Guía de Laboratorio Bioqumica 2012

5/25/2018 Gua de Laboratorio Bioqumica 2012

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GUA DE LABORATORIOBIOQUMICA

CARRERAS FACULTAD DE CIENCIAS DE

LA SALUD

Profesores:

Mauricio Mondaca

Julia Opazo


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Facultad de Ciencias de la Salud 2012

REGLAMENTO INTERNO LABORATORIOS.

1. La Asistencia a La!"at!"i! es de un 1##$.

%. El uso del delantal o cotona blanca es OBLIGATORIO& 'ste dee usa"sea!t!nad!& el pelo debe llevarse toado& NO se debe !n"er!r al!entos n!beb!das en el laborator!o. LOS TEL#$ONOS %EL&LARES SE 'EBEN A(AGAR.

(. Se e)i*e (&NT&ALI'A'.

+. L!s estudiantes ,ue lle*uen at"asad!s antes del t'"-in! del c!nt"!l& !d"/n in*"esa"0 "endi" el "esecti! c!nt"!l de la!"at!"i! 2s!l! se aceta"/n dos at"as!s en else-est"e3.

4. L!s estudiantes ,ue n! ten*an su delantal NO !d"/n in*"esa" al la!"at!"i!& l! cual

i-lica n! "endi" el c!nt"!l "esecti! siend! cali5icad! c!n n!ta 1)0 2un! c!-a ce"!3.

6. NO se aceta"/ "ecue"a" la!"at!"i!s.

7. El us! de la Gu8a de La!"at!"i! es OBLIGATORIO& l!s estudiantes ,ue n! ten*an su*u8a de la!"at!"i! se les cali5ica"/ c!n n!ta 1.0 2un! c!-a ce"!3.

*. E+AL&A%IONES,

9.1 En TO'OS l!s la!"at!"i!s se "eali:a"/ un c!nt"!l de ent"ada& ,ue c!-"ende"/-ate"ia DEL LABORATORIO A E$E%T&ARSE. Este c!nt"!l tend"/ una du"aci;n

-/)i-a de die: -inut!s.

9.% ? 1#$ > C!nt"!les de La!"at!"i!

? 1#$> In5!"-es @ Se-ina"i!s? 1#$ > E)a-en de La!"at!"i!

9.4 A LOS ALUMNOS QUE SEAN SOR


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$orato de Elaborac!-n de Inores.

?


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ulicaci;n. T8tul! de la ulicaci;n. Edit!"ial. Cuidad 0 a8s de ulicaci;n. Matisse& R.& Scneel& F. N. 0 Steine"& G. 1HH9. An/lisis de l!s ali-ent!s. Ed. Ac"iia.a"a*!:a& Esaa.> . 1 0 %%H@%(%.

Revistas u otra publicacin peridica:

A


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IN'I%E 'E A%TI+I'A'ES

ES(E%TRO$OTOMETRIA 6

TAM(ONES O B&$$ER 1

9I'RATOS 'E %ARBONO 16

LI(I'OS 20

TIT&LA%ION 'E AMINOA%I'OS 2

E:TRA%%I;N 'E 'NA 27

ENA 'E RE(ORTE 51

4


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(RA%TI%O N?1.

ES(E%TRO$OTOMETRIA

.! "#$RO%&''"(#Utili:and! t'"-in!s ,ui:/s e)cesia-ente si-listas uede de5ini"se la esect"!5!t!-et"8ade as!"ci;n& c!-! la -edida de la atenuaci;n ,ue el -ate"ial a estudia" 2-uest"a3e5ecta s!"e una "adiaci;n incidente s!"e el -is-! c!n un esect"! de5inid!. En*ene"al& las -edidas se "eali:an dent"! del esect"! c!-"endid! ent"e %%# 0 9## n-& 0este esect"!& a su e:& uede diidi"se en d!s a-lias :!nas> la :!na de la rad!ac!-nv!s!ble& situada !" enci-a de (9# n-& 0 la :!na de la rad!ac!-n ultrav!oleta situada !"dea! de est!s (9# n-. La "e*i;n del !nrarro@o se sita !" enci-a de l!s 9## n-.

La ene"*8a de una !nda elect"!-a*n'tica est/ dada !" la ecuaci;n> E ) d!nde esla c!nstante de


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Le)es de la absorcin de energa radianteSe "e5ie"en a las "elaci!nes e)istentes ent"e la cantidad de as!"ente 0 el *"ad! c!n el,ue es as!"ida la ene"*8a "adiante. En t'"-in!s *ene"ales& uede deci"se ,ue a0 d!sa"iales caaces de a5ecta" al *"ad! de as!"ci;n> la c!ncent"aci;n del as!"ente 0 lal!n*itud del t"a0ect! ,ue el "a0! lu-in!s! "ec!""e a t"a's de la s!luci;n.La Le3 de Labert D Beer estalece ,ue la as!"ci;n es "!!"ci!nal al n-e"! de-!l'culas de la sustancia as!"ente "esente en la s!luci;n !" d!nde asa el a:elect"!-a*n'tic!. La e)"esi;n -ate-/tica a"a esta le0 es>

A Y l c

D!nde Y es la Zas!"tiidad -!la"[ 2una -edida de la "adiaci;n as!"ida3& ,ue es unal!" c!nstante a"a cada sustancia a cada l!n*itud de !nda W. Cuand! la c!ncent"aci;n&

c& es e)"esada en -!les !" lit"! se den!-ina Zc!e5iciente de e)tinci;n -!la"[ 0 cuand!es e)"esada en *"a-!s !" lit"! Zc!e5iciente de e)tinci;n esec85ic![. El t'"-in! Zl["e"esenta el eses!" de la caa as!"ente 0 est/ en unidades de c-.Cuand! las -edidas se e5ectan utili:and! sie-"e la -is-a cueta 2! ien un *"u! decuetas estanda"i:adas ,ue !sean un as! de lu: c!nstante3 0 l!s e5ect!s ;tic!sdeid!s a la cueta s!n "e"!duciles& el t'"-in! Zl[ de la e)"esi;n de la as!"ancia seace c!nstante. Dad! ,ue Y& es ta-i'n c!nstante a"a un dete"-inad! as!"ente 0 unac!nc"eta l!n*itud de !nda& "esulta ent!nces ,ue la as!"ancia es di"ecta-ente"!!"ci!nal a la c!ncent"aci;n>

A c 2 Y l3

'aractersticas de un espectrofot*etroLa -edida de as!"ancia se llea a ca! c!n la a0uda de un esect"!5!t;-et"!>

7


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Est!s e,ui!s c!ntienen l!s si*uientes c!-!nentes /sic!s>


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"eacti!s3 ,ue as!"en ta-i'n a esa l!n*itud de !nda. Est!s c!-uest!s seden!-inan inte"5e"encias. Se dee desca"ta" la as!"ancia de las inte"5e"encias& a"aell! es necesa"i! ace" sie-"e una -uest"a ,ue c!nten*a t!d!s l!s c!-!nentes delsiste-a -en!s a,uel ,ue se desea -edi". Esta -uest"a se lla-a blanco 0 la as!"anciade 'ste dee "esta"se a las -uest"as "!le-a 0 a l!s at"!nes& ! ien& c!n el lanc! secali"a el inst"u-ent! a as!"ancia i*ual a #& ! sea 1##$ de t"ans-isi;n.

'urvas de calibracin.Una cu"a de cali"aci;n "elaci!na las A ; $T c!n las c!ncent"aci!nes 0 su e-le! esnecesa"i! en l!s t"aa!s cuantitati!s en l!s ,ue a0 ,ue calcula" la c!ncent"aci;n delas!"ente. Sie-"e ,ue sea !sile& es ac!nseale la c!nst"ucci;n de una cu"a decali"aci;n ,ue cu"a la :!na de c!ncent"aci!nes ,ue se an a enc!nt"a" en la "/ctica.La ela!"aci;n de la cu"a dee se" la 5ase "i-e"a al -!nta" 0 estanda"i:a" cual,uie""!cedi-ient! 5!t!-'t"ic!. Las c!ncent"aci!nes ueden e)"esa"se en cual,uie" ti! deunidades de -edida sin e-a"*!& la -edida -/s c!neniente es e-lea" a"a las cu"aslas -is-as unidades en las ,ue se dee e)"esa" el "esultad! 5inal.

Ee-l!> Cu"a de la\e-!*l!ina.

H


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Dad! ,ue la As!"ancia es "!!"ci!nal a la c!ncent"aci;n& tend"e-!s ,ue>A1 / A2 = C1/ C2

D!nde>A1 As!"ancia del "!le-a

A% As!"ancia de un est/nda" de c!ncent"aci;n c!n!cidaC1 C!ncent"aci;n del "!le-aC% C!ncent"aci;n del est/nda"%oncentrac!-n =problea/ F A1 =problea/ H A2 =estndar/J %oncentrac!-n estndar

+.! O,J-$"O/Una de las alicaci!nes "/cticas de -a0!" inte"'s de la esect"!5!t!-et"8a de as!"ci;nUJ@Jisile es la del an/lisis cuantitati!& asada en la alicaci;n de la ecuaci;n deLa-e"t@ Bee".

