Extracción de DNA genómico de sangre completa por kit Axygen

(AxyPrep Blood Genomic DNA Miniprep Kit)

Antes de empezar: Adicionar la cantidad especificada de etanol en los envases de Buffer W1A y Buffers W2 concentrates y mezclar bien. El etanol ha utilizar puede ser al 95% o 100%

Metodología:1. Adicionar 500 ml de Buffer AP1 a un tubo eppendorf de 1.5 mL. 2. Adicionar 200-220 ml de sangre con anticoagulantes. Mezclar por vortex 10 segundos. 3. Adicionar 100 ml de Buffer AP2 y mezclar por vortex durante 10 segundos.4. Centrifugar a 14500 rpm por 10 minutos a temperatura ambiente.5. Colocar un columna miniprep del kit en un tubo de eppendorf de 2 ml. Pipetear el sobrenadante a

la columna y centrifugar a 14500 por 1 minuto. 6. Descartar el filtrado y volver a colocar la microcolumna en un tubo eppendorf de 2 ml. Pipetear 700

ml de Buffer W1A dentro de la columna e incubar a temperatura ambiente 2 minutos. Centrifugar a 14500 rpm/1 minuto.

7. Descartar el filtrado y volver a colocar la microcolumna en un tubo eppendorf de 2 ml, adicionar 800 mL de Buffer W2 a la columna y centrifugar a 14500 rpm/1 minuto. Realizar este paso dos veces es opcional

8. Descartar el filtrado y colocar la columna en un tubo eppendorf de 2 ml y centrifugar a 14500 rpm/1 minuto.

9. Colocar la columna en un tubo del kit (1.5 ml). Adicionar 80-200 ml de Buffer TE. Incubar a temperatura ambiente 1 minutos y centrifugar centrifugar a 14500 rpm/1 minuto para eluir el DNA.