IL-6 - Diagnostic Products Corporation · IL-6 stimulus is necessary for B cells to differentiate...

IMMULITE® 2000 IL-6

2 IMMULITE 2000 IL-6 (PIL2K6P-8, 2005-04-05)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement ofinterleukin 6 (IL-6) in serum, EDTA orheparinized plasma, as an aid in the studyof inflammatory diseases.Catalog Number: L2K6P2 (200 tests)Test Code: I6 Color: Dark Green

Summary and ExplanationInterleukin-6 (IL-6) is a mediator of theimmune system, which has a wide varietyof biological actions. It is also known as Bcell stimulatory factor (BCSF), B cellstimulation factor 2 (BSF-2), hybridomagrowth factor (HGF), hepatocytestimulatory factor (HSF), cytolyticdifferentiation factor for T lymphocytes(CDF) and many others.

The IL-6 cDNA is coding for a polypeptideconsisting of 212 amino acids. This proteinis cleaved to a mature protein of 184amino acids. Due to different degrees ofglycosylation — at positions 73 and 172,respectively — and phosphorylation, IL-6has a molecular weight ranging between21.5 and 28 kDa.

Many different cells are capable of IL-6synthesis including monocytes/macrophages, fibroblasts, endothelialcells, keratinocytes, mast cells, T cells andmany tumor cell lines. In vivo and in vitro,IL-6 acts as a differentiation factor for Bcells and an activation factor for T cells. Inthe presence of IL-2, it drives thedifferentiation of T cells to cytotoxic T cellsand induces the proliferation ofthymocytes. After stimulation with IL-4, anIL-6 stimulus is necessary for B cells todifferentiate into Ig-secreting plasma cells.IL-6 is a potent growth factor of differenthuman myelomas and is active inconcentrations less than 10 pg/mL. IL-3and IL-6 show in vitro synergistic effects inthe differentiation of hematopoieticprogenitor cells.

Elevated IL-6 serum or plasma levels mayoccur in different diseases including

sepsis, autoimmune diseases,lymphomas, AIDS, alcoholic liver diseaseand in patients with infections, ortransplant rejection.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 IL-6 is a solid-phase,enzyme-labeled, chemiluminescentsequential immunometric assay.Incubation Cycles: 2 × 30 minutes.

Specimen CollectionThe use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufactures may yield differing values,depending on tube materials andadditives, including gel or physicalbarriers, clot activators and/oranticoagulants. IMMULITE 2000 IL-6 hasnot been tested with all possible variationsof tube types. Consult the section onAlternate Sample Types for details ontubes that have been tested.

Volume Required: 100 µL serum, EDTAor heparinized plasma.Storage: 1 day at 2–8°C or 6 months at –20°C.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Source

IMMULITE 2000 IL-6 (PIL2K6P-8, 2005-04-05) 3

materials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

IL-6 Bead Pack (L26P12)With barcode. 200 beads, coated withmonoclonal murine anti-IL-6. Stable at 2–8°C until expiration date.L2K6P2: 1 pack.

IL-6 Reagent Wedge (L26PA2)With barcode. 18.5 mL protein/buffermatrix and 18.5 mL alkaline phosphatase(bovine calf intestine) conjugated topolyclonal sheep anti-IL-6 in buffer, withpreservative. Stable at 2–8°C untilexpiration date.L2K6P2: 1 wedge.

Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

IL-6 Adjustors (L6PL, L6PH)Two vials (Low and High) of lyophilizedIL-6 in a protein/buffer matrix, withpreservative. Reconstitute each vial with3.0 mL distilled or deionized water. Mix bygentle swirling or inversion until thelyophilized material is fully dissolved.Stable at 2–8°C for 3 days afterreconstitution, or for 6 months (aliquotted)at –20°C.L2K6P2: 1 set.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Kit ComponentsSupplied Separately

Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4)For the on-board dilution of patientsamples. One vial of concentrated (ready-to-use), nonhuman protein/buffer matrix,with preservative. Stable at 2–8°C for 30days after opening, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.L2M2Z: 25 mL. L2M2Z4: 55 mL.Barcode labels are provided for use withthe diluent. Before use, place anappropriate label on a 16 × 100 mm testtube, so that the barcode can be read bythe on-board reader.L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels

L2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes(16 × 100 mm)L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps

LILCM: A bi-level, human serum-basedIMMULITE Cytokine Control Modulecontaining IL-6.Also RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.

Recommended Adjustment Interval:2 weeks.Quality Control Samples: Use controlsor sample pools with at least two levels(low and high) of IL-6.

Expected ValuesA reference range study forIMMULITE 2000 IL-6 was performed onserum samples collected from 60 healthylaboratory volunteers into plain glassserum tubes. The non-parametric lower95% range was from nondetectable to


3.4 pg/mL. The absolute range was fromnondetectable to 5.9 pg/mL.

Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationHeterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in pg/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Calibration Range: Up to 1,000 pg/mLNIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL):IU/mL = 0.1 × pg/mL.Analytical Sensitivity: 2 pg/mLHigh-dose Hook Effect:None up to 60,000 pg/mL.

Precision: Samples were repeatedlyassayed in duplicate over the course ofseveral days for a total of 40 runs and 80replicates. (See "Precision" table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree IL-6 solutions (1,000, 4,000, and8,000 pg/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody is highly specificfor IL-6. (See "Specificity" table.)

Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 550 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 12 volunteers into plainglass and plastic serum tubes, plasticheparinized and EDTA tubes, and plasticgel barrier tubes (SST®). All tubes werefrom Becton Dickinson. Equal volumes ofthe matched samples were spiked withvarious concentrations of IL-6, to obtainvalues throughout the calibration range ofthe assay, and then assayed by theIMMULITE 2000 IL-6 procedure.(EDTA Plastic) = 0.98 (Serum Glass) + 5.2 pg/mL

(Heparin Plastic) = 0.92 (Serum Glass) + 8.3 pg/mL

(SST Plastic) = 0.71 (Serum Glass) + 9.1 pg/mL

(Serum Plastic) = 0.76 (Serum Glass) + 7.1 pg/mL

Means:186 pg/mL (Serum Glass)188 pg/mL (EDTA Plastic)180 pg/mL (Heparin Plastic)142 pg/mL (SST Plastic)148 pg/mL (Serum Plastic)

Method Comparison 1: The assay wascompared to a commercially availableassay for IL-6 (Kit A) on 109 patientsamples. (Concentration range:approximately 3 to 300 pg/mL. See graph1.) By linear regression:(IML 2000) = 0.80 (Kit A) + 0.97 pg/mLr = 0.975

Means:100 pg/mL (IMMULITE 2000)124 pg/mL (Kit A)

Method Comparison 2: The assay wasalso compared to DPC's IMMULITE IL-6on 150 patient samples. (Concentrationrange: approximately 3 to 870 pg/mL. Seegraph 2.) By linear regression:(IML 2000) = 1.08 (IML) – 3.8 pg/mLr = 0.994

Means:215 pg/mL (IMMULITE 2000)203 pg/mL (IMMULITE)


References1) Hirano T, Akira S, Taga T, Kishimoto T.Biological and clinical aspects of interleukin-6.Immunol Today 1990;11:443-9. 2) Saito S,Kasahara T, Kato Y, Ishihara Y, Ichijo M.Elevation of amniotic fluid interleukin 6 (IL-6), IL-8 and granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) in term and preterm parturition. Cytokine1993;5:81-8. 3) Waage A, Brandtzaeg P,Halstensen A, Kierulf P, Espevik, T. Thecomplex pattern of cytokines in serum frompatients with meningococcal septic shock. J ExpMed 1989; 169:333-8. 4) Hack CE, De GrootER, Felt-Bersma RJF, Nuijens JH, Strack VanSchijndel RJM, Eerenberg-Belmer AJM, ThijsLG, Aarden LA. Increased plasma levels ofinterleukin-6 in sepsis. Blood 1989;74/5:1704-10. 5) Steinmetz HT, Herbertz A, Bertram M,Diehl V. Increase in interleukin-6 serum levelpreceding fever in granulocytopenia andcorrelation with death from sepsis. J Infect Dis1995;171:225-8. 6) Buck C, Bundschu J, GallatiH, Bartmann P, Pohlandt F. Interleukin-6: Asensitive parameter for the early diagnosis ofneonatal bacterial infection. Pediatrics1994;93:54-8. 7) Hummel M, Czerlinski S,Friedel N, Liebenthal C, Hapser D, von Baehr R,Hetzer R, Volk HD. Interleukin-6 and interleukin-8 concentrations as predictors of outcome inventricular assist device patients before hearttransplantation. Critical Care Med 1994;22:448-54. 8) National Committee for ClinicalLaboratory Standards. Procedures for thecollection of diagnostic blood specimens byvenipuncture; approved standard. 4th ed.NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS,1998.

