Digitoxin - Diagnostic Products Corporation · DM, Dito WR, editors. Interpretations in therapeutic...

Digitoxin

IMMULITE® 2000 Digitoxin

2 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIL2KDG-4, 2005-03-04)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement of digitoxinin serum, as an aid in the therapeuticadministration of this cardioglycoside.

Catalog Numbers: L2KDG2 (200 tests),L2KDG6 (600 tests)Test Code: DGT Color: RedCDC Analyte Identifier Code: 1303CDC Test System Identifier Code: 10418CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and ExplanationDigitoxin is a long-acting cardiac glycosideused in the treatment of congestive heartfailure and certain arrhythmias. It isstructurally identical to digoxin except forthe absence of a single hydroxyl group.Being less polar, digitoxin is absorbedmore completely, and circulates to a muchgreater extent protein-bound. In the liver, itis extensively metabolized to both activeand inactive forms. Digitoxin has acomparatively long half-life of 5 to 7 daysand, except in the nephrotic syndrome, islargely unaffected by renal dysfunction.A transient peak is associated with thedistribution phase; thereafter thecirculating level exhibits a steady and verygradual decline. Accordingly, bloodsamples for digitoxin analysis should becollected just before the next dose — or inany case not less than 6 hours after theprevious dose — to allow time for plasmaand tissue levels to reach equilibrium.Serum determinations can assist inverifying compliance and in adjusting thedose to achieve a desired plasmaconcentration. Monitoring circulatingdigitoxin levels is especially valuable whenthere are enterohepatic or renalcomplications, and during concomitanttherapy with drugs like quinidine, whichcan affect the pharmacokinetics ofdigitoxin.It must be remembered, however, that therelation between circulating level andclinical response varies greatly from one

individual to another, due to the manyfactors which are at work. This is reflectedin the considerable overlap betweentherapeutic and toxic ranges summarizedin the literature.

Thus, circulating levels of approximately10 to 25 ng/mL are observed in themajority of patients exhibiting asatisfactory therapeutic response todigitoxin, while levels greater than45 ng/mL are typical of patients withsymptoms of digitoxin toxicity.2,4,16 Butconcentrations higher than theconventional therapeutic range may berequired to control certain arrhythmias.Conversely, circulating levels well below45 ng/mL may give rise to symptoms oftoxicity in patients rendered more sensitiveto the drug's action by, for example, alowered potassium level. Even so, thehigher the circulating level, the moreprobable it is that clinical symptoms oftoxicity can be attributed to the drug – andthe lower the level, the less likely.Serum determinations should supplementclinical judgment, not substitute for it. Anisolated value should not be used as thesole criterion for the assessment ofefficacy or toxicity; rather it should alwaysbe interpreted in the total clinical context.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 Digitoxin is a solid-phase,competitive chemiluminescent enzymeimmunoassay.Incubation Cycles: 1 × 30 minutes.

Specimen CollectionCollect blood into plain (withoutanticoagulant) or heparinized tubes, andseparate the serum from the cells. Thetime of collection should be noted.To avoid misleadingly high digitoxinresults, patient samples should be drawnjust before the next dose — or in any caseno less than six hours after theadministration of this cardiac glycoside.

The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receipt

IMMULITE 2000 Digitoxin (PIL2KDG-4, 2005-03-04) 3

by the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.

Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2000 Digitoxin has not beentested with all possible variations of tubetypes. Consult the section on AlternateSample Types for details on tubes thathave been tested.Volume Required: 10 µL serum.Storage: 7 days at 2–8°C or2 months at –20°C.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.

Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.

Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

Digitoxin Bead Pack (L2DG12)With barcode. 200 beads, coated withpolyclonal rabbit anti-digitoxin antibody.Stable at 2–8°C until expiration date.L2KDG2: 1 pack. L2KDG6: 3 packs.

Digitoxin Reagent Wedge (L2DGA2)With barcode. 11.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to digitoxin in buffer. Stable at2–8°C until expiration date.L2KDG2: 1 wedge. L2KDG6: 3 wedges.Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

Digitoxin Adjustors (LDGL, LDGH)Two vials (Low and High), 4 mL each, ofdigitoxin in processed human serum, withpreservative. Stable at 2–8°C for 30 daysafter opening, or for 6 months (aliquotted)at –20°C.L2KDG2: 1 set. L2KDG6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Kit ComponentsSupplied SeparatelyL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)SDCM: Bi-level, multi-constituent controlAlso RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.


