Efecto citoprotector y antisecretor gástrico del extracto ... · Abstract Aim: The aim of this...

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

UNIDAD DE POSTGRADO

Efecto citoprotector y antisecretor gástrico del extracto

acuoso de Solanum americanum Mill (Hierba mora) en

inducción de úlcera gástrica en ratas

TESIS

para optar al grado académico de Magíster en Farmacología con Mención

en Farmacología Experimental

AUTORA

Rocío Jovanna Varas Ponce

Lima-Perú

2009

A mis padres: Alejandro y Laura Por los valores inculcados y por haber guiado mi formación a lo largo de la vida.

A mis hermanos: Lupo y Carina Por sus consejos y apoyo incondicional.

Agradecimiento Mi sincero agradecimiento a: - Doctor Jorge Luis Arroyo Acevedo, por su invalorable apoyo en la

dirección de la ejecución de la Investigación como asesor de tesis. - Doctor José Raéz Gonzáles y Doctor Pablo Enrique Bonilla Rivera

por su valioso apoyo en la ejecución de la investigación.

Sumario

Resumen Abstract Pág I Introducción 1 II Marco Teórico 4

II.1 Antecedentes 4

II.2 Estudio Botánico 5

II.3 Estudio Farmacológico 6 III Material y Métodos 11 IV Resultados 22 V Discusión 41 VI Conclusiones 47 VII Referencias Bibliográficas 48 VIII Anexos 52

Resumen

Objetivo: El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto citoprotector y

antisecretor del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora) en

ratas con úlcera gástrica inducida y observar la presencia de reacciones

adversas. Métodos: Se emplearon 72 ratas fueron divididas en grupos de 6.

Para evaluar el efecto citoprotector, la úlcera fue inducida administrando

indometacina 30mg/kg; para evaluar el efecto antisecretor se realizó la ligadura

de píloro y para evaluar las reacciones adversas se administró el extracto

durante dos meses; las dosis administradas de extracto fueron de 200mg/kg y

400mg/kg, las cuales fueron comparadas con el omeprazol a dosis de 10mg/kg.

Resultados: El tratamiento con extracto de S. americanum Mill a dosis de

400mg/kg de peso, demostró efecto citoprotector, disminuyendo en 67% los

indicadores de congestión, edema y hemorragia, inducidas con indometacina,

sin embargo el omeprazol disminuyó en 67% los indicadores de congestión y

hemorragia y en 100%, el indicador de edema. En ligadura de píloro, el extracto

acuoso de S. americanum M. a dosis de 400mg/kg de peso, demostró efecto

antisecretor disminuyendo el volumen de la secreción gástrica en un 66% y

aumentando el pH en un 163%; comparado con omeprazol que disminuyó la

secreción gástrica en un 83.6% e incrementó el pH en un 201.5%. En la

determinación de efectos adversos, S. americanum M. demostró ser seguro a

dosis de 400mg/kg de peso. Conclusión: En las condiciones experimentales, el

extracto acuoso de S. americanum M. ha demostrado tener efecto antisecretor

y citoprotector en ratas con inducción de úlcera gástrica, y con mínimos efectos

adversos.

Palabras clave: Hierba mora; Solanum americanum; citoprotección, úlcera

gástrica, secreción gástrica.

Abstract

Aim: The aim of this study was to determine the cytoprotective and

antisecretory effect of extract aqueous of Solanum americanum Mill (hierba

mora) in rats with gastric ulcer induced and to observe the presence of adverse

reactions. Methods: We used 72 rats were divided en groups of 6. For the

cytoprotective effect, the ulcer was induced by administration of indomethacin

30mg/kg b.w.; the antisecretory effect by pylorus ligation and to evaluate the

adverse reactions the extract was administered for two months, the doses of

extract were 200mg / kg and 400mg/kg, which were compared with omeprazole

at a dose of 10mg/kg. Results: Treatment with extract of S. americanum Mill at

a dose of 400mg/kg b.w., showed cytoprotective effect, decreasing in 67% the

indicators of congestion, edema and hemorrhage induced with indomethacin,

however omeprazole decreased 67% the indicators of congestion and

hemorrhage, and 100% the indicator of edema. In pylorus-ligated, the extract

aqueous of S. americanum Mill a dose of 400mg/kg b.w., showed antisecretory

effect, decreasing the volume of gastric secretion in 66% and increasing pH in

163%, and the omeprazole reduced the gastric acid secretion in 83.6% and

increased the pH in 201.5%. In the determination of adverse effects, S.

americanum Mill proved to be safe at doses of 400mg/kg b.w. Conclusion: In

the experimentals conditions, the extract aqueous of S. americanum Mill

possesses antisecretory and cytoprotective effect in rats with induced gastric

ulcer, and with minimal side effects.

Key words: Hierba mora; Solanum americanum; Cytoprotection; Gastric Ulcer;

Gastric secretion.

1

I. INTRODUCCIÓN La úlcera gástrica es una de las enfermedades gastrointestinales más

comunes, y aunque según su etiología es importante porque el 70% de

ellas se debe a H. pylori, se sabe perfectamente que es una enfermedad

multifactorial y poligenética, y se considera que la hipersecreción ácida es

un factor clave en su patogenia. (Valdés et al., 2003) 1

La fisiopatología se refiere a un desequilibrio entre los factores agresivos

como son el ácido gástrico, pepsina, Helicobacter pylori, sales biliares y

los defensivos como son mucus, ión bicarbonato, barrera epitelial y

prostaglandina E de la mucosa gastroduodenal. (Cotran, 2002;

Hoogerwerf et al., 2001)2,3

Entre los fármacos empleados en el tratamiento farmacológico para la

úlcera péptica están los inhibidores de la bomba de protones, como el

omeprazol, los cuales son usados en los desórdenes relacionados con la

secreción gástrica, incluyendo reflujo gastroesofágico, enfermedades de

úlcera péptica ocasionadas por el stress, H. Pylori y antiinflamatorios no

esteroideos. (Wolfe et al., 2000; Martelli et al., 1998) 4,5

Solanum americanum, llamado también, hierba mora (Fuentes, 1996)6,

tomatillo del diablo, tomatillo, tabaco del diablo, tabaco cimarrón (Solanum

nigrum) es una planta herbácea de la familia de las solanáceas, de origen

sudamericano, y emparentada con la berenjena (Solanum melongena) y

el tomate (Solanum lycopersicum), crece silvestre en casi todo el mundo.

(Frohne et al., 1984) 7

En medicina popular, las hojas o la infusión en frío de las mismas se

emplean como sedante, antiinflamatorio, antipirético y purgante; la

sobredosis, sin embargo, puede ser fatal. (Frohne et al., 1984) 7

2

El presente estudio se justifica porque S. americanum ha demostrado

moderada actividad antioxidante in vitro y además el extracto metanólico

de la misma especie reveló tener efecto citoprotector (Iwalewa et al.,

2005)8. El extracto liposoluble de S. nigrum es antinocipeptivo,

antiinflamatorio y antipirético (Zakaria et al., 2006) 9. También se demostró

efecto antiulcerogénico en el fruto de Solanum nigrum en ratas,

concluyendo que inhibe la actividad de la bomba de H+/K+ ATP asa y

disminuye la secreción gástrica. (Jainu et al., 2006) 10

Al presente no se han encontrado investigaciones en nuestro medio

referente a la hierba mora, y sustentado este estudio como una alternativa

en el tratamiento de úlcera gástrica, se consideró como problema de

estudio: ¿El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora)

será citoprotector y antisecretor gástrico al ser administrado a ratas con

inducción de úlcera gástrica y no presentará efectos adversos?; siendo la

hipótesis de trabajo: El extracto acuoso de Solanum americanum Mill

(hierba mora) es un agente citoprotector y antisecretor gástrico, al ser

administrado a ratas con inducción de úlcera gástrica y no presenta

efectos adversos.

Por lo tanto los objetivos de la presente investigación fueron: 1) Identificar

los grupos de metabolitos secundarios del extracto acuoso de Solanum

americanum Mill (hierba mora), mediante el estudio fitoquímico preliminar;

2) Determinar el efecto citoprotector gástrico del extracto acuoso de

Solanum americanum Mill (hierba mora) administrado a ratas con úlcera

gástrica inducida por indometacina; 3) Determinar el efecto antisecretor

gástrico del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora)

administrado a ratas con ligazón de píloro; 4) Comparar el efecto

citoprotector y antisecretor gástrico del extracto acuoso de Solanum

americanum Mill (hierba mora) con omeprazol administrado a ratas con

inducción de úlcera gástrica; y, 5) Determinar los posibles efectos

adversos a nivel hematológico, bioquímico e histopatológico del extracto

3

acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora) administrado a ratas

por vía oral durante 60 días.

4

II. MARCO TEÓRICO

II.1 ANTECEDENTES

Un estudio in vitro de nueve tipos de vegetales comestibles provenientes

del Sur Este de Nigeria fueron evaluados para demostrar su efecto

antioxidante y citoprotector. Para evaluar la actividad antioxidante usaron

el radical libre 1,1-difenil-2-picrilhidrazil y para la actividad citoprotectora

aplicaron el ensayo de hemaglutinación con eritrocitos de bovino.

Concluyeron que de los nueve extractos, S. americanum tenía una

moderada actividad antioxidante y todas las plantas eran pro-oxidantes.

