ES QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit Handbook

Junio 2012

Sample & Assay Technologies

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 50

Versin 2

Para uso diagnstico in vitro

61104

1071108ES

QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden

(Alemania)

Tfno: +49-2103-29-0

R2 1071108ES

QIAGEN: Tecnologas de preparacin de muestras y ensayos de biologa molecular QIAGEN es el proveedor lder de tecnologas innovadoras para la preparacin de muestras y ensayos de biologa molecular que permiten el aislamiento y la deteccin del contenido de cualquier muestra biolgica. Nuestros productos y servicios de vanguardia y mxima calidad garantizan el xito desde la muestra hasta el resultado.

QIAGEN sienta las bases de excelencia en los siguientes campos:

Purificacin de ADN, ARN y protenas Ensayos de cidos nucleicos y protenas Investigacin con microARN y ARNi Automatizacin de tecnologas de preparacin de muestras y ensayos de

biologa molecular

Nuestra misin es ayudarle a superar sus retos y a alcanzar un xito excepcional. Para ms informacin, visite www.qiagen.com.

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012 3

ndice Uso previsto 4

Resumen y descripcin 4

Lisis de las clulas sanguneas 5

Unin del ADN genmico a la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini 5

Purificacin automatizada 6

Materiales suministrados 8

Contenido del kit 8

Materiales necesarios pero no suministrados 9

Informacin sobre seguridad 10

Almacenamiento y manipulacin de los reactivos 12

Manipulacin y almacenamiento de las muestras 12

Notas importantes 15

Cuestiones importantes antes de comenzar un protocolo 15

Preparacin de reactivos y soluciones tampn 15

Manipulacin de las columnas de centrifugacin QIAamp Mini 16

Elucin de ADN genmico 17

Rendimiento y calidad del ADN genmico 17

Montaje del sistema de vaco QIAvac 24 Plus 18

Protocolos

Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de sangre con un sistema de vaco 20

Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de sangre con una microcentrifugadora 24

Control de calidad 27

Caractersticas del rendimiento 27

Rendimiento en ensayos subsiguientes 28

Smbolos 33

Bibliografa 34

Informacin de contacto 35

Informacin para pedidos 36

4 Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Uso previsto El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini es un sistema que utiliza la tecnologa de membrana de gel de slice (tecnologa QIAamp) para el aislamiento y la purificacin de ADN genmico procedente de muestras biolgicas.

El producto est concebido para ser utilizado por usuarios profesionales, como tcnicos y mdicos formados en tcnicas de biologa molecular.

El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini se ha diseado para el uso diagnstico in vitro.

Resumen y descripcin El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini utiliza una tecnologa ampliamente consolidada para ofrecer un mtodo simple y rpido de aislamiento y purificacin de ADN genmico a partir de muestras de 200 l de sangre completa.

Los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini, diseados para el procesamiento simultneo de mltiples muestras de sangre, obtienen ADN purificado listo para su uso. En los procedimientos se puede utilizar sangre completa fresca o congelada y sangre tratada con citrato o EDTA.

Los sencillos procedimientos QIAamp DSP de centrifugacin y vaco permiten el procesamiento simultneo de mltiples muestras. Algunos de los procedimientos de centrifugacin QIAamp pueden ser completamente automatizados en el QIAcube para una mayor estandarizacin y facilidad de uso (vase la pgina 6).

No es necesaria la previa separacin de los leucocitos. Los procedimientos no requieren ni la extraccin con fenol/cloroformo ni la precipitacin con alcohol y precisan una intervencin mnima por parte del usuario, lo que permite la manipulacin segura de muestras potencialmente infecciosas. Los procedimientos estn diseados para minimizar la contaminacin cruzada de una muestra a otra. El ADN purificado est listo para su uso en una PCR o cualquier otra aplicacin o puede conservarse a entre 25 C y 15 C para un uso posterior.


Principios del procedimiento Cada procedimiento QIAamp DSP DNA Blood Mini comprende 4 etapas:

Lisis de las clulas presentes en la muestra de sangre Unin del ADN genmico del lisado celular a la membrana de una

columna de centrifugacin QIAamp Mini

Lavado de la membrana Elucin del ADN genmico de la membrana Este manual contiene protocolos para 2 procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini alternativos: el procedimiento de centrifugacin, para el que se requiere una centrifugadora, y el procedimiento de vaco, para el que se requiere una centrifugadora y un sistema de vaco (consulte el organigrama, pgina 7).

Lisis de las clulas sanguneas Las muestras se lisan en condiciones de desnaturalizacin a altas temperaturas. La lisis se realiza en presencia de proteasa QIAGEN (QP) y solucin tampn de lisis (AL).

Unin del ADN genmico a la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini Para optimizar la unin del ADN genmico a la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini se aade en primer lugar etanol a los lisados. Cada lisado se dispensa entonces en una columna de centrifugacin QIAamp Mini y, a medida que el lisado la atraviesa por efecto del vaco o de la fuerza centrfuga, el ADN genmico se adsorbe sobre la membrana de gel de slice.


Purificacin automatizada La purificacin de ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini puede automatizarse completamente en el instrumento QIAcube. El innovador QIAcube utiliza tecnologa avanzada para procesar las columnas de centrifugacin QIAGEN, lo que permite la integracin sin interrupciones de la preparacin automatizada de muestras de bajo volumen en la dinmica de trabajo de laboratorio. La preparacin de muestras con el QIAcube se realiza siguiendo los mismos pasos que en el procedimiento manual (es decir, lisis, unin, lavado y elucin), por lo que es posible utilizar el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini para la purificacin de ADN de alta calidad.

Para obtener ms informacin sobre el procedimiento automatizado, consulte la hoja del protocolo correspondiente en www.qiagen.com/MyQIAcube. Las hojas de protocolo actualizadas se pueden descargar gratuitamente u obtener a travs del Departamento de Servicio Tcnico de QIAGEN (consulte la pgina 35).