Mediante el si*uiente "/ctic! se usca"/>@ A"ende" a usa" c!""ecta-ente el esect"!5!t;-et"!

@ C!n!ce" 0 alica" l!s "incii!s /sic!s de la esect"!5!t!-et"8a

0.! P1R$- -2P-R"M-#$1L

&so del espectroot-etro

1.D (reparac!-n de soluc!ones de colorantes,

1.1.D (repare las s!"u!entes soluc!ones,a3 %4# -L de s!luci;n de E!sina A-a"illa al #+ $ 3 %4# -L de s!luci;n de Fuccina /cida al # $

c3 4## -L de s!luci;n de Je"de Mala,uita al # $

1.2.D A part!r de las soluc!ones anter!ores) real!ce d!luc!ones para preparar,a3 1## -L de s!luci;n de E!sina A-a"illa %# -3 1## -L de s!luci;n de Fuccina /cida 4 -c3 1## -L de s!luci;n de Je"de Mala,uita 4 -

2.D Real!ce el espectro de absorc!-n de su colorante,

1. Encendid! de l/-a"as>

1.1.@ L/-a"a de tun*sten! 2!na del isile& H## a (+# n-3& encendid!

instant/ne!1.%.@ L/-a"a de Deute"i! 2!na del UJ& (+# a %## n- a"!)3& encienda el e,ui!(# -in antes de usa"l!

%. O"i-a la tecla ATC a"a acci!na" el -!d! as!"ancia

(. Selecci!na" la l!n*itud de !nda c!n el -and! c!""es!ndiente.

+. Inse"te el lanc! en el !"taceldas 0 cie""e la ue"ta del c!-a"ti-ient! de -uest"as

1#


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4. O"i-a la tecla # ABS a"a llea" a ce"! as!"ancia

6. Sa,ue el lanc! e inse"te la -uest"a "!le-a en el !"taceldas& cie""e la ue"ta delc!-a"ti-ient!.

7. Lea la -edici;n de as!"ancia en la antalla.

Iportante, las cubetas epleadas en el espectroot-etro =1 c de espesor/deben estar escrupulosaente l!p!as 3 deben co"erse s!epre por sus caraseser!ladas u opacas. No es conven!ente secarlas con papel corr!ente por elcarcter abras!vo de 4ste s!no con un papel suave.

Act!v!dad,

Si*uiend! las inst"ucci!nes ante"i!"es s!"e la utili:aci;n del e,ui!>

1. Selecci!ne una l!n*itud de !nda de +## n-. en el -!d! as!"ancia.

%. Inse"te el lanc! 0 cali"e a ce"!(. Sa,ue el lanc!& c!l!,ue su -uest"a 0 dete"-ine el al!" de as!"ancia a +##

n-+. Selecci!ne una nuea l!n*itud de !nda en +%# n-4. Juela a cali"a" c!n el lanc!6. Lea as!"ancia de la -uest"a a +%# n-7. Reita el "!cedi-ient! asta l!s 7## n- a"a !tene" el esect"! isile de su

c!l!"ante.9. Re*ist"e sus al!"es en la si*uiente tala>

H. Realice el *"/5ic! de la as!"ancia en 5unci;n de la l!n*itud de !nda en ael-ili-et"ad!.

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0.! %eter*ine el coeficiente de e3tincin *olar:

1. Cuand! ten*a el esect"! dete"-ine la l!n*itud de !nda del -/)i-! deas!"ci;n 0 cali"e el e,ui! a dica l!n*itud de !nda 2W -/)3.

%.


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(RA%TI%O N?2.

TAM(ONES o B&$$ER

INTRO'&%%ION.

La "ea"aci;n de ta-!nes c!nstitu0e una ta"ea de "utina en un la!"at!"i! dei!,u8-ica. Su utili:aci;n n! s!l! es indisensale en la -aniulaci;n de cual,uie"en:i-a& sin! ,ue t!das a,uellas t'cnicas& anal8ticas ! "ea"atias& a"a la sea"aci;n de-!l'culas i!l;*icas caaces de i!ni:a"se& asadas "ecisa-ente en la di5e"encia deca"*a 2elect"!5!"esis& c"!-at!*"a58a de inte"ca-i! i;nic!3 de las distintas -!l'culasi-lican la utili:aci;n de ta-!nes adecuad!s ,ue e"-itan una i!ni:aci;n di5e"enciadade las -!l'culas 0& !" tant!& su sea"aci;n.Es i-"escindile& en c!nsecuencia& 5a-ilia"i:a"se c!n la "ea"aci;n 0 ca"acte"8sticas del!s ta-!nes. ]C;-! "ea"a" un ta-;n adecuad!& ]Cu/l es la :!na til de unta-;n& ]Cu/l es la caacidad de un ta-;n& 0& en de5initia ]C;-! dee "ea"a"se

un ta-;n S!n cuesti!nes ,ue dee-!s tene" as!luta-ente cla"as.En esta "/ctica "eali:a"e-!s una se"ie de e)e"i-ent!s ,ue ade-/s de "etende""es!le" las cuesti!nes sealadas "eia-ente n!s e"-itan isuali:a" el e5ect! deta-!naci;n. 2En cas! de necesidad c!niene "easa" l!s c!ncet!s te;"ic!s"elaci!nad!s> \& ^a& dis!ciaci;n de /cid!s 0 ases d'iles& etc.3.

(RE(ARA%ION 'E &N TAM(ON.

L!s ta-!nes s!n& c!-! sae-!s& -e:cla de /cid!s ! ases d'iles c!n sus sales& 0 su:!na de utilidad c!-! tales deende l;*ica-ente del al!" de su ^a. Este es ues un5act!" li-itante a la !"a de selecci!na" un ta-;n.


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Desea-!s "ea"a" 1##-l de un ta-;n AA\ de ^a 7.1 a \ 7.+ 0 una c!ncent"aci;n#.1 M.

\ ^a _ l!* PA PA\7.+ 7.1 _ l!* PA PA\

l!* PA PA\ #.( PA PA\ 1.HH4Teniend! en cuenta ,ue desea-!s "ea"a" 1## -l de este ta-;n c!n unac!ncent"aci;n #.1 M& ,uie"e est! deci" ,ue el n-e"! t!tal de -!les de A _ A\ a de se"de #.#1.Lue*!>

PA PA\ 2#.#1 ` )3 ) 1.HH4&dad! ,ue el !lu-en es c!-n a"a a-!s c!-!nentes.De d!nde>

) #.##(+ -!les A\#.#1 ` ) #.##66 -!les de A

!teniend! de a,u8 el nu-e"! de *"a-!s de /cid! 2A\3 0 de sal 2A 3 ,ue se "e,uie"ena"a la "ea"aci;n de l!s 1## -l de ta-;n.

En la "/ctica "esulta -/s c!neniente "ea"a" s!luci!nes #.1 M de cada un! de l!sc!-!nentes del ta-;n 0 calcula" la "elaci;n de !l-enes 2,ue c!incidi"/ c!n la"elaci;n -!la" calculada "eia-ente3

PA PA\ 1.HH4 c1 ) 1 c% ) % c1 c%1 % 1.HH4 0 c!-! 1 _ % 1## -l

21## ` %3 % 1.HH4

S!"e un! de l!s !l-enes calculad!s se adici!na"a *"adual-ente el del !t"!c!-!nente si*uiend! las a"iaci!nes de \ en el \@-et"! asta c!nse*ui" el \

desead!.

C!-! e-!s dic! ante"i!"-ente el \ de un ta-;n es deendiente de la "elaci;n ent"el!s c!-!nentes del -is-! e indeendiente de su c!ncent"aci;n 2dent"! de cie"t!sl8-ites3& e"! en cual,uie" cas! n! !cu""e as8 c!n su caacidad de a-!"ti*uaci;n ,uedeende de la c!ncent"aci;n.C!n el 5in de c!-"ende" est!s c!ncet!s 0 isuali:a" el e5ect! de a-!"ti*uaci;n del \se "eali:a"/ la si*uiente a"te e)e"i-ental.

(arte eKper!ental

A a"ti" de s!luci!nes #.1 M de


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El e)e"i-ent! t!tal se "eeti"/ c!n el ta-;n "eia-ente diluid! a la -itad.

Reali:a" c!n l!s dat!s !tenid!s en cada cas! las *"a5icas "esectias ,ue "elaci!nenal!"es de \ 2en !"denadas3 5"ente a -l de \Cl 0 NaO\ aadid!s 2en ascisas3.C!-'ntense l!s "esultad!s !tenid!s "esect! a>@ ^a del ta-;n

@ e5ect! ta-;n@ caacidad del ta-;n@ e5ect! de la diluci;n s!"e l!s ante"i!"es aa"tad!s.

Ee-l!s>

14


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(RA%TI%O N?.