En relación al efecto citoprotector demostraron que los extractos de las

plantas, tenían un título de hemaglutinación muy baja entre 0.32 y 5.56

excepto el extracto metanólico de S. Americanum que presentaba valores

de 50. Estos resultados indicaron que existía correlación entre la actividad

antioxidante y los valores de hemaglutinación (Iwalewa,2005) 8

Estudios en roedores, demostraron que el extracto liposoluble de frutos

de S. nigrum, tenía propiedades antinocipeptivas, antiinflamatorias y

antipiréticas. El extracto fue preparado por maceración con cloroformo por

72 horas, luego sometido a evaporación a 40°C, secado y después fue

disuelto a 1:50 en dimetilsulfóxido. La dosis del extracto administrado fue

de 200mg/kg de peso. (Zakaria, 2006) 9

Jainu M y Devi C, demostraron efectos antiulcerogénicos del fruto de

Solanum nigrum en ratas, con úlcera gástrica inducida con indometacina

(30mg/kg), estrés, ligadura de píloro y etanol. A dosis altas de 400mg/kg

de S. nigrum inhiben las lesiones gástricas inducidas por estrés, ligadura

de píloro, etanol e indometacina. El extracto de frutos maduros de

Solanum nigrum demostró actividad antiulcerogénica al reducir la

secreción gástrica, con una eficacia igual o mayor que el omeprazol. El

estudio tuvo una duración de 7 días, con la conclusión de que el extracto

5

inhibe la actividad de la bomba de H+/K+ ATP asa y disminuye la

secreción gástrica. (Jainu, 2006) 10

Al presente no se ha encontrado antecedentes nacionales relacionados al

tema de investigación.

II.2 ESTUDIO BOTÁNICO

HIERBA MORA

Hierba mora, Solanum americanum Mill. Var. nodiflorum (Jacq.) Edmons

1971 (sinón.: Solanum nigrum L.), s.v. ají, ccaya-ccaya (Mexia), cajaya-

ccjaya (Herrera), Kaya-Kaya (Holguín), ñuchcu, pilliyuyu, hierba mora. El

cocimiento de las hojas se emplea en baños, en el tratamiento de la

erisepela, el cocimiento o la cataplasma se usa como un poderoso

analgésico para combatir reumatismos, neuralgias, etc., la maceración de

las hojas en agua se utiliza en enemas en la fiebre tifoidea y tifus

exantemático y el jugo de los frutos se aplica como antiinflamatorio.

(Soukup,1970) 11

Según el terreno y las condiciones de nutrición, puede llegar a ser

sumamente tóxica, conteniendo elevadas concentraciones de solanina,

un alcaloide que la planta emplea como defensa contra los predadores;

sin embargo, cuenta con cierto uso en fitoterapia. (Frohne, et al. 1984)7.

En la ciudad de Ica-Perú, la hierba mora es el Solanum nigrum M.,

también conocido como tomatillo del diablo. Planta herbácea,

cosmopolita, de tallo erguido y ramoso; con hojas pequeñas de bordes

dentados, casi blanquecinas. Las flores son pequeñas se agrupan en

corimbo, de color blancas en el centro se ven las anteras de color

amarillo. El fruto es una baya carnosa casi esférica de color negro.

(FITOICA, 2006) 12

6

La planta contiene glicoalcaloides (solanina, solasodina, solanigrina,

solamargina, 0.09%-0.65%), glicósidos esteroidales (β-solamargina,

solasonina y α, β-solansodamina), saponinas esteroidales (dios-genina

0.4-1.2%), genina esferoidal (gitogenina), taninos (7-10%) y componentes

fenólicos. Los frutos maduros contienen menos cantidad de alcaloides

(solanina). (Saijo et al., 1982; Son et al., 2003) 13,14

Estudios previos probaron que las antocianinas poseen efecto

antioxidante y antiulceroso en modelos experimentales con animales.

(Cristoni et al., 1987)15. Adicionalmente, también las saponinas, taninos y

aceites volátiles de algunas plantas son conocidos por poseer actividad

citoprotectora. (Aguwa et al., 1998)16

III.3 ESTUDIO FARMACOLÓGICO

ÚLCERA PÉPTICA

La úlcera péptica es una enfermedad crónica recurrente, en la cual por

acción del ácido y la pepsina, además de factores predisponentes, se

produce lesión ulcerosa de la mucosa digestiva, es decir una solución de

continuidad que atraviesa la capa muscular de la mucosa en cualquiera

de los segmentos superiores del tubo digestivo. (Cotran, 2002;

Hoogerwerf et al., 2001)2,3 (Figura 1)

La fisiología gástrica consiste en la secreción ácida en forma de ácido

clorhídrico; éste se forma cuando la bomba ATPasa - H+/K+ (localizada en

las membranas de las células parietales) expulsa hidrógeno a cambio de

iones potasio, y se conjuga con la secreción de cloruro. El estímulo de las

células parietales puede producirse a través de varios mecanismos:

estimulación nerviosa (vagal), endocrina (principalmente gastrina) y local

(histamina liberada por los mastocitos). La estimulación vagal y de

gastrina actúan incrementando el calcio intracelular, mientras que la

estimulación de histamina activa la formación de adenosin monofosfato

cíclico (AMPc). (Cotran, 2002) 2

7

La aparición de las lesiones ulcerosas en las mucosas proviene del

desequilibrio entre los agentes irritativos locales y los mecanismos

protectores. Entre los primeros destaca la propia secreción ácida gástrica,

ácidos biliares, Helicobacter pylori y enzimas proteolíticas como la

pepsina; entre los mecanismos protectores destaca la secreción de moco,

de carácter glucoproteico, ión bicarbonato (segregado por células

mucosas del antro y del duodeno), barrera epitelial y prostaglandina E de

la mucosa gastroduodenal. Las concentraciones elevadas de ácido

pueden producir por sí mismas, una lesión aguda en la mucosa del tubo

digestivo alto. Niveles de ácido más fisiológicos no causan lesión directa,

pero tienen un papel permisivo en el desarrollo de las erosiones

(ulceraciones) provocadas por otras causas. (Flores, 1990) 17

Fig 1: Úlcera Gástrica (Cotran, 2002) 2

Tipos de Úlcera: (Valdés et al., 2003)1

1. Tipo I: Se caracterizan por estar localizadas en la curvatura menor.

Puede deberse al tipo de circulación de la curvatura menor (más

fácilmente expuesto a alteraciones) y a la gran tensión cinética

ejercida por las contracciones peristálticas. Se caracterizan por:

8

hiposecreción, hipoacidez; algunos investigadores consideran que el

encontrar un pH alto no significa siempre que la cantidad de ácido es

producido en poca cantidad, y más bien es por alteraciones de la

mucosa se produce retrodifusión del ión hidrógeno con aumento del

pH.

2. Tipo II: asociadas con úlceras duodenales. Se caracterizan por tener

pH bajo, por la hipersecreción de ácido. El factor irritativo es claro, que

aprovecha cuando hay disminución de los factores defensivos. En

estudios de vaciamiento gástrico se observó que era el único tipo que

presentaba retraso en el vaciamiento gástrico, cosa que no ocurría en

las de tipo I y III.

3. Tipo III: asociadas con úlceras prepilóricas. Se caracterizan por que

hay pérdida de mecanismos defensivos (alteración de la barrera

mucosa). Existe un reflujo de bilis al estómago (se comprueba por

endoscopia), que tiene un gran poder detergente y que desintegra la

barrera mucosa.

Las manifestaciones clínicas de la enfermedad son: epigastralgia (dolor

tipo ardor quemante en epigastrio); en úlcera gástrica, el dolor aumenta

con la comida, se acompaña de náusea y se proyecta hacia el dorso; en

contraste a la úlcera duodenal que suele ser nocturno, se alivia con la

comida y antiácidos, el dolor es intermitente y su presencia y severidad

no guarda relación con la actividad de la úlcera, ya que hay muchos

casos asintomáticos. (Cotran, 2002) 2

TRATAMIENTO

El tratamiento farmacológico de la úlcera gástrica se clasifica de acuerdo

a su mecanismo de acción: Inhibidores de la secreción ácida, dentro de

ellos se encuentran, antihistamínicos H2, inhibidores de la bomba

ATPasa- H+/K+, anticolinérgicos y antagonistas de la gastrina. Otros

9

tratamientos, lo constituyen los neutralizantes de la secreción ácida,

antiácidos; protectores de la mucosa como son sales de bismuto coloidal,

sucralfato y análogos de la prostaglandinas y finalmente los Erradicadores

de H. pylori. (Flores, 1990; Brunton, 1996) 17,18

Los inhibidores de la ATPasa-H+/K+ actúan selectivamente sobre el

eslabón final del proceso de secreción ácida gástrica, la ATPasa-H+/K+ o

bomba de protones. Esta enzima representa un paso obligatorio en el

proceso de secreción de H+, y en contraste con los antagonistas H2, la

capacidad inhibitoria de estos fármacos es independiente del estímulo

desencadenante de la producción ácida. Todos ellos tienen propiedades

farmacodinámicas y farmacocinéticas muy similares, siendo el omeprazol

el compuesto principal de esta familia. (Flores, 1990) 17

Más del 90% de pacientes con úlcera duodenal y el 80-90% de pacientes

con úlcera gástrica tienen infección con H. pylori en antro pilórico, siendo

el más utilizado el esquema de erradicación triple: omeprazol, amoxicilina

y claritromicina. (Cotran, 2002) 2

El omeprazol forma parte del grupo de los inhibidores de la bomba de

protones, inhibe la secreción ácida por interactuar en forma irreversible

con la bomba de H+/K+ ATP asa de la célula parietal. (Sachs et al., 1997;

Fellenius et al.,1981)19,20

El omeprazol es una base débil (pKa=4) que, tras absorberse en el

intestino delgado y pasar a la sangre, alcanza la célula parietal. A valores

de pH fisiológicos, la molécula no está cargada eléctricamente y atraviesa

bien las membranas biológicas. En un medio ácido, como el existente en

el canalículo secretor de la célula parietal, su estructura molecular se

protoniza, pierde la capacidad lipófila y no puede retornar al interior de la

célula parietal. El omeprazol es un profármaco, ya que él mismo no

interacciona con la bomba de protones, sino que requiere la conversión

10

posterior de su forma protonizada en un compuesto tetracíclico activo

(derivado sulfonamido) por el medio ácido existente en el canalículo

secretor de la célula parietal. (Flores, 1990) 17

El omeprazol es convertido a ácido sulfénico, el cual reacciona con los

residuos de Cys-813 de la subunidad α catalítica de la bomba y origina el

denominado complejo inhibitorio. (Wolfe et al., 2000 ; Adelstein et al.,

1988 ; Mardh et al., 1988 ; Schubert et al., 1990)4,21,22,23

Los parámetros farmacocinéticos del omeprazol son: tiempo de vida

media menor de 1 hora, biodisponibilidad 35-60%, volumen de

distribución 0.3-0.4 L/kg y un porcentaje de unión a proteínas plasmáticas

95% (especialmente albúmina y α1-glicoproteína ácida). Estudios en

animales sugieren que puede atravesar la barrera hematoencefálica y la

placentaria. Se metaboliza rápidamente en el hígado, originándose dos

metabolitos (sulfona e hidroxiomeprazol) sin efecto antisecretor.