Al automatizar el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini en el instrumento QIAcube, el instrumento quiz procese menos de 50 muestras debido a volmenes muertos, evaporacin y consumo adicional de reactivo por el pipeteo automatizado. QIAGEN nicamente garantiza 50 preparaciones de muestras con el uso manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini.

Figura 1. El instrumento QIAcube.


Lea atentamente los protocolos (pginas 22 y 26) antes de comenzar.

Aada a un tubo de lisis (LT) 20 l de QP, 200 l de muestra y 200 l de AL.

Agite con la agitadora vorticial 15 segundos.

Incube 10 minutos ( 1 minuto) a 56C ( 1C).

Aada 200 l de etanol.

Agite con la agitadora vorticial 15 segundos.

Procedimientos de centrifugacin y vaco del kit QIAamp DSP DNA

Blood Mini

Transfiera el lisado a la columna de centrifugacin QIAamp Mini.

Procedimiento de centrifugacin: centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.

Procedimiento de vaco: aplique vaco.

Procedimiento de centrifugacin: ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado nuevo, aada 500 l de AW1 y centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.

Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW1 y aplique vaco.

Procedimiento de centrifugacin: ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un nuevo tubo de lavado, aada 500 l de AW2 y centrifugue 1 minuto a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm).

Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW2 y aplique vaco.

Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado.

Centrifugue 3 minutos a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm).

Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de elucin.

Aada 50200 l de AE e incube durante 1 minuto.

Centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.

Procedimiento de vaco QIAamp

Lavado (solucin

tampn AW1)

Lavado (solucin

tampn AW2)

Elucin

ADN genmico o viral puro

Muestra Muestra

Vaco

Vaco

Vaco

Lisis

Unin

Procedimiento de centrifugacin

QIAamp


Materiales suministrados

Contenido del kit

Kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

N de referencia 61104

Nmero de preparaciones 50*

QIAamp Mini Spin

QIAamp Mini Spin Columns with Wash Tubes (columnas de centrifugacin QIAamp Mini con tubos de lavado) (WT) (2 ml)

50

ET Elution Tubes (tubos de elucin) (1,5 ml)

50

VC VacConnectors (conectores VacConnector)

50

LT Lysis Tubes (tubos de lisis) (1,5 ml)

50

WT Wash Tubes (tubos de lavado) (2 ml)

3 x 50

AL Lysis Buffer (solucin tampn de lisis)

12 ml

AW1 Wash Buffer 1 (concentrate) (solucin tampn de lavado 1 [concentrado])

19 ml

AW2 Wash Buffer 2 (concentrate) (solucin tampn de lavado 2 [concentrado])

13 ml

AE Elution Buffer (solucin tampn de elucin)

25 ml

PS Protease Solvent (disolvente de protease)

2 ml

QP QIAGEN Protease (proteasa QIAGEN)

1 vial

CD

1

Manual

1

* Al automatizar el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini en el QIAcube, el instrumento quiz

procese menos de 50 muestras debido a volmenes muertos, evaporacin y consumo adicional de reactivo por el pipeteo automatizado. QIAGEN nicamente garantiza 50 preparaciones de muestras con el uso manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini.


Contiene clorhidrato de guanidina. No compatible con desinfectantes que contengan leja. Para ms informacin, consulte la pgina 11.

Contiene azida sdica como conservante. Volumen de resuspensin 1,2 ml. Vase Preparacin de la proteasa QIAGEN en la pgina

15.

Materiales necesarios pero no suministrados Siempre que trabaje con productos qumicos, utilice una bata de laboratorio adecuada, guantes desechables y gafas protectoras. Para ms informacin, consulte las correspondientes fichas de datos de seguridad de los materiales (MSDS) que el proveedor del producto pone a su disposicin.

Para los procedimientos de centrifugacin y vaco

Etanol (96100%) Pipetas* y puntas de pipeta (para prevenir la contaminacin cruzada,

recomendamos encarecidamente usar puntas de pipeta resistentes a aerosoles)

Guantes desechables Bloque de calentamiento* para la lisis de muestras a 56 C

(recomendamos el equipo Thermomixer comfort de Eppendorf con termobloque para tubos de ensayo micro de 1,5 ml)

Microcentrifugadora* Probeta graduada (50 ml) Agitadora vorticial

Para el procedimiento de vaco nicamente

Sistema de vaco QIAvac 24 Plus (QIAvac 24 Plus, n de referencia 19413, QIAvac Connecting System, n de referencia 19419, y Vacuum Pump, n de referencia 84020) o sistema de vaco de laboratorio genrico equivalente.

* Para garantizar el correcto procesamiento de las muestras en los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini, recomendamos encarecidamente calibrar los instrumentos (p. ej., pipetas y bloques de calentamiento) siguiendo las recomendaciones de los fabricantes.

Esta no es una lista completa de proveedores y no incluye a numerosos proveedores importantes de suministros biolgicos.


Informacin sobre seguridad Siempre que trabaje con productos qumicos, utilice una bata de laboratorio adecuada, guantes desechables y gafas protectoras. Para ms informacin, consulte las correspondientes hojas de datos de seguridad de materiales (MSDS). Dichas hojas estn disponibles online en un formato PDF cmodo y compacto en www.qiagen.com/Support/MSDS.aspx, donde podr encontrar, ver e imprimir la hoja de datos sobre seguridad correspondiente a cada kit y a cada componente del kit QIAGEN.

ATENCIN: NO aada leja o soluciones cidas directamente al residuo de la preparacin de la muestra.

La solucin tampn de lisis (AL) y la solucin tampn de lavado 1 (AW1) contienen clorhidrato de guanidina, susceptible de formar compuestos muy reactivos cuando se combina con leja. Si se derrama algn lquido que contenga estas soluciones tampn, lmpielo con agua y un detergente de laboratorio adecuado. Si el lquido derramado contiene agentes potencialmente infecciosos, limpie primero la zona afectada con agua y detergente de laboratorio y seguidamente con hipoclorito sdico al 1% (v/v). Si los frascos de solucin tampn sufren algn dao o pierden lquido, use guantes y gafas protectoras al desecharlos para evitar lesiones personales o lesiones a terceros.