Technical AssistanceAvailable outside the United States only.For technical assistance, contact yourNational Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (pg/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 89 4.0 4.5% 4.7 5.3%

2 112 3.7 3.3% 8.1 7.2%

3 244 10.8 4.4% 11.3 4.6%

4 421 19.6 4.7% 23.4 5.6%

5 695 34.4 4.9% 45.0 6.5%

6 724 27.3 3.8% 39.4 5.4%

Linearity (pg/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 8 59.4 — —

4 in 8 32.7 29.7 110%

2 in 8 15.6 14.9 105%

1 in 8 8.27 7.43 111%

2 8 in 8 98.9 — —

4 in 8 54.2 49.5 109%

2 in 8 26.7 24.8 108%

1 in 8 14.7 12.4 119%

3 8 in 8 444 — —

4 in 8 216 222 97%

2 in 8 114 111 103%

1 in 8 58.3 55.5 105%

4 8 in 8 565 — —

4 in 8 282 283 100%

2 in 8 147 141 104%

1 in 8 72.6 70.6 103%


Specificity

Compound1pg/mLAdded2

Apparentpg/mL3

% Cross-reactivity4

IL-1α 10,000 ND ND

IL-1β 10,000 ND ND

IL-2 10,000 ND ND

IL-4 10,000 ND ND

IL-8 10,000 ND ND

TNFα 10,000 ND ND

InterferonGamma

10,000 ND ND

ND: not detectable.5

Recovery (pg/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — — —

A 50.3 50.0 101%

B 182 200 91%

C 409 400 102%

2 — 86.8 — —

A 132 132 100%

B 267 282 95%

C 482 482 100%

3 — 168 — —

A 203 210 97%

B 362 360 101%

C 604 560 108%

4 — 229 — —

A 290 268 108%

B 436 418 104%

C 719 618 116%

5 — 419 — —

A 401 448 90%

B 623 598 104%

C 888 798 111%

Method Comparison 1

0

100

200

300

0 100 200 300

Kit A, pg/mL

IMM

ULI

TE 2

000

IL-6

(IML 2000) = 0.80 (Kit A) + 0.97 pg/mLr = 0.975

Method Comparison 2

0

200

400

600

800

1000

0 200 400 600 800 1000

IMMULITE IL-6, pg/mLIM

MU

LITE

200

0 IL

-6

(IML 2000) = 1.08 (IML) – 3.8 pg/mLr = 0.994

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4SD (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.Recovery: 1Probe, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3 GemesseneKonzentration, 4% Kreuzreaktivität, 5NN: Nichtnachweisbar. Method Comparison: IL-6:Interleukin-6.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3Concentraciónaparente, 4% Reacción cruzada, 5ND: nodetectable. Method Comparison: IL-6: IL-6.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté, 3Concentration apparente, 4Réaction croisée %.


5ND: non détectable. Method Comparison:IL-6: IL6.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta, 3Concentrazione apparente, 4Percentuale diCrossreattività, 5ND: non determinabile. MethodComparison: IL-6: IL-6.

Português. Precisão: 1Intra-série, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearidade: 1Diluição, 2Observado(O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8.Recuperação: 1Solução, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Especificidade:1Composto, 2Quantidade adicionada,3Concentração Aparente, 4Percentagem dereactividade cruzada, 5ND: não detectável.Comparação de Métodos: IL-6:Interleuquina 6.

Deutsch

IMMULITE 2000 IL-6Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2000Systems - zur quantitativen Bestimmungvon Interleukin-6 in Serum, EDTA-Plasmaoder Heparin-Plasma als Hilfestellung fürdie Untersuchung von entzündlichenKrankheiten.Artikelnummern: L2K6P2 (200 Tests)Testcode: I6 Farbe: dunkelgrün

Klinische RelevanzInterleukin-6 (IL-6) ist eineMediatorsubstanz des Immunsystems mitmannigfaltigen biologischen Aktivitäten.IL-6 ist auch bekannt als B-Zell-Stimulationsfaktor (BCSF), B-Zell-Stimulationsfaktor 2 (BSF-2), Hybridom-Wachstumsfaktor (HGF), Hepatozyten-Stimulationsfaktor (HSF), zytolytischerDifferenzierungsfaktor für T-Lymphozyten(CDF) u.v.a.Die cDNA von IL-6 kodiert für einPolypeptid, das aus 212 Aminosäurenbesteht. Dieses Protein wird in ein reifes,aus 184 Aminosäuren bestehendesProtein aufgespalten. Wegenverschiedener Grade der Glykosilierung(an Positionen 73 bzw. 172) und

Phosphorylierung variiert dasMolekulargewicht von IL-6 zwischen 21,5und 18 kDa.IL-6 kann von vielen verschiedenenZellarten synthetisiert werden, darunterMonozyten/Makrophagen, Fibroblasten,Endothelzellen, Keratinozyten, Mastzellen,T-Zellen und viele Tumorzelllinien. IL-6fungiert in vivo und in vitro alsDifferenzierungsfaktor für B-Zellen undAktivierungsfaktor für T-Zellen. Im Beiseinvon IL-2 bewirkt es, dass T-Zellen zuzytotoxischen T-Zellen differenzieren unddass Thymozyten proliferieren. B-Zellenbenötigen nach Stimulation mit IL-4 einenIL-6-Stimulus, um zu Ig-sezernierendenPlasmazellen zu differenzieren. IL-6 ist einpotenter Wachstumsfaktor fürverschiedene menschliche Myelome undentfaltet seine Aktivitäten bereits inKonzentrationen von unter 10 pg/ml. IL-3und IL-6 zeigen in vitro bei derDifferenzierung von hämopoetischenVorläuferzellen synergistische Effekte.Erhöhte IL-6-Werte in Serum oder Plasmakönnen bei verschiedenen Krankheitenwie etwa Sepsis, Autoimmuner-krankungen, Lymphome, AIDS,alkoholbedingten Leberschäden sowie beiInfektionen oder Organabstoßungauftreten.

MethodikIMMULITE 2000 IL-6 ist ein sequentiellerFestphasen-Chemilumineszenz-immunometrischer Assay.Inkubationszyklen: 2 × 30 min.

ProbengewinnungDer Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zuinterpretieren.

Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Proben


von Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000 IL-6 wurde noch nicht mit allen erhältlichenRöhrchentypen getestet. Der Abschnitt zuden verschiedenen Probenarten enthältnähere Informationen zu den bereitsgetesteten Röhrchentypen.Erforderliche Menge: 100 µl Serum,EDTA-Plasma oder Heparin-Plasma.

Lagerung: 1 Tag bei 2–8°C oder6 Monate bei –20°C.

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.

Reagenzien: Bei 2–8 °C lagern. DieEntsorgung muss nach den jeweilsgültigen Gesetzen erfolgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertesWasser benutzen.