Aproximadamente el 80% de la dosis se elimina por la orina y el 20% por

bilis. Los parámetros farmacocinéticos no son modificados en

condiciones graves de insuficiencia renal, problemas hepáticos o en

ancianos. Dentro de las reacciones adversas se encuentran: Ceguera

transitoria, dolor abdominal, diarrea, dolor de cabeza, hepatotoxicidad,

pancreatitis, rash, prurito.

Interacciones farmacocinéticas: diazepam, fenitoína, warfarina,

ketoconazol, carbamazepina, antiretrovirales. (Flores, 1990) 17

11

III.MATERIAL Y MÉTODOS:

1. MATERIALES:

1.1. Material biológico:

72 ratas machos, raza Sprague-Dawley, del Instituto Nacional de

Salud, con peso de 225 ± 25g, se realizaron análisis de sangre y de

tejido de estómagos de la muestra de estudio.

Extracto acuoso de frutos maduros de S. americanum Mill (hierba

mora).

1.2. Material farmacológico:

8 tabletas de indometacina 25mg (Laboratorios Merck Sharp &

Dohme Perú S.R.L.)

Pentobarbital (Laboratorios Abbott)

5 tabletas de Omeprazol 20mg. (Laboratorios Corporación Infarmasa

S.A.)

Histamina (Laboratorios Lilly)

1.3. Material de laboratorio:

Equipos:

Estufa, Marca MEMMERT, modelo TV 305.

Centrífuga, Marca TERMO TEC, modelo central CL-2.

Microscopio electrónico, marca OLYMPUS

Balanza Analítica, marca OHAUS, modelo AS200.

Potenciómetro, marca CIMATEC S.A.C.

Instrumental de laboratorio de vidrio y otros:

Equipo de disección

Suturas Seda Negra Trenzada 5/0 TC 15 y Catgut Crómico 2/0

CR40 x 100 cm. (Cirugía S.A.)

Jaulas anticoprofágicas.

12

Bebederos de agua

Comida para ratas procedente del Instituto Nacional de Salud.

Viruta estéril

Equipo de cómputo Pentium IV (Marca LG).

2. MÉTODOS:

Estudio Fitoquímico preliminar. (Kokate et al, 1996) 24

Inducción de úlcera gástrica con una dosis simple de Indometacina.

(Bhattacharya et al., 2007) 25

Método experimental de ligazón de píloro según Shay modificado por

Ibrahim et al. (2007) 26

Comparación del efecto citoprotector y antisecretor con omeprazol. (Jainu

et al., 2006) 10

Toxicidad crónica a dosis repetidas por 60 días. (Organization for

Economic Cooperation and Development, 1995; Mosberg, 2000)27,28

2.1. Diseño experimental:

Los animales fueron acondicionados durante una semana.

Tiempo de estudio: 60 días

Se formaron 12 grupos, 6 ratas por grupo.

13

Tabla I.- Diseño Experimental

Grupo Tratamiento

I Control: Suero Fisiológico 2ml/kg peso VO.

II Indometacina 30mg/kg peso VIP

III Indometacina 30mg/kg peso VIP + Extracto acuoso de

frutos 200mg/kg peso VO.

IV Indometacina 30mg/kg peso VIP + Extracto acuoso de

frutos 400mg/kg peso VO.

V Indometacina 30mg/kg/peso VIP + Omeprazol

10mg/kg/peso VO.

VI Ligadura de Píloro

VII Ligadura de Píloro + Extracto acuoso de frutos 200mg/kg

peso VO.

VIII Ligadura de Píloro + Extracto acuoso de frutos 400mg/kg

peso VO.

IX Ligadura de Píloro + Omeprazol 10mg/kg/peso VO.

X Extracto acuoso de frutos (200mg/kg/peso VO)

XI Extracto acuoso de frutos (400mg/kg/peso VO)

XII Control: Suero Fisiológico 2ml/kg peso VO.

2.2. Identificación de los grupos de metabolitos secundarios del

extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora), y

estudio fitoquímico preliminar.

Identificación taxonómica de la planta:

Realizado por el Museo de Historia Natural de la Universidad

Nacional Mayor de San Marcos.

14

Preparación del extracto: (Jainu et al., 2006) 10

Se utilizaron sólo los frutos de la planta; el extracto se preparó por

cocción, 100g en un 1litro de agua, durante 20 minutos; se dejó

enfriar, luego se filtró y se dejó secar en 60°. El extracto seco se

pesó y se preparó una solución acuosa con agua destilada.

Para todos los ensayos se empleó una solución de 5mg/ml.

Estudio fitoquímico preliminar: (Kokate et al, 1996) 24

Se usó 0.5g del extracto seco y se disolvió en 1ml de metanol; luego

se colocó 0.1ml de ésta solución en tubos de ensayos, a los cuales

se añadieron los siguientes reactivos:

1. Tubo I: control.

2. Tubo II: Ninhidrina, para determinar la presencia o ausencia de

aminoácidos.

3. Tubo III: Gelatina, para determinar la presencia de taninos.

4. Tubo IV: FeCl3, para determinar la presencia o ausencia de

compuestos fenólicos.

5. Tubo V: Dragendorf, para determinar la presencia o ausencia de

Alcaloides.

6. Tubo VI: Mayer, para determinar la presencia o ausencia de

Alcaloides.

7. Tubo VII: NaOH, para determinar la presencia o ausencia de

Quinonas.

8. Tubo VIII: Lieberman, para determinar la presencia o ausencia de

Esteroides o triterpenoides.

9. Tubo IX: Molish: α naftol + H2SO4 (4 gtas), para determinar la

presencia o ausencia de Glicósidos.

10. Tubo X: Shinoda: Mg metálico + HCl (2 gtas), para determinar la

presencia o ausencia de flavonoides, enoles, aminoácidos,

glicósidos, terpenoides, según modelo.

15

2.3. Determinación del efecto citoprotector gástrico del extracto

acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora).

Método:



Diseño experimental para evaluar citoprotección

Grupo I: Grupo control, suero fisiológico 2ml/kg/peso VO.

Grupo II: Indometacina 30mg/kg/peso VIP.

Grupo III: Extracto acuoso de frutos 200mg/kg/peso VO. y a los

30min Indometacina 30mg/kg/peso VO.

Grupo IV: Extracto de acuoso de frutos 400mg/kg/peso y a los 30min

Indometacina 30mg/kg/peso VIP.

Procedimiento

Se preparó una solución de indometacina en agua destilada 5mg/ml,

administrándose una sola dosis de 30mg/kg/peso. El extracto seco

de los frutos de la planta se redisolvió con agua destilada,

obteniendo una solución de 5mg/ml.

Los grupos de tratamiento fueron como sigue:

Grupo I sólo recibió Suero Fisiológico 2ml/kg/peso VO.

Grupo III y IV se le administró extracto acuoso de frutos vía oral, la

dosis 200mg/kg/peso y 400mg/kg/peso respectivamente, en el

primer y segundo día del estudio; luego se les dejó en ayunas por

24h con agua a libertad. En el tercer día del estudio:

Al grupo II se les administró Indometacina 30mg/kg/peso vía

intraperitoneal.

Al grupo III, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 200mg/kg/peso vía oral y después de 30min recibieron

Indometacina 30mg/kg/peso vía intraperitoneal.

16

Al grupo IV, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 400mg/kg/peso vía oral y después de 30min recibieron

Indometacina 30mg/kg de peso vía intraperitoneal.

A las 6 horas de la administración de Indometacina, las ratas fueron

sacrificadas por administración de pentobarbital 100 mg/kg/peso.

Los estómagos de las ratas fueron retirados, luego abiertos a nivel

de la curvatura mayor, lavados delicadamente con suero fisiológico

para eliminar el detritus y fijados en una placa de tecnopor para la

observación macroscópica y cuantificación de lesiones gástricas;

luego, fueron colocados en un recipiente con formol tamponado

(Formol 40% (100 mL) + sodio fosfato monobásico

monohidratado (4 g) + sodio fosfato dibásico anhidro (6.5 g) + agua

destilada csp un litro) para el estudio microscópico.

Indicadores de evaluación

Estudio macroscópico y microscópico: Congestión, Edema,

Hemorragia expresados en Ninguno = 0; leve = 1; moderado = 2;

severo = 3.