QIAGEN no ha analizado los residuos lquidos generados por los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini para determinar si contienen materiales residuales infecciosos. La contaminacin del residuo lquido con materiales residuales infecciosos es improbable, pero no se puede descartar completamente. Por consiguiente, el residuo lquido debe considerarse como infeccioso y manipularse y desecharse segn las normas de seguridad locales.


A los diversos componentes del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini les conciernen las siguientes declaraciones de riesgo y seguridad:

Solucin tampn de lisis (AL) y solucin tampn de lavado 1 (AW1)

Contienen clorhidrato de guanidina: nocivo, causa irritacin. Declaraciones de riesgo y seguridad: * R22-36/38, S13-26-36-46.

Proteasa QIAGEN (QP)

Contiene subtilisina: sensibilizante, causa irritacin. Declaraciones de riesgo y seguridad: * R37/38-41-42, S22-24-26-36/37/39-46.

Informacin para emergencias disponible las 24 horas

Informacin mdica para emergencias disponible en ingls, francs y alemn las 24 horas del da en:

Centro de informacin de toxicologa, Maguncia, Alemania.

Tfno: +49-6131-19240

* R22: nocivo por ingestin; R36/38: causa irritacin en los ojos y la piel; R37/38: causa irritacin en el sistema respiratorio y la piel; R41: riesgo de lesiones oculares graves; R42: posibilidad de sensibilizacin por inhalacin; S13: mantngase lejos de alimentos, bebidas y piensos; S22: no respirar el polvo; S24: evtese el contacto con la piel; S26: en caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente con agua y acdase a un mdico; S36: sese indumentaria protectora adecuada; S36/37/39: sese indumentaria protectora adecuada; S46: en caso de ingestin, acuda inmediatamente al mdico y muestre la etiqueta o el envase.


Almacenamiento y manipulacin de los reactivos Las columnas de centrifugacin QIAamp Mini deben conservarse a entre 2 C y 8 C a su recepcin y pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit.

Todas las soluciones tampn se pueden conservar a temperatura ambiente (1525 C) hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit.

La proteasa QIAGEN (QP) liofilizada se puede conservar a temperatura ambiente (1525 C) hasta la fecha de caducidad del kit sin que su rendimiento se vea afectado. La proteasa QIAGEN reconstituida permanece estable hasta un ao si se conserva a entre 2 C y 8 C, pero solo hasta la fecha de caducidad del kit.

La solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida y la solucin tampn de lavado 2 (AW2) reconstituida permanecen estables hasta 1 ao a temperatura ambiente (1525C), pero solo hasta la fecha de caducidad del kit.

Manipulacin y almacenamiento de las muestras Los crioprecipitados que se forman durante la descongelacin de muestras congeladas obstruirn la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini. Si los crioprecipitados son visibles, evite aspirarlos durante la aspiracin de la muestra. Los efectos de congelar y descongelar muestras de sangre en la purificacin de ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini han sido determinados (vase la Figura 2).

Figura 2. Efecto de la congelacin y descongelacin de muestras de sangre. Se congel y descongel hasta 3 veces sangre tratada con EDTA y seguidamente se someti a una purificacin del ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. Los resultados de rendimiento de ADN obtenidos estn normalizados respecto al rendimiento de una muestra fresca (100%). Cada barra en la grfica representa los resultados de 32 rplicas (media desviacin estndar).

Ren

dim

ien

to n

orm

aliz

ad

o

al d

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mu

estr

a f

resc

a

(%)

Nmero de ciclos de congelacin/descongelacin

Fresca


La cantidad de ADN purificado en los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini depende del contenido de leucocitos de cada muestra de sangre. Mediante el procedimiento de centrifugacin o vaco, el ADN genmico se purifica a partir de 200 l de muestras de sangre de donantes sanos. Para recoger las muestras de sangre que se van a analizar con los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini se pueden utilizar varios tipos distintos de tubos primarios y anticoagulantes (Tabla 1).

Tabla 1. Rendimientos relativos medios de ADN en muestras de sangre recogidas utilizando diversos tipos de tubos primarios y anticoagulantes

Tubo primario Fabricante N de referencia

Volumen nominal

Rendimiento medio*

BD Vacutainer 9NC

BD 366007 9 ml 6,4 g

BD Vacutainer K3E BD 36847 10 ml 6,6 g

BD Vacutainer K2E BD 367864 6 ml 6,4 g

S-Monovette EDTA

Sarstedt 02.1066.001 9 ml 6,5 g

S-Monovette CPDA1

Sarstedt 01.1610.001 8,5 ml 6,3 g

Vacuette K3E Greiner Bio-One

455036 9 ml 6,5 g

Vacuette 9NC Greiner Bio-One

454382 2 ml 6,3 g

El ADN genmico fue purificado a partir de 200 l de muestras de sangre de donantes sanos (de 4,0 x 106 clulas por ml a 9,0 x 106 clulas por ml). * Para cada tubo primario, se determina el rendimiento medio a partir de 11 muestras

triplicadas.

Eliminacin de los contaminantes residuales

Mientras que el ADN genmico se mantiene unido a la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini, los contaminantes se eliminan de manera eficaz primero con la solucin tampn de lavado 1 (AW1) y seguidamente con la solucin tampn de lavado 2 (AW2).


Elucin de ADN genmico puro

El ADN genmico se eluye de la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con 50200 l de solucin tampn de elucin (AE). El ADN eluido est listo para su uso en distintos ensayos subsiguientes, incluidos diversos tipos de ensayos de diagnstico in vitro.


Notas importantes

Cuestiones importantes antes de comenzar un protocolo Al recibir el kit, compruebe que los componentes no han sufrido ningn

dao. Si los blsteres o los frascos de solucin tampn estn daados, contacte con el Servicio Tcnico de QIAGEN o con el distribuidor local. Si se derrama algn lquido, consulte la Informacin sobre seguridad (pgina 10). No use los componentes daados de un kit, ya que su rendimiento podra verse afectado.