Quality Control Samples: Use controlsor sample pools with at least two levels(low and high) of digitoxin.

Therapeutic RangeThe following results are reported in theliterature for therapeutic and toxiccirculating levels of digitoxin.16

ng/mL nmol/L

Therapeutic Range 10–25 13–33

Toxic Level >45 >59

Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsMany physiological, pharmacological,pathological and genetic factors mayaffect the interpretation of results (see theSummary and Explanation section).

In cases of overdosage, specimens shouldbe obtained before administering digoxinimmune Fab antidote preparations (e.g.Digibind®) since these can be expected tointerfere with any digitoxin immunoassayprocedure. Once such a preparation hasbeen administered, accuratedeterminations of digitoxin can be madeonly by specialized techniques (notroutinely available in most clinical settings)until the Fab fragments have beeneliminated from the body: this takesseveral days for patients with intact renalfunction, and a week or longer for patientswith renal impairment. In addition to invitro effects, these preparations,administered intravenously, cause a rapidrise in pharmacologically inactive, Fab-bound, total circulating digitoxin that maybe detected immunologically.15

The presence of Uzara® in the serum ofpatients can result in falsely elevateddigitoxin results.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type of

interference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in ng/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)

Conversion Factor:ng/mL × 1.307 → nmol/LCalibration Range: 5 – 60 ng/mL(6.5 – 78 nmol/L).Analytical Sensitivity: 1 ng/mL(1.3 nmol/L)

Precision: Samples were assayed induplicate over the course of multiple days,for a total of 40 runs and 80 replicates.(See "Precision" table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3digitoxin solutions (193, 385 and770 ng/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody is highly specificfor digitoxin. (See "Specificity" table.)

Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 600 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 20 volunteers intoplain, heparinized, EDTA and Becton


Dickinson SST® vacutainer plastic tubes.Equal volumes of the matched sampleswere spiked with various concentrations ofdigitoxin, to obtain values throughout thecalibration range of the assay, and thenassayed by the IMMULITE 2000 Digitoxinprocedure.(Heparin) = 0.90 (Serum) + 0.26 ng/mLr = 0.987

(EDTA) = 0.89 (Serum) + 0.39 ng/mLr = 0.973

(SST) = 1.07 (Plain Tubes) – 0.07 ng/mLr = 0.975

Means:7.96 ng/mL (Serum)7.46 ng/mL (Heparin)7.50 ng/mL (EDTA)8.48 ng/mL (SST)

Method Comparison 1: The assay wascompared to DPC's IMMULITE Digitoxinon 86 patient samples. (Concentrationrange: approximately 7 to 57 ng/mL. Seegraph.) By linear regression:(IML 2000) = 0.97 (IML) – 0.4 ng/mLr = 0.98

Means:24.0 ng/mL (IMMULITE 2000)25.1 ng/mL (IMMULITE)

Method Comparison 2: The assay wasalso compared to DPC's Coat-A-CountDigitoxin radioimmunoassay on 89 patientsamples. (Concentration range:approximately 5 to 55 ng/mL. See graph.)By linear regression:(IML 2000) = 1.04 (Coat-A-Count) – 1.1 ng/mLr = 0.98

Means:24.2 ng/mL (IMMULITE 2000)24.1 ng/mL (Coat-A-Count)

References1) Aronson JK. Clinical pharmacokinetics ofcardiac glycosides in patients with renaldysfunction. Clin Pharmacokinet 1983;8:155-78.2) Baer DM. Key points for interpretation of drugconcentrations: digoxin and digitoxin. In: BaerDM, Dito WR, editors. Interpretations intherapeutic drug monitoring. Chicago: AmericanSociety of Clinical Pathologists, 1982: 351-4. 3)Bresnahan JF, Vlietstra RE. Digitalis glycosides.Mayo Clin Proc 1979;54:675-84. 4) Dito WR.Cardiac glycosides and therapeutic drugmonitoring. In: Baer DM, Dito WR, editors.Interpretations in therapeutic drug monitoring.Chicago: American Society of ClinicalPathologists, 1981: 61-73. 5) Fenster PE, et al.Digitoxin-quinidine interaction: pharmacokineticevaluation. Ann Int Med 1980;93:698-701. 6)