Im Lieferumfang enthaltenDie Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf der

Innenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

IL-6 Kugelcontainer (L26P12)Barcodiert. 200 Kugeln beschichtet mitAnti-IL-6 (monoklonal, Maus). Bei 2–8°Cbis zum Verfallsdatum haltbar.L2K6P2: 1 Container.

IL-6 -Reagenzbehälter (L26PA2)Barcodiert. 18,5 ml gepufferteProteinmatrix und 18,5 ml mit alkalischerPhosphatase (Rinderkalbsdarm)konjugiertes polyklonales Anti-IL-6(Schaaf) in Pufferlösung (mitKonservierungsmittel). Bei 2–8°C bis zumVerfallsdatum haltbar.L2K6P2: 1 Behälter.Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Die Folie von der Oberseite desContainers entfernen. Den Schiebedeckelnach unten in die Führung desReagenziendeckels einrasten lassen.

IL-6 Kalibratoren (L6PL, L6PH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mitlyophilisiertem IL-6 in einer Protein-/Puffermatrix (mit Konservierungsmittel).Fläschchen mit je 3,0 ml destilliertem oderdeionisiertem Wasser rekonstituieren.Zum Mischen leicht schwenken oderumdrehen, bis das lyophilisierte Materialvollständig aufgelöst ist. NachRekonstituierung 3 Tage bei2–8°C, sonst 6 Monate (aliquotiert) bei–20°C haltbar.L2K6P2: 1 Set.

Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufGlasröhrchen kleben, so dass dieBarcodes vom Barcodereader desSystems gelesen werden können.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4)Zum automatischen Verdünnen derPatientenproben. Eine Flasche enthältkonzentrierte nichthumane Protein-/Puffermatrix, mit Konservierungsstoffen(gebrauchsfertig). 30 Tage nach demÖffnen bei 2–8°C oder für 6 Monate


(aliquotiert) bei –20°C haltbar.L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml.

Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz(Diluents) werden Barcode Etikettenmitgeliefert. Vor Verwendung einentsprechendes Etikett so auf ein16×100 mm Teströhrchen kleben, dass esvom eingebauten Barcode Readergelesen werden kann.L2M2Z: 3 Etiketten L2M2Z4: 5 EtikettenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) ReaktionsgefäßeL2ZT: 250 Teströhrchen (16 × 100 mm)für die ProbenverdünnungL2ZC: 250 Röhrchenverschlüsse für dieProbenverdünnungLILCM: IMMULITE Zytokin-Kontrolle.IL-6 in menschlichen Serum mit zweiunterschiedlichen Konzentrationen(niedrig und hoch).Ebenfalls benötigtDestilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Teströhrchen; Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2000-Handbuch.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Qualitätskontrollproben: Kontrollen oderPoolseren mit IL-6 in mindestens zweiKonzentrationen (niedrig und hoch)verwenden.

ReferenzwerteIn einer Referenzbereichsstudie fürIMMULITE 2000 IL-6 wurdenSerumproben von 60 klinisch unauffälligenLaborprobanden in einfachenGlasserumröhrchen untersucht. Imnichtparametrischen unteren 95%-Konfidenzintervall lagen die Wertezwischen „nicht nachweisbar“ bis3,4 pg/ml. In absoluten Zahlen reichten

die Werte von „nicht nachweisbar“ bis5,9 pg/ml.

Diese Grenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen. Jedes Laborsollte seine eigenen Referenzbereicheetablieren.

Grenzen der MethodeHeterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als pg/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – aus Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)Messbereich: bis 1 000 pg/mlNIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL):IU/mL = 0,1 × pg/ml,Analytische Sensitivität: 2 pg/mlHigh-Dose-Hook-Effect: Bis60 000 pg/ml keiner.

Präzision: Verschiedene Proben wurdenin Zweifachbestimmung über mehrereTage bestimmt in einer Gesamtzahl von40 Läufen mit 80 Bestimmungen; sieheTabelle „Precision“).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Linearity“.)


Wiederfindung: Die getesteten Probenwaren mit drei Interleukin-6-Lösungen(1 000, 4 000, und 8 000 pg/ml) 1:19versetzt. (Repräsentative Datenentnehmen Sie bitte der Tabelle„Recovery“.)Spezifität: Hochspezifischer IL-6-Antikörper. (siehe Tabelle „Specifity“.)Bilirubin: Konjugiertes undunkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 550 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Triglyceride hat inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.

Alternativer Probentyp: Um dieAuswirkungen von verschiedenenProbenarten zu untersuchen, wurde Blutvon 12 Probanden in einfacheSerumröhrchen aus Glas und Kunststoffund in Heparin-, EDTA- und SST®-Trenngelröhrchen aus Kunststoffentnommen. Alle Röhrchen wurden vonBecton Dickinson hergestellt. GleicheVolumina der jeweiligen Proben wurdenmit verschiedenen Konzentrationen vonIL-6 versetzt, um Werte im gesamtenKalibrationsbereich zu erhalten.Anschließend wurden die Proben mit demIMMULITE 2000 IL-6 -Assay analysiert.(EDTA-Röhrchen aus Kunststoff) = 0,98(Serumröhrchen aus Glas) + 5,2 pg/ml

(Heparinisierte Röhrchen aus Kunststoff) = 0,92(Serumröhrchen aus Glas) + 8,3 pg/ml

(SST-Röhrchen aus Kunststoff) = 0,71(Serumröhrchen aus Glas) + 9,1 pg/ml

(Serumröhrchen aus Kunststoff) = 0,76(Serumröhrchen aus Glas) + 7,1 pg/ml

Mittelwerte:186 pg/ml (Serumröhrchen aus Glas)188 pg/ml (EDTA-Röhrchen aus Kunststoff)180 pg/ml (Heparinisierte Röhrchen aus Kunststoff)142 pg/ml (SST-Röhrchen aus Kunststoff)148 pg/ml (Serumröhrchen aus Kunststoff)

Methodenvergleich 1: Der Assay wurdeanhand von 109 Patientenproben miteinem kommerziell erhältlichen IL-6 Assayverglichen. (Konzentrationsbereich: ca.

3 – 300 pg/ml. Siehe Grafik 1.)Berechnung der linearen Regression:(IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/mlr = 0,975

Mittelwerte:100 pg/ml (IMMULITE 2000)124 pg/ml (Kit A)

Methodenvergleich 2: Der Assay wurdeanhand von 150 Patientenproben mit demIMMULITE IL-6 Assay von DPCverglichen. (Konzentrationsbereich: ca.3 – 870 pg/ml. Siehe Grafik 2.)Berechnung der linearen Regression:(IML 2000) = 1,08 (IML) – 3,8 pg/mlr = 0,994

Mittelwerte:215 pg/ml (IMMULITE 2000)203 pg/ml (IMMULITE)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

IMMULITE 2000 IL-6Utilidad del análisis: Para su uso en eldiagnóstico in vitro con los analizadoresIMMULITE 2000 — para la medicióncuantitativa de interleucina 6 (IL-6) ensuero, en plasma EDTA o en plasmaheparinizado, como ayuda en el estudiode enfermedades inflamatorias.Referencia: L2K6P2 (200 tests)Código del Test: I6Código de Color: Verde oscuro

Resumen y Explicación delTestLa interleuquina-6 (IL-6) es un mediadordel sistema inmunitario, que interviene enuna gran variedad de acciones biológicas.También es conocida como factor deestimulación de las células B (BCSF),factor 2 de estimulación de las células B(BSF-2), factor de crecimiento dehibridoma (HGF), factor de estimulaciónde hepatocitos (HSF), factor dediferenciación citolítico para los linfocitosT (CDF) y muchos otros.


El ADNc de la IL-6 codifica un polipéptidoque consta de 212 aminoácidos. Estaproteína está unida a una proteínamadura de 184 aminoácidos. Debido a losdistintos grados de glicosilación (en lasposiciones 73 y 172, respectivamente) yde fosforilación, IL-6 tiene un pesomolecular que oscila entre 21,5 y 28 kDa.