9!dratos de %arbono

INTRO'&%%ION

L!s id"at!s de ca"!n! e"tenecen l!s c!-uest!s !li@5unci!nales ,ue c!ntienen *"u!ca"!nil! 2alde8d! ! cet;nic! 3 0 *"u!s id"!)il! alc!;lic!s.

a3 M!n!sac/"id!s> S!n *ene"al-ente s;lid!s ien c"istali:ad!s& s!lules en a*ua& desa!" -/s ! -en!s dulce. T!d!s !seen "!iedades "educt!"as& de"iadas de*"u!s ca"!nil!s. Alde8d! 2@C\O3& ! cet!sa si c!ntiene el *"u! cet!na 2VCO3

3 Disac/"id!s> F!"-ad!s !" d!s unidades de a:ca"es si-les siend! l! -/si-!"tante a,uellas de"iadas de las e)!sas l!s ,ue !" l!,ue! ! n! de las5unci!nes "educt!"as se clasi5ican en>1. @ Disac/"id!s "educt!"es e> Malt!sa& lact!sa.%. @ Disac/"id!s n! "educt!"es e> Saca"!sa.

c3


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ca"!id"at!s est/ c!ndici!nad! a la "esencia de un *"u! alde8d! li"e ! un *"u!cet;nic! ad0acente a un *"u! id"!)i-etil.En !lisac/"id!s d!nde l!s *"u!s alde8d!s ! cet;nic!s li"es se encuent"anc!-"!-etid!s 5!"-and! enlaces *lic!s8dic!s& dan al!"es ne*ati!s c!n el test "educt!".Est!s enlaces *lic!s8dic!s& s!n estales en -edi! alcalin! e"! se id"!li:an en "esenciade /cid!& lie"and! -!n!sac/"id!s ,ue dan "eacci;n "educt!"a !sitia.

Nu-e"!s!s a*entes !)idantes c!-! Cu%_& A*_ 0 5e""icianu"! de !tasi! ueden!)ida" a l!s a:ca"es "educt!"es. En estas "eacci!nes l!s ca"!id"at!s su5"en una se"iede de*"adaci!nes !)idatias -ient"as ,ue la sustancia !)idante es "educida.

REA%%IONES 'E RE%ONO%IMIENTO 'E LOS 9I'RATOS 'E %ARBONO.

Usand! las di5e"encias de las "!iedades ,u8-icas es !sile identi5ica" al*un!sca"!id"at!s aundantes en la natu"ale:a a t"a's de cie"t!s tests -u0 si-les.Una "!iedad de l!s ca"!id"at!s 0 ,ue se e-lea en su dete"-inaci;n es el !de""educt!". Esta "!iedad est/ c!ndici!nada a la "esencia de un ca"!n! an!-'"ic! li"e&,ue es a,uel -/s !)idad!. Nu-e"!s!s a*entes !)idantes c!-! Cu %_ 2Felin*& Nels!n3&

A*_ 2T!llens3 0 Fe""icianu"! 2


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$est de ,arfoedEste test di5e"encia ent"e M!n!sac/"id!s 0 Disac/"id!s "educt!"es. L!s i!nes c"ic!s2Cu%_3 s!n "educid!s !" l!s a:ca"es "educt!"es a"a da" ;)id! cu"!s!. En -edi! /cid!l!s -!n!sac/"id!s "eacci!nan -/s "/id! ,ue l!s disac/"id!s.

7idrlisis 1cidaL!s enlaces *lic!s8dic!s s!n estales en -edi! alcalin! e"! se id"!li:an en "esenciade /cid!s in!"*/nic!s en'"*ic!s& lie"and! M!n!sac/"id!s l!s ,ue da"/n "eacci;n"educt!"a !sitia al s!-ete"l!s al test de Felin*.

$est de "odo para 1l*idnLa 5"acci;n -!lecula" de A-il!sa del Al-id;n& tiene est"uctu"a elic!idal 0 es caa: deat"aa" -!l'culas de I% 2! I(@3 a"a da" un c!-le! de c!l!" a:ul !scu"!.

OB>ETI+OS Ca"acte"i:a" cualitatia-ente l!s ca"!id"at!s de acue"d! a su "eactiidad en "esencia de "eactantes esec85ic!s. Identi5ica" ca"!id"at!s "educt!"es. Je"i5ica" la id";lisis "esentes en distintas -uest"as

(ARTE E:(ERIMENTALEn este "/ctic! cada *"u! "ecie una Muest"a ,ue dee se" identi5icada 0 ,ue uedese" cual,uie"a de l!s si*uientes ca"!id"at!s>Gluc!sa& F"uct!sa& Lact!sa& Saca"!sa& Al-id;n u !t"!s ,ue se indica"an.


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+.@ Test de I!d! a"a Al-id;nC!l!,ue 1 -L de -uest"a si 'sta es l8,uida ! 1 unta de es/tula si esta es s;lida 0a*"e*ue 4 *!tas de la s!luci;n de 0!d!etan!l 2Lu*!l3. La 5!"-aci;n de un c!l!" a:ulintens! dete"-ina la "esencia de Al-id;n.

Tabla de resultado Test

GLUCIDO Felin* SeliKan!55 Test de i!d!

Gluc!sa

F"uct!sa

Lact!sa

Saca"!sa

Saca"!sa\id"!li:ada

Al-id!n

1H


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(RA%TI%O N?.

LI(I'OS.INTRO'&%%ION

Ba! el t'"-in! L8id!s se a*"uan un *"an n-e"! de c!-uest!s& de est"uctu"a ,u8-icaa"iada& ,ue tienen la "!iedad c!-n de se" s!lules en s!lentes !"*/nic!s eins!lules en a*ua.L!s l8id!s& a-lia-ente dist"iuid!s en ani-ales 0 e*etales& c!-"enden un *"u!ete"!*'ne! de sustancias si-ila"es ent"e s8 !" sus ca"acte"8sticas de s!luilidad> s!nnada s!lules en a*ua 0 s!lules en s!lentes !"*/nic!s. Esta "!iedad se e)lica !" laescasa !la"idad de sus -!l'culas.Deid! a las inte"acci!nes -!lecula"es& una sustancia dete"-inada es s!lule ens!lentes de natu"ale:a se-eante a la su0a. Sustancias !la"es se disuelen ens!lentes !la"es sustancias n! !la"es& en s!lentes n! !la"es.L!s l8id!s n! 5!"-an est"uctu"as !li-'"icas -ac"!-!lecula"es c!-! las de l!s

!li'tid!s ! !lisac/"id!s su -asa n! alcan:a al!"es -u0 elead!s.El estudi! de l!s l8id!s tiene esecial inte"'s desde el unt! de ista i!l;*ic!> a3 s!nc!-!nentes esenciales de l!s se"es i!s c!nstitu0en a"te 5unda-ental de las-e-"anas celula"es 3 en ani-ales 5!"-an el "incial -ate"ial de "ese"a ene"*'tica2*"asas neut"as3 c3 desde el unt! de ista nut"iti!& l!s l8id!s de ali-ent!s s!ni-!"tantes 5uentes de ene"*8a !" su alt! c!ntenid! cal;"ic! 0& ade-/s& eiculi:anita-inas li!s!lules d3 nu-e"!sas sustancias de n!tale actiidad 5isi!l;*ica est/n"elaci!nadas c!n este *"u! de c!-uest!s> !"-!nas& al*unas ita-inas& /cid!silia"es.De acue"d! c!n la c!-leidad de su -!l'cula& se distin*uen d!s cate*!"8as de l8id!s&si-les 0 c!-le!s. E)isten ade-/s !t"as sustancias ,ue c!-a"ten las "!iedades des!luilidad de l!s l8id!s 0 se as!cian a ell!s en la natu"ale:a.

S!n l8id!s si-les l!s acil*lice"!les 0 las ce"as. L!s l8id!s c!-le!s c!-"enden5!s5!l8id!s& *lic!l8id!s 0 li!"!te8nas. Ent"e las sustancias as!ciadas a l8id!s sec!nside"an die"s!s c!-uest!s& c!-! este"!les& te"en!s& ita-inas li!s!lules& etc.En la -!l'cula de casi t!d!s l!s l8id!s se encuent"an /cid!s !"*/nic!s -!n!ca"!)8lic!sden!-inad!s *en'"ica-ente /cid!s *"as!s. La i-!"tancia de est!s c!-uest!s en lac!nstituci;n de l8id!s 0 en la dete"-inaci;n de sus "!iedades ac!nsea su estudi! en"i-e" t'"-in!.La id";lisis de un 5!s5!l8id! de -e-"ana& en cie"tas !casi!nes "esenta a"ticula"inte"'s dad! ,ue al*un!s /cid!s *"as!s ,ue est/n este"i5icad!s al *lice"!l ueden actua"c!-! sust"at!s -eta;lic!s i-!"tantes& tal es el cas! del cid! A"a,uid;nic!.Ot"! ee-l! en d!nde la id";lisis de 5!s5!l8id!s es i-!"tante se da en la int!)icaci;n!58dica. La se"iente C"!talus du"issus te""i5icus 2cascael3 !see un enen! c!-uest!

!" una c!nunt! de "!te8nas e i!nes. Una de las t!)inas -/s i-!"tantes !seeactiidad F!s5!liasa 2


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OB>ETI+OSf C!n!ce" las "!iedades 5isic!,u8-icas 5unda-entales de l!s L8id!s.f Di5e"encia" las ca"acte"8sticas 0 "!iedades i!l;*icas de l!s L8id!s c!n "esect! a!t"as Bi!-!l'culas.

