Estudio multicéntrico de sobre-estadiaje

ganglionar en pacientes con cáncer de colon

mediante técnica molecular-OSNA

Resultados preliminares

Dra. Míriam Cuatrecasas

Hospital Clínic

Barcelona

M. Cuatrecasas, L. Bernet, MC. Méndez, C. Villar, T. Pereda,

K. Elorriaga, L. Herrero, I. Aldecoa, J. Tarragona 1

Introducción

5-year survival rate (%) Primary tumour (T) Nodal status

97.4/87.6/68.7 T1 N0/N1/N2

96.8/87.7/76.6 T2 N0/N1/N2

87.5/68.7/47.3 T3 N0/N1/N2

71.5/50.5/27.1 T4 N0/N1/N2

Gunderson et al., JCO 28: 264-271, 2010

• El tratamiento del CCR en estadios iniciales I y II (pN0 M0) es quirúrgico. Las guías oncológicas no recomiendan quimioterapia adyuvante

• Hasta un 25% de pacientes en estadios I y II progresan con recidivas o metástasis

• Las metástasis ganglionares determinan el tratamiento con quimioterapia adyuvante y son un importante factor pronóstico

• 2010: 7ª ed. TNM: : El estadio ganglionar influye en la supervivencia en todos los estadios T

• Las metástasis ganglionares no detectadas con H&E podrían ser marcadores de diseminación tumoral sistémica en pacientes en estadios iniciales de CCR

• Células tumorales aisladas (deptumour-cell deposits <0,2 mm; ITC)

• Micrometastasis (0,2–2,0 mm)

• Métodos moleculares más sensibles (inmunohistoquímica o RT-PCR) permitirían detectar metástasis ganglionares “ocultas con H&E” e identificar pacientes pN0 con riesgo de recidiva que se beneficiarían de quimioterapia adyuvante

Introducción

Método diagnóstico estándar

• Disección ganglios post-fijación formol

• Un corte teñido H&E de ≥12 ganglios linfáticos

Problema

• No se analiza el 98% del tejido

• Sesgo de localización tisular falsos negativos 11%1 … 24%

2,3

Pueden no detectarse metástasis ganglionares

Probabilidad de recidiva

Consecuencias

• Pacientes falsos negativos con estadios I o II y no reciben quimioterapia

Pacientes infraestadiados: tasas de suprvivencia significativamente peores4,5

4

Estadiaje ganglionar (pN) CCR

1 Saha et al. 2006

2 Clinical trial John Wayne CI

3 unpublished Sysmex results

4 Swanson et al. 2003

5 Rahbari et al. 2011

C-CLOSER I – Colon

5

Estudio sobre el estadiaje ganglionar de pacientes

con cáncer de colon mediante técnica molecular

Hospital Clínic (Barcelona) Hospital Lluís Alcanyis (Xàtiva)

Hospital Universitario Arnau de Vilanova (Lérida) Hospital Reina Sofía (Madrid)

Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid) Hospital Costa del Sol (Marbella)

Hospital Universitario 12 de Octubre (Madrid) Hospital Virgen de la Macarena (Sevilla)

Hospital Severo Ochoa (Leganés) Instituto Oncológico San Sebastián (Donostia)

Hospital de Txagorritxu (Vitoria)

Participantes Kick-off meeting 23/09/2011 Sevilla

Complete

Lymphadenectomy

Osna

Study for

Enhanced

Review

(in Colon cancer)

Objetivos del estudio

• Evaluar las diferencias de estadiaje ganglionar en pacientes con

cáncer de colon en estadios I – II, utilizando el sistema OSNA

(método de ensayo), versus H&E (método estándar)

• Determinar la viabilidad operativa de la disección en fresco de

los ganglios linfáticos

16 min; 65

C

1 min

5 min

Homogenización Centrifugación Amplificación Detección CK19

Real-Time

Ganglio

OSNA = One Step Nucleic Acid Amplification

OSNA: Nivel de corte

++

+

-

Macro-Metástasis

Micro-Metástasis

ITC / fondo

CK19 mRNA Tamaño de metástasis

250

copias/ µl*

5.000

copias/ µl

Pieza colectomía en fresco

Metodología

• Disección ganglios linfáticos en fresco (<50’)

• Identificar tubo Ependorff y cassette para

cada ganglio linfático, con el mismo número

• Según tamaño del ganglio, sección central 1

mm o ½ ganglio para histología (HE)