Cambie siempre las puntas de pipeta entre las transferencias de lquidos. Para evitar la contaminacin cruzada, recomendamos usar puntas de pipeta resistentes a aerosoles.

Todos los pasos de centrifugacin se realizan a temperatura ambiente (1525 C).

Use siempre guantes desechables y compruebe regularmente que no se hayan contaminado con el material de las muestras. Deseche los guantes si se contaminan.

Para minimizar la contaminacin cruzada, no abra ms de un tubo a la vez.

No use componentes de kits distintos del que est utilizando a menos que tengan el mismo nmero de lote.

Procure evitar la contaminacin microbiana de los reactivos del kit. Para minimizar el riesgo de infeccin con material potencialmente

infeccioso, se recomienda trabajar bajo un flujo de aire laminar hasta que las muestras estn lisadas.

Este kit solo debe ser utilizado por personal con experiencia en los mtodos de laboratorio de diagnstico in vitro.

Preparacin de reactivos y soluciones tampn Preparacin de la proteasa QIAGEN

Aada 1,2 ml de disolvente de proteasa (PS) al vial de proteasa QIAGEN (QP) liofilizada y mezcle cuidadosamente. Para evitar que se forme espuma, mezcle invirtiendo el vial repetidas veces. Compruebe que la proteasa QIAGEN (QP) se ha disuelto por completo.

No aada la proteasa QIAGEN (QP) directamente a la solucin tampn de lisis (AL).


Preparacin de la solucin tampn de lavado 1 Usando una probeta graduada, aada 25 ml de etanol (96100%) al frasco que contiene 19 ml de concentrado de solucin tampn de lavado 1 (AW1). Conserve la solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida a temperatura ambiente (1525 C).

Mezcle siempre la solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida invirtiendo el frasco varias veces antes de comenzar el procedimiento.

Preparacin de la solucin tampn de lavado 2 Usando una probeta graduada, aada 30 ml de etanol (96100%) al frasco que contiene 13 ml de concentrado de solucin tampn de lavado 2 (AW2). Conserve la solucin tampn de lavado 2 (AW2) reconstituida a temperatura ambiente (1525 C).

Mezcle siempre la solucin tampn de lavado 2 (AW2) reconstituida invirtiendo el frasco varias veces antes de comenzar el procedimiento.

Preparacin de la solucin tampn de elucin El kit incluye un frasco de solucin tampn de elucin (AE). Para evitar la contaminacin de la solucin tampn de elucin (AE), recomendamos encarecidamente utilizar puntas de pipeta resistentes a aerosoles para su pipeteo y volver a cerrar el frasco inmediatamente despus.

La solucin tampn de elucin (AE) contiene azida sdica como conservante, la cual presenta absorbencia a 260 nm. Por lo tanto, al cuantificar el ADN en el eluido midiendo la absorbencia a 260 nm, al determinar la pureza del ADN en el eluido midiendo la absorbencia a 260 y 280 nm o al controlar la absorbencia en el rango comprendido entre 220 nm y 350 nm, asegrese de que la muestra para ensayo en blanco contiene la misma concentracin de azida sdica que el eluido. Por ejemplo, si prepara el eluido para la medicin de absorbencia diluyendo 50 l del mismo con 100 l de agua, para preparar la muestra para ensayo en blanco diluya 50 l de solucin tampn de elucin (AE) con 100 l de agua. Utilice agua destilada fresca para las diluciones.

Manipulacin de las columnas de centrifugacin QIAamp Mini Dada la sensibilidad de las tecnologas de amplificacin de los cidos nucleicos, cuando se manipulen las columnas de centrifugacin QIAamp Mini deben adoptarse las siguientes medidas de precaucin con el fin de evitar una posible contaminacin cruzada entre las preparaciones de muestras:


Dispense la muestra o la solucin cuidadosamente en la columna de centrifugacin QIAamp Mini. Pipetee la muestra en la columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde de la columna.

Cambie siempre las puntas de pipeta entre las transferencias de lquidos. Recomendamos el uso de puntas de pipeta resistentes a aerosoles.

Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.

Tras haber realizado todos los pasos de agitacin vorticial con pulsos, centrifugue brevemente los tubos para microcentrifugadora con el fin de eliminar las gotas del interior de las tapas.

Abra cada vez solamente una columna de centrifugacin QIAamp Mini y procure no generar aerosoles.

Lleve guantes durante todo el procedimiento. Si los guantes entran en contacto con la muestra, cmbieselos inmediatamente.

Elucin de ADN genmico El volumen de ADN eluido procedente de una columna de centrifugacin QIAamp Mini puede ser hasta 20 l menor que el volumen de solucin tampn de elucin (AE) dispensado en la columna. El volumen del eluido recuperado depende de la naturaleza de la muestra. La solucin tampn de elucin (AE) debe equilibrarse a temperatura ambiente (1525 C) antes de dispensarla en la columna. El ADN eluido se recoge en tubos de elucin (ET). Para periodos de hasta 4 semanas, recomendamos conservar el ADN a entre 2 C y 8 C. Para el almacenamiento a largo plazo, recomendamos conservarlo a 20 C.

Rendimiento y calidad del ADN genmico El rendimiento y la calidad del ADN genmico aislado son adecuados para todos los tipos de procedimientos de deteccin subsiguientes utilizados en el diagnstico molecular. Los ensayos de diagnstico debern llevarse a cabo conforme a las instrucciones de los fabricantes.


Montaje del sistema de vaco QIAvac 24 Plus Compruebe que ha montado correctamente la columna de centrifugacin QIAamp Mini, el conector VacConnector (VC) y la vlvula VacValve (vase la Figura 3).

Figura 3. Ensamblado de los componentes del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini para el procesamiento al vaco de las muestras.