Hay muchas células distintas que puedenrealizar la síntesis de IL-6, como es elcaso de los monocitos/ macrófagos,fibroblastos, células endoteliales,queratinocitos, mastocitos, células T y envarias líneas tumorales. In vivo e in vitro,IL-6 funciona como un factor dediferenciación para las células B y comoun factor de activación para las células T.Ante la presencia de IL-2, se produce ladiferenciación de las células T en célulasT citotóxicas e induce la proliferación detimocitos. Después de la estimulación conIL-4, es necesario un estímulo de IL-6para que las células B se diferencien encélulas plasmáticas secretoras de Ig. IL-6es un potente factor de crecimiento dedistintos mielomas humanos y que estáactivo en concentraciones inferiores a10 pg/ml. IL-3 e IL-6 muestran efectossinérgicos in vitro en la diferenciación decélulas hematopoyéticas progenitoras.Pueden producirse niveles elevados deIL-6 en suero o plasma en distintasenfermedades, tales como sepsis,enfermedades autoinmunes, linfomas,SIDA, cirrosis hepática y en pacientes coninfecciones o rechazos a trasplantes.

Principio del análisisIMMULITE 2000 IL-6 es un ensayoinmunométrico enzimático secuencial enfase sólida por quimioluminiscencia.Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.

Recogida de la muestraSe recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.

Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.

Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El IMMULITE 2000 IL-6no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.Volumen requerido: 100 µl suero, enplasma EDTA o en plasma heparinizado.Conservación: 1 día a 2–8°C, o 6 mesesa –20°C.

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.

Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo a la legislación en vigor.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.

Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.

Sustrato quimioluminiscente: Evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Usar agua destilada o desionizada.


Materiales suministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de Bolas IL6 (L26P12)Con código de barras. 200 bolas,recubiertas con anticuerpo monoclonal deratón anti-IL6. Estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad.L2K6P2: 1 cartucho.

Vial de reactivo de IL-6 (L26PA2)Con códigos de barras. 18,5 ml de unamatriz proteica, en solución tampón y18,5 ml fosfatasa alcalina (de intestino deternera) conjugada con anticuerpopoliclonal de oveja anti-IL-6, en solucióntampón, con conservante. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad.L2K6P2: 1 vial.Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de IL-6 (L6PL, L6PH)Dos viales (bajo y alto) que contienen IL-6liofilizada en una matriz de proteína, ensolución tampón, con conservante.Reconstituya cada vial con 3,0 ml deagua destilada o desionizada. Mezcle poragitación o inversión suave hasta que sehaya disuelto completamente el materialliofilizado. Estable a 2–8°C durante 3 díasdespués de la reconstitución, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.L2K6P2: 1 juego.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separado

Multidiluyente 2 (L2M2Z L2M2Z4)Para la dilución de las muestras delpaciente que van a analizarse. Un vial dematriz protéica no humana concentrada(listo para el uso), con conservante.Estable a 2–8°C durante 30 días despuésde su apertura, o durante 6 meses

(alicuotado) a –20°C.L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml.

Se suministran códigos de barras con eldiluyente. Antes de usar, colocar laetiqueta a un tubo de 16 × 100 mm, demodo que el código de barras pueda serleído por el lector del equipo.L2M2Z: 3 etiquetas L2M2Z4: 5 etiquetasL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)L2ZT: 250 Tubos De Prueba DelDiluyente De la Muestra (16 × 100 mm)L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo DelDiluyente De la MuestraLILCM: módulo control de citoquinas conIL-6 de dos niveles en una matriz de suerohumano.También necesariosAgua destilada o desionizada; tubos deensayo; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2000.Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, dilución, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de Calidad: Utilizarcontroles o pooles de sueros con almenos dos niveles diferentes de IL-6 (bajoy alto).

Valores esperadosSe realizó un estudio de rangos dereferencia para el ensayo IL-6 IMMULITE2000 con sueros procedentes de 60voluntarios sanos recogidos en tubos decristal sin anticoagulante. El rango noparamétrico inferior al 95% fue desdeindetectable hasta 3,4 pg/ml. El rangoabsoluto fue desde indetectable hasta5,9 pg/ml.

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada laboratorio deberáestablecer sus propios intervalos dereferencia.


LimitaciónLos anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo, consulte las tablasy los gráficos. Los resultados se expresanen pg/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación.)

Intervalo de calibración:Hasta 1 000 pg/mlNIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL):IU/mL = 0,1 × pg/ml,Sensibilidad analítica: 2 pg/mlEfecto de gancho a altas dosis:Ninguno hasta 60 000 pg/ml.

Precisión: Las muestras fueronprocesadas en duplicado durante variosdias, para un total de 40 tandas y 80replicados. (Ver la tabla "Precisión").

Linealidad: Las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Ver latabla "Linealidad" para resultadosrepresentativos.)

Recuperación: Se han analizado lasmuestras cargadas 1 a 19 con tressoluciones (1 000, 4 000, y 8 000 pg/ml)de IL-6. (Ver la tabla "Recuperación" pararesultados representativos).

Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para IL-6. (Ver la tabla"Especificidad".)Bilirrubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y libre en concentracioneshasta 200 mg/l no tiene efecto en elensayo, en lo concerniente a la precisióndel ensayo.Hemólisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 550 mg/dl,notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Lipemia: La presencia de triglicéridos enconcentraciones hasta 3 000 mg/dl notiene efecto alguno en los resultados, enlo correspondiente a la precisión delensayo.Tipo de Muestra Alternativa: Paraevaluar el efecto de los distintos tipos demuestras alternativos, se recogió sangrede 12 voluntarios en tubos de plástico yde vidrio para suero, en tubos de plásticoheparinizados y con EDTA y en tubos conuna barrera de gel (SST®). Todos lostubos fueron de Becton Dickinson.Volúmenes iguales de las distintasmuestras fueron sobrecargados convarias concentraciones de IL-6 para cubrirtodo el rango de calibración del ensayo, yprocesados por el procedimientoIMMULITE 2000 IL-6.(EDTA en plástico) = 0,98 (Suero en vidrio) +5,2 pg/ml

(Heparina en plástico) = 0,92 (Suero en vidrio) +8,3 pg/ml

(SST en plástico) = 0,71 (Suero en vidrio) +9,1 pg/ml

(Suero en plástico) = 0,76 (Suero en vidrio) +7,1 pg/ml

Medias:186 pg/ml (Suero en vidrio)188 pg/ml (EDTA en plástico)180 pg/ml (Heparina en plástico)142 pg/ml (SST en plástico)148 pg/ml (Suero en plástico)

Método Comparativo 1: El ensayo fuecomparado con un kit comercialmentedisponible de IL-6 (Kit A) con 109muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente de 3 a300 pg/ml. Ver el gráfico 1.) Por regresiónlineal:(IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/mlr = 0,975


Medias:100 pg/ml (IMMULITE 2000)124 pg/ml (Kit A)

Método Comparativo 2: El ensayotambién fue comparado con IL-6IMMULITE de DPC conhe assay was also150 muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente de 3 a870 pg/ml. Ver el gráfico 2.) Por regresiónlineal:(IML 2000) = 1,08 (IML) – 3,8 pg/mlr = 0,994

Medias:215 pg/ml (IMMULITE 2000)203 pg/ml (IMMULITE)

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.Fabricado por EURO/DPC Ltd. bajo un Sistemade Calidad acorde con la ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 IL-6Domaine d'utilisation : Dosagequantitatif de l'interleukine-6 (IL6) dans lesérum, le plasma hépariné ou EDTA.Réservé à un usage diagnostic in vitroavec les analyseurs IMMULITE 2000, cetest constitue une aide pour l'étude desmaladies inflammatoires.Référence catalogue : L2K6P2 (200 tests)Code produit : I6Code couleur : vert fonce

IntroductionL'interleukine-6 (IL-6) est un médiateur dusystème immunitaire ayant une grandevariété d'activités biologiques. Elle estégalement connue sous les noms defacteur stimulant les cellules B (BCSF) ;facteur-2 stimulant les cellules B (BSF-2) ;facteur de croissance des hybridomes(HGF) ; facteur stimulant les hépatocytes(HSF) ; facteur de différenciation deslymphocytes T (CDF) et bien d'autresencore.