A%TI+I'A'ES

1/ Ensa3os de solub!l!dad,a3 En un tu! de ensa0! c!l!ca" unas *!tas de aceite 0 ( -l de a*ua. A*ita"

5ue"te-ente. Ose"a". Dea" en "e!s!. J!le" a !se"a".3 Reeti" el ensa0! a*"e*and! "eia-ente al aceite t"es *!tas de s!luci;n de

NaO\.c3 C!-a"a" la estailidad de las e-ulsi!nes en a-!s cas!s.d3 cl!"!5!"-!& encen!&

acet!na 0 tet"acl!"u"! de ca"!n!.

53 A*ita"& !se"a" 0 c!-a"a" l!s "esultad!s.

2/ Mancas en papel,a3 S!"e un t"!:! de ael e"te" una *!ta de aceite.3 S!"e !t"! t"!:! de ael unta" una e,uea cantidad de -anteca.c3 S!"e un te"ce" t"!:! de ael 5"!ta" un !c! de *"asa ani-al.d3 Ose"a" l!s t"es t"!:!s de ael al t"aslu:. C!-a"a" l!s "esultad!s.

Reconoc!!ento de l8p!dos

MATERIALESTu!s de ensa0!

G"adillaJa"illas de id"i!Mece"!Jas!s de "eciitad!s *lice"ina 0 /cid!s *"as!s. gst!s se c!-inan c!nl!s i!nes s!di! ! !tasi! del id";)id! a"a da" a!nes& ,ue s!n en c!nsecuencia lassales s;dicas ! !t/sicas de l!s /cid!s *"as!s. En l!s se"es i!s& la id";lisis de l!st"i*lic'"id!s se "eali:a -ediante la acci;n de en:i-as esec85ic!s 2liasas3 ,ue dan lu*a"a la 5!"-aci;n de /cid!s *"as!s 0 *lice"ina.

%1


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T#%NI%A. C!l!ca" en un tu! de ensa0! %-l de aceite 0 %-l de NaO\ al %#$.. A*ita" en'"*ica-ente 0 c!l!ca" el tu! al a! Ma"8a de %# a (# -inut!s.. una in5e"i!" cla"a ,uec!ntiene la s!luci;n de s!sa s!"ante unt! c!n la *lice"ina 5!"-ada& !t"a inte"-ediase-is;lida ,ue es el a;n 5!"-ad! 0 una sue"i!" li8dica de aceite inalte"ad!.

2. TIN%I;N

FUNDAMENTOL!s l8id!s se c!l!"ean selectia-ente de "!!@ana"anad! c!n el c!l!"ante Sud/n III.

T#%NI%ADis!ne" en una *"adilla % tu!s de ensa0! c!l!cand! en a-!s %-l de aceite.

Aadi" a un! de l!s tu!s +@4 *!tas de s!luci;n alc!;lica de Sud/n III.Al !t"! tu! aadi" +@4 *!tas de tinta "!a.A*ita" a-!s tu!s 0 dea" "e!sa".

Ose"a" l!s "esultad!s> en el tu! c!n Sud/n III t!d! el aceite tiene ,ue aa"ece" teid!&-ient"as ,ue en el tu! c!n tinta& 'sta se i"/ al 5!nd! 0 el aceite n! esta"/ teid!.

. SOL&BILI'A'

FUNDAMENTOL!s l8id!s s!n ins!lules en a*ua. Cuand! se a*itan 5ue"te-ente en ella se diiden ene,ue8si-as *!tas 5!"-and! una e-ulsi;n de asect! lec!s!& ,ue es t"ansit!"ia& uesdesaa"ece en "e!s! !" "ea*"uaci;n de las *!titas de *"asa en una caa ,ue& !" su-en!" densidad& se sita s!"e el a*ua.

TgCNICA Se e"/ c;-! el aceite se a disuelt! en el 'te" 0& en ca-i! n!l! ace en el a*ua 0 el aceite sui"/ deid! a su -en!" densidad.

%%


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%&ESTIONARIO1. ]Qu' 5a-ilias de c!-uest!s ,u8-ic!s se as!cian a! la den!-inaci;n c!-n

de l8id!s%. E)li,ue !" ,u' l!s l8id!s 2G"asas 0 Aceites3 s!n ins!lules en a*ua.

(. ]A ,u' se dee el alt! !de" c!-ustile de l!s l8id!s+. ]Qu' es la sa!ni5icaci;n4. ]C;-! acta un dete"*ente

%(


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(RA%TI%O N?5.

TIT&LA%ION 'E AMINOA%I'OS'eter!nac!-n de p1) p2) (I

INTRO'&%%ION

L!s a-in!/cid!s s!n -!l'culas ,ue c!ntienen un *"u! /sic! 2a-in! @N\%3 0 un*"u! /cid! 2ca"!)il! @COO\3 unid!s !" un /t!-! de ca"!n!& el ca"!n! h

Fi*. N1> Est"uctu"a /sica de un a-in!/cid!

L!s a@a-in!/cid!s di5ie"en ent"e si !" la cadena late"al 2*"u! @R3 unida al ca"[email protected] "!iedades de l!s a-in!/cid!s ,ueda dete"-inada !" est"uctu"a de la cadenalate"al R. Es as8 c!-! l!s a-in!/cid!s se clasi5ican en G"u!s R> a!la"es ali5/tic!s2Glicina 2Gl03& Alanina 2Ala3& Jalina 2Jal3& Leucina 2Leu3& Is!leucina 2Ile3&


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Fi*. N%> Ee-l!s de est"uctu"as de a-in!/cid!s.

Fi*. N(> Est"uctu"a :Kitte"i;n.

Dad! ,ue t!d!s l!s a-in!/cid!s !seen un *"u! /cid! 0 un *"u! /sic! "esentan"!iedades an5;te"as. Es deci"& s!n -!l'culas ,ue uede d!na" 0 aceta" "!t!nes. Enuna s!luci;n /cida l!s a-in!/cid!s est/n c!-leta-ente "!t!nad!s 2la 5!"-a cati;nica3.S8 la s!luci;n es neut"a& la -a0!"8a de l!s a-in!/cid!s e)isten c!-! i!nes di!la"es&ta-i'n lla-ad!s :Kitte"i;n. La ca"*a neta de un i;n di!la" es ce"! 2la 5!"-a neut"a3. El\ en el cual "ed!-ina la 5!"-a c!n ca"*a neut"a del a-in!/cid! se lla-a el unt!is!el'ct"ic! 2I3. En una s!luci;n alcalina se encuent"a -a0!"ita"ia-ente la 5!"-a c!n

ca"*a ne*atia& c!-leta-ente des"!t!nada 2la 5!"-a ani;nica3.

%4


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Fi*. N+> Cu"a Titulaci;n de Glicina#&1 M A %4C.

Las esecies i;nicas "ed!-inantes en unt!s clae de la titulaci;n se -uest"an enci-ade la *"/5ica. L!s "ecuad"!s s!-"ead!s& cent"ad!s al"eded!" de ^1 %&(+ 0 ^% H&6#indican las "e*i!nes de -/)i-! !de" ta-!nante.

OB>ETI+OS? Dete"-ina" el â1& â% de un a-in!/cid! sin ca"*a? Dete"-ina" el â1& â%& ^R 0 I de un a-in!/cid! /cid!? Dete"-ina" el â1& â% & ^R 0 I de un a-in!/cid! /sic!

Mater!ales por "rupo React!vos1 as! %4# -L S!luci;n de Gli #%4 M!la" \%#% as!s de 1## -L S!luci;n de A"* #%4 M!la" \%#

1 ietas a5!"adas de %4 -L S!luci;n de As #%4 M!la" \%#1 i:eta S!luci;n de NaO\ #&1# M!la"1 a*itad!" -a*n'tic!1 a""a -a*n'tica1 u"eta de 4# -L 1 s!!"te unie"sal1 \@-et"! 1 in:a 1 d!le nue:

(arte EKper!ental

1. T!-e una al8cu!ta de %4 -L de s!luci;n de *licina #%4 M!la" 0 i'"tala en un as! de 1## -L. Inclu0a la a""a -a*n'tica 0 c!l!,ue s!"e a*itad!" -a*n'tic!

%.


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(RA%TI%O N?6.

E:TRA%%I;N 'E 'NAINTRO'&%%ION

El /cid! des!)i""i!nucleic!& 5"ecuente-ente a"eiad! ADN& c!nstitu0e el "incialc!-!nente del -ate"ial *en'tic! de la in-ensa -a0!"8a de l!s !"*anis-!s& unt! c!n el

ARN& siend! el c!-!nente ,u8-ic! "i-a"i! de l!s c"!-!s!-as 0 el -ate"ial c!n el ,uel!s *enes est/n c!di5icad!s.

Se t"ata de una -!l'cula de *"an es! -!lecula" 2-ac"!-!l'cula3 ,ue est/ c!nstituida!" t"es sustancias distintas> /cid! 5!s5;"ic!& un -!n!sac/"id! alde8dic! del ti! ent!sa2la des!)i""i!sa3& 0 una ase nit"!*enada c8clica ,ue uede se" "ica 2adenina !*uanina3 ! i"i-id8nica 2ti-ina& cit!sina ! u"acil!3. La uni;n de la ase nit"!*enada2cit!sina& adenina& *uanina ! ti-ina3 c!n la ent!sa 2des!)i""i!sa3 5!"-a un nucle;sid!