1. VacValve (suministrada con el sistema de vaco)

2. VacConnector (VC)

3. Columna de centrifugacin QIAamp Mini

Si se emplea el procedimiento de vaco con el sistema de vaco QIAvac 24 Plus, recomendamos etiquetar los tubos de lisis (LT), los tubos de elucin (ET) y las columnas de centrifugacin QIAamp Mini segn el esquema de la Figura 4 (vase la pgina siguiente) para no confundir las muestras. Este esquema se puede fotocopiar y etiquetar con los nombres de las muestras. Si se utiliza un sistema de vaco distinto o el procedimiento de centrifugacin, recomendamos utilizar un esquema similar.


Fecha: ___________________________________________________________________________

Operador: _______________________________________________________________________

ID del ciclo: ______________________________________________________________________

Figura 4. Esquema de etiquetado para los tubos de lisis (LT), los tubos de elucin (ET) y las columnas de centrifugacin QIAamp Mini para su uso en el sistema de vaco QIAvac 24 Plus.

0102

0304

0506

0708

0910

1112

1314

1516

1718

1920

2122

2324

20 Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

06/2012

Protocolo: Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de sangre con un sistema de vaco Para el aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de 200 l de sangre completa tratada con EDTA o citrato con un sistema de vaco como el QIAvac 24 Plus.

Cuestiones importantes antes de comenzar

El siguiente procedimiento proporciona instrucciones para procesar una sola muestra de sangre. No obstante, con el sistema de vaco QIAvac 24 Plus se pueden procesar hasta 24 muestras simultneamente.

Antes de comenzar

Equilibre las muestras de sangre a temperatura ambiente (1525 C) y compruebe que estn bien mezcladas.

Si se ha formado un precipitado en la solucin tampn de lisis (AL), disulvalo incubando a 56 C.

Asegrese de que la solucin tampn de lavado 1 (AW1), la solucin tampn de lavado 2 (AW2) y la proteasa QIAGEN (QP) se han preparado segn las instrucciones del apartado Preparacin de reactivos y soluciones tampn en las pginas 15 y 16.

Equilibre la solucin tampn de elucin (AE) a temperatura ambiente (1525 C) para su uso en el paso 14.

Ajuste el bloque de calentamiento a 56 C para su uso en el paso 4. Para minimizar la contaminacin cruzada, inserte un VacConnector (VC)

en cada adaptador Luer del sistema de vaco.

Los procedimientos de control de calidad de QIAGEN se basan en las pruebas funcionales realizadas en el lanzamiento del kit para cada lote concreto del kit. Por ello, no mezcle reactivos de lotes del kit distintos y no combine reactivos individuales de diferentes lotes de reactivos.

Compruebe que el frasco de residuos del sistema de vaco est vaco y que todas las conexiones se han realizado correctamente.

Para informacin detallada sobre el funcionamiento del sistema de vaco, especialmente acerca de su mantenimiento, consulte el manual suministrado con el equipo.


Procedimiento

1. Pipetee 20 l de proteasa QIAGEN (QP) en un tubo de lisis (LT).

Compruebe la fecha de caducidad de la proteasa reconstituida antes de utilizarla.

2. Aada 200 l de muestra de sangre al tubo de lisis (LT). 3. Aada 200 l de solucin tampn de lisis (AL) al tubo de lisis (LT),

cierre la tapa y mezcle en la agitadora vorticial con pulsos durante 15 segundos. Para que la lisis sea eficaz, es esencial que la muestra y la solucin tampn de lisis se mezclen perfectamente hasta obtener una solucin homognea.

Dado que la solucin tampn de lisis (AL) es muy viscosa, asegrese de aadir el volumen correcto de la misma, ya sea pipetendola cuidadosamente o utilizando una pipeta adecuada.


4. Incube a 56 C (1C) durante 10 minutos (1 minuto). 5. Centrifugue el tubo de lisis (LT) durante 5 segundos a la mxima

velocidad para eliminar las gotas del interior de la tapa. 6. Aada 200 l de etanol (96100%) al tubo de lisis (LT), cierre la tapa

y mzclelo bien en la agitadora vorticial con pulsos durante 15 segundos.

7. Centrifugue el tubo de lisis (LT) durante 5 segundos a la mxima velocidad para eliminar las gotas del interior de la tapa.

8. Inserte la columna de centrifugacin QIAamp Mini en el VacConnector (VC) del sistema de vaco. Asegrese de que la vlvula de vaco principal (entre el sistema de vaco y el colector de vaco) y la vlvula con tapn de rosca (en el colector de vaco) estn cerradas. Encienda la bomba de vaco. Deseche el tubo de lavado (WT) (2 ml) en el que est colocada la columna de centrifugacin QIAamp Mini en el blster.

El vaco solamente se aplica al sistema de conexin (si se utiliza) y no al colector de vaco.

9. Dispense cuidadosamente todo el lisado obtenido en el paso 7 en la columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.

22 Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

06/2012

Si se estn procesando varias muestras, no abra ms de un tubo de lisis (LT) cada vez.

10. Abra la vlvula principal de vaco. Una vez que el lisado haya atravesado la columna de centrifugacin QIAamp Mini, cierre la vlvula principal de vaco y abra la vlvula con tapn de rosca en el colector de vaco para ventilar el colector. Cierre la vlvula con tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido del colector. Tras cerrar la vlvula principal de vaco, el vaco solamente se aplica al sistema de conexin (si se utiliza) y no al colector de vaco.

Utilice la vlvula con tapn de rosca del colector de vaco para una rpida eliminacin del vaco.

Si se procesan varias columnas de centrifugacin QIAamp Mini al mismo tiempo, se recomienda cerrar la vlvula VacValve de cada columna despus de que el lisado las haya atravesado con el fin de acortar la duracin de este paso de vaco.

Si al cabo de 10 minutos el lisado an no ha terminado de atravesar la membrana, coloque la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio, cierre la tapa y centrifugue a aproximadamente 6.000 x g (8.000 rpm) durante 3 minutos o hasta que haya pasado todo el lisado. Coloque la columna de centrifugacin QIAamp Mini en otro tubo de lavado (WT) limpio y prosiga con el paso 10 del protocolo en la pgina 25.

