DOSSIER VALIDATION/ANA302 v01 Détection, identification et ...

Vérification : JL Beaudart (RQ) 1 /13 Mise en fonction : 31.01.2014

DDOOSSSSII EERR VVAALL II DDAATTII OONN//AANNAA330022 vv0011

DDéétteecctt iioonn,, iiddeenntt ii ff iiccaatt iioonn eett qquuaanntt ii ff iiccaatt iioonn ddeess mmééttaabbooll ii tteess dduu ccaarr bbaaddooxx eett

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Mise en fonction : 30/10/2014 Pages : 13 Annexes : 2

Nom, fonction Date Signature Rédaction : Gillard Nathalie

Responsable méthode

Toute reproduction interdite

DDOOSSSSIIEERR VVAALLIIDDAATTIIOONN//AANNAA330022 vv0011 DDéétteeccttiioonn,, iiddeennttii ff iiccaattiioonn eett qquuaannttii ff iiccaattiioonn ddeess mmééttaabbooll ii tteess dduu ccaarrbbaaddooxx eett ddee ll ’’ oollaaqquuiinnddooxx ddaannss llee mmuussccllee ddee ppoouulleett eett ddaannss llee mmuussccllee ddee ppoorrcc ppaarr LLCC--MMSS//MMSS


PPllaann ddee llaa vvaall iiddaatt iioonn

Méthode d’analyse Détection, identification et quantification des métabolites du carbadox et de l’olaquidox dans la muscle de poulet et dans le muscle de porc par LC-MS/MS

Technique Chromatographie Liquide couplée à la spectrométrie de masse (HPLC-MS/MS)

Matrice Muscle de porc et muscle de poulet

Validation Validation principale, méthode de confirmation quantitative

DDeesstt iinnaattaaii rr eess :: DDééppaarr tteemmeenntt SSaannttéé // llaabboo LL CC--MM SS//MM SS Opérateurs

Christelle ROBERT Pierre-yves BRASSEUR Amaury BRASSEUR

Responsable

Christelle ROBERT



SSoommmmaaii rr ee

1. Introduction ..........................................................................................................................................4

2. Champ d’application.............................................................................................................................4 2.1. Matrice .......................................................................................................................................................4 2.2. Gamme de concentration..........................................................................................................................4 2.3. Statut de la méthode..................................................................................................................................4 2.4. Analytes......................................................................................................................................................4

3. Schéma de la validation et performances de la méthode ....................................................................4 3.1. Répétabilité et recovery ............................................................................................................................5 3.2. Limite de décision (CCαααα), capacité de détection (CCββββ).........................................................................5 3.3. Selectivité-spécificité .................................................................................................................................5 3.4. Robustesse..................................................................................................................................................5

4. Conclusions...........................................................................................................................................5

5. Références .............................................................................................................................................5

ANNEXE 1. Données Brutes.................................................................................................................6 A.1.1. QCA............................................................................................................................................................6 A.1.2. MQCA........................................................................................................................................................8

ANNEXE 2. Données de validation.....................................................................................................10 A.2.1. QCA..........................................................................................................................................................10

A.2.1.1. QCA : Calcul du CCα et le CCβ ......................................................................................................................11 A.2.2. MQCA......................................................................................................................................................12

A.2.2.1. MQCA : Calcul du CCα et le CCβ ..................................................................................................................13



1. Introduction La méthode ANA302 a été établie pour la détection, l’identification et la quantification des métabolites du carbadox et de l’olaquindox dans la viande de poulet et de porc par LC-MS/MS. 2. Champ d’application 2.1. MATRICE

La méthode s’applique aux échantillons de viande de porc et de viande de poulet. 2.2. GAMME DE CONCENTRATION Les teneurs sont exprimés en µg/kg de viande ou ppb. Une valeur recommandée a été fixée à 10 ppb (CRL GUIDANCE PAPER, 7 December 2007). La concentration des métabolites varie de 2,5 à 25 ppb. 2.3. STATUT DE LA METHODE La méthode d’analyse ANA 302 est une méthode de confirmation quantitative (D/I/Q). 2.4. ANALYTES Les composés concernés par ce dossier de validation ANA302 sont repris dans le tableau repris au § 3. Conclusions.