Garty M. Digitoxin elimination reduced duringquinidine therapy. Ann Int Med 1981;94:35-7. 7)Kuemmell HC, et al. Studies to determineindividual toxic doses of digitoxin. MunchenerMed Wochenschr 1982;124:545-9. 8) KuhlmannJ. Sources of digitalis intoxication. Med Klinik1982;77:39-44. 9) Larsen A, Storstein L.Digitoxin kinetics and renal excretion in children.Clin Pharmacol Ther 1983;33:717-27. 10) MaierC, Kolenda KD. Digitoxin in the presence ofhepatorenal failure. Deutsche Med Wochenschr1983;108:1475-80. 11) Rietbrock N, Alken RG.The therapy of heart failure with digitalis.Deutsche Med Wochenschr 1980;105:1622-8.12) Smith TW. Digitalis in the management ofheart failure. Hosp Pract 1984 Mar;19(3):67-92.13) Smith TW, et al. Digitalis glycosides:mechanisms and manifestations of toxicity. ProgCardiovasc Dis 1984;26:413-58 and 495-540.14) National Committee for Clinical LaboratoryStandards. Procedures for the collection ofdiagnostic blood specimens by venipuncture;approved standard. 4th ed. NCCLS DocumentH3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 15) Digoxinimmune Fab. In: McEvoy GK, editor. AHFS DrugInformation 92. American Society of HospitalPharmacists, 1992: 1977-81. 16) NationalAcademy of Clinical Biochemistry. Guidelines fortherapeutic drug monitoring services. Printed byDurik Advertising, Inc., 1999: 82-83.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 8.9 0.73 8.2% 1.04 11.7%

2 16.4 1.11 6.7% 1.28 7.8%

3 24.1 1.54 6.4% 2.11 8.8%

4 31.9 1.73 5.4% 3.18 10.0%

5 44.1 2.68 6.1% 4.14 9.4%


Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 2 in 2 18.0 — —

1 in 2 10.3 9.0 114%

2 2 in 2 26.3 — —

1 in 2 12.1 13.2 92%

3 4 in 4 33.1 — —

2 in 4 16.7 16.6 101%

1 in 4 8.78 8.28 106%

4 4 in 4 39.3 — —

2 in 4 19.0 19.7 96%

1 in 4 10.4 9.83 106%

5 8 in 8 49.7 — —

4 in 8 27.0 24.9 108%

2 in 8 13.2 12.4 106%

1 in 8 5.79 6.21 93%

Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 5.27 — —

A 15.9 14.6 109%

B 24.2 24.3 100%

C 48.4 43.5 111%

2 — 8.91 — —

A 17.9 18.1 99%

B 27.9 27.7 101%

C 42.2 47.0 90%

3 — 10.8 — —

A 20.0 19.9 101%

B 28.2 29.6 95%

C 49.2 48.8 101%

4 — 14.9 — —

A 23.4 23.8 98%

B 30.9 33.5 92%

C 50.9 52.7 97%

5 — 23.2 — —

A 30.6 31.6 97%

B 39.1 41.3 95%

C 55.6 60.5 92%

Specificity

Compound1ng/mLAdded2

% Cross-reactivity3

Digitoxin — 100%

Digoxin 250 7.4%

Aldosterone 100,000 0.02%

Amikacin 100,000 ND

Corticosterone 100,000 0.01%

Cortisol 100,000 ND

Cortisone 100,000 0.01%

Dexamethasone 100,000 ND

11-Deoxycorticosterone 100,000 0.02%

Hydrocortisone 100,000 0.01%

Estradiol 100,000 ND

Estriol 100,000 ND

Methotrexate 100,000 ND

Prednisolone 100,000 ND

Prednisone 100,000 ND

Pregnenolone 100,000 ND

Progesterone 100,000 0.03%

Spironolactone 100,000 0.01%

Testosterone 100,000 0.02%

Tobramycin 100,000 NDND: not detectable.4

Method Comparison 1

0

10

20

30

40

50

60

0 10 20 30 40 50 60

IMMULITE Digitoxin, ng/mL

IMM

ULIT

E 20

00 D

igito

xin

(IML 2000) = 0.97 (IML) – 0.4 ng/mLr = 0.98


Method Comparison 2

0

10

20

30

40

50

60

0 10 20 30 40 50 60

CAC Digitoxin, ng/mL

IMM

ULIT

E 20

00 D

igito

xin

(IML 2000) = 1.04 (Coat-A-Count) – 1.1 ng/mLr = 0.98

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4SD (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3% Kreuzreaktivität, 4NN:Nicht nachweisbar. Method Comparison:Digitoxin: Digitoxin.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1 Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2 Cantidad añadida, 3% Reaccióncruzada, 4ND: no detectable. MethodComparison: Digitoxin: Digitoxina.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté,3Réaction croisée%, 4ND: non détectable.Method Comparison: Digitoxin: Digitoxine.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta,3Percentuale di Crossreattività, 4ND: nondeterminabile. Method Comparison: Digitoxin:Digitossina.