• El resto del ganglio en el tubo de Ependorff,

se guarda a -80C

• Análisis diferido con sistema OSNA según

protocolo

*Store a slice in case needed to

IHQ CK19 analysis

11

• Identificar ganglios linfáticos residuales

que no se han disecado en fresco

• Cortar sección central o ½ del ganglio

para procesado histológico convencional

• Se determinará el estadio ganglionar pN

utilizando los cortes teñidos con H&E

(fresco y post-fijación en formol)

Ganglios linfáticos aislados

post-fijación en formol

Lymph nodes

1 x H&E

Lymph nodes

*Store one slice in case needed to IHQ CK19 analysis

Metodología

Resection of the

surgical segment

Identification of

lymph nodes in

fresh segments

1 mm central

section

Freezing of rest

of lymph node

Fixation of

remaining segment

in formalin

Identification of

residual lymph

nodes

Study of the

frozen nodes by

OSNA Study of residual

lymph nodes by

H&E

Fixation of a

central section in

formalin

Study of a central

section by H&E

Diagrama de flujo

1 MM

15

Sysmex Life Science | OSNA colon cancer | C-CLOSER I Portugal 16

1 MM

CK 19

Resultados - OSNA

pTNM n %

pTis 8 6.02

pT0 4 3.01

pT1 25 18.80

pT2 24 18.05

pT3 56 42.11

pT4a 16 12.03

Total 133 100.00

Resultados - OSNA

Estadiaje Hematoxilina-

Eosina

n %

pN0 109 81.95

pN1a 13 9.77

pN1b 4 3.01

pN1c 4 3.01

pN2a 3 2.26

Total 133 100.00

Resultados - OSNA

Estadiaje OSNA

Hematoxilina-

Eosina

pN0 pN1a pN1b pN2a pN2b Total

pN0 62 (56.88) 21 (19.27) 19 (17.43) 4 (3.67) 3 (2.75) 109

pN1a 7 (53.85) 2 (15.38) 4 (30.77) 13

pN1b 1 (25.00) 3 (75.00) 4

pN1c 1 (25.00) 1 (25.00) 2 (50.00) 4

pN2a 2 (66.67 1 (33.33) 3

Total 63 (47.37) 30 (22.56) 26 (19.55) 10 (7.52) 4 (3.01) 133

Meta-análisis 39 estudios - 4087 pacientes

• Estadios I o II con H&E (pN0)

• Detección metástasis ganglionares con IHC (30), RT-PCR (7), ambas (2)

Estadiaje ganglionar e CCR

Supervivencia global HR 2.20 2.54 2.02

Supervivencia libre de enfermedad HR 2.24 4.53 1.56

Supervivencia asociada a enfermedad HR 3.37 4.26 3.34

Métodos moleculares de estadiaje ganglionar identificarían pacientes pN0

con H&E, con riesgo de progresión: candidatos a quimioterapia adyuvante

El significado pronóstico de la detección molecular de células tumorales es

independiente del método utilizado, de la diana molecular, y del número de

ganglios linfáticos aislados

Molecular detection of tumor cells in regional lymph nodes is

associated with disease recurrence and poor survival in node-

negative colorectal cancer: A systematic review and Meta-Analysis Rahbari et al. 2012 JCO

• El método OSNA es más sensible que la tinción con H&E para

detección de metástasis ganglionares

• Objetivamos un 43,12% de sobreestadiaje ganglionar molecular con

el método OSNA versus el estadiaje patológico con H&E

• La presencia de metástasis ganglionares detectadas por método

OSNA podría ayudar a seleccionar aquellos pacientes con cáncer

de colon en estadios I y II candidatos a tratamiento adyuvante

• La disección en fresco de los ganglios linfáticos del mesocolon es

factible y no representa una sobrecarga de trabajo

Conclusiones

• Equipo humano de SYSMEX

• Dr. Jordi Tarragona - H. Universitari Arnau de Vilanova, Lleida

• Dra. Teresa Pereda - H. Costa del Sol

• Dr. Kepa Elorriaga – I. Oncológico de San Sebastián

• Dra. Noemí García / Dr. José Palacios - H. Ramón y Cajal

• Dra. Laia Bernet - H. Lluis Alcanyis

• Dra. Isabel Guerra / Dr. Jose Domingo Sardon - H. Universitario Alava-Txagorritxu

• Dra. Carolina Ibarrola /Dra. Guadalupe López Alonso /Dra.Yolanda Rodriguez - H. 12

de Octubre

• Dra. Sofía Pereira/ Dr. Ricardo Gonzalez - H. Virgen Macarena

• Dra. Maria Carmen Méndez/Dra. Elvira Gonzalez - H. Severo Ochoa

• Dr. Carlos Villar / Dr. Manuel Medina - H. Universitario Reina Sofía

23

Agradecimientos