2.4. Determinación del efecto antisecretor gástrico del extracto

acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora).

Método:



Diseño experimental para evaluar el efecto antisecretorio

Grupo VI: Ligadura de píloro.

Grupo VII: Extracto acuoso de frutos (200mg/kg/peso VO) y a los 30

min ligadura de píloro.

Grupo VIII: Extracto acuoso de frutos (400mg/kg/peso VO) y a los 30


17

Procedimiento

Los grupos de tratamiento fueron los siguientes:

Grupo VII y VIII se le administró extracto acuoso de frutos VO, a dosis

de 200mg/kg/peso y 400mg/kg/peso respectivamente, en el primer y

segundo día del estudio; luego se les dejó en ayunas por 24h con

agua a libertad. En el tercer día del estudio:

Al Grupo VI, se le practicó ligadura de píloro.

Al grupo VII, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 200mg/kg/peso vía oral y a los 30min se practicó la ligadura

de píloro, usando como anestésico pentobarbital 30mg/kg/ peso.

Al grupo VIII, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 400mg/kg/peso vía oral y a los 30min se practicó la ligadura

de píloro, usando como anestésico pentobarbital 30mg/kg/ peso.

A las 4 horas de haber practicado la ligadura de píloro, las ratas

fueron sacrificadas por administración de pentobarbital 100

mg/kg/peso.

Los estómagos fueron retirados, luego se realizó una punción a nivel

de la curvatura mayor del estómago, el jugo gástrico fue recolectado

en tubos de ensayo y luego centrifugados para medir el volumen en

mililitros.

Los estómagos de las ratas fueron abiertos a nivel de la curvatura

mayor, lavados delicadamente con suero fisiológico para eliminar el

detritus y fijados en una placa de tecnopor para la observación

macroscópica y cuantificación de lesiones gástricas; luego, fueron

colocados en un recipiente con formol tamponado (Formol 40% (100

mL) + sodio fosfato monobásico monohidratado (4g) + sodio fosfato

dibásico anhidro (6.5 g) + agua destilada csp un litro) para el estudio

microscópico.

18


Cantidad de jugo gástrico en mililitros.

pH de la Solución

Miliequivalentes de iones hidrógeno para determinar el grado de

acidez.

2.5. Comparación del efecto citoprotector y antisecretor gástrico del

extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora) con

omeprazol.

Método:





Comparación del efecto citoprotector y antisecretor con omeprazol.

(Jainu et al., 2006) 10

Diseño experimental

Grupo III, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 200mg/kg/peso vía oral y a los 30min recibieron


Grupo IV, primero se les administró extracto acuoso de frutos a la

dosis de 400mg/kg/peso vía oral y a los 30min recibieron


Grupo V: Omeprazol (10mg/kg/peso VO) y a los 30min Indometacina

30mg/kg/peso VIP.

Grupo VII: Extracto acuoso de frutos (200mg/kg/peso VO) y a los 30


Grupo VIII: Extracto acuoso de frutos (400mg/kg/peso VO) y a los 30


19

Grupo IX: Omeprazol (10mg/kg/peso VO) y a los 30 min ligadura de

píloro.

Procedimiento

Grupo V, primero se les administró Omeprazol a la dosis de

10mg/kg/peso vía oral y a los 30min recibieron Indometacina

30mg/kg/peso vía intraperitoneal.

Grupo IX primero se les administró Omeprazol a dosis de

10mg/kg/peso vía oral y a los 30 min se le practicó ligadura de píloro.

Para practicar la ligadura de píloro en las ratas de los grupos VII, VIII y

IX, se usó como anestésico, pentobarbital 30mg/kg/peso.

Se comparó el efecto citoprotector gástrico del omeprazol en el grupo

V con el efecto del extracto acuoso de Solanum americanum Mill

(hierba mora) en los grupos III y IV.

Se comparó el efecto antisecretor gástrico del omeprazol en el grupo

IX con el efecto del extracto acuoso de Solanum americanum Mill

(hierba mora) en los grupos VII y VIII.

Las ratas de los grupos III, IV y V, fueron sacrificadas a las 6 horas de

la administración de Indometacina por administración de pentobarbital

100 mg/kg/peso. Los estómagos de las ratas fueron retirados, luego

abiertos a nivel de la curvatura mayor, lavados delicadamente con

suero fisiológico para eliminar el detritus y fijados en una placa de

tecnopor para la observación macroscópica y cuantificación de

lesiones gástricas; luego, fueron colocados en un recipiente con

formol tamponado (Formol 40% (100 mL) + sodio fosfato

monobásico monohidratado (4g) + sodio fosfato dibásico anhidro (6.5

g) + agua destilada csp un litro) para el estudio microscópico.

Las ratas de los grupos VII, VIII y IX, fueron sacrificadas a las 4 horas,

por administración de pentobarbital 100 mg/kg/peso. Los estómagos

fueron retirados, luego se realizó una punción a nivel de la curvatura

mayor del estómago, el jugo gástrico fue recolectado en tubos de

ensayo y luego centrifugados para medir el volumen en mililitros.

20

Los estómagos de las ratas fueron abiertos a nivel de la curvatura

mayor, lavados delicadamente con suero fisiológico para eliminar el

detritus y fijados en una placa de tecnopor para la observación

macroscópica y cuantificación de lesiones gástricas; luego, fueron

colocados en un recipiente con formol tamponado (Formol 40% (100

mL) + sodio fosfato monobásico monohidratado (4g) + sodio fosfato

dibásico anhidro (6.5 g) + agua destilada csp un litro) para el estudio

microscópico.




severo = 3.

Cantidad de jugo gástrico en mililitros.

pH de la Solución.

Miliequivalentes de iones hidrógeno determinar el grado de acidez.

2.6. Determinación de la toxicidad crónica a dosis repetidas por 60

días del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba

mora).

Método:

La determinación de los efectos adversos fue a través de la

observación de posibles cambios hematológicos, bioquímicos e

histopatológicos. (Organization for Economic Cooperation and

Development, 1995; Mosberg, 2000)27,28

Diseño experimental:

Grupo X: Extracto acuoso de frutos (200mg/kg/peso/ VO), 1 vez/día

Grupo XI: Extracto acuoso de frutos (400mg/kg/peso VO), 1 vez/día

Grupo XII: Control, recibió suero fisiológico 2ml/kg/peso VO, 1 vez/día

21

Procedimiento:

Se administraron los tratamientos por un periodo de 60 días. Al

término de éste, se recolectó sangre por punción cardiaca para

realizar las pruebas hematológicas y bioquímicas y luego los animales

fueron sacrificados por administración de pentobarbital 100

mg/kg/peso, para realizar el estudio histopatológico.


Hematológicos: hemoglobina, hematocrito, volumen corpuscular

medio.

Bioquímicas: glucosa, úrea, perfil hepático.

Histopatológico de hígado y riñón: congestión, edema, hemorragia.



severo = 3.

3. TRATAMIENTO ESTADÍSTICO DE DATOS

El procesamiento de la información fue mediante el software

Bioestadística SPSS versión 12.

Todos los resultados, cualitativos y cuantitativos, fueron expresados en

promedio (media) y desviación estándar; los datos fueron sometidos a

análisis de varianza (ANOVA).

El intervalo de confianza fue del 95%, p < 0.05. (Jainu et al., 2006) 10

4. CONSIDERACIONES ÉTICAS

Para evitar el sufrimiento de los animales de experimentación fue

necesario la administración de un anestésico para realizar el

procedimiento de la ligadura de píloro y antes de sacrificar a los animales.

(Jainu et al., 2006; Pardo, 2005) 10,29

22

IV. RESULTADOS

1. Estudio Fitoquímico

Identificación taxonómica de la planta: (Museo de Historia Natural

de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos)

División: MAGNOLIOPHYTA

Clase: MANOLIOPSIDA

Sub clase: ASTERIDAE

Orden: SOLANALES

Familia: SOLANACEAE

Género: Solanum

Especie: Solanum americanum Mill

Nombre Vulgar: “Hierba Mora”

Fig 2: Solanum americanum Mill “Hierba Mora”

23

Fig 3: Localización de Solanum americanum Mill “Hierba Mora”

Rendimiento del extracto

Calculado para 100 gramos de frutos de la planta:

% P = 5g/100g x 100 = 5%

24

2. Tabla II.- Marcha fitoquímica del extracto acuoso de Solanum

americanum Mill

TUBOS REACTIVO TIPO DE COMPUESTO RESULTADOS I Blanco -

II Ninhidrina Aminoácidos -

III Gelatina Taninos +

IV FeCl3 Taninos, compuestos fenólicos +++

V Dragendorf Alcaloides +

VI Mayer Alcaloides +

VII NaOH Quinonas -

VIII Lieberman Esteroides o triterpenoides +

IX

Molish: α naftol + H2SO4 (4 gtas) Carbohidratos y glicósidos +

X

Shinoda: Mg metálico + HCl (2 gtas) Flavonoides +

Leyenda: Ninguno = (-); Poca cantidad = (+); Regular cantidad = (++); Abundante

cantidad = (+++)

La tabla II, muestra la presencia en gran cantidad de compuestos fenólicos

en el extracto de frutos de Solanum americanum Mill.

3. Tabla III. Efecto citoprotector del extracto acuoso de Solanum

americanum Mill

GRUPO

TRATAMIENTO

Congestión

(X ± SD)

Edema (X ± SD)

Hemorragia

(X ± SD) I

Control normal

0

0

0

II

Indometacina 30mg/kg (I)

3

3

3

III

I + extracto 200 mg/kg

2

2

2

IV


0.83 ± 0.41

0.83 ± 0.41

0.83 ± 0.41

V

I + omeprazol 10mg/kg

1

0

1

Leyenda: Ninguno = (0); leve = (1); moderado = (2); severo = (3).