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Percentagem de reacção cruzada,

4ND: não detectável. Method Comparison:Digitoxin: Digitoxina.

Deutsch

Digitoxin - IMMULITE 2000Anwendung: Zur in vitro Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2000Systems - zur quantitativen Bestimmungvon Digitoxin im Serum in derÜberwachung einer medikamentösenBehandlung mit Herzglykosiden.Artikelnummern: L2KDG2 (200 Tests),L2KDG6 (600 Tests)Testcode: DGT Farbe: rot

Klinische RelevanzDigitoxin ist ein hochwirksamesHerzglykosid, dass in der Behandlung derHerzinsuffizienz und verschiedenerArrhythmien eingesetzt wird. Es ist bis aufeine Hydroxylgruppe strukturell mit demDigoxin identisch. Durch seine geringerePolarität wird Digitoxin vollständigeradsorbiert und zirkuliert in größeremAusmaß proteingebunden als Digoxin.Digitoxin wird in der Leber sowohl in aktiveals auch inaktive Derivate abgebaut. Eshat eine verhältnismäßig langeHalbwertszeit von 5 bis 7 Tagen und istdurch Nierenfunktionsstörungen(Ausnahme: Nephrose) weitgehendunbeeinflusst.Ein vorübergehender Spiegelanstieg istmit der Verteilungsphase assoziiert,nachfolgend kommt es zumkontinuierlichen und allmählichen Abfalldes Medikamentenspiegels. DieBlutabnahme zur Spiegelbestimmungsollte deshalb unmittelbar vor dernächsten Medikamentengabe, frühestensjedoch 6 Stunden nach der letzten Dosiserfolgen, um ein Verteilungsgleichgewichtzwischen Plasma und Gewebe zugewährleisten.Die Serummessung des Digitoxins istgeeignet, die Patientencompliance zuüberwachen und den gewünschtenSerumspiegel einzustellen. Besonderswertvoll ist das Monitoring deszirkulierenden Digitoxins beienterohepatischen oder renalen


Komplikationen und im Fall von Ko-Medikation mit Präparaten wie Quinidin u.a., die die Pharmakokinetik des Digitoxinsbeeinflussen können.Der Zusammenhang zwischenDigitoxinspiegel und klinischem Effektkann individuell sehr unterschiedlich sein.Dies wird auch durch die, in der Literaturbeschriebenen, Überschneidung vontherapeutischem und toxischem Bereich,reflektiert.Digitoxinspiegel von 10–25 ng/ml werdenbei der Mehrheit der Patienten mit einemzufriedenstellenden therapeutischenEffekt beobachtet. Dagegen sindSerumkonzentrationen größer 45 ng/mltypisch für Patienten mit Symptomen einerDigitoxinintoxikation.2,4,16 Trotzdemkönnen Konzentrationen oberhalb desüblichen therapeutischen Bereichesnotwendig sein, um bestimmteArrhythmien effektiv zu behandeln. ImGegensatz dazu können Digitoxinspiegeldeutlich unter 45 ng/ml u. U. bei Patientenbereits Intoxikationssymptome hervorrufen(z. B. bei gleichzeitig niedrigemSerumkalium). Grundsätzlich gilt: Je höherder Digitoxinspiegel, desto wahrschein-licher ist das Medikament die Ursacheauftretender Intoxikationssymptome. Istder Spiegel dagegen niedrig, ist dieserZusammenhang weniger wahrscheinlich.

Serumspiegelbestimmungen sollen dieklinische Beurteilung lediglich ergänzenund sie keineswegs ersetzen. Eineinzelner Messwert darf nicht alsalleiniges Kriterium für die Entscheidungüber therapeutische Effizienz oderIntoxikation herangezogen werden; stetsist der klinische Kontext zuberücksichtigen.