'ste& uni'nd!se al /cid! 5!s5;"ic!& n!s da un nucle;tid! la uni;n de l!s nucle;tid!s ent"es8 en enlace dieste" n!s da el !linucle;tid!& en este cas! el /cid! des!)i""i!nucleic!.

Fi*. N1> Est"uctu"a Bases Nit"!*enadas.

La 5unci;n "incial del ADN es -antene" a t"a's de un siste-a de claes 2c;di*!*en'tic!3 la in5!"-aci;n necesa"ia a"a ,ue las c'lulas ias sean id'nticas a las"!*enit!"as 2in5!"-aci;n *en'tica3. Este "!ces! se al-acena en la secuencia de lasases 2aa"ente-ente aleat!"ia3& ,ue tiene una dis!sici;n ,ue es c!iada al ARN-2t"aducci;n3 a"a ,ue en el "i!s!-a sintetice dete"-inada "!te8na. Este "!ces! es

%7


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ta-i'n den!-inad! jd!*-a cent"al de la i!l!*8a -!lecula"j.

El "i-e" as! en la u"i5icaci;n del DNA c!nsiste en !-!*enei:a" las c'lulas 0 lisa" l!sncle!s de l!s cuales se e)t"ae el DNA. El -edi! de e)t"acci;n de !"dina"i! c!ntiene undete"*ente& c!-! el SDS& ,ue si"e a"a lisa" 2"!-e"3 l!s ncle!s 0 lie"a" el DNA& ec!

,ue au-enta n!tale-ente la isc!sidad de la s!luci;n. El dete"*ente inie ta-i'ncual,uie" actiidad nucleasa en la "ea"aci;n. El !eti! de l!s as!s de u"i5icaci;n essea"a" el DNA de -ate"iales c!nta-inantes& c!-! RNA 0 "!te8nas.

OB>ETI+OS

@ C!n!ce" l!s "!cedi-ient!s /sic!s de u"i5icaci;n 0 e)t"acci;n de DNA

@ C!n!ce" las di5e"entes 5unci!nes ,ue tienen cada "eacti! a"a "eali:a" la e)t"acci;n

@ L!*"a" la isuali:aci;n de DNA

Mater!ales

\!as de acel*aSal

A*ua 5"8aDete"*ente l8,uid!Licuad!"au*! de aa0a ! iaJas!s "eciitad!s li-i!sC!lad!" ! 5ilt"!s

Alc!!l 5"8!


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@ Cuele el c!ntenid! del as! de la licuad!"a a un as! li-i!. Aada % cuca"adass!e"as de dete"*ente l8,uid! 2s!luili:a -e-"anas3. Me:cle t!d! 0 dee "e!sa" 1#-inut!s.

@ Jie"ta esta -e:cla en e,ue!s "eciientes de id"i! li-i!s.

@ Aada a cada "eciiente unas *!tas de u*! de ia 2en:i-a3 0 -e:cla -u0 suae-entea"a n! 5!"-a" esu-a. Dee "e!sa" % -inut!s.

@ Incline cada "eciiente 0 aade lenta-ente desde su !"de el alc!!l 5"8! asta ,ue easuna caa s!"e el c!ntenid!. El DNA se elea"/ desde la -e:cla asta la caa de alc!!l.C!n un alill! uedes -aniula" el DNA.

Inorac!-n para la real!ac!-n del !nore


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(RA%TI%O N?7.

EN


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Tabla 2D Las en!as 3 la d!"est!-n

LactasaLa lactasa es una en:i-a "!ducida en el intestin! del*ad!& ,ue ue*a un aelital en el desd!la-ient! de la lact!sa 2"!ces! necesa"i! a"a la as!"ci;n de nuest"!!"*anis-!3& en sus d!s c!-!nentes /sic!s> *luc!sa 0 *alact!sa. Si l!s nieles de lalactasa s!n a!s a 'sta n! "eali:a su la!" desd!lad!ta& aa"ecen di5icultades a"adi*e"i" la lact!sa.

(aretros c!n4t!cosLas en:i-as& se ca"acte"i:an !" -edi! de ^-& c!nstante de Micaelis@Menten 0 de laJ-& el!cidad -/)i-a de "eacci;n.

La cin'tica ! el!cidad se uede -edi">a3 -idiend! la desaa"ici;n de sust"at! en el tie-! !3 -idiend! la aa"ici;n de "!duct! en el tie-!.

En este "/ctic! se ealua"/ la acci;n de la en:i-a lactasa s!"e la lact!sa& disac/"id!5!"-ad! !" una -!l'cula de *luc!sa 0 *alact!sa& !" l! tant! c!-! "!duct! se !tienen-!l'culas de *luc!sa li"e& l! cual se uede cuanti5ica" en el tie-! utili:and! la

esect"!5!t!-et"8a.

I-!"tante es c!nt"!la" -u0 ien el tie-! de la "eacci;n& kt 2tie-! de incuaci;n3.


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Fi* N1> Deendencia de la Jel!cidad inicial c!n "esect! a la c!ncent"aci;n de sust"at!en la ,ue se -uest"an l!s a"/-et"!s cin'tic!s ,ue de5inen l!s l8-ites dela cu"a a c!ncent"aci;n de sust"at! alta 0 aa.

La !tenci;n de ^- desde este *"/5ic! n! es -u0 adecuada& 0a ,ue se "e,uie"ede *"an cantidad de unt!s a"a c!nst"ui" la :!na cu"a. En ca-i! si se t"ata"/ de unal8nea "ecta& esta ,ueda dete"-inada c!n t"es unt!s 0 es -/s 5/cil& e)t"a!la" ! inte"!la"&! calcula" una endiente ! una inte"secci;n. Es as8 c!-! LineKeae" 0 Bu"& lineali:a"!nel c!-!"ta-ient! de Micaelis@Menten !teniend!>

Fi*. N(> G"/5ica d!le "eci"!ca ! de LineKeae"@Bu" 2Sl!e ETI+OS@ Dete"-ina" e)e"i-ental-ente cual es la in5luencia de la te-e"atu"a 0 la c!ncent"aci;nde sust"at! s!"e la actiidad catal8tica de la en:i-a lactasa en lact!sa.@ Dete"-ina" e)e"i-ental-ente l!s a"/-et"!s cin'tic!s(ARTE E:(ERIMENTAL

En el "esente la!"at!"i! se t"aaa"/ c!n lactasa. El sust"at! a utili:a" se"/ lact!sa.


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@ Lue*! se c!l!ca en un a*itad!" -a*n'tic! asta alcan:a" la te-e"atu"a de (4C@ Una e: instalad! se a*"e*an di5e"entes c!ncent"aci!nes de lact!sa a cada as! 2,uese indica"/ en el "/ctic!3& en el cual se c!-ien:a a c!nt"!la" el tie-!.@ Se deen saca" -uest"as cada 1 -inut! asta c!-leta" l!s 14 -inut!s.@ Las -uest"as deen se" c!l!cadas en a! de iel!@ Se "eali:a la cuanti5icaci;n de *luc!sa !" -edi! de ^it c!-e"cial.

@ Se dee "eali:a" un Blanc! ,ue n! c!nten*a sust"at!@ Se dee "eali:a" un c!nt"!l el cual n! tiene en:i-a 0 -ide la id";lisis ,u8-ica delsust"at!.

Eecto de la teperatura en la en!aSe "eali:a"/ el -is-! "!t!c!l! ante"i!" e"! a 4#C

%lculos,@ C!n l!s al!"es de as!"ancia calcule la c!ncent"aci;n de *luc!sa. C!n este al!" 0 eltie-! de incuaci;n calcule la el!cidad de "eacci;n.@ C!n!ciend! la c!ncent"aci;n inicial de sust"at!& calcule la c!ncent"aci;n de este en cadaas!.

@ G"a5i,ue se*n LineKeae" 0 Bu". Dete"-ine el al!" de ^- 0 J-a).

((


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(RA%TI%O N?*.

Metabol!so

Ses!-n de se!nar!o.