L'ADNc de l'IL-6 encode un polypeptide de212 acides aminés. Ce précurseur estclivé en une protéine mature de 184acides aminés. En raison de degrés

différents de glycosylation — aux positions73 et 172 — et de phosphorylation, lamasse moléculaire de l'IL-6 varie de 21,5à 28 kDa.De nombreuses cellules différentes sontcapables de synthétiser l'IL-6, comme lesmonocytes, les fibroblastes, les cellulesendothéliales, les kératinocytes, lesmastocytes, les lymphocytes T et denombreuses lignées cellulaires tumorales.In vivo et in vitro, l'IL-6 agit comme facteurde différenciation pour les lymphocytes Bet comme facteur d'activation pour leslymphocytes T. En présence d'IL-2, elleassure la différenciation des lymphocytesT en lymphocytes T cytotoxiques et induitla prolifération des thymocytes. Après unestimulation par l'IL-4, un stimulus de l'IL-6est nécessaire pour que les lymphocytesB se différencient en plasmocytessécréteurs d'immunoglobulines. L'IL-6 estun puissant facteur de croissance pourdifférents myélomes humains, actif à desconcentrations inférieures à 10 pg/ml. L'IL-3 et l'IL-6 ont des effets synergiques invitro dans la différenciation des cellulesprogénitrices hématopoïétiques.Des taux sériques ou plasmatiques élevésd'IL-6 peuvent être observés au cours dedifférentes pathologies, comme lasepticémie, les maladies auto-immunes,les lymphomes, le SIDA, la cirrhose dufoie et en cas d'infection ou de rejet degreffe.

Principe du testL'IMMULITE 2000 IL-6 est un testimmunométrique séquentielchimiluminescent par amplificationenzymatique, en phase solide.Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsIl est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.

Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronés


dûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. IL-6 IMMULITE 2000 n'a pas été testé surtous les types de tubes possibles. Veuillezconsulter le chapitre intitulé Autres Typesd'Échantillons pour plus derenseignements sur les tubes qui ont ététestés.

Volume nécessaire : 100 µl de sérum oude plasma hépariné ou EDTA.Conservation : 1 jour à +2°C/+8°C ou6 mois à –20°C.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : Conserver les réactifs à +2°/+8 °C. Éliminer les déchets conformémentaux lois en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.

Substrat chimiluminescent : Éviter lescontaminations et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes IL-6 (L26P12)Avec code-barre. 200 billes revêtuesd'anticorps monoclonal murin anti-IL-6.Stable à +2/ +8 °C jusqu'à la date depéremption.L2K6P2: 1 cartouche.

Cartouche à réactif IL-6 (L26PA2)Avec code-barres. 18,5 ml de matricetampon/ protéine et 18,5 ml d'anticorpspolyclonal de mouton anti-IL-6 marqué àla phosphatase alcaline (intestins deveau) dans un tampon, avecconservateur. Stable à +2/ +8 °C jusqu'àla date de péremption.L2K6P2: 1 cartouche.Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs IL-6 (L6PL, L6PH)2 flacons d'ajusteurs (« bas » et « haut »)contenant de l'IL-6 lyophilisée dans unematrice tampon/ protéines, avecconservateur. Reconstituer chaque flaconavec 3,0 ml d'eau distillée ou désionisée.Mélanger doucement jusqu'à complètedissolution de la substance lyophilisée.Stable à +2°C/+8°C pendant 3 jours aprèsreconstitution ou 6 mois (aliquoté)à –20 C.L2K6P2: 1 jeu.Avant de procéder à un ajustement, placerles étiquettes correspondant à l'aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes enverre de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournisséparément

Multi-diluant 2 (L2M2Z, L2M2Z4)Pour la dilution par l'appareil deséchantillons cliniques. Un flacon dematrice protéine non humaine/tampon,


concentrée (prête à l'emploi), avecconservateur. Stable à +2–8°C pendant30 jours après ouverture, ou 6 mois(aliquoté) à –20°C.L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml.

Des étiquettes à code-barre sont fourniespour être utilisées avec le diluant. Avantutilisation, coller une étiquette appropriéesur le tube 16 × 100 mm de manière à ceque le code-barre soit lisible par le lecteurà bord de l'automate.L2M2Z: 3 étiquettes L2M2Z4: 5 étiquettesL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)L2ZT : 250 Tubes À essai De Diluantéchantillon (16 × 100 mm)L2ZC : 250 Bouchons pour tubes dediluantsLILCM: Contrôle multiparamétrique àdeux niveaux IMMULITE Cytokines, àbase de sérum humain, contenant del'IL-6.Egalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes;Contrôles.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation de l'IMMULITE 2000.Se reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2000 pour : la préparation, ledémarrage du système, le dilution, lesajustements, le dosage et les procéduresde contrôle de qualité.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle dequalité : utiliser des Contrôle ou des poolsde Echantillons avec au moins deuxniveaux de concentration (faible ou élevé)d' IL6.

Valeurs de référenceUne étude de valeurs de références pourl'Immulite 2000 IL-6 a été réalisée sur deséchantillons sériques prélevés de 60volontaires en bonne santé sur tubes secsen verre. Le domaine non-paramétrique

bas à 95 % allait de non détectable à3,4 pg/mL. Le domaine absolu allait denon détectable à 5,9 pg/ml.Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesLes anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont donnés en pg/ml. (En l'absenced'indication contraire, tous les résultats ontété obtenus sur des échantillons sériquesrecueillis en tubes, sans gel ni activateurde la coagulation.)

Domaine de mesure :jusqu'à 1 000 pg/mlNIBSC 1st IS 89/548 (UI/ml):UI/ml = 0,1 × pg/ml,Sensibilité analytique : 2 pg/ml

Accoutumance aux doses élevées :aucune jusqu'à 60 000 pg/ml.Précision : les échantillons ont été dosésen duplicata pendant plusieurs jours, soitun total de 40 séries et de 80 résultats.(Voir le tableau « Precision ».)Test de dilution : Des échantillons ontété dosés à différentes concentrations.


(Voir le tableau « Linearity » pour desdonnées représentatives.)

Test de récupération : des échantillonsdosés ont été chargés dans uneproportion de 1 à 19 avec trois solutions d'IL6 (1 000, 4 000, et 8 000 pg/ml). (Voir letableau « Recovery » pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : L'anticorps utilisé esthautement spécifique de IL-6. (Voir letableau « Specificity ».)Bilirubine : La présence de bilirubine,conjuguée ou non, n'a aucun effet sur ledosage ni sur sa précision si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.

Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 550 mg/dl.

Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.