25

La tabla III, muestra que el extracto de S. americanum Mill a dosis de

400mg/kg/peso disminuye los indicadores de congestión, edema y

hemorragia en úlcera inducida con indometacina en ratas, con resultados

similares al omeprazol (p < 0.05).

Fig 4: Efecto protector del extracto de Solanum americanum Mill sobre la congestión de mucosa al inducir úlcera gástrica en ratas (p< 0.05).

26

Fig 5: Efecto protector del extracto de Solanum americanum Mill sobre el edema de mucosa al inducir úlcera gástrica en ratas (p< 0.05).

Fig 6: Efecto protector del extracto de Solanum americanum Mill sobre la hemorragia de mucosa al inducir úlcera gástrica en ratas (p< 0.05).

27

Fig 7: Mucosa de cuerpo gástrico en grupo control sin cambios morfológicos. Coloración hematoxilina eosina (40X)

Fig 8: Mucosa de cuerpo gástrico en grupo con indometacina a dosis 30mg/kg, con cambios morfológicos, degenerativos, principalmente se observa, congestión, edema y hemorragia. Coloración hematoxilina eosina (40X)

28

Fig 9: Mucosa de cuerpo gástrico en grupo con tratamiento de extracto acuoso de Solanum americanum Mill a dosis 200mg/kg, principalmente se observa congestión y edema. Coloración hematoxilina eosina (40X)

Fig 10: Mucosa de cuerpo gástrico en grupo con tratamiento de extracto acuoso de Solanum americanum Mill a dosis 400mg/kg sin cambios morfológicos. Coloración hematoxilina eosina (40X)

29

Fig 11: Mucosa de cuerpo gástrico en grupo con tratamiento de omeprazol 10mg/kg, sin cambios morfológicos y con mejoramiento del edema, congestión y hemorragia. Coloración hematoxilina eosina (40X)

30

4. Tabla IV. Porcentaje de eficacia citoprotectora del extracto

acuoso de Solanum americanum Mill

DISMINUCIÓN

GRUPO

TRATAMIENTO Congestión

Edema

Hemorragia

I

Control normal

100%

100%

100%

II

Indometacina 30mg/kg (I)

0%

0%

0%

III


33%

33%

33%

IV


72%

72%

72%

V

I + omeprazol 10mg/kg

67%

100%

67%

La tabla IV, muestra que el extracto de S. americanum Mill a dosis de

400mg/kg ha disminuido en un 72% los indicadores de congestión, edema y

hemorragia. Por otro lado, el omeprazol muestra que ha disminuido en un

67% los indicadores de congestión y hemorragia y en un 100% el indicador

de edema en úlcera inducida con indometacina en ratas (p < 0.05).

Fórmula:

100 - Indicador de grupo con extracto/omeprazol x 100

Indicador de grupo con indometacina

31

0%

20%

40%

60%

80%

100%

120%

Control normal Indometacina

30mg/kg (I)

I + extracto

200 mg/kg

I + extracto

400 mg/kg

I + omeprazol

10mg/kg

TRATAMIENTO

% E

FIC

AC

IA C

ITO

PR

OT

EC

TO

RA

Congestión

Edema

Hemorragia

Leyenda: Control normal = mucosa íntegra; I = Indometacina; I + extracto 200mg/kg = Indometacina + extracto 200mg/kg ; I + extracto 400mg/kg = Indometacina + extracto

400mg/kg ; I + omeprazol 10mg/kg = Indometacina + omeprazol 10mg/kg.

Fig 12: Porcentaje de eficacia citoprotectora del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (p<0.05).

32

5. Tabla V. Efecto antisecretor del extracto acuoso de Solanum americanum Mill

GRUPO

TRATAMIENTO

VOLUMEN (ml)

(X ± SD)

pH

(X ± SD)

Meq de iones H+

(X ± SD)

VI Ligadura Píloro (LP)

5.0 ± 0.13

1.34 ± 0.07

6.71 ± 0.37

VII

LP + extracto 200 mg/kg

3.41 ± 0.02

2.38 ± 0.07

8.12 ± 0.26

VIII


1.7 ± 0.11

3.53 ± 0.17

6.02 ± 0.54

IX

LP + omeprazol 10mg/kg

0.82 ± 0.13

4.04 ± 0.13

3.31 ± 0.57

La tabla V, muestra que el extracto de S. americanum Mill disminuye la secreción gástrica y aumenta el pH en ligadura de píloro en ratas (p<0.05).

Leyenda: LP = ligadura de píloro; LP+E(200mg/kg) = ligadura de píloro + extracto 200mg/kg ; LP+E(400mg/kg) = Ligadura de píloro + extracto 400mg/kg; LP+O(10mg/kg) = ligadura de píloro + omeprazol 10mg/kg.

Fig 13: Efecto antisecretor del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (p<0.05).

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

LP LP+

E(200mg/kg)

LP+

E(400mg/kg)

LP+

O(10mg/kg)

TRATAMIENTO

VOLUMEN (ml)

pH

meq

33

6. Tabla VI. Porcentaje de eficacia antisecretora del extracto acuoso de Solanum americanum Mill

GRUPO

TRATAMIENTO

VOLUMEN

(ml)

% EFICACIA

ANTISECRETORA

VI Ligadura Píloro (LP)

5.0 ± 0.13

0%

VII


3.41 ± 0.02

31.8%

VIII


1.7 ± 0.11

66%

IX


0.82 ± 0.13

83.6%

La tabla VI, muestra que el extracto de S. americanum Mill a dosis de

400mg/kg de peso, presenta un porcentaje de eficacia antisecretora de

66%. El omeprazol presenta un porcentaje de eficacia antisecretora de

83.6% (p<0.05).

Fórmula:

100 - Grupo con tratamiento de extracto/omeprazol x 100

Grupo con ligadura de píloro

34

Leyenda: LP = ligadura de píloro; LP+E(200mg/kg) = ligadura de píloro + extracto

200mg/kg ; LP+E(400mg/kg) = Ligadura de píloro + extracto 400mg/kg; LP+O(10mg/kg) = ligadura de píloro + omeprazol 10mg/kg.

Fig 14: Porcentaje de eficacia antisecretora del extracto acuoso de Solanum americanum Mill (p<0.05).

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

LP LP +

E(200mg/kg)

LP +

E(400mg/kg)

LP + O(10mg/kg)

TRATAMIENTO

% E

FIC

AC

IA A

NT

ISE

CR

ET

OR

A

35

7. Tabla VII. Porcentaje de eficacia del extracto acuoso de Solanum americanum Mill en el pH del jugo gástrico

GRUPO

TRATAMIENTO

pH

% EFICACIA EN EL pH DEL JUGO GÁSTRICO

VI

Ligadura Píloro (LP)

1.34 ± 0.07

0%

VII


2.38 ± 0.07

77.6%

VIII


3.53 ± 0.17

163.4%

IX


4.04 ± 0.13

201.5%

La tabla VII, muestra que el extracto de S. americanum Mill a dosis de

400mg/kg de peso aumenta el pH en ligadura de píloro en ratas en un

163%. El omeprazol incrementa el pH en un 201.5%, en ligadura de píloro

en ratas (p<0.05).

Fórmula:

Grupo con tratamiento de extracto/omeprazol x 100 - 100

Grupo con ligadura de píloro

36

Leyenda: LP = ligadura de píloro; LP+E(200mg/kg) = ligadura de píloro + extracto 200mg/kg ; LP+E(400mg/kg) = Ligadura de píloro + extracto 400mg/kg; LP+O(10mg/kg) = ligadura de píloro + omeprazol 10mg/kg.

Fig 15: Porcentaje de eficacia del extracto acuoso de Solanum americanum Mill en el pH del jugo gástrico (p<0.05).

Fig 16: Relación entre volumen (mL) y pH del jugo gástrico.

0

50

100

150

200

250

300

350

LP LP+ E(200mg/kg) LP+ E(400mg/kg) LP+ O(10mg/kg)

TRATAMIENTO

PO

RC

EN

TA

JE

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

0 1 2 3 4 5 6

VOLUMEN JUGO GÁSTRICO (mL)

VA

LO

RE

S p

H

37

8. Tabla VIII. Toxicidad crónica a dosis repetidas por 60 días del

extracto acuoso de Solanum americanum Mill

VIII.1.- Pruebas hematológicas en ratas que recibieron extracto

acuoso de Solanum americanum Mill por vía oral durante 60 días:

GRUPO

TRATAMIENTO

Hb

Hto

VCM

X

Control SSF 4 mL/kg

14.95 ± 1.07

41.33 ± 2.33

50.92 ± 3.18

XI

Extracto 200 mg/kg

15.18 ± 1.25

40.60 ± 1.52

52.58 ± 1.55

XII

Extracto 400 mg/kg

15.00 ± 0.94

41.5 ± 1.05

52.37 ± 2.76

La tabla VIII.1, Pruebas hematológicas realizadas a los grupos que

recibieron el extracto de S. americanum Mill durante 60 días, muestra que

no produce efectos adversos, al no existir diferencia significativa con el

grupo control (p<0.05).