MethodikIMMULITE 2000 Digitoxin ist einkompetitiver Festphasen-,Chemilumineszenz-Immunoassay.Inkubationszyklen: 1 × 30 min.

ProbengewinnungDie Blutentnahme soll in Röhrchen ohneZusätze oder Trenngel erfolgen. DieBlutproben immer zum selben Zeitpunktzu entnehmen.

Um irreführend hohe DigitoxinKonzentrationen zu vermeiden, soll die

Blutentnahme vor oder mindestens 6Stunden nach einer Gabe vonHerzglykosiden erfolgen.Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.

Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zuinterpretieren.Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000Digitoxin sind nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 10 µl Serum.

Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C, oder2 Monate bei –20°C.

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.

Reagenzien: Bei 2–8 °C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.


Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertesWasser benutzen.

Im Lieferumfang enthalten:Die Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

Digitoxin Kugel-Container (L2DG12)Der barcodierte Kugel-Container enthält200 Kugeln, beschichtet mit Antikörperngegen Digitoxin (polyklonal, Kaninchen).Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar.L2KDG2: 1 Container.L2KDG6: 3 Container.

Digitoxin Reagenzbehälter (L2DGA2)Mit Barcode. 11,5 ml mit alkalischerPhosphatase (Rinderkalbsdarm)konjugiertes Digitoxin in Pufferlösung. Bei2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar.L2KDG2: 1 Behälter.L2KDG6: 3 Behälter.Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Die Folie von der Oberseite desContainers entfernen. Den Schiebedeckelnach unten in die Führung desReagenziendeckels einrasten lassen.

Digitoxin Kalibratoren (LDGL, LDGH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch),jeweils mit 4,0 ml Digitoxin inprozessiertem Humanserum (mitKonservierungsmittel). 30 Tage nach demÖffnen bei 2–8°C oder 6 Monate bei–20°C haltbar.L2KDG2: 1 Set. L2KDG6: 2 Sets.

Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufGlasröhrchen kleben, so dass die

Barcodes vom Barcodereader desSystems gelesen werden können.

Separat erhältliche Testsystem-KomponentenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) ReaktionsgefäßeSDCM: Multikomponentenkontrolle in zweiKonzentrationen

Ebenfalls benötigtDestilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Teströhrchen; Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2000-Handbuch.

Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Qualitätskontrollseren: Kontrollen oderPool-Seren mit Digitoxin in mindestenszwei Konzentrationen (niedrig und hoch)verwenden.

Therapeutischer BereichDie folgenden therapeutischen undtoxischen Serumspiegel werden in derLiteratur berichtet.16

ng/ml nmol/l

TherapeutischerBereich

10–25 13–33

Toxischer Bereich >45 >59

Diese Grenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen. Jedes Laborsollte seine eigenen Referenzbereicheetablieren.

Grenzen der MethodeDie Interpretation der Ergebnisse kanndurch physiologische, pharmakologische,pathologische und genetische Faktoren


beeinflusst werden (siehe „KlinischeRelevanz“).

Im Falle einer Digitalis-Überdosierung desPatienten sollte die Probe vor der Gabevon Digitalis-Antitoxin wie Digitalis-Antidot-BM o. ä. erfolgen, da die hierinenthaltenen Fab-Antikörperfragmente inDigitoxin-Immunoassays interferierenkönnen. Nach der Gabe eines solchenPräparates ist die Digitoxin Bestimmungbis zur Eliminierung der Fab-Fragmenteaus dem Körper nur mit speziellenMethoden möglich, die in Routinelaborsmeist nicht verfügbar sind. Bei Patientenmit intakter Nierenfunktion kann diesmehrere Tage, bei Patienten mitNierenfunktionsstörungen eine Wocheund länger dauern. Zusätzlich zu den invitro Effekten führt die Gabe von Fab-Fragmenten zum schnellen Anstieg despharmakologisch inaktiven, Fab-gebundenen, zirkulierenden Gesamt-Digitoxin, welches evtl. vonImmunoassays detektiert werden kann.15

Die Einnahme des Medikamentes Uzara®

kann zu falsch erhöhten Digitoxin-Wertenführen.Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als ng/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden - sofern nicht andersangegeben - aus Serumproben in

Röhrchen ohne Trenngel odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)

Umrechnungsfaktor:ng/ml × 1,307 → nmol/lMessbereich: 5 – 60 ng/ml(6,5 – 78 nmol/l),Analytische Sensitivität: 1 ng/ml(1,3 nmol/l)

Präzision: Proben wurden innerhalb vonmehreren Tagen in Doppelbestimmunggemessen (insgesamt 40 Bestimmungenund 80 Einzelmessungen). (Siehe Tabelle”Precision”).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Linearity“.)