Si el lisado sigue sin pasar por la membrana durante la centrifugacin, deseche la muestra y repita el aislamiento y la purificacin con nuevo material de muestra empezando por el paso 1 de la pgina 21.

11. Dispense 750 l de solucin tampn de lavado 1 (AW1) en la columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta. Deje la tapa de la columna abierta y abra la vlvula de vaco principal. Una vez que la solucin tampn de lavado 1 (AW1) haya atravesado la columna de centrifugacin QIAamp Mini, cierre la vlvula principal de vaco y abra la vlvula con tapn de rosca para ventilar el colector. Cierre la vlvula con tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido del colector.

12. Dispense 750 l de solucin tampn de lavado 2 (AW2) en la columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin


QIAamp Mini con la punta de la pipeta. Deje la tapa de la columna abierta y abra la vlvula de vaco principal. Una vez que la solucin tampn de lavado 2 (AW2) haya atravesado la columna de centrifugacin QIAamp Mini, cierre la vlvula principal de vaco y abra la vlvula con tapn de rosca para ventilar el colector. Cierre la vlvula con tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido del colector.

13. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini, retrela del sistema de vaco y deseche el VacConnector (VC). Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio y centrifguela a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm) durante 3 minutos para secar completamente la membrana.

La omisin de la centrifugacin en seco puede producir una inhibicin del ensayo subsiguiente.

14. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de elucin (ET) limpio y deseche el tubo de lavado (WT) contenedor del filtrado. Abra cuidadosamente la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y dispense de 50 a 200 l de solucin tampn de elucin (AE) en el centro de la membrana. Cierre la tapa e incube a temperatura ambiente (1525 C) durante 1 minuto. Centrifugue a 6.000 x g (8.000 rpm) durante un minuto para eluir el ADN.

Tras realizar este protocolo, siga el procedimiento de mantenimiento del sistema de vaco (para ms detalles, vase el manual suministrado con el sistema de vaco).


Protocolo: Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de sangre con una microcentrifugadora Para el aislamiento y purificacin del ADN genmico de muestras de 200 l de sangre completa tratada con EDTA o citrato con una microcentrifugadora.

Cuestiones importantes antes de comenzar

El siguiente procedimiento proporciona instrucciones para procesar una sola muestra de sangre. No obstante, es posible procesar varias muestras al mismo tiempo, el nmero depender de la capacidad de la microcentrifugadora utilizada.

Antes de comenzar

Equilibre las muestras de sangre a temperatura ambiente (1525 C) y compruebe que estn bien mezcladas.

Si se ha formado un precipitado en la solucin tampn de lisis (AL), disulvalo incubando a 56 C.

Asegrese de que la solucin tampn de lavado 1 (AW1), la solucin tampn de lavado 2 (AW2) y la proteasa QIAGEN (QP) se han preparado segn las instrucciones del apartado Preparacin de reactivos y soluciones tampn en las pginas 15 y 16.

Equilibre la solucin tampn de elucin (AE) a temperatura ambiente (1525 C) para su uso en el paso 15.

Ajuste el bloque de calentamiento a 56 C para su uso en el paso 4. Los procedimientos de control de calidad de QIAGEN se basan en las

pruebas funcionales realizadas en el lanzamiento del kit para cada lote concreto del kit. Por ello, no mezcle reactivos de lotes del kit distintos y no combine reactivos individuales de diferentes lotes de reactivos.

Procedimiento

1. Pipetee 20 l de proteasa QIAGEN (QP) en un tubo de lisis (LT).

Compruebe la fecha de caducidad de la proteasa reconstituida antes de utilizarla.

2. Aada 200 l de muestra de sangre al tubo de lisis (LT). 3. Aada 200 l de solucin tampn de lisis (AL) al tubo de lisis (LT),

cierre la tapa y mezcle en la agitadora vorticial con pulsos durante 15 segundos.


Para que la lisis sea eficaz, es esencial que la muestra y la solucin tampn de lisis (AL) se mezclen perfectamente hasta obtener una solucin homognea.

Dado que la solucin tampn de lisis (AL) es muy viscosa, asegrese de aadir el volumen correcto de la misma, ya sea pipetendola cuidadosamente o utilizando una pipeta adecuada.


4. Incube a 56 C (1C) durante 10 minutos (1 minuto). 5. Centrifugue el tubo de lisis (LT) durante 5 segundos a la mxima

velocidad para eliminar las gotas del interior de la tapa. 6. Aada 200 l de etanol (96100%) al tubo de lisis (LT), cierre la tapa

y mzclelo bien en la agitadora vorticial con pulsos durante 15 segundos.

7. Centrifugue el tubo de lisis (LT) durante 5 segundos a la mxima velocidad para eliminar las gotas del interior de la tapa.

8. Dispense cuidadosamente todo el lisado obtenido en el paso 7 en la columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.

Si se estn procesando varias muestras, no abra ms de un tubo de lisis (LT) cada vez.

9. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y centrifugue a aproximadamente 6.000 x g durante 1 minuto. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio y deseche el tubo contenedor del filtrado.

Si despus de una centrifugacin a aproximadamente 6.000 x g (8.000 rpm) el lisado an no ha terminado de atravesar la membrana, vuelva a centrifugar a la mxima velocidad (hasta 20.800 x g) durante 1 minuto.

Si el lisado sigue sin pasar por la membrana durante la centrifugacin, deseche la muestra y repita el aislamiento y la purificacin con nuevo material de muestra empezando por el paso 1 de la pgina 24.

10. Abra cuidadosamente la columna de centrifugacin QIAamp Mini y aada 500 l de solucin tampn de lavado 1 (AW1) procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.

11. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y centrifugue a aproximadamente 6.000 x g durante 1 minuto. Ponga


la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio y deseche el tubo contenedor del filtrado.

