ELISA Enzyme ELISA Linked Enzyme ELISA ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA.

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ELISA

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ELISA

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Enzyme

ELISA

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LinkedEnzyme

ELISA

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ImmunoSorbentEnzyme Linked

ELISA

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AssayEnzyme Linked ImmunoSorbent

ELISA

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Anticorps Antigène

ELISA

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

EE

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Principe du test ELISA (1)

Coating de l ’Ag ou de l’Ac

Saturation

SupportTampon de coating

Saturation

Lavages

Lavages

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Substrat incolore

Produit coloré

Addition du ligand marqué avec l’enzyme

Principe du test ELISA (2)

E

E

E

E

Lavages: PBS-Tween

Addition du substrat de l ’enzyme

E

E

Enzymes

Substrats

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Les différents types d’ELISA

- Phase homogène

- Phase hétérogène

- ELISA direct

- ELISA indirect

- ELISA Sandwich

- ELISA par compétition

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Les ELISA en phase homogène

E

E

Antigène présent dans l’échantillon

Antigène absent de l’échantillon

S P

S

P

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Les ELISA en phase hétérogène (1)

ELISA directAnticorps marqué Antigène marqué

ELISA indirect

Recherche d’anticorps dans le plasma

E

S

PE

S

P

E

S

P

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Les ELISA en phase hétérogène (2)

ELISA sandwich (1)

Sandwich direct

-Symétrique-Asymétrique

Sandwich indirect

E

S

P

ES

P

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Les ELISA en phase hétérogène (3)

ELISA sandwich (2)

Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques

E

S

P

E

S

P

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Les ELISA en phase hétérogène (4)

DO

[antigène ou anticorps]Limite de détection

Zone linéaire

Phase plateau

ELISA non compétitif

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Les ELISA en phase hétérogène (5)

ELISA par compétition (1)

Compétition au niveau de l’anticorps

Anticorps à doser

Compétition au niveau de l’antigène

Antigène à doser

E

Élimination par lavage

EES

P

S

P

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DO

[antigène ou anticorps]

Les ELISA en phase hétérogène (6)

ELISA par compétition (2)

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Choix du test

- Quel est le but du test?

- Quels réactifs sont disponibles?

- Quel va être l’utilisation de ce test?

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Cupule Coatée

avec anticorps

spécifique

Présence d’antigène

Absence d’antigène

Distribution des

témoins et des

échantillons

S

P

S

P

Addition du mélange

substrat-chromogèneDistribution du

conjugué HRP

Principe du kit utilisé pendant la partie pratique

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Coating de l’antigène

(IgG de lapin)

Addition de l’anticorps

marqué avec la PAL

Addition de l’anticorps

marqué à la biotine

S

P

S

P

Addition du mélange

Chromogène-Substrat

Addition de l’avidine

recouverte de la PAL

Addition du mélange

Chromogène-Substrat

Dosage d’IgG de lapins par un test ELISA direct

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Les techniques apparentées (1)

ELISPOT

Cellules

Nitrocellulose

Culture cellulaire Lavages

E E

Révélation

Addition d’un substrat précipitantApparition de spots

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Les techniques apparentées (2)

- Western blot

- immunocytochimie ou immunohistochimie

Beaucoup plus loin………...

- Immunofluorescence

- Cytométrie en flux

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Refracted light1

2

Incident light

Gold film

Prism

Ligand flow

time

Light refraction

1

2Association

Dissociation

Principles of BiacoreTM analysis