Wiederfindung: Die getesteten Probenwaren mit drei Digitoxin-Lösungen 1:19versetzt (193, 385 und 770 ng/ml).(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Recovery“.)Spezifität: Hochspezifischer digitoxin-Antikörper. (siehe Tabelle „Specificity“.)Bilirubin: Konjugiertes undunkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.

Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 600 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.

Lipämie: Triglyceride hat inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.Alternativer Probentyp: Um dieAuswirkungen von verschiedenenProbenarten zu untersuchen, wurde Blutvon 20 Freiwilligen in Plastik-Röhrchenohne Additiva, in Heparin-, EDTA- undBecton Dickinson SST® Vacutainer-Rörchen gesammelt. Gleiche Voluminader jeweiligen Proben wurden mitverschiedenen Konzentratonen anDigitoxin versetzt, um Werte im gesamtenKalibrationsbereich zu erhalten, und dieProben anschließend mit dem IMMULITE2000 Assay für Digitoxin gemessen.(Heparin) = 0,90 (Serum) + 0,26 ng/mlr = 0,987


(EDTA) = 0,89 (Serum) + 0,39 ng/mlr = 0,973

(SST) = 1,07 (ohne Zusatz) – 0,07 ng/mlr = 0,975

Mittelwerte:7,96 ng/ml (Serum)7,46 ng/ml (Heparin)7,50 ng/ml (EDTA)8,48 ng/ml (SST)

Methodenvergleich 1: Der Assay wurdeunter Verwendung von 86Patientenproben mit dem IMMULITEDigitoxin Assay von DPC verglichen.(Konzentrationsbereich: circa 7–57 ng/ml.Siehe Grafik.) Berechnung der linearenRegression:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 0,4 ng/mlr = 0,98

Mittelwerte:24,0 ng/ml (IMMULITE 2000)25,1 ng/ml (IMMULITE)

Methodenvergleich 2: Der Assay wurdeauch unter Verwendung von 89Patientenproben mit dem DigitoxinCoat-A-Count RIA der DPC verglichen.(Konzentrationsbereich: circa 5–55 ng/ml.Siehe Grafik.) Berechnung der linearenRegression:(IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) – 1,1 ng/mlr = 0,98

Mittelwerte:24,2 ng/ml (IMMULITE 2000)24,1 ng/ml (Coat-A-Count)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

IMMULITE 2000 DigitoxinaUtilidad del análisis: Para el diagnósticoin vitro con el Analizador IMMULITE 2000para la medición cuantitativa de digitoxinaen suero, como una ayuda en elseguimiento de la administraciónterapeútica de este cardioglicósido.Referencia: L2KDG2 (200 tests),L2KDG6 (600 tests)

Código del Test: DGTCódigo de Color: Rojo

Resumen y Explicación delTestLa digitoxina es un glicósido cardiaco delarga duración, usado en el tratamiento defallos cardiacos congestiivos y endeterminadas arritmias.Esestructuralmente identical a la digoxinaexcepto por la ausencia de un único grupohidroxilo. Al ser menos polar, la digitoxinase absorbe más completamente y circulaa mayor cantidad unida a proteíans. En elhígado, es metabolizada tanto en suforma active como no active. La digitoxinatiene una vida media más larga entre 5 y 7días y, excepto en los syndromesnefróticos, no es afectada por lasdisfunciones renales.

Presenta un pico de concentración estáasociuado a su administración; luego, losniveles circulantes muestran undecaimiento sostenido y gradual. Por ello,las muestras de sangre para el análisis dedigitoxina deben recogerse justo antes dela siguiente dósis — o en cualquier casono más tarde de 6 horas después de ladósis previa — para permitir que losniveles plasmáticos y tisulares alcancen elequilibrio.Las determinaciones séricas puedenayudar en la verificación y en el ajuste dela dósis para alcanzar la concentraciónplasmática deseada. El seguimiento delos niveles circulantes de digitoxina es deespecial interés cuando existencomplicaciones enterohepáticas o renales,y durante la administración conjunta dedeterminados medicamentos como lasquinidina, que pueden afectar lafarmacocinética de la digitoxina.Se debe recordar, no obstante, que larelación entre los niveles circulantes y larespuesta clínica varía considerablementede un individuo a otro dependiendo demultiples factores que entran en juego.Esto se refleja en el solapamiento detangos terapeúticos y tóxicos que serecogen en la bibliografía.Así, niveles circulantes deaproximadamente 10 a 25 ng/ml seobservan en la mayoría de los pacientesque muestran una respuesta satisfactoriaal tratamiento con digitoxina, mientras queniveles superiors a 45 ng/ml son típicos de