L!s ali-ent!s ,ue in*e"i-!s deen esta" c!nstituid!s !" l!s 6 c!-!nentes /sic!s ,ues!n "!te8nas& ca"!id"at!s& l8id!s& ita-inas& -ine"ales 0 a*ua& la cantidad ,ue se"e,uie"e in*e"i" de cada un! de l!s c!-!nentes a"8a de acue"d! a la c!nstituci;n 0 laactiidad 58sica ,ue se "eali:a& tant! la 5alta c!-! en el e)ces! de c!nsu-! de al*un! del!s c!-!nentes /sic!s c!nllea a die"s!s t"ast!"n!s -eta;lic!s. A"!)i-ada-entedel +# al +4$ de nuest"a in*esta cal;"ica "!iene del c!nsu-! dia"i! de ca"!id"at!sc!-le!s l!s cuales al se" di*e"id!s dan lu*a" a l!s di5e"entes -!n!sac/"id!s ent"e l!s,ue se encuent"a la *luc!sa& la cu/l se dist"iu0e !" la san*"e a las c'lulas a"a !de"

cata" la *luc!sa& siend! la "incial 5uente de ene"*8a. Al*un!s ti!s celula"es s!ndeendientes de la lie"aci;n de insulina !" el /nc"eas c!-! es el cas! de las c'lulas-uscula"es. Si la insulina n! 5unci!na adecuada-ente& la *luc!sa se ,ueda en el 5lu!san*u8ne! causand! eleaci;n de l!s nieles de *luc!sa en la san*"e 0 a est! se leden!-ina ie"*luce-ia una de las en5e"-edades ,ue se ca"acte"i:a !" laie"*luce-ia en sus "i-e"as etaas es la diaetes -ellitus.La diaetes -ellitus est/ ca"acte"i:ada !" una ie"*luce-ia "esultante de de5ect!s en lasec"eci;n de insulina& en la acci;n de la insulina ! en a-as. La ie"*luce-ia c";nica dela diaetes est/ as!ciada a lesi!nes& dis5unci;n 0 5all! de a"i!s ;"*an!s& esecial-entede l!s !!s& l!s "i!nes& el c!"a:;n 0 l!s as!s san*u8ne!s.Ja"i!s "!ces!s at!*'nic!s est/n i-licad!s en el desa""!ll! de la diaetes. Est!s andesde una dest"ucci;n aut!in-un!l;*ica de las c'lulas X del /nc"eas& c!n lac!nsi*uiente de5iciencia de insulina& asta an!"-alidades& en las ,ue el /nc"eas n!"!duce su5iciente insulina ! la ,ue "!duce n! es e5iciente. La acci;n de5iciente de lainsulina en l!s teid!s diana es la "es!nsale del -eta!lis-! an;-al! de l!sca"!id"at!s de ca"!n!& *"asas 0 "!te8nas en laDiaetes. La acci;n de5iciente de la insulina !casi!na una "esuesta inadecuada en un! !-/s unt!s de la c!-lea t"a-a -eta;lica en la ,ue esta !"-!na tiene ael"e*ulat!"i!.F"ecuente-ente c!e)isten en el -is-! aciente una inadecuada sec"eci;n de insulina as8c!-! de5ect!s de la acci;n de 'sta& en la actualidad n! se sae si una de estas

an!"-alidades es la c!nsecuencia ! la causa de la !t"a. En cual,uie" cas!& el "esultad!es la ie"*luce-ia. La *"an -a0!"8a de l!s cas!s de diaetes ueden inclui"se en d!sa-lias cate*!"8as eti!at!*'nicas. En el "i-e" cas! 2diaetes de ti! I3 la causa es unade5iciencia as!luta en la sec"eci;n de insulina. L!s indiidu!s c!n alt! "ies*! dedesa""!lla" este ti! de diaetes ueden se" a -enud! identi5icad!s -ediante eidenciasse"!l;*icas de un "!ces! aut!in-une ,ue se "!duce en l!s isl!tes anc"e/tic!s 0ta-i'n -ediante -a"cad!"es *en'tic!s. En la se*unda cate*!"8a 2diaetes de ti! II3&-uc! -/s "ealente& la causa es una c!-inaci;n de una "esistencia a la acci;n de la

(+


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insulina 0 de una inadecuada "esuesta sec"et!"a c!-ensad!"a. La diaetes ti! II seca"acte"i:a !" esta" "esente -uc!s a!s antes de se" detectada una ie"*luce-ia sins8nt!-as cl8nic!s 2sed& '"dida de es!3& e"! su5iciente a"a !casi!na" ca-i!sat!l;*ic!s 0 5unci!nales s!"e l!s ;"*an!s lanc!. Du"ante este e"8!d! asint!-/tic!& es!sile de-!st"a" t"ast!"n!s en el -eta!lis-! de l!s ca"!id"at!s -idiend! la *luc!sa

las-/tica en a0unas ! desu's de una s!"eca"*a de *luc!sa !" 8a !"al.El e)ces! en la in*esta de ca"!id"at!s n! s!la-ente -antiene la "ese"a de ene"*8a en5!"-a de *luc;*en! sin! ,ue ta-i'n el e)ces! de ca"!id"at!s es c!ne"tid! ent"iacil*lice"!les. En el 8*ad! l!s t"iacil*lice"!les se sinteti:an a a"ti" de acil C!A 0 *lice"!l(@5!s5at! siend! e-a,uetad!s c!n a!"!te8nas 0 en li!"!te8nas de -u0 aadensidad 2JLDL3& sec"etad!s al t!""ente san*u8ne! siend! al-acenad!s en teid!adi!s!.


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de*"adaci;n del anill! u"8nic! es el /cid! "ic!& ,ue se eli-ina !" la !"ina& tiene unas!luilidad li-itada !" l! ,ue su e)ces! da c!-! "esultad! la 5!"-aci;n de c"istales en"e*i!nes del !"*anis-! c!-! ueden se" l!s ded!s *!"d!s del ie& t"ast!"n! ,ue sec!n!ce c!-! *!ta.L!s al!"es elead!s de /cid! "ic! se "esentan en> in*esti;n de ali-ent!s "ic!s en

nucle!"!te8nas& insu5iciencia "enal& a:!e-ias "e""enales.Ot"! de l!s c!-!nentes del -eta!lis-! nit"!*enad! es la c"eatinina ,ue en el -scul!en su 5!"-a 5!s!"ilada si"e c!-! al-ac'n de alta ene"*8a 0 se t"ans5!"-a c!n 5acilidaden AT< !" la en:i-a c"eatina 5!s5!cinasa. La c"eatina 5!s5at! es inestale 0 se ciclaes!nt/nea-ente 5!"-a la c"eatinina ,ue se eli-ina en la !"ina. La "!ducci;n dec"eatinina es "!!"ci!nal a la -asa -uscula" c!"!"al. La cantidad de c"eatinina ,ue seeli-ina dia"ia-ente uede utili:a"se c!-! indicad!" de la n!"-alidad de la 5unci;n "enal.

(6


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(RA%TI%O N?.%arbo!dratos

'eter!nac!-n de "l!ce!a

INTRO'&%%IONGlice-ia& *luce-ia& 0 *luc!sa san*u8nea& si*ni5ican la c!ncent"aci;n de *luc!sa ensan*"e. Qu8-ica-ente la *luc!sa es una ald!e)!sa en la cual la 5!"-a alde8dica est/en e,uili"i! c!n la 5!"-a en;lica& est"uctu"a ,ue est/ 5a!"ecida a \ 5isi!l;*ic!.La utili:aci;n de *luc!sa au-enta c!nside"ale-ente !" e5ect! de la insulina& 0a ,ue'sta 5acilita la enet"aci;n de *luc!sa a las c'lulas. Cuand! n! e)iste su5iciente insulina&enet"a -en!s *luc!sa& dis-inu0end! su !)idaci;n 0 au-entand! la *luc!*en;lisise/tica& la utili:aci;n de *"asas& la *luc!ne!*'nesis 0 la "!ducci;n de cue"!scet;nic!s.Se "ec!n!ce a la diaetes n! t"atada !" "esenta" una eleaci;n c";nica de la *luce-ia

lla-ada ie"*luce-ia. Este au-ent! se dee a un d'5icit t!tal ! a"cial de insulina ,uei-lica una dis-inuci;n de la -eta!li:aci;n de la *luc!sa 0 una ie"*luce-iasecunda"ia 0& se*n el d'5icit& un inc"e-ent! en la acide: c!"!"al& ,ue uede lle*a" a se"inc!-atile c!n la ida.

$&N'AMENTO 'EL METO'OLa *luc!sa "esente en la -uest"a es c!ne"tida !" la *luc!sa !)idasa 2GOD3 en /cid!*luc;nic! 0 e";)id! de id";*en!& ,ue en "esencia de e"!)idasa 2


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(RO%E'IMIENTO

En t"es tu!s -a"cad!s B 2Blanc!3 S 2Standa"d3 0 D 2Desc!n!cid!3 c!l!ca">

B S D

Standa"d @ 1# ul @

Muest"a @ @ 1# ul

Reacti! A 1 -l 1 -l 1 -l

Incua" 4 -inut!s en a! de a*ua a (7!C ! %4 -inut!s a 14@%4!C. Lue*! lee" enesect"!5!t;-et"! a 4#4 n- ! en 5!t!c!l!"8-et"! c!n 5ilt"! e"de 2+H#@4(# n-3 lleand! el

aa"at! a ce"! c!n el lanc!.

ESTABILIDAD DE LA MECLA DE REACCION FINAL

El c!l!" de "eacci;n 5inal es estale (# -inut!s& !" l! ,ue la as!"ancia dee se" le8dadent"! de este las!.