VIII.2.- Pruebas bioquímicas en ratas que recibieron extracto acuoso

de Solanum americanum Mill por vía oral durante 60 días:

GRUPO

TRATAMIENTO

GOT

GPT

FA

COLESTEROL TOTAL

PROTEÍ

NAS TOTAL

ES

ALBÚM

INAS

GLOBULINAS

Glu

cosa

Urea

X

Control SSF 4 mL/kg

10.94 ± 1.44

14.29 ± 1.06

180.9 ± 2.59

75.08 ± 6.43

4.14 ± 0.16

3.02 ± 0.14

1.22 ± 0.14

77.31 ± 2.13

50.34 ± 2.9

XI

Extracto 200 mg/kg

10.51 ± 0.88

13.98 ± 0.62

179.4 ± 2.55

76.48 ± 3.11

4.13 ± 0.21

2.93 ± 0.25

1.28 ± 0.15

79.22 ± 1.76

50.48 ± 2.75

XII

Extracto 400 mg/kg

11.24 ± 0.73

14.55 ± 0.78

180.8 ± 1.23

73.43 ± 4.86

4.08 ± 0.19

2.97 ± 0.28

1.23 ± 0.25

77.58 ± 3.52

51.78 ± 1.66

Leyenda: GOT =(Transaminasa glutámico oxalacética); GPT =(Transaminasa

glutámico pirúvica); FA = (Fosfatasa alcalina).

38

La tabla VIII.2, Pruebas bioquímicas realizadas a los grupos que

recibieron el extracto de S. americanum Mill durante 60 días, muestra que

no produce efectos adversos, al no existir diferencia significativa con el

grupo control (p<0.05).

VIII.3.- Estudio histopatológico de hígado y riñón de ratas que

recibieron extracto acuoso de Solanum americanum Mill por vía oral

durante 60 días:

GRUPO

TRATAMIENTO

Congestión

Edema

Hemorragia

X

Control SSF 2 mL/kg

0

0

0

XI

Extracto 200 mg/kg

0

0

0

XII

Extracto 400 mg/kg

0

0

0

Leyenda: Ninguno = (0); leve = (1); moderado = (2); severo = (3).

La tabla VIII.3, Estudio histopatológico de hígado y riñón realizado a los

grupos que recibieron el extracto de S. americanum Mill durante 60 días,

muestra que no produce efectos adversos, al no existir diferencia con el

grupo control.

39

Fig 17: Corte de tejido hepático después de 60 días de administración de extracto acuoso de Solanum americanum Mill a dosis 400mg/kg, sin cambios morfológicos. Coloración hematoxilina eosina (40X).

40

Fig 18: Corte de tejido de riñón (túbulos normales) después de 60 días de administración de extracto acuoso de Solanum americanum Mill a dosis 400mg/kg, sin cambios morfológicos. Coloración hematoxilina eosina (40X).

Fig 19: Corte de tejido de riñón (glomérulos normales) después de 60 días de administración de extracto acuoso de Solanum americanum Mill a dosis 400mg/kg, sin cambios morfológicos. Coloración hematoxilina eosina (40X).

41

V. DISCUSIÓN

Se ha demostrado el efecto citoprotector y antisecretor de Solanum

americanum Mill sin efectos adversos, según diseño experimental de la

Tabla I. A continuación se da explicación de los resultados encontrados

en el presente estudio.

En la Tabla II, se muestra que se han encontrado gran cantidad de

compuestos fenólicos en el extracto de la planta ensayada; hallazgos

similares encontrados por otros autores, quienes reportan que los frutos

maduros de Solanum nigrum de procedencia de la India, presentan

glicósidos esteroidales (β-solamargina, solasonina y α, β-solansodamina),

saponinas esteroidales (dios-genina 0.4-1.2%), geninas esteroidales

(gitogenina), taninos (7-10%) y componentes polifenólicos. (Saijo et al.,

1982; Son et al., 2003) 13,14

Los compuestos fenólicos, clasificados como metabolitos secundarios,

son los que se encuentran en mayor cantidad en las plantas y presentan

actividad antioxidante (Zheng, 2001)30; entre estos tenemos a los taninos,

flavonoides, proantocianinas; los taninos condensados son llamados

antocianinas, brindando propiedades antiulcerosas y citoprotectoras.

(Aguwa et al., 1998) 16

Los flavonoides, presentan actividad sobre el sistema vascular como

aumento de la permeabilidad y disminución de la resistencia de los

capilares sanguíneos. Actúa inhibiendo distintos sistemas enzimáticos

relacionados con la funcionalidad de los vasos (hialuronidasa, catecol-O-

metiltransferasa, fosfodiesterasa-AMPc, PKC, etc). Además, también

presentan actividad antiagregante plaquetaria, antiinflamatoria y

captadora de radicales libres. (Fujisawa et al., 2002 ; Frei et al., 2003)31, 32

42

Los antocianósidos, también poseen actividad antiinflamatoria,

antiagregante plaquetaria y, al igual que otros compuestos fenólicos,

actividad antioxidante. Además los antocianósidos se emplean en

oftalmología en el tratamiento de trastornos circulatorios a nivel de la

retina. (Tsuda, 2000)33

La úlcera fue inducida con una dosis tóxica de indometacina

produciéndose lesiones caracterizadas por congestión, edema y

hemorragia. (Bhattacharya et al., 2007; Ibrahim et al., 2007; Szabo et al.,

1985; Morise et al., 1998; Djahanguiri, 1969) 25,26,34,35,36

La indometacina por ser un antiinflamatorio no esteroidal, analgésico y

antipirético, actúa inhibiendo, en forma reversible y competitiva, la

ciclooxigenasa-1 (localizada principalmente en riñón y tracto

gastrointestinal) y por consiguiente la formación de prostaglandinas a

nivel central y periférico, lo cual es esencial para la integridad de la

mucosa. Tiene como efecto adverso principal, la irritación de la mucosa

gástrica, erosión, ulceración, melena y hematemesis. (Flores, 1990;

Brunton, 2006)17,18

La úlcera gástrica es una de las reacciones adversas de los

antiinflamatorios no esteroidales, éstos causan daño por diferentes

mecanismos, incluyendo efecto irritante en el epitelio, supresión de la

síntesis de prostaglandinas, interfiere con la hemostasia e inactiva los

factores de crecimiento, importante en la defensa y reparación del epitelio

gástrico. (Wallace, 2000; Whittle, 2003) 37,38

La tabla III y las figuras 4, 5 y 6 demuestran que Solanum americanum M.

tiene efecto citoprotector al actuar sobre la úlcera gástrica inducida con

indometacina disminuyendo los indicadores de congestión, edema y

hemorragia pero en menor grado que el omeprazol; así mismo según el

43

examen histopatológico de las figuras 7, 8, 9, 10 y 11, se observa la

mejora del tratamiento con el extracto de la planta; ésto se explicaría por

la presencia de compuestos fenólicos, los cuales tienen actividad

antioxidante (captadoras de radicales libres), antiinflamatorio y

antiagregante plaquetario. Los radicales libres producen daño endotelial,

deterioro de células adyacentes, desencadenando una respuesta

inflamatoria y finalmente lesión ulcerosa. (Aguwa et al., 1998) 16

En la tabla IV y figura 12, Solanum americanum M. se muestra la eficacia

citoprotectora, después de la administración a dosis de 200mg/kg de peso

y 400mg/kg de peso en úlcera inducida en ratas; el estudio demostró una

reducción del daño de la mucosa gástrica inducida por indometacina en

un 72% a dosis de 400mg/kg de peso, indicando el probable incremento

local de la síntesis de prostaglandinas. Sin embargo el omeprazol mostró

una reducción del 67% en los indicadores de congestión y hemorragia y

el 100% en el indicador de edema, demostrando que tiene mayor eficacia

citoprotectora que el extracto; hallazgos similares a los obtenidos por

Jainu, et al. (2006) 10.

Para evaluar el efecto antisecretor se ha utilizado el método de la ligadura

de píloro, el cuál consiste en ligar a la altura del píloro (entre el estómago

y el intestino delgado) a fin de que el contenido del intestino no se mezcle

con el contenido gástrico, aumentando así la secreción gástrica, el mismo

que al estar en mayor tiempo en contacto con la mucosa gástrica

ocasiona lesiones gástricas y en muchos casos úlcera gástrica. (Ibrahim

et al., 2007; Shay et al., 1945) 26,39

En la tabla V y figura 13, se muestra el volumen en mililitros y el pH del

jugo gástrico del estómago de las ratas, demostrando que Solanum

americanum M. tiene efecto antisecretor y que al compararse con el

omeprazol tiene menor efecto que este último. El omeprazol forma parte

44

del grupo de los inhibidores de la bomba de protones, inhibe la secreción

ácida por interactuar en forma irreversible con la bomba de H+/K+ ATP

asa de la célula parietal. (Brunton, 1996; Sachs et al., 1997; Fellenius et

al., 1981)18,19,20 . El omeprazol se administra 30 minutos antes porque

actúa como profiláctico y reduce la aparición de úlcera gástrica.

En la Tabla VI y figura 14, el extracto de S. americanum Mill comparado

con el grupo control disminuye la secreción gástrica en un 66%; sin

embargo el omeprazol, disminuye la secreción gástrica en un 83.6%,

porcentajes de eficacia similares a los obtenidos por Jainu, et al. (2006) 10.

El estrés inducido por la ligadura de píloro incrementa la producción de

ácido y pepsina; lo que al encontrarse en mayor contacto con la mucosa

gástrica provoca la aparición de úlceras (Goel et al., 1991)40. Después de

la administración de extracto, observamos que éste disminuye las

lesiones y la secreción gástrica probablemente debido a la inhibición de la

bomba de H+/K+ ATP asa. (Baggio et al., 2003)41

En la Tabla VII y figura 15, el extracto de S. americanum Mill comparado

con el grupo control aumenta el pH en un 163%; sin embargo el

omeprazol, lo incrementa en un 201.5%, porcentajes de eficacia similares

a los obtenidos por Jainu, et al. (2006) 10 y esto se explicaría porque el

extracto actuaría inhibiendo la bomba de H+/K+ ATP asa y por lo tanto

modificando el pH del jugo gástrico.