pacientes con síntomas de toxicidad pordigitoxina.2,4,16 Aunque concentracionessuperiors al rango terapeúticoconvencional pueden requerirse para elcontrol de ciertas arritmias. Al contrario,niveles cirlantes inferiors a 45 ng/mlpueden generar síntomas de toxicidad enpacientes más sensibles a la acción deesta droga, por ejemplo, un nivel muy bajode potasio. Aún así, lo más probable esatribuir los síntomas clínicos de latoxicidad al fármaco cuando el nivelcirculante de éste es alto ymenosprobable cuando el nivel es másbajo.”

Las determinaciones séricas debenayudar al juicio clínico, no sustituirle. Unvalor aislado no debe usarse como elúnico criterio para asegurar la eficacia otoxicidad de la dosis, debería interpretarseen el contexto total de la historia clínicadel paciente.

Principio del análisisIMMULITE 2000 Digitoxina es uninmunoensayo enzimáticoquimioluminiscente competitivo en fasesólida.Ciclos de incubación: 1 × 30 minutos.

Recogida de la muestraRecoger la muestra en tubo sinanticoagulants o en tubos heparinizados,y separar el suero de las células. La horade la recogida debe ser anotada.

Para evitar errores con resultadoselevados de digitoxina, las muestras delos pacientes deben ser extraídasinmediatamente antes de la dosissiguiente — o en cualquier caso, no antesde 6 horas después de la administraciónde este glicósido cardíaco.Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos a

la presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Digitoxina IMMULITE2000 no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.Volumen requerido: 10 µl de suero.

Conservación: 2–8°C durante 7 días, o2 meses a –20°C.

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo a la legislación en vigor.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.Sustrato quimioluminiscente: Evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales suministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.


Cartucho de bolas de Digitoxina(L2DG12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas con de anticuerpospoliclonales de conejo anti-digitoxina.Estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.L2KDG2: 1 cartucho.L2KDG6: 3 cartuchos.

Vial de reactivo de Digitoxina (L2DGA2)Con código de barras. 11,5 ml defosfatasa alcalina (de intestino de ternera)conjugada con digitoxina en solucióntampón. Estable a 2–8°C hasta la fechade caducidad.L2KDG2: 1 vial. L2KDG6: 3 viales.

Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de Digitoxina (LDGL,LDGH)Dos viales (bajo y alto), cada uno con4 ml, de Digitoxina en suero humanoprocesado, con conservante. Estable a2–8°C durante 30 días después de abriseo estable a –20°C durante 6 meses.L2KDG2: 1 juego. L2KDG6: 2 juegos.

Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separadoL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)SDCM: Módulo Control de Drogas delSuero

También necesariosAgua destilada o desionizada; tubos deensayo; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento general

según lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2000.

Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, dilución, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.

Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de calidad: Usecontroles o pools de muestras con dosniveles diferentes, como mínimo, dedigitoxina (bajo y alto).

Intervalo TerapéuticoLa literatura informa de los resultadossiguientes, para valores circulantestóxicos y terapeúticos.16

ng/ml nmol/l

Intervalo terapéutico 10–25 13–33

Nivel tóxica >45 >59

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada laboratorio deberáestablecer sus propios intervalos dereferencia.

LimitacionesMuchos factores fisiológicos,farmacológicos, patológicos y genéticospueden afectar la interpretación de losresultados (ver la sección Resumen yExplicación del Test).En casos de sobredosis, las muestrasdeben recogerse antes de seradministrado el antidoto anti-digoxina (e.g.Digibind®) ya que puede interferer en elinmunoanálisis de digitoxina. Una vez queesta preparación haya sido administrada,las determinaciones de digitoxina debenrealizarse por técnicas expecializadas (nodisponibles en la mayoría de los Centrosclínicos) hasta que los fragmentos deanticuepo se hayan eliminado del cuerpo:varios días para pacientes con su functionrenal inalterada y una semana o más parapacientes con fallo renal. Además de losefectos in vitro, estas preparaciones,administradas intravenosamente, causanuna rápida inactivación farmacológica dela digitoxina circulante pero que puede serdetectada inmunológicamente.15