%AL%&LO 'E LOS RES&LTA'OS

C!ncent"aci;n de la -uest"a As!"ancia de la -uest"a ) C!ncent"aci;n at";n As!"ancia del at";n

C!ncent"aci;n del at";n 1## -*dL 24&44 --!lL3

1## -*dl*luc!sa 2-*dl3 D ) 5 5

S

+ALORES 'E RE$EREN%IA

En la lite"atu"a 2Tiet:& N.m.3 se -enci!na el si*uiente "an*! de "e5e"encia>Sue"! ! las-a

Adult!s> 7+ @ 1#6 -*dl 2+&11 @ 4&9H --!ll3Ni!s> 6# @ 1## -*dl 2(&(( @ 4&44 --!ll3Ne!nat!s> 1 d8a> +# @ 6# -*dl 2%&%% @ (&(( --!ll3-a0!" a 1 d8a> 4# @ 9# -*dl 2%&79 @ +&++ --!ll3

O"ina aislada 5"esca1 @ 14 -*dl 2# @ #&9( --!ll3O"ina de %+ !"as

(9


39/52


#&4 *%+ s 2 %&79 --!l%+ s3

CONJERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SIGluc!sa 2-*dl3 ) #Ƽ Gluc!sa 2--!ll3Gluc!sa 2*%+ !"as3 ) 44&4 Gluc!sa 2--!l%+ s3

%uest!onar!o,

1@]Qu' !t"!s -'t!d!s se c!n!cen a"a dete"-ina" *luc!sa san*u8nea 0 cu/l sec!nside"a c!-! -'t!d! de "e5e"encia

%@En el -'t!d! e-lead! en el la!"at!"i!& cu/l es el c!-uest! ,ue 5inal-ente se lee enel e,ui!

(@Menci!ne al -en!s t"es causas tant! de \I


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(RA%TI%O N?10.Tr!"l!cer!dos en plasa

INTRO'&%%ION

L!s t"i*lic'"id!s s!n 'ste"es de *lice"!l 0 /cid!s *"as!s ,ue "!ienen de la dieta ! s!nsinteti:ad!s "incial-ente en el 8*ad!. L!s t"i*lic'"id!s se t"ans!"tan en el las-a enlas li!"!te8nas 0 s!n utili:ad!s !" el teid! adi!s!& -scul! 0 !t"!s. Su "incial5unci;n es su-inist"a" ene"*8a a la c'lula.

El -a0!" c!ntenid! de l!s t"i*lic'"id!s se encuent"a en ,uil!-ic"!nes 0 JLDL. Lasc!ncent"aci!nes eleadas de t"i*lic'"id!s en sue"! ueden se" deidas a alte"aci!neseat!ilia"es& diaetes -ellitus& ne5"!sis& i!ti"!idis-!& alc!!lis-!&ie"li!"!teine-ia 5a-ilia" ti! IJ 2eleaci;n de JLDL3 0 ti! J 2eleaci;n de JLDL 0,uil!-ic"!nes3& "a"a e: s!n ti! I 2eleaci;n e)clusia de ,uil!-ic"!nes3.

El dia*n;stic! cl8nic! n! dee "eali:a"se teniend! en cuenta el "esultad! de un nic!ensa0!& sin! ,ue dee inte*"a" l!s dat!s cl8nic!s 0 de la!"at!"i!.

N! es tan cla"a la "elaci;n ent"e la en5e"-edad ca"diaca c!"!na"ia 2C\D3 0 laie"t"i*lice"ide-ia c!-! c!n l!s nieles de c!leste"!l LDL. Sin e-a"*!& !" estudi!s de-etan/lisis se c!nside"an l!s t"i*lic'"id!s un "edict!" indeendiente al c!leste"!l deC\D.


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e"!)idasa+@AF> +@a-in!5ena:!na

M&ESTRASSue"! ! las-a "ec!*id!s -ediante "!cedi-ient!s est/nda".

L!s t"i*lic'"id!s en sue"! ! las-a s!n estales 4 d8as a %@9 C. L!s antic!a*ulantesc!-! la ea"ina& EDTA& !)alat! ! 5lu!"u"! n! inte"5ie"en.

(RO%E'IMIENTO\!-!*enei:a" la -uest"a antes de usa"& esecial-ente 5"ente a sue"!s lec!s!s.En t"es cuetas esect"!5!t!-'t"icas -a"cadas B 2Blanc!3& S 2Standa"d3 0 D2Desc!n!cid!3 c!l!ca">

B S DMuest"a @ @ 1# ulStanda"d @ 1# ul @

Reacti! A 1 -l 1 -l 1 -l

S. Standa"d> s!luci;n de *lice"!l %&%6 --!ll 2e,uiale a % *l de t"i!le8na3.

CONDICIONES DE REACCION@ L!n*itud de !nda> 4#4 n-@ Te-e"atu"a de "eacci;n> (7!C@ Tie-! de "eacci;n> 4 -inut!s@ J!lu-en de -uest"a> 1# ul@ J!lu-en de Reacti! A> 1 -l

@ J!lu-en 5inal de "eacci;n> 1 -l

Me:cla"& incua" 4 -inut!s a (7oC ! %# -inut!s a te-e"atu"a a-iente 219@%4oC3.En5"ia" 0 lee" en esect"!5!t;-et"! a 4#4 n- lleand! el aa"at! a ce"! c!n a*uadestilada.

+1


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ESTABILI'A' 'E LA ME

% *lTG 2*l3 D ) 5act!" 5act!"

S

D> desc!n!cid!S> standa"d

%ON+ERSION 'E &NI'A'ES

T"i*lic'"id!s 2*l3 # ) T"i*lic'"id!s 2-*dl3

T"i*lic'"id!s 2-*dl3 ) #( T"i*lic'"id!s 2--!ll3


El anel de e)e"t!s del Nati!nal C!leste"!l Educati!n 1&4# *l

M!de"ada-ente elead! a elead!> 1&4# @ 1&HH *l

Elead!> %# @ +&HH *l

Mu0 elead!> p 4# *l

+%


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(RA%TI%O N?11.

'eter!nac!-n de &rea

INTRO'&%%ION

La u"ea s!l! se sinteti:a en el 8*ad! c!-! un "!duct! de la desa-inaci;n de l!sa-in!/cid!s. Su eli-inaci;n en la !"ina "e"esenta la "incial 8a de e)c"eci;n delnit";*en!. La eleaci;n de sus al!"es se utili:a c!-! indicad!" de dis5unci;n de la5ilt"aci;n "enal 0 es utili:ad! c!-! a"a estalece" la necesidad de di/lisis en acientesc!n insu5iciencia "enal c";nica. Es c!nside"ada una "uea de 5unci;n "enal. Lac!ncent"aci;n san*u8nea 0 u"ina"ia se ueden inc"e-enta" !"> la actiidad -uscula"&t"au-as& in5ecci!nes& a0un!& etc3. Se encuent"an c!ncent"aci!nes eleadas de u"ea enlas-a c!-! c!nsecuencia de una dieta ie""!te8ca& ! t"ata-ient! c!n *luc!c!"tic!ides

2u"e-ia "e""enal3.En c!ndici!nes at!l;*icas las c!ncent"aci!nes s'"icas de u"ea au-entan en>insu5iciencia "enal& desid"ataci;n& inanici;n& lce"a 'tica san*"ante& insu5icienciaca"diaca c!n*estia& c!,ue 2i!!l'-ic!& ca"di!*'nic!& s'tic!& etc3& ti"!t!)ic!sis& etc.El inc"e-ent! en la -a0!"8a de l!s cas!s se e)lica !" una dis-inuci;n en el indice de5ilt"aci;n *l!-e"ula".La u"e-ia !st"enal est/ causada !" c!ndici!nes ,ue !st"u0en el 5lu! u"ina"i!>ne5"!litiasis& tu-!" ! ie"t"!5ia "!st/tica. La utilidad de la u"ea c!-! indicad!" de la5unci;n "enal est/ li-itada !" la a"iailidad de su c!ncent"aci;n las-/tica c!-!c!nsecuencia de 5act!"es n! "enales.La dis-inuci;n de la u"ea s'"ica se !se"a& ent"e !t"as c!ndici!nes& en insu5iciencia

e/tica& ues es en el 8*ad! d!nde se sinteti:a la u"ea.El dia*n;stic! cl8nic! n! dee "eali:a"se teniend! en cuenta el "esultad! de un nic!ensa0!& sin! ,ue dee inte*"a" l!s dat!s cl8nic!s 0 de la!"at!"i!.

$&N'AMENTO 'EL M#TO'O =&REASAHSALI%ILATO/La u"ea "esente en la -uest"a !"i*ina& se*n las "eacci!nes desc"itas a c!ntinuaci;n& unind!5en!l c!l!"ead! ,ue se cuanti5ica esect"!5!t!-'t"ica-ente.

U"easau"ea _ \%O % N\( _ CO%

GLD\N\( _ NAD\ _ \_ _ %@!)!*luta"at! l@*luta-at! _ NAD_ _ \%O

+(


44/52


(RO%E'IMIENTOI@ TECNICA CON REACTIJOS SE

Reacti! A 1 -lMuest"a ! Standa"d 1# ul

Me:cla" sin ine"ti". Incua" a"!)i-ada-ente 1 -inut! a (7!C.Lue*! a*"e*a">

Reacti! B %4# ul

Me:cla" in-ediata-ente 2sin ine"ti"3 0 disa"a" si-ult/nea-enteun c"!n;-et"!. A l!s 6#

se*und!s e)act!s -edi" la as!"ancia 2D1 ! S13 0 c!ntinua" la incuaci;n.Medi" nuea-ente la as!"ancia 2D% ! S%3 a l!s 1%# se*und!s 26# se*und!s desu'sde la 1o lectu"a3.