12. Abra cuidadosamente la columna de centrifugacin QIAamp Mini y aada 500 l de solucin tampn de lavado 2 (AW2) procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.

13. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y centrifugue a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm) durante 1 minuto. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio y deseche el tubo contenedor del filtrado.

14. Centrifugue a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm) durante 3 minutos para secar completamente la membrana.

La omisin de la centrifugacin en seco puede producir una inhibicin del ensayo subsiguiente.

15. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de elucin (ET) limpio y deseche el tubo de lavado (WT) contenedor del filtrado. Abra cuidadosamente la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y dispense de 50 a 200 l de solucin tampn de elucin (AE) en el centro de la membrana. Cierre la tapa e incube a temperatura ambiente (1525 C) durante 1 minuto. Centrifugue a aproximadamente 6.000 x g (8.000 rpm) durante un minuto para eluir el ADN.


Control de calidad Conforme al sistema de gestin de la calidad con certificacin ISO de QIAGEN, cada lote del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini se somete a pruebas frente a una serie de especificaciones predeterminadas con el fin de garantizar una calidad constante del producto.

Limitaciones El rendimiento del sistema se ha comprobado utilizando sangre completa para el aislamiento de ADN genmico.

Es responsabilidad del usuario validar el rendimiento del sistema para cualquier procedimiento utilizado en su laboratorio que no haya sido avalado por los estudios de rendimiento de QIAGEN.

Para minimizar el riesgo de un efecto negativo sobre los resultados diagnsticos, deben utilizarse controles adecuados para las aplicaciones subsiguientes. Para validaciones adicionales, se recomiendan las directrices de la International Conference on Harmonization of Technical Requirements (ICH) detalladas en ICH Q2(R1) Validation Of Analytical Procedures: Text And Methodology.

Todo resultado diagnstico que se genere debe interpretarse en combinacin con otros datos clnicos o de laboratorio.

Caractersticas del rendimiento

Rendimiento del ADN purificado

Se ha determinado el rango lineal del rendimiento de ADN mediante el procedimiento de vaco QIAamp DSP DNA Blood Mini a partir de sangre de donantes sanos con recuentos leucocitarios de 3,8 x 106 1,34 x 107 clulas/ml (vase la Figura 5, pgina 28).


Figura 5. Rango lineal del rendimiento de ADN mediante el procedimiento de vaco QIAamp DSP DNA Blood Mini con 200 l de volumen de elucin. Se determinaron los recuentos leucocitarios de los donantes sanos, que se hallaban en el rango 3,8 x 106 1,34 x 107 clulas/ml. Se purific el ADN a partir de las muestras de sangre mediante el procedimiento de vaco QIAamp DSP DNA Blood Mini con un volumen de elucin de 200 l. Se procesaron 87 muestras triplicadas.

Rendimiento en ensayos subsiguientes El ADN genmico eluido est listo para su uso en distintos ensayos subsiguientes, incluidos varios tipos de ensayos de diagnstico in vitro (Tablas 26). Se han determinado los efectos del volumen de elucin y del volumen de eluido utilizado en la PCR sobre el rendimiento de la PCR (vase la Tabla 7).

Ren

dim

ien

to (g

/mu

estr

a)

Recuento leucocitario (x 106 clulas/ml)


Tabla 2. Tipificacin del HLA con Dynal AllSet+ SSP Assays HLA-A Low Resolution, HLA-B Low Resolution, DR Low Resolution y DQ Low Resolution

Locus HLA-A Locus HLA-B Locus HLA-DR Locus HLA-DQ

Genotipo N Genotipo N Genotipo N Genotipo N

A2/A3 2 B51, B51/ B13 o B51/B27

1 DR1/DR3 1 DQ2 1

A3/A1 1 B13/B35 1 DR3 o DR3/DR13

1 DQ2/DQ3 2

A3/A25 1 B8/B27 1 DR3/DR7 1 DQ6 1

A2/A24 2 B7/B13 o B7/B15

1 DR7/DR15 2 DQ2/DQ5 1

A1/A2 2 B7/B18 1 DR4/DR15 1 DQ2/DQ5 2

A30/A68 1 B7/B44 1 DR4/DR7 1 DQ3 1

A2/A32 1 Otro 0 DR4 1 DQ3/DQ6 2

Otro 0 DR15 1 Otro 0

DR1/DR7 1

Otro 0

Se recogi sangre completa de donantes individuales y se purific ADN genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. Con Dynal AllSet+ SSP Assays (Dynal Biotech), se identificaron alelos en los loci indicados en el nmero determinado de individuos. N: nmero de individuos.


Tabla 3. Genotipificacin del factor V Leiden (FV) con el kit LightCycler Factor V Leiden Mutation Detection

Genotipo Nmero

Natural 17

FV G16191 A heterocigtico 13

FV G16191 A homocigtico 0

Se recogi sangre completa de 30 donantes individuales y se purific ADN genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. El estatus allico en el locus FV G1691 A se determin con el kit LightCycler Factor V Leiden Mutation Detection (Roche Group).

Tabla 4. Genotipificacin del factor V Leiden (FV) mediante PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA

Genotipo Nmero

Natural 17

FV G16191 A heterocigtico 13

FV G16191 A homocigtico 0

Se recogi sangre completa de 30 donantes individuales y se purific ADN genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. El estatus allico en el locus FV G1691 A se determin mediante PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA (Biotage).


Tabla 5. Genotipificacin de protrombina (PT) mediante PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA

Genotipo Nmero

Natural 30

PT G20210A heterocigtico 0

PT G20210A homocigtico 0

Se recogi sangre completa de 30 donantes individuales y se purific ADN genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. El estatus allico en el locus PT G20210 A se determin mediante PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP Reagent en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA (Biotage).