En la figura 16, se muestra la relación entre el volumen de jugo gástrico y

el pH de la solución, a mayor volumen menor valor de pH, es decir más

acidez del jugo gástrico y a menor volumen, mayor valor de pH, es decir

menos ácido o más básico y esto estaría relacionado con la inhibición de

la bomba de H+/K+ ATP asa y la modificación del pH del jugo gástrico.

45

El presente estudio aporta un evidencia importante del efecto citoprotector

y antisecretor del extracto acuoso de S. americanum Mill, al inhibir la

úlcera inducida con indometacina, confirmado con el estudio

histopatológico y al disminuir la secreción gástrica y disminuir su acidez;

lo cual implicaría la posibilidad de ser una alternativa en el tratamiento de

úlcera gástrica y con la ventaja frente al omeprazol de no producir

reacciones adversas como: ceguera transitoria, dolor abdominal, diarrea,

dolor de cabeza, hepatotoxicidad, pancreatitis, rash, prurito. (Flores, 1990;

Brunton, 2006)17,18

Los estudios de toxicidad crónica a dosis repetidas por 60 días del

extracto acuoso del fruto de Solanum americanum M. administrado a

ratas normales en dosis de 200mg/kg y 400mg/kg de peso, fue realizado

mediante pruebas a nivel hematológico, bioquímico e histopatológico. Las

pruebas hematológicas y bioquímicas han sido de gran valor ya que

indican el alcance y profundidad de un daño, además de que sus

resultados pueden indicar posibles daños sobre un órgano específico.

Las pruebas hematológicas de hemoglobina, hematocrito y volumen

corpuscular medio que se presentan en la tabla VIII.1, muestra que no

presenta reacciones adversas a nivel hematológico ya que los niveles se

presentan dentro de los valores que presenta el grupo control,

demostrando así que S. americanum M. no produce alteraciones

sanguíneas y por lo tanto no presenta implicancias significativas a nivel

hematológico.

Las pruebas bioquímicas de glucosa, úrea, perfil hepático (Transaminasa

glutámico oxalacética, transaminasa glutámico pirúvica, fosfatasa alcalina,

colesterol total, proteínas totales, albúminas, globulinas) que se presentan

en la tabla VIII.2, muestra que no presenta reacciones adversas a nivel

hepático ya que los niveles se encuentran dentro de los valores que

46

presenta el grupo control, demostrando así que S. americanum M. no

produce daño hepático. Estos hallazgos se explicaría por la presencia de

compuestos fenólicos, los cuales presentan actividad, antiinflamatoria y

captadora de radicales libres, es decir actividad antioxidante. (Fujisawa et

al., 2002 ; Frei et al., 2003; Tsuda, 2000)31,32,33

Las pruebas histopatológicas de congestión, edema y hemorragia que se

presentan en la tabla VIII.3 y en las figuras 17, 18 y 19 muestran que no

presenta reacciones adversas a nivel histopatológico, demostrando así

que S. americanum M. no produce lesiones tisulares en los diferentes

órganos vitales. Estos hallazgos se explicaría a la presencia de

compuestos fenólicos, los cuales presentan actividad, antiinflamatoria y

captadora de radicales libres, es decir actividad antioxidante. (Fujisawa et

al., 2002 ; Frei et al., 2003 ; Tsuda, 2000)31,32,33

Se podría afirmar que la administración del extracto acuso de S.

americanum M. por vía oral a dosis repetidas por 60 días de

400mg/kg/peso, no ha producido alteraciones o modificaciones que se

puedan interpretar como daño.

El extracto acuoso de S. americanum M. ha demostrado ser

antiinflamatorio y antioxidante y podría ser usado en procesos

inflamatorios, en úlcera gástrica y por no producir reacciones adversas es

una ventaja frente a otras alternativas de tratamiento. Así mismo

evaluando costo beneficio el procesamiento de la planta tiene menor

costo al compararse con la fabricación de medicamentos; por todo lo

mencionado, se recomienda se realicen estudios para determinar el

efecto de S. americamum M. en la concentración de gastrina y pepsina,

en cáncer, determinación de la actividad antioxidante, evaluación de la

producción de mucus y estudios clínicos en seres humanos.

47

VI. CONCLUSIONES

1. El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora),

contiene abundante cantidad de compuestos fenólicos.

2. El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora) tiene

efecto citoprotector y antisecretor gástrico, siendo mejor a dosis de

400mg/kg de peso.

3. El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora)

disminuye en 72% la congestión, edema y hemorragia similar al dado

por omeprazol.

4. El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora)

disminuye la secreción gástrica en un 66%, aumenta el pH en un

163%, y el omeprazol disminuye la secreción gástrica en un 83.6% e

incrementa el pH en un 201.5%, en ligadura de píloro en ratas.

5. El extracto acuoso de Solanum americanum Mill (hierba mora) es

seguro al no presentar efectos adversos.

48

VII.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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52

VIII. ANEXOS

53

Tabla IX.- Resultado de los Grupos (I, II, III, IV, V)

Efecto Citoprotector

95% Confidence Interval for Mean

Indicador Grupos (Tratamiento) N Mean Std.

Deviation Lower Bound

Upper Bound Minimum Maximum

Control 6 0 0 0 0 0 0

Indometacina 6 3 0 3 3 3 3

I + extracto 200mg/kg 6 2 0 2 2 2 2

I + extracto 400mg/kg 6 0.8333 0.4082 0.4049 1.2618 0 1

Congestión

I + omeprazol 10mg/kg 6 1 0 1 1 1 1

Control 6 0 0 0 0 0 0


I + extracto 200mg/kg 6 2 0 2 2 2 2

I + extracto 400mg/kg 6 0.8333 0.4082 0.4049 1.2618 0 1

Edema


Control 6 0 0 0 0 0 0


I + extracto 200mg/kg 6 2 0 2 2 2 2

I + extracto 400mg/kg 6 0.8333 0.4082 0.4049 1.2618 0 1

Hemorragia


Tabla X.- Resultado de Comparaciones Múltiples entre los Grupos (I, II, III, IV, V)

Efecto Citoprotector

95% Confidence

Interval Dependent

Variable (I)

Tratamiento (J)

Tratamiento

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound

Upper Bound

Indometacina -3 0.1054 1.4385E-20 -3.2171 -2.7829

I + omeprazol 10mg/kg -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829

I + extracto 200mg/kg -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

Grupo I: Control

I + extracto 400mg/kg -0.8333 0.1054 2.9148E-08 -1.0504 -0.6162

Control 3 0.1054 1.4385E-20 2.7829 3.2171

I + omeprazol 10mg/kg 2 0.1054 2.3339E-16 1.7829 2.2171

I + extracto 200mg/kg 1 0.1054 9.1837E-10 0.7829 1.2171

Congestión

Grupo II: Indometacina

I + extracto 400mg/kg

2.1667 0.1054 3.5441E-17 1.9496 2.3838

54

Control 1 0.1054 9.1837E-10 0.7829 1.2171

Indometacina -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

I + extracto 200mg/kg -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829

Grupo V: I+omeprazol

10mg/kg I + extracto 400mg/kg 0.1667 0.1054 0.12641676 -0.0504 0.3838

Control 2 0.1054 2.3339E-16 1.7829 2.2171

Indometacina -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829


Grupo III: I + extracto 200mg/kg

I + extracto 400mg/kg 1.1667 0.1054 3.9818E-11 0.9496 1.3838

I 0.8333 0.1054 2.9148E-08 0.6162 1.0504

Indometacina -2.1667 0.1054 3.5441E-17 -2.3838 -1.9496

I + omeprazol 10mg/kg -0.1667 0.1054 0.12641676 -0.3838 0.0504

Congestión

Grupo IV: I + extracto 400mg/kg

I + extracto 200mg/kg -1.1667 0.1054 3.9818E-11 -1.3838 -0.9496

Indometacina -3 0.1054 1.4385E-20 -3.2171 -2.7829

I + omeprazol 10mg/kg 0 0.1054 1 -0.2171 0.2171

I + extracto 200mg/kg -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

Grupo I: Control

I + extracto 400mg/kg -0.8333 0.1054 2.9148E-08 -1.0504 -0.6162

Control 3 0.1054 1.4385E-20 2.7829 3.2171


I + extracto 200mg/kg 1 0.1054 9.1837E-10 0.7829 1.2171


I + extracto 400mg/kg 2.1667 0.1054 3.5441E-17 1.9496 2.3838

Control 0 0.1054 1 -0.2171 0.2171

Indometacina -3 0.1054 1.4385E-20 -3.2171 -2.7829

I + extracto 200mg/kg -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

Grupo V: I+ omeprazol

10mg/kg I + extracto 400mg/kg -0.8333 0.1054 2.9148E-08 -1.0504 -0.6162

Control 2 0.1054 2.3339E-16 1.7829 2.2171

Indometacina -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829



I + extracto 400mg/kg 1.1667 0.1054 3.9818E-11 0.9496 1.3838

Control 0.8333 0.1054 2.9148E-08 0.6162 1.0504

Indometacina -2.1667 0.1054 3.5441E-17 -2.3838 -1.9496

I + omeprazol 10mg/kg 0.8333 0.1054 2.9148E-08 0.6162 1.0504

Edema


I + extracto 200mg/kg -1.1667 0.1054 3.9818E-11 -1.3838 -0.9496

Indometacina -3 0.1054 1.4385E-20 -3.2171 -2.7829

I + omeprazol 10mg/kg -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829

I + extracto 200mg/kg -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

Hemorragia

Grupo I: Control

I + extracto 400mg/kg -0.8333 0.1054 2.9148E-08 -1.0504 -0.6162

55

Control 3 0.1054 1.4385E-20 2.7829 3.2171


I + extracto 200mg/kg 1 0.1054 9.1837E-10 0.7829 1.2171


I + extracto 400mg/kg 2.1667 0.1054 3.5441E-17 1.9496 2.3838

Control 1 0.1054 9.1837E-10 0.7829 1.2171

Indometacina -2 0.1054 2.3339E-16 -2.2171 -1.7829

I + extracto 200mg/kg -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829

Grupo V: + omeprazol

10mg/kg I + extracto 400mg/kg 0.1667 0.1054 0.12641676 -0.0504 0.3838

Control 2 0.1054 2.3339E-16 1.7829 2.2171

Indometacina -1 0.1054 9.1837E-10 -1.2171 -0.7829



I + extracto 400mg/kg 1.1667 0.1054 3.9818E-11 0.9496 1.3838

Control 0.8333 0.1054 2.9148E-08 0.6162 1.0504

Indometacina -2.1667 0.1054 3.5441E-17 -2.3838 -1.9496

I + omeprazol 10mg/kg -0.1667 0.1054 0.12641676 -0.3838 0.0504

Hemorragia


I + extracto 200mg/kg -1.1667 0.1054 3.9818E-11 -1.3838 -0.9496

* The mean difference is significant at the .05 level.