3. Schéma de la validation et performances de la méthode La méthode de confirmation quantitative a été validée de manière principale, soit sur 3 jours d’analyse et en analysant chaque jour, 7 échantillons blancs et 21 échantillons blancs supplémentés avant analyse de manière à 3 niveaux (0.25, 1 et 1.5 x la concentration recommandée). Ces diverses analyses ont permis de répondre aux exigences de la Décision de la Commission 2002/657/EC.



3.1. REPETABILITE ET RECOVERY Les données et calcul des performances de la méthode sont décrites de l’annexe 1 à l’annexe 6. Pour chaque composé, on retrouvera

1) les données brutes exportées de Targetlynx (Waters®) 2) le calcul des performances de la méthode d’analyse, dont le recovery, CV intra-jour et inter-jour

3.2. LIMITE DE DECISION (CC αααα), CAPACITE DE DETECTION (CC ββββ) Pour les composés interdits, la limite de décision (CCα) et la limite de détection (CCβ) sont déterminés par la procédure de la courbe d'étalonnage selon la norme ISO 11843.

3.3. SELECTIVITE-SPECIFICITE La sélectivité de la méthode LC-MS/MS a été démontrée par la présence d’au moins 2 transitions diagnostiques MRM lors du monitoring en MS/MS, par la détermination du temps de rétention relatif (tolérance de ± 2.5%), et la détermination des abondances ioniques relatives (dans les tolérances admises). La spécificité a été démontrée par l’absence de pic d’intensité significative dans les échantillons blancs. (réponse inférieure à 1/10 de la réponse du QC) au temps de rétention des composés recherchés dans les échantillons de muscle blancs. 3.4. ROBUSTESSE L’effet matrice, avec 5 origines différentes (3 porcs et 2 poulets), ainsi que l’opérateur sont les paramètres qui ont varié au cours des essais de validation. Ces variations sont inclues dans les résultats de validation. 4. Conclusions La méthode peut être déclarée validée pour les composés suivants : QCA (quinoxaline-2-carboxylic acid) et MQCA (3methylquinoxaline-2-carboxylic acid).

RL CCα CCβ Nom

ppb

Date validation (+) ou de retrait (-)

MQCA 10 1.72 2.34 30/10/2014 QCA 10 2.40 3.28 30/10/2014

5. Références • Décision 2002/657/CE de la Commission européenne portant modalités d’application de la directive

96/23/CE du Conseil concernant les performances des méthodes d’analyse et l’interprétation des résultats.

• Règlement (UE) N° 37/2010 de la Commission du 22 décembre 2009 relatif aux substances pharmacologiquement actives et à leur classification en ce qui concerne les limites maximales de résidus dans les aliments d’origine animale.

• CRL GUIDANCE PAPER (7 December 2007) • ISO 11843-2:2000. Capability of detection- Part 2: Methodology in the linear calibration case.



ANNEXE 1. Données Brutes A.1.1. QCA



A.1.2. MQCA



ANNEXE 2. Données de validation A.2.1. QCA



A.2.1.1. QCA : Calcul du CCα et le CCβ Dans le cas de substances pour lesquelles aucune limite autorisée n'a été fixée, la limite de décision et la capacité de détection peuvent être déterminées par la procédure de la courbe d'étalonnage selon la norme ISO 11843 (17). Dans ce cas, les données obtenues aux 4 niveaux (blanc y compris) sont utilisés pour calculer le CCα et le CCβ.

Les valeurs retenues pour le CCα et le CCβ sont celles obtenues le 2ème jour de validation (valeurs plus importantes).



A.2.2. MQCA



A.2.2.1. MQCA : Calcul du CCα et le CCβ Dans le cas de substances pour lesquelles aucune limite autorisée n'a été fixée, la limite de décision et la capacité de détection peuvent être déterminées par la procédure de la courbe d'étalonnage selon la norme ISO 11843 (17). Dans ce cas, les données obtenues aux 4 niveaux (blanc y compris) sont utilisés pour calculer le CCα et le CCβ.

Les valeurs retenues pour le CCα et le CCβ sont celles obtenues le 2ème jour de validation (valeurs plus importantes).

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