Tabla 6. Anlisis de los polimorfismos de la ApoE T112C y C158T mediante PCR convencional, con secuenciacin del amplicn mediante el kit BigDye v1.1 Ready Reaction Cycle Sequencing y separacin en el instrumento ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer

Genotipo Nmero

ApoE*3/*3 5

ApoE*3/*4 5

Otro 0

Se recogi sangre completa de 10 donantes individuales y se purific ADN genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. El anlisis de los polimorfismos de la ApoE T112C y C158T se realiz mediante PCR convencional, con secuenciacin del amplicn mediante el kit BigDye v1.1 Ready Reaction Cycle Sequencing y separacin en el instrumento ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Life Technologies Corporation).


Tabla 7. Efectos del volumen de elucin y el volumen de eluido utilizado en la PCR sobre el rendimiento de la PCR

Volumen de eluido por 50 l de PCR*

Volumen de elucin 2 l 5 l 10 l

50 l 100% 100% 100%

100 l 100% 100% 97%

200 l 100% 100% 100%

* Los valores indican las tasas de resultados positivos de la PCR y representan la media de 48 muestras.

Estabilidad del eluido

En las pruebas de almacenamiento con eluidos generados con el kit QIAamp DNA Blood Mini, un kit de laboratorio de uso genrico que utiliza la misma tecnologa, se puso de manifiesto que el ADN eluido con columnas de centrifugacin QIAamp Mini en la solucin tampn AE y conservado a 5 C o a 20C era estable durante 8 aos (Figura 6). No obstante, los estudios a largo plazo sobre la estabilidad de los eluidos obtenidos con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini an no han concluido.

M 28C -20C M

Figura 6. Estabilidad a largo plazo de ADN aislado y purificado con columnas de centrifugacin QIAamp Mini. El ADN se purific con el kit QIAamp DNA Blood Mini, se eluy en 200 l de solucin tampn AE y se conserv a una temperatura entre 2 C y 8 C o a 20 C durante 8 aos. Las muestras de ADN se analizaron en un gel de agarosa teido con bromuro de etidio. M: marcador.


Smbolos

Contiene suficientes reactivos para preparaciones de muestras

Fecha de caducidad

Dispositivo mdico de diagnstico in vitro

A su recepcin

Abrir en el momento de la entrega; conservar las columnas de centrifugacin QIAamp Mini a 28 C

Nmero de referencia

Nmero de lote

Nmero de material

Componentes

Contiene

Nmero

Volumen

Limitacin de temperatura

Fabricante

Anotar la fecha actual tras aadir etanol al frasco

Aadir


Liofilizado

Reconstituir en

Etanol

Clorhidrato de guanidina

Subtilisina

Dirige a

Consultar instrucciones de uso

Nota importante

Bibliografa QIAGEN mantiene online una extensa base de datos actualizada de publicaciones cientficas en las que se utilizan los productos de QIAGEN. Las exhaustivas opciones de bsqueda permiten al usuario encontrar los artculos que necesita, ya sea mediante una bsqueda sencilla con una palabra clave o especificando la aplicacin, el rea de investigacin, el ttulo, etc.

Para obtener una lista bibliogrfica completa, visite la base de datos bibliogrfica online de QIAGEN en www.qiagen.com/RefDB/search.asp o pngase en contacto con el Servicio Tcnico de QIAGEN o con su distribuidor local.


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Los clientes de QIAGEN son una valiosa fuente de informacin sobre los usos avanzados o especializados de nuestros productos. Esta informacin es de utilidad para otros cientficos adems de para los investigadores de QIAGEN. Por este motivo, le animamos a ponerse en contacto con nosotros si tiene cualquier sugerencia sobre el rendimiento de nuestros productos o sobre nuevas aplicaciones y tcnicas.

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QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit (50)

Para 50 preparaciones de ADN: Columnas de centrifugacin QIAamp Mini, conectores VacConnector, proteasa QIAGEN, reactivos, soluciones tampn y tubos de recogida

61104

Accesorios

QIAvac 24 Plus vacuum manifold*

Colector de vaco para el procesamiento de 1 a 24 columnas de centrifugacin: colector de vaco QIAvac 24 Plus, conexiones Luer, acoplamientos rpidos

19413

Vacuum Pump* Bomba de vaco universal 84020

Si desea obtener informacin actualizada sobre la licencia y las exenciones de responsabilidad especficas del producto, consulte el manual o la gua de usuario del kit de QIAGEN correspondiente. Los manuales y las guas de usuario de los kits QIAGEN estn disponibles en www.qiagen.com o pueden solicitarse al Servicio Tcnico de QIAGEN o a su distribuidor local.

* Para el uso con protocolos de vaco.

Marcas comerciales: QIAGEN, QIAamp, QIAcube, artus, Pyrosequencing (QIAGEN Group); ABI PRISM, BigDye (Life Technologies Corporation); BD, Vacutainer (Becton, Dickinson and Company); Bio-One, Vacuette (Greiner Bio-One); Dynal, AllSet+ (Dynal Biotech); Eppendorf (Eppendorf AG); LightCycler (Roche Group); Monovette, Sarstedt (Sarstedt AG & Co.). Incluso en aquellos casos en los que no se indica de manera explcita, no debe asumirse que las marcas comerciales, nombres registrados, etc., no estn protegidos por la ley.

Acuerdo de Licencia Limitada para el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

La utilizacin de este producto implica por parte de cualquier comprador o usuario del producto la aceptacin de los siguientes trminos:

1. El producto puede utilizarse nicamente conforme a los protocolos suministrados con el producto y a este manual y para su uso exclusivo con los componentes incluidos en el kit. QIAGEN no ofrece licencia alguna bajo ninguna de sus propiedades intelectuales para incorporar o utilizar los componentes contenidos en este kit con componentes no incluidos en el mismo, excepto segn se describe en los protocolos proporcionados con el producto, en este manual y en los protocolos adicionales disponibles en www.qiagen.com. Algunos de estos protocolos adicionales han sido suministrados por usuarios de QIAGEN para usuarios de QIAGEN. Estos protocolos no han sido rigurosamente comprobados u optimizados por QIAGEN. QIAGEN ni los garantiza ni ofrece garantas de que no infrinjan los derechos de terceros.

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