56

Tabla XI.- Resultados del Grupo V

Ligadura de Píloro

N Minimum Maximum Mean Std.

Deviation

Volumen 6 4.80 5.20 5.0000 .12649 PH 6 1.30 1.45 1.3417 .06646 MEq 6 6.24 7.25 6.7083 .37075 Valid N (listwise)

6

Tabla XII.- Resultados del Grupo VI

Ligadura de Píloro + Extracto de frutos de S. Americanum M. (200mg/kg)


Deviation


6

Tabla XIII.- Resultados del Grupo VII

Ligadura de Píloro + Extracto de frutos de S. Americanum M. (400mg/kg)


Deviation


6

57

Tabla XIV.- Resultados del Grupo VIII

Ligadura de Píloro + Omeprazol (10mg/kg)


Deviation

Volumen 6 .60 1.00 .8167 .13292 PH 6 3.90 4.20 4.0433 .12987 mEq 6 2.34 4.10 3.3067 .56920 Valid N (listwise)

6

Tabla XV.- Resultados del Grupo X (Control)

N Minimum Maximum Mean Std. Deviation

Hemoglobina 6 13.50 16.46 14.9500 1.07076

Hematocrito 6 38 44 41.33 2.338

Volumen Corpuscular Medio

6 46.10 54.50 50.9167 3.17768

GOT 6 9.20 12.79 10.9350 1.44398

GPT 6 13.43 16.38 14.2900 1.06215

Fosfatasa Alcalina 6 179.11 185.24 180.9717 2.59324

Colesterol Total 6 66.63 81.03 75.0817 6.42618

Proteínas Totales 6 3.93 4.39 4.1450 .16306

Albúminas 6 2.80 3.21 3.0233 .14038

Globulinas 6 .95 1.36 1.2217 .14331

Glucosa 6 75.41 80.41 77.3100 2.13029

Úrea 6 46.13 53.36 50.3400 2.86997

Valid N (listwise) 6

58

Tabla XVI.- Resultados del Grupo XI

Extracto acuoso de frutos de S. Americanum M. (200mg/kg)


Hemoglobina 5 14.10 16.94 15.1800 1.25443

Hematocrito 5 39 43 40.60 1.517


5 50.90 54.80 52.5800 1.55467

GOT 5 9.62 11.81 10.5060 .87612

GPT 5 13.00 14.62 13.9840 .61861




Albúminas 5 2.73 3.30 2.9280 .24974

Globulinas 5 1.05 1.43 1.2820 .14653

Glucosa 5 77.12 81.11 79.2220 1.76103

Úrea 5 47.81 54.81 50.4820 2.75152


Tabla XVII.- Resultados del Grupo XII

Extracto acuoso de frutos de S. Americanum M. (400mg/kg)


Hemoglobina 6 13.30 15.81 14.9983 .94375

Hematocrito 6 40 43 41.50 1.049


6 48.90 54.80 52.3667 2.76237

GOT 6 10.45 12.30 11.2383 .72634

GPT 6 13.64 15.74 14.5467 .78441




Albúminas 6 2.48 3.27 2.9717 .28442

Globulinas 6 .94 1.60 1.2333 .24655

Glucosa 6 71.49 81.56 77.5833 3.51890

Úrea 6 49.42 53.57 51.7850 1.65825


59

Tabla XVIII.- Resultado de Comparaciones Múltiples entre los

Grupos

95% Confidence Interval

Dependent Variable

(I) Grupo Tratamiento

(J) Grupo Tratamiento

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound

Upper Bound

Extracto 200mg/kg -0.2300 0.6570 0.9408 -2.0266 1.5666 Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg -0.0483 0.6264 0.9970 -1.7613 1.6646

Control SSF 2mL/kg 0.2300 0.6570 0.9408 -1.5666 2.0266

Extracto 200mg/kg Extracto 400mg/kg 0.1817 0.6570 0.9626 -1.6149 1.9782

Control SSF 2mL/kg 0.0483 0.6264 0.9970 -1.6646 1.7613

Hemoglobina

Extracto 400mg/kg Extracto 200mg/kg -0.1817 0.6570 0.9626 -1.9782 1.6149

Extracto 200mg/kg 0.7333 1.0492 0.7866 -2.1358 3.6025 Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg -0.1667 1.0004 0.9862 -2.9023 2.5690

Control SSF 2mL/kg -0.7333 1.0492 0.7866 -3.6025 2.1358


Control SSF 2mL/kg 0.1667 1.0004 0.9862 -2.5690 2.9023

Hematocrito


Extracto 200mg/kg -1.6633 1.6046 0.5959 -6.0512 2.7246 Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg -1.4500 1.5299 0.6471 -5.6337 2.7337

Control SSF 2mL/kg 1.6633 1.6046 0.5959 -2.7246 6.0512


Control SSF 2mL/kg 1.4500 1.5299 0.6471 -2.7337 5.6337

Volumen Corpuscular

Medio



Control SSF 2mL/kg -0.4290 0.6500 0.8070 -2.2066 1.3486


Control SSF 2mL/kg 0.3033 0.6198 0.8880 -1.3915 1.9982

GOT



Control SSF 2mL/kg -0.3060 0.5181 0.8417 -1.7227 1.1107


Control SSF 2mL/kg 0.2567 0.4940 0.8748 -1.0941 1.6074

GPT


Extracto 200mg/kg 1.5997 1.3256 0.5002 -2.0254 5.2247 Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg 0.1750 1.2639 0.9905 -3.2813 3.6313

Control SSF 2mL/kg -1.5997 1.3256 0.5002 -5.2247 2.0254


Control SSF 2mL/kg -0.1750 1.2639 0.9905 -3.6313 3.2813

Fosfatasa Alcalina


60

95% Confidence Interval Dependent

Variable (I) Grupo (J) Grupo

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound

Extracto 200mg/kg -1.3983 3.0833 0.9029 -9.8299 7.0332

Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg 1.6550 2.9398 0.8550 -6.3841 9.6941

Control SSF 2mL/kg 1.3983 3.0833 0.9029 -7.0332 9.8299


Control SSF 2mL/kg -1.6550 2.9398 0.8550 -9.6941 6.3841

Colesterol Total


Extracto 200mg/kg 0.0150 0.1135 0.9913 -0.2954 0.3254


Control SSF 2mL/kg -0.0150 0.1135 0.9913 -0.3254 0.2954


Control SSF 2mL/kg -0.0667 0.1082 0.8292 -0.3626 0.2293

Proteínas Totales


Extracto 200mg/kg 0.0953 0.1404 0.7970 -0.2886 0.4792


Control SSF 2mL/kg -0.0953 0.1404 0.7970 -0.4792 0.2886


Control SSF 2mL/kg -0.0517 0.1339 0.9286 -0.4177 0.3144

Albúminas


Extracto 200mg/kg -0.0603 0.1136 0.8696 -0.3709 0.2502

Control SSF 2mL/kg Extracto 400mg/kg -0.0117 0.1083 0.9942 -0.3078 0.2845

Control SSF 2mL/kg 0.0603 0.1136 0.8696 -0.2502 0.3709


Control SSF 2mL/kg 0.0117 0.1083 0.9942 -0.2845 0.3078

Globulinas


Extracto 200mg/kg -1.9120 1.5940 0.5042 -6.2708 2.4468


Control SSF 2mL/kg 1.9120 1.5940 0.5042 -2.4468 6.2708


Control SSF 2mL/kg 0.2733 1.5198 0.9840 -3.8826 4.4293

Glucosa


Extracto 200mg/kg -0.1420 1.4939 0.9955 -4.2273 3.9433


X 0.1420 1.4939 0.9955 -3.9433 4.2273


Control SSF 2mL/kg 1.4450 1.4244 0.6086 -2.4501 5.3401

Úrea


61

Fig 20: Marcha Fitoquímica del Extracto Acuoso de Solanum americanum Mill

Fig 21: Administración del Extracto Acuoso de Solanum americanum Mill

62

MÉTODO: LIGADURA DE PÍLORO

Fig 22: Corte abdominal

Fig 23: Ligadura de Píloro

63

Fig 24: Ligadura de Píloro

Fig 25: Cierre de la cavidad abdominal

64

Fig 26: Extracción del estómago de rata

Fig 27: Mucosa con hemorragia después de la administración de indometacina

30mg/kg

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