Autres types d'échantillons: Pourestimer l'effet de l'utilisation de différentstypes d'échantillons, 12 volontaires ont étéprélevés sur tubes de verre et de plastiquesecs, sur tubes de plastique héparinés etEDTA et sur tubes de plastique à barrièregel SST®, tous fabriqués par BectonDickinson. Des volumes égaux de cesdifférents échantillons ont été mélangésavec plusieurs concentrations d'IL-6 pourobtenir des valeurs à l'intérieur dudomaine de mesure du test puis dosésavec le protocole l'IMMULITE 2000 IL-6.(Plastique EDTA) = 0,98 (Tube à sérum enverre) + 5,2 pg/ml

(Plastique hépariné) = 0,92 (Tube à sérum enverre) + 8,3 pg/ml

(Plastique SST) = 0,71 (Tube à sérum en verre)+ 9,1 pg/ml

(Tube à sérum en plastique) = 0,76 (Tube àsérum en verre) + 7,1 pg/ml

Moyennes :186 pg/ml (Tube à sérum en verre)188 pg/ml (Plastique EDTA)180 pg/ml (Plastique hépariné)142 pg/ml (Plastique SST)148 pg/ml (Tube à sérum en plastique)

Comparaison de Méthode 1: Ce dosagea été comparé à un autre test disponiblesur le marché pour l'IL-6 (Kit A) sur 109échantillons de patients. (intervalle de

concentrations : environ de 3 à 300 pg/ml.Voir graphique 1.) Par régression linéaire :(IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/mlr = 0,975

Moyennes :100 pg/ml (IMMULITE 2000)124 pg/ml (Kit A)

Comparaison de Méthode 2: Le test aété également comparé au dosageIMMULITE IL-6 de DPC sur 150échantillons de patients. (intervalle deconcentrations : environ de 3 à 870 pg/ml.Voir graphique 2.) Par régression linéaire :(IML 2000) = 1,08 (IML) – 3,8 pg/mlr = 0,994

Moyennes :215 pg/ml (IMMULITE 2000)203 pg/ml (IMMULITE)

Assistance techniqueContacter votre distributeur national. EnFrance distribué par DPC France 90 bdNational 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadre d'unSystème Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 IL-6Uso: Ad uso diagnostico in vitro con gliAnalizzatori IMMULITE 2000 — per lamisurazione quantitativa dell'Interleuchina6 (IL-6) nel siero o nel plasma EDTA oeparinizzato, quale ausilio nello studiodelle infiammazioni.Codice: L2K6P2 (200 test)Codice del Test: I6 Colore: verde scuro

Riassunto e Spiegazione delTestL'Interleuchina-6 (IL-6) è un mediatore delsistema immunitario, che presentainnumerevoli azioni biologiche. E'conosciuta anche come fattore stimolantedelle cellule B (BCSF), fattore stimolante2 delle cellule B (BSF-2), fattore dicrescita dell'ibridoma (HGF), fattorestimolante degli epatociti (HSF), fattore didifferenziazione citolitica per i linfociti T(CDF) ed in molti altri modi.


L'IL-6 cDNA è un codice per unpolipeptide composto da 212 aminoacidi.Questa proteina è spaccata da unaproteina matura di 184 aminoacidi. Acausa di diversi gradi di glicosilazione —nelle posizioni 73 e 172, rispettivamente –e nella fosforilazione, l'IL-6 ha un pesomolecolare tra i 21,5 ed i 28 kDa.

Molte cellule diverse sono in grado disintetizzare l'IL-6, inclusi imonociti/macrofagi, i fibroblasti, le celluleepiteliali, i cheratinociti, le cellule disupporto, le cellule T, e molte celluletumorali. In vivo ed in vitro, l'IL-6 agiscecome fattore di differenziazione per lecellule B e fattore di attivazione per lecellule T. In presenza dell'IL-2, favorisce ladifferenziazione dalle cellule T alle celluleT citotossiche ed induce la proliferazionedei timociti. Dopo stimolo con IL-4, ènecessario uno stimolo con IL-6 perchè lecellule B possano differenziarsi in celluleplasmatiche che secernono Ig. L'IL-6 è unpotente fattore di crescita di diversimielomi umani ed è attiva inconcentrazioni inferiori a 10 pg/mL. L'IL-3e l'IL-6 presentano effetti sinergici in vitronella differenziazione delle celluleprogenitrici ematopoietiche.Livelli elevati di IL-6 nel siero o nel plasmapossono presentarsi in diverse malattie,inclusa la sepsi, le malattie autoimmuni, illinfoma, l'AIDS, la cirrosi epatica ed inpazienti con infezioni o nel fenomeno dirigetto a seguito di trapianto.

Principio del DosaggioL'IMMULITE 2000 IL-6 é un dosaggiochemiluninescente sequenzialeimmunometrico in fase solida marcato conenzima.Cicli d'incubazione: 2 × 30 minuti.

Prelievo dei CampioniSi consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

I campioni emolizzati possono indicare untrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,

assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.IMMULITE 2000 IL-6 non é stato verificatocon tutte le possibili variazioni di tipi diprovette. Consultare la sezioneriguardante i Campioni Alternativi perdettagli sulle provette che sono stateesaminate.Volume richiesto: 100 µL di siero o diplasma EDTA o eparinizzato.

Conservazione: 1 giorno a 2–8°C o6 mesi a –20°C.

Avvertenze e precauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminaresecondo le normative di legge vigenti.Seguire le precauzioni universali, emanipolare tutti i componenti come sepotessero trasmettere agenti infettivi.Sono stati dosati i materiali di origineumana e sono stati trovati non reattivi perla Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.

E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica).Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali fornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.


Contenitore di Sferette IL-6 (L26P12)Con codice a barre. 200 sferette, coattatecon un anticorpo monoclonale murino anti-IL-6. Stabile a 2–8°C fino alla data discadenza.L2K6P2: 1 Confezione.

Porta Reagente IL-6 (L26PA2)Con codice a barre. 18,5 mL di unamatrice/tampone proteico e 18,5 mL difosfatasi alcalina (intestino di vitello)coniugata con un anticorpo policlonale dipecora anti-IL-6 in un tampone, conconservanti. Stabile a 2–8°C fino alla datadi scadenza.L2K6P2: 1 porta reagente.Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori IL-6 (L6PL, L6PH)Due flaconi (Basso ed Alto), ciascuno conIL-6 liofila in una matrice/tamponeproteica, con conservanti. Ricostituire ogniflacone con 3,0 mL di acqua distillata odeionizzata. Mescolare agitandodelicatamente o invertendo la miscelafinché il materiale liofilo siacompletamente dissolto. Stabile a 2–8°Cper 3 giorni dopo la ricostituzione, o per6 mesi (aliquotato) a –20°C.L2K6P2: 1 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste (fornite col kit) sulle provette dellealiquote cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Componenti del kit fornitiseparatamente

Multidiluente 2 (L2M2Z, L2M2Z4)Per la diluizione interna dei campioni deipazienti. Un flacone di unamatrice/tampone proteica non umana conconservanti (pronta all'uso). Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6mesi (aliquotato) a –20°C.L2M2Z: 25 mL. L2M2Z4: 55 mL.Vengono fornite le etichette provviste dicodice a barre da utilizzarsi con il diluente.Prima dell'utilizzo, collocare un'etichetta

da 16 x 100 mm sulla provetta in modoche il codice a barre possa essere lettodal lettore interno.L2M2Z: 3 etichette L2M2Z4: 5 etichette.L2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di Lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)L2ZT: 250 Provette (16 × 100 mm) perDiluente del CampioneL2ZC: 250 Tappini per Provette perDiluente del CampioneLILCM: Un controllo Citochina IMMULITEa due livelli di siero umano contenenteIL-6.Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; Provette;controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per prestazioni ottimali, èimportante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinite nel Manuale dell'OperatoreIMMULITE 2000.Vedi Manuale dell'Operatore IMMULITE2000 per: preparazione, messa a punto,diluizione, calibrazione, dosaggio eprocedure di controllo di qualità.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.Campioni per il controllo di qualità:Usare controlli o campioni con almeno duelivelli (basso ed alto) di IL-6.

Valori AttesiE' stato effettuato uno studio sul range diriferimento per l'IMMULITE 2000 IL-6 sucampioni di siero fornita da 60 volontari dilaboratorio in buona salute prelevati inprovette di vetro semplici per il siero. Ilrange inferiore non parametrico al 95%era da non rilevabile a a 3,4 pg/mL. Ilrange assoluto era da non rilevabile a5,9 pg/mL.Considerare questi limiti soltanto comelinee guida. Ogni laboratorio dovrebbestabilire i propri range di riferimento.

