : bouchons pour cupules ractionnelles (optionnel) DCHS : Support pour units de dilution automatise par l'IMMULITE 1000 Windows. Egalement requis Pipettes pour le transfert des chantillons ; eau distille ou dsionise.

Protocole de dosage Noter que pour des performances optimales, il est important de raliser toutes les procdures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel d'Utilisation de l'IMMULITE ou de l'IMMULITE 1000. Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITE ou de l'IMMULITE 1000 pour la prparation, le dmarrage du systme, les ajustements, le dosage et les procdures de contrle de qualit. Vrifier visuellement que chaque Unit-Test contient bien une bille avant de la charger dans l'automate. Noter que les deux flacons de ractif A et B doivent tre placs sur le carrousel pour raliser ce dosage. Pour l'IMMULITE 1000 Windows, le flacon contenant le diluant chantillon doit galement tre charg sur le carrousel. Intervalle d'ajustement recommand : 4 semaines. Echantillons pour le contrle de qualit : Les contrles fournis dans le coffret doivent utiliss pour le contrle de qualit des performances du dosage. Les tmoins positifs et ngatif sont conus pour dtecter un dfaut majeur du ractif.

Le tmoin positif fourni ne pourra pas garantir la prcision du seuil. En plus des contrles fournis, les utilisateurs peuvent souhaiter utiliser des contrles supplmentaires pour les valeurs leves du domaine de mesure du dosages. Ces contrle supplmentaires pourront tre tests, conformment aux recommandations ou aux directives des autorits locales ou nationales. 12 Il est galement recommand de tester priodiquement des chantillons positifs ou ngatifs connus, pour contrler l'exactitude du pipetage lors de l'tape de dilution.

Interprtations des rsultats Le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif est standardis par rapport au Troisime Standard International de l'OMS pour les anticorps sriques anti-toxoplasmose. Le seuil du dosage est dtermin par courbe ROC partir d'chantillons positifs et ngatifs reprsentatifs (confirm par dosage ELISA). Positif : un rsultat suprieur ou gal 8 UI/ml indique une infection passe. Ngatif : un rsultat infrieur 6,5 UI/ml est considr comme ngatif. (Les rsultats infrieurs 6,5 UI/ml doivent tre rendus comme Ngatif sans mentionner de concentration numrique).

Indtermin : un rsultat suprieur ou gal 6,5 UI/ml et infrieur 8 UI/ml est considr comme indtermin. Une concentration suprieure 250 UI/ml devra tre rapporte comme suprieure 250 UI/ml . Un chantillon dont la concentration, obtenue sur une dilution au 1:21 par l'appareil, est suprieure 250 UI/ml, devra tre dilu d'un facteur supplmentaire avec le diluant chantillon IgG/IgM. La prsence d'anticorps IgG anti-Toxoplasma gondii est rvlatrice d'un contact antrieur avec le parasite. Un seul chantillon peut uniquement servir valuer le statut srologique de l'individu. Un rsultat indtermin indique des taux d'anticorps anti-Toxoplasma gondii intermdiaires : l'chantillon devra donc tre dos de nouveau. Les chantillons qui restent alors indtermins devront


tre tests par une autre mthode, ou un autre prlvement devra tre obtenu si possible dans un dlai raisonnable (une semaine, par exemple). Toute interprtation de rsultats est dconseille si les contrles positif ou ngatif donne un rsultat situ en dehors de l'intervalle de rfrence dfini la section Contrle de qualit . L'importance du taux d'IgG rapport n'est pas corrle un titrage en point final. Les rsultats communiqus au mdecin par le laboratoire devront comporter la mention suivante : Les rsultats suivant ont t obtenus avec le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif. Les rsultats obtenus avec des procds de dosage d'autres fabricants ne doivent pas y tre substitus.

Valeurs de rfrence Il est possible que les IgG spcifiques ne soient pas dtectables dans les phases prcoces de l'infection par Toxoplasma gondii. En cas de suspicion d'infection au stade prcoce, il faudra imprativement effectuer un dosage IgM anti-Toxoplasma gondii. Les taux d'IgG anti-Toxoplasma gondii commencent augmenter une deux semaines aprs la contamination. La rponse anticorps atteint son maximum en 6 8 semaines, puis diminue progressivement sur plusieurs mois, voire plusieurs annes. Le titre d'anticorps n'est pas corrl la gravit de la maladie.2,4,6 La prvalence des anticorps anti-Toxoplasma gondii varie avec l'ge et la localisation gographique. Des tudes ont t menes sur des chantillons provenant de sujets asymptomatiques en bonne sant apparente, du nord-ouest des Etats-Unis. Les sujets, au nombre de 69, taient gs de 15 64 ans. (Les chantillons avaient t recueillis et congels 20 C avant d'tre doss). La prvalence de la sropositivit pour Toxoplasma gondii, sur la base des rsultats obtenus par le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif, est de 56 % dans cette population. Des tudes complmentaires ont t menes sur des chantillons prlevs chez 42 femmes enceintes, ges de 16 41 ans, habitant la mme rgion. (Les

chantillons avaient t recueillis et congels 20 C avant d'tre doss). La prvalence de la sropositivit pour Toxoplasma gondii, sur la base des rsultats obtenus par le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif, est de 5 % pour cette population. (Voir le graphique Expected Values.) Utiliser ces valeurs titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devrait tablir ses propres valeurs de rfrence.

Limites L'utilisation du dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif pour le diagnostic d'une infection rcente en dosant des paires de srums n'a pas t valide. Les rsultats doivent imprativement tre interprts dans le contexte clinique du patient, de la symptomatologie et d'autres rsultats de laboratoire. La mise en vidence d'IgG spcifiques dans un chantillon unique ne permet pas de distinguer une infection active d'une infection passe. Les patients suspects de primo-infection ou d'infection active doivent faire l'objet d'une recherche d'IgM anti-Toxoplasma gondii. Pour mettre en vidence une sroconversion, un second chantillon srique devra tre prlev trois ou quatre semaines aprs le prlvement ngatif de la phase aigu, au cours de la phase de convalescence de l'infection. L'chantillon de phase aigu doit tre conserv et test en parallle avec l'chantillon de la phase de convalescence. Il est possible que les IgG spcifiques ne soient pas dtectables dans la phase prcoce d'une infection aigu par Toxoplasma gondii. Les rsultats obtenus chez des patients sropositifs pour le VIH, des patients suivant un traitement immunosuppresseur ou des patients ayant d'autres troubles conduisant une immunosuppression, devront tre interprts avec prudence. Les performances de ce dosage n'ont pas t values pour l'utilisation d'chantillons provenant de sang de cordon, de nouveau-ns, de patients allant recevoir une transplantation ou pour des liquides biologiques autres que le

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativ

IMMULITE:IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG

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