II@ TECNICA CON REACTIJO UNICOLlea" a ce"! el esect"!5!t;-et"! c!n a*ua destilada.En una cueta -antenida a la te-e"atu"a de t"aa!& c!l!ca">

Reacti! nic! 1 -lMuest"a ! Standa"d 1# ul

Me:cla" in-ediata-ente 2sin ine"ti"3 0 disa"a" si-ult/nea-ente un c"!n;-et"!. A l!s 6#se*und!s e)act!s -edi" la as!"ancia 2D1 ! S13 0 c!ntinua" la incuaci;n.Medi" nuea-ente la as!"ancia 2D% ! S%3 a l!s 1%# se*und!s 26# se*und!s desu'sde la 1o lectu"a3.

III@ TECNICA EN ORINAUtili:a" la -is-a t'cnica 2I ! II3 dilu0end! la !"ina c!neniente-ente c!n a*ua ! s!luci;n5isi!l;*ica. (+# n- 2\* ((+ ; (663@ Te-e"atu"a de "eacci;n> (7!C@ Tie-! de "eacci;n> % -inut!s@ J!lu-en de -uest"a> 1# ul@ J!lu-en 5inal de la "eacci;n> 1 -l


++


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#&6# *lU"ea 2*l3 5 ) 2D1 @ D% 3 5

2S1 @ S%3


En la lite"atu"a 2Tiet:& N.m.3 se -enci!na el si*uiente "an*! de "e5e"encia>

Sue"! ! las-a> 1( @ +( -*dl 2%&1 @ 7&1 --!ll3

O"ina> %6 @ +( *%+ s 2#&+( @ #&7% -!l%+ !"as3

%ON+ERSION 'E &NI'A'ES,

U"ea 2*l3 ) +6&7 BUN 2-*dl3U"ea 2-*dl3 ) #&1664 U"ea 2--!ll3U"ea 2-*dl3 ) #&+67 BUN 2-*dl3BUN 2-*dl3 ) %&1+ U"ea 2-*dl3

U"ea 2*%+ s3 ) #§ U"ea 2-!l%+ s3

1%&1+ 5act!" de c!ne"si;n ent"e la u"ea 0 el nit";*en! u"eic! en san*"e 2BUN> l!!du"ea nit"!*en 2nit";*en! u"eic! las-/tic!33

1### 5act!" de c!ne"si;n ent"e *"a-! 0 -ili*"a-!11# 5act!" de c!ne"si;n ent"e lit"! 0 decilit"!

Ee-l!>#&4# *l de u"ea ) +6&7 %(&+ -*dl de BUN

M&ESTRASSue"!& las-a u !"ina "ec!*id!s -ediante "!cedi-ient!s est/nda".La u"ea en sue"! ! las-a es estale 7 d8as a %@9 C.

+4


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(RA%TI%O N?12.

'eter!nac!-n de %reat!n!naINTRO'&%%ION

La c"eatinina& c!-uest! su-a-ente di5usile& se eli-ina del !"*anis-! casie)clusia-ente !" 5ilt"aci;n "enal. Su dete"-inaci;n en sue"!& as8 c!-! la deu"aci;n dec"eatinina end;*ena c!nstitu0en a"/-et"!s i-!"tantes a"a el dia*n;stic! de die"sasa5ecci!nes "enales.

$&N'AMENTOS 'EL METO'O

La c"eatinina "eacci!na c!n el ic"at! alcalin! 2"eacci;n de a55e3 "!duciend! unc"!-;*en! "!!. La el!cidad de esta "eacci;n& a! c!ndici!nes c!nt"!ladas& es una-edida de la c!ncent"aci;n de c"eatinina de la -uest"a uest! ,ue se c!-!"ta c!-!

una "eacci;n cin'tica de "i-e" !"den a"a la c"eatinina.

ID TE%NI%A (ARA S&ERO O (LASMA

E,uili"a" el Reacti! de T"aa! a la te-e"atu"a de "eacci;n 2%4oC3. Antes de a*"e*a" la-uest"a& llea" el aa"at! a ce"! c!n a*ua destilada. En d!s cuetas esect"!5!t!-'t"icas-a"cadas S 2Standa"d3 0 D 2Desc!n!cid!3& c!l!ca">

S D

Reacti! de T"aa! 1&% -l 1&% -l

Standa"d #&% -l @

Muest"a @ #&% -l

Me:cla" in-ediata-ente& iniciand! al -is-! tie-! el c"!n;-et"! 0 "!se*ui" laincuaci;n. A l!s (# se*und!s e)act!s -edi" la as!"ancia 2S1 0 D13 0 c!ntinua" laincuaci;n.

Medi" nuea-ente la as!"ancia 2S% 0 D%3 a l!s 4 -inut!s 2+ -inut!s (# se*und!sdesu's de la "i-e"a lectu"a3.

IID TE%NI%A (ARA ORINA

+6


47/52


Rec!lecta" 0 "ea"a" la -uest"a c!-! se desc"ii; en ZRec!lecci;n[& e5ectuand! unadiluci;n 1>4# de la -is-a en a*ua desi!ni:ada. Alica" lue*! la t'cnica I.


8 'reatinina en suero 9*gl8 ;2D% @ D13 ) 5

%# -*l5

S% @ S1D% @ D1

+8 'reatinina en orina 9g+< 5s8 ; ) JS% @ S1

siend!>

J !lu-en de la diu"esis e)"esad! en lit"!s%+ s

La 5;"-ula su"*e de>D% @ D1

C"eatinina en !"ina 2*%+ s3 ) #%# *l ) 4# ) JS% @ S1

d!nde>

#%# *l c!ncent"aci;n del Standa"d

4# 5act!" de diluci;n

D.C.E. 2-l-in3 ) 1&7(

Sue"5icie c!"!"al del aciente 2-%3

+7


48/52



Sue"! ! las-a>\!-"e> 7 @ 1( -*lMue"> 6 @ 11 -*l

O"ina>\!-"e> 1+ @ %6 -*^*%+ sMue"> 11 @ %# -*^*%+ s

D.C.E.>\!-"e> H+ @ 1+# -l-in1&7( -%Mue"> 7% @ 11# -l-in1&7( -%

'ETERMINA%ION 'E $OS$ATASA AL%ALINA =AL(/

INTRO'&%%ION

La 5!s5atasa alcalina es una en:i-a a-lia-ente dist"iuida en el !"*anis-!. \id"!li:a l!s-!n!'ste"es del /cid! !"t!5!s5;"ic! en -edi! alcalin!. En el adult! "!iene en a"te del8*ad! 2te"-!estale3 0 en a"te de ues!& siste-a "eticul!end!telial 0 ascula"2te"-!l/il3 dand! lu*a" a distintas i:!en:i-as.

La actiidad s'"ica de AL< ;sea& en c!ndici!nes n!"-ales alcan:a su -a0!" actiidad enl!s ni!s en edad de c"eci-ient!& lle*and! a t"ilica" l!s nieles del adult!& deid! a ,ueesta i:!en:i-a se l!cali:a en l!s !ste!last!s. Ta-i'n es 5isi!l;*ic! el au-ent! ,ue se"!duce al 5inal de "i-e" t"i-est"e de e-a"a:!& a e)ensad de la i:!en:i-a lacenta"ia

,ue en este e"i!d! alcan:a nieles -/)i-!s.

Ent"e las at!l!*8as ,ue a5ecta la actiidad s'"ica de AL< se ueden cita"> ca"cin!-as-etast/tic!s en 8*ad! 0 ues!& c!lestasis ilia"& in5a"t! al -i!ca"di!& ul-!na" ! "enal.

+9


49/52


$&N'AMENTO

La AL< id"!li:a al @nit"!5enil5!s5at!& inc!l!"!& "!duciend! 5!s5tat! 0 @nit"!5enil a \ deH.9& la el!cidad de aa"ici;n del ani!n @nit"!5en!lt! a +#4n-& es "!!"ci!nal a la

actiidad en:i-atica en la -uest"a.

La dietan!la-ina "e*ula en \ de "eacci;n 0 acta c!-! acet!" del 5!s5tat! lie"ad! !"la 5!s5atasa.

AL< _ @NFF

1 .@Sust"at! "ec!nstituid! %.4-L

%.@


50/52


+.@ Lee" as!"ancia inicial en esect"! a +#4n-& disa"a" c"!n;-et"!

4.@ Re*ist"a" as!"ancias desu's de 1&% 0 ( -inut!s desu's de la "i-e"a lectu"a.

6.@ Dete"-ina" la di5e"encia "!-edi! de As!"ancia -in 2qA-in3& "estand! cadaas!"ancia 0 !teniend! el "!-edi!.

%AL%&LOS

AL< 2UI3 qA-in ) 691%

RES&LTA'OS

AL


51/52


9O>A 'E RE(ORTE

T!tulo de la (rct!ca.

Nobre de losalunos

Muestra Absorbanc!auestra

Absorbanc!a

delpatr-n

%oncentrac!-ndel patr-n N!veles de

OBSER+A%IONES.

%ON%L&SIONES.

$E%9A.

+oBo 'O%ENTE.

41


52/52


4%

Guía de Laboratorio Bioqumica 2012

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