LimitiGli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nelle


componenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenuticon questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedi tabelle e grafici per datirappresentativi delle prestazioni deldosaggio. I risultati sono espressi inpg/mL. (Se non diversamente annotato,tutti i risultati sono stati generati dacampioni di siero prelevati in provettesenza barriere di gel o additivi chefavoriscano la coagulazione.)Range di calibrazione:Fino a 1 000 pg/mLNIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL):IU/mL = 0,1 × pg/mL,Sensibilità Analitica: 2 pg/mLEffetto Gancio a Dosi Elevate: Nessuneffetto fino a 60 000 pg/mL.

Precisione: I campioni sono statiripetutamente dosati in doppio nel corso dipiù giorni, per un totale di 40 sedute ed 80replicati. (Vedi tabella “Precision”)

Linearità: I campioni sono stati dosati avarie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” perdati rappresentativi.)Recupero: Sono stati dosati campioni 1:19 con tre soluzioni di IL-6 (1 000, 4 000,e 8 000 pg/mL). (Vedi tabella “Recovery”per dati rappresentativi).Specificità: L'anticorpo è molto specificoper l'IL-6. (Vedi tabella "Specificity".)

Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto entro il range di precisionedel dosaggio.

Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 550 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Tipo di Campione Alternativo: Pervalutare l'effetto di campioni alternativi, éstato prelevato del sangue proveniente da12 volontari in provette per siero di vetrosemplice, di plastica, di plasticaeparinizzata, EDTA e di plastica a barrieredi gel (SST®). Tutte le provette eranoBecton Dickinson. Ad eguali volumi dicampioni misti sono state aggiunte varieconcentrazioni di IL-6 per ottenere valorilungo l'intero range di calibrazione deldosaggio e quindi dosati con il kitIMMULITE 2000 IL-6.(Plastica EDTA) = 0,98 (Vetro per Siero) +5,2 pg/mL

(Plastica Eparina) = 0,92 (Vetro per Siero) +8,3 pg/mL

(Plastica SST) = 0,71 (Vetro per Siero) +9,1 pg/mL

(Plastica per Siero) = 0,76 (Vetro per Siero) +7,1 pg/mL

Valore medio:186 pg/mL (Vetro per Siero)188 pg/mL (Plastica EDTA)180 pg/mL (Plastica Eparina)142 pg/mL (Plastica SST)148 pg/mL (Plastica per Siero)

Comparazione di Metodi 1: Il dosaggio èstato comparato ad un dosaggiodisponibile in commercio per l'IL-6 (Kit A)su 109 campioni. (Range diconcentrazione: circa da 3 a 300 pg/mL.Vedi grafico 1.) Mediante regressionelineare:(IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/mLr = 0,975

Valore medio:100 pg/mL (IMMULITE 2000)124 pg/mL (Kit A)

Comparazione di Metodi 2: Il dosaggio èstato comparato anche al dosaggio DPCIMMULITE IL-6 su 150 campioni. (Rangedi concentrazione: circa da 3 a 870 pg/mL.Vedi grafico 2.) Mediante regressionelineare:(IML 2000) = 1,08 (IML) – 3,8 pg/mLr = 0,994


Valore medio:215 pg/mL (IMMULITE 2000)203 pg/mL (IMMULITE)

Assistenza TecnicaAll'Estero: contattare il proprio distributorenazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell'ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 IL-6Utilização: Para utilização no diagnósticoin vitro com o Analisador IMMULITE 2000– para o doseamento quantitativo dainterleuquina 6 (IL-6) no soro, plasma comEDTA ou heparinizado, como auxiliar noestudo de doenças inflamatórias.

Números de catálogo:L2K6P2 (200 testes)Código do teste: I6 Cor: Verde escuro

Sumário e explicação do testeA interleuquina-6 (IL-6) é um mediador dosistema imunológico, com uma amplavariedade de acções biológicas. Étambém conhecida como factorestimulante da célula B (BCSF), factor 2de estimulação da célula B (BSF-2), factorde crescimento de hibridoma (HGF),factor estimulante de hepatócitos (HSF),factor de diferenciação citolítico, paralinfócitos T (CDF) e muitos outros.A IL-6 cDNA é uma codificação para umpolipeptídeo composto por 212aminoácidos. Esta proteína é clivada atétornar-se numa proteína amadurecida de184 aminoácidos. Devido a diferentesgraus de glicosilação – nas posições 73 e172, respectivamente – e fosforilação, aIL6 tem um peso molecular que variaentre 21,5 e 28 KDA.Muitas células diferentes têm capacidadepara sintetizar a IL-6 incluindomonócitos/macrófagos, fibroblastos,células endoteliais, queratinócitos,mastócitos, células T e muitas linhas decélulas tumorais. In vitro e in vivo, a IL-6actua como um factor de diferenciaçãopara células B e um factor de activaçãopara células T. Na presença da IL-2,

desencadeia a diferenciação de células Tpara células T citotóxicas e induz aproliferação de timócitos. Apósestimulação com IL-4, é necessário umestímulo de IL-6 para que as células B sediferenciem, transformando-se em célulasplasmáticas secretoras de lg. A IL-6 é umpotente factor de crescimento dediferentes mielomas humanos e é activaem concentrações inferiores a 10 pg/mL.A IL-3 e a IL-6 mostram efeitossinergísticos in vitrona diferenciação decélulas progenitoras hematopoiéticas.Níveis elevados de IL-6 no plasma ou nosoro podem ocorrer em diferentesdoenças incluindo sepsia, doençasautoimunes, linfomas, SIDA, doençahepática alcoólica e em pacientes cominfecções, ou rejeição a transplantes.

Princípio do ProcedimentoO IMMULITE 2000 IL-6 é um ensaioimunométrico sequencialquimioluminescente de fase sólida,marcado com enzimas.Ciclos de incubação: 2 × 30 minutos.

ColheitaRecomenda-se a utilização de uma ultracentrífuga para clarificar as amostraslipémicas.As amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de um espécimenantes da sua recepção pelo laboratório;assim, os resultados devem serinterpretados de forma cautelosa.

A centrifugação de amostras de soroantes de completada a formação de umcoágulo pode resultar na presença defibrina. A fim de prevenir resultadoserrados devido à presença de fibrina,certifique-se de que o coágulo ficoucompletamente formado antes dacentrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentessujeitos a terapia anticoagulante, podemnecessitar de mais tempo para aformação do coágulo.Os tubos de colheita de sangue dediferentes fabricantes podem produzirvalores diferentes, dependendo dosmateriais e aditivos dos tubos, incluindobarreiras de gel ou físicas, activadores decoagulação e/ou anticoagulantes. OIMMULITE 2000 IL-6 não foi ensaiado


com todas as variantes possíveis de tiposde tubos. Consultar a secção sobre TiposAlternativos de Amostras para maisinformações sobre os tubos que têm sidoensaiados.

Volume de Amostra: 100 µL de soro,plasma heparinizado ou com EDTA.Armazenamento: 1 dia a 2–8°C, ou6 meses a –20°C.

PrecauçõesPara uso de diagnósticoin vitro.Reagentes: Armazenar a 2–8°C. Eliminarde acordo com a legislação aplicável.Observar todas as precauções emanipular todos os componentes comopotenciais transmissores de agentesinfecciosos. As matérias primas obtidas apartir de soro humano foram testadas,revelando-se como não reactivas à sífilis,aos anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV 1 e 2); aoantigénio de superfície da hepatite B eaos anticorpos da hepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitarcontaminação e exposição à luz directado sol (ver literatura inclusa).Água: Utilizar água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjuntoindivisível. As etiquetas no interior dacaixa são necessárias para o ensaio.

Embalagem de pérolas de IL-6 (L26P12)Com código de barras. 200 esferas,revestidas com anti-IL-6 murinomonoclonal. Estável até a data devalidade a 2–8°C.L2K6P2: 1 embalagem.

Embalagem de reagente de IL-6(L26PA2)Com código de barras. Contém 18,5 mLde uma matriz proteica tamponada e18,5 mL de fosfatase alcalina (intestino de

bezerro) conjugada com anti-IL-6policlonal de carneiro em tampão, comconservante. Estável até a data devalidade a 2–8°C.L2K6P2: 1 embalagem.

Antes de utilizar, destacar a parte de cimada etiqueta pelo ponteado, sem danificaro código de barras. Remover o selo dealumínio da parte de cima da embalageme encaixar a tampa deslizante nasranhuras da tampa dos reagentes.

Ajustes IL-6 (L6PL, L6PH)Contém dois frascos (Alto e Baixo) de IL-6liofilizada numa matriz proteicatamponada, com conservante.Reconstituir cada frasco com 3,0 mL deágua destilada ou desionizada. Misturarcom movimentos lentos ou por inversãosuave até o material liofilizado estarcompletamente dissolvido. Estável a 2–8°C, durante 3 dias após a reconstituiçãoou durante 6 meses (aliquotado) a –20°C.L2K6P2: 1 conjunto.

Antes de realizar qualquer rectificação,colocar as etiquetas da alíquotaapropriadas (fornecidas com o kit) nostubos de ensaio de forma a que oscódigos de barras possam ser lidos pelodispositivo de leitura incorporado.

Componentes do kit fornecidosseparadamente

Multidiluente 2 (L2M2Z, L2M2Z4)Para a diluição de amostras de pacienteno aparelho. Um frasco de uma matrizproteica tamponizada não humanaconcentrada (pronta a usar), comconservante. Estável a 2–8°C durante 30dias depois de aberto ou durante 6 meses(aliquotado) a –20°C.L2M2Z: 25 mL. L2M2Z4: 55 mL.São fornecidas etiquetas de códigos debarras para utilização com o diluente.Antes de usar, colocar uma etiquetaapropriada num tubo de ensaio de 16 x100 mm, de forma a que o código debarras possa ser lido pelo dispositivoincorporado.L2M2Z: 3 etiquetas L2M2Z4: 5 etiquetas

L2SUBM: Substrato quimioluminescenteL2PWSM: Lavagem de sondaL2KPM: Kit de limpeza da sondaLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)L2ZT: 250 Tubos de ensaio de diluente


da amostra (16 × 100 mm)L2ZC: 250 Tampas para tubos de diluenteda amostraLILCM: Um Módulo de Controlo deCitoquina IMMULITE de dois níveisbaseada em soro humano contendo IL-6.

Também necessárioÁgua destilada ou desionizada; tubos deensaio; controlos.

Procedimento de doseamentoDe notar que para um óptimodesempenho, é importante realizar todosos procedimentos de manutenção derotina definidos no Manual de Operadordo IMMULITE 2000.Consultar o Manual de Operador doIMMULITE 2000 para os procedimentosde preparação, instalação, diluições,rectificação, ensaio e controlo dequalidade.

Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.Amostras de controlo de qualidade:Utilizar controlos ou pools de amostrascom pelo menos dois níveis (alto e baixo)de IL-6.

Valores EsperadosFoi realizado um estudo de gama dereferência do IMMULITE 2000 IL-6 emamostras de soro colhidas de 60voluntários saudáveis para tubos de soroem vidro liso. O intervalo inferior nãoparamétrico dos 95% registou-se entrenão detectável e 3,4 pg/mL. O intervaloabsoluto registou-se entre não detectávele 5,9 pg/mL.

Estes valores limite devem serconsiderados apenas como directrizes.Cada laboratório deve estabelecer osseus próprios valores de referência.

LimitaçõesOs anticorpos heterofílicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes noscomponentes do ensaio, causandointerferência com os imunoensaiosin vitro.[Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Amostras de doentes expostas porrotina a produtos animais ou de soro

animal podem demonstrar este tipo deinterferência, causando potencialmenteum resultado anómalo. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do ensaio. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre utilizados emcombinação com o exame clínico, históriamédica do paciente e outros resultados.

Características do EnsaioConsultar as Tabelas e Gráficos paradados representativos do desempenho doensaio. Os resultados são apresentadosem pg/mL. (Salvo referência em contrário,todos os valores foram obtidos a partir deamostras de soro colhidas em tubos sembarreiras de gel nem aditivos promotoresda coagulação.)

Gama de Calibração: Até 1 000 pg/mLNIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL):IU/mL = 0,1 × pg/mLSensibilidade Analítica: 2 pg/mLEfeito Hook de Alta Dose: Nenhum até60 000 pg/mL.

Precisão: As amostras foramrepetidamente submetidas a ensaio emduplicado ao longo de vários dias, numtotal de 40 séries e 80 réplicas. (Consultara tabela “Precisão”.)Linearidade: As amostras foramsubmetidas a ensaio sob várias diluições.(Ver tabela "Recuperação" para dadosrepresentativos.)Recuperação: Foram submetidas aensaio amostras adicionadas naproporção de 1 para 19 com três soluçõesde IL- 6 (1 000, 4 000, e 8 000 pg/mL).(Ver tabela "Recuperação" para dadosrepresentativos.)Especificidade: O anticorpo é altamenteespecífico para IL-6. (Ver tabela de"Especificidade".)Bilirrubina: A presença de bilirrubinaconjugada e não conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temqualquer efeito nos resultados, dentro daprecisão do ensaio.Hemólise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 550 mg/dL não temqualquer efeito nos resultados, dentro daprecisão do ensaio.


Lipémia: A presença de triglicéridos emconcentrações até 3 000 mg/dL não temqualquer efeito nos resultados, dentro daprecisão do ensaio.Tipo de amostra alternativa: Paradeterminar o efeito de tipos alternativos deamostras, foi colhido sangue a 12voluntários para tubos de soro de vidro ede plástico lisos, tubos de plásticoheparinizados e com EDTA, e tubos deplástico (SST®) com barreira de gel.Todos os tubos eram da BectonDickinson. A volumes iguais das amostrascorrespondentes foram adicionadas váriasconcentrações de IL-6, para obter valoresao longo da gama de calibração doensaio, e sendo então as amostrassubmetidas a ensaio pelo processo doIMMULITE 2000 IL-6.(EDTA em plástico) = 0,98 (Soro em vidro) +5,2 pg/mL

(Heparina em plástico) = 0,92 (Soro em vidro) +8,3 pg/mL

(SST em plástico) = 0,71 (Soro em vidro) +9,1 pg/mL

(Soro em plástico) = 0,76 (Soro em vidro) +7,1 pg/mL

Médias:186 pg/mL (Soro em vidro)188 pg/mL (EDTA em plástico)180 pg/mL (Heparina em plástico)142 pg/mL (SST em plástico)148 pg/mL (Soro em plástico)

Comparação de Métodos 1: O ensaio foicomparado com um ensaio disponível nomercado para IL-6 (Kit A) em 109amostras de paciente. (Gama deconcentração: aproximadamente de 3 a300 pg/mL. Consultar o gráfico 1.) Porregressão linear:(IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/mLr = 0,975

Médias:100 pg/mL (IMMULITE 2000)124 pg/mL (Kit A)

Comparação de Métodos 2: O ensaio foitambém comparado com o IMMULITEIL-6 da DPC em 150 amostras depaciente. (Gama de concentração:aproximadamente de 3 a 870 pg/mL.Consultar o gráfico 2.) Por regressãolinear:(IML 2000) = 1,08 (IML) – 3,8 pg/mLr = 0,994

Médias:215 pg/mL (IMMULITE 2000)203 pg/mL (IMMULITE)

Assistência TécnicaPor favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.

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