La presencia de Uzara® en el suero de lospacientes puede generar unos resultadosde digitoxina falsamente elevados.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo, consulte las tablasy los gráficos. Los resultados se expresanen ng/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación.)Factor de Conversión:ng/ml × 1,307 → nmol/lIntervalo de calibración: 5 – 60 ng/ml(6,5 – 78 nmol/l),Sensibilidad analítico: 1 ng/ml(1,3 nmol/l)Precisión: Se analizaron muestras porduplicado durante varios días, para untotal de 40 ensayos y 80 replicados. (Verla tabla "Precision".)Linealidad: Las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Ver latabla "Linearity" para resultadosrepresentativos.)Recuperación: Se han analizado lasmuestras cargadas 1 a 19 con tressoluciones de digitoxina (193, 385 y770 ng/ml). (Ver la tabla "Recovery" pararesultados representativos).

Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para digitoxina. (Ver la tabla"Specificity".)Bilirrubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y libre en concentracioneshasta 200 mg/l no tiene efecto en elensayo, en lo concerniente a la precisióndel ensayo.Hemólisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 600 mg/dl,notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Lipemia: La presencia de triglicéridos enconcentraciones hasta 3 000 mg/dl notiene efecto alguno en los resultados, enlo correspondiente a la precisión delensayo.Tipo de Muestra Alternativa: Paraevaluar el efecto de los diferentes tipos demuestras alternativos, se recogió sangrede 20 voluntarios en tubos plásticosnormales, tubos con Heparina, tubos conEDTA y tubos vacutainer SST® de BectonDickinson. Volúmenes iguales de lasdiferentes muestras fueron sobrecargadascon diferentes concentraciones deDigitoxina, con la finalidad de cubrir todoel rango de calibración del ensayo, yprocesadas con el procedimientoDigitoxina IMMULITE 2000.(Heparina) = 0,90 (Suero) + 0,26 ng/mlr = 0,987

(EDTA) = 0,89 (Suero) + 0,39 ng/mlr = 0,973

(SST) = 1,07 (tubos simples) – 0,07 ng/mlr = 0,975

Medias:7,96 ng/ml (Suero)7,46 ng/ml (Heparina)7,50 ng/ml (EDTA)8,48 ng/ml (SST)

Comparación de los métodos 1: Elensayo se ha comparado con el DigitoxinaIMMULITE de DPC en 86 muestras depacientes. (Intervalo de concentración:aproximadamente 7 – 57 ng/ml. Ver elgráfico.) Por regresión lineal:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 0,4 ng/mlr = 0,98

Medias:24,0 ng/ml (IMMULITE 2000)25,1 ng/ml (IMMULITE)

Comparación de los métodos 2: Elensayo se ha comparado con el ensayocon Coat-A-Count de Digitoxina de DPC


en 89 muestras de pacientes. (Intervalode concentración: aproximadamente 5 –55 ng/ml. Ver el gráfico.) Por regresiónlineal:(IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) – 1,1 ng/mlr = 0,98

Medias:24,2 ng/ml (IMMULITE 2000)24,1 ng/ml (Coat-A-Count)

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.Fabricado por EURO/DPC Ltd. bajo un Sistemade Calidad acorde con la ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 DigitoxineDomaine d'utilisation : dosage quantitatifde la digitoxine dans le sérum. Ce test estréservé à un usage diagnostic in vitroavec l'Analyseur IMMULITE 2000, etconstitue une aide pour l'administrationthérapeutique de ce cardioglycoside.

Référence catalogue :L2KDG2 (200 tests), L2KDG6 (600 tests)Code produit : DGT Code couleur : rouge

IntroductionLa digitoxine est un glycoside cardiaque àdurée d'action prolongée, utilisé pour letraitement de l'insuffisance cardiaquecongestive et pour certaines arythmies. Sastructure est identique à celle de ladigoxine hormis l'absence d'ungroupement hydroxyle. Etant moinspolaire, la digitoxine est absorbée pluscomplètement et circule dans une bienplus grande mesure liée à une protéineporteuse. Dans le foie, elle estcomplètement métabolisée, sous formesactive et inactive. La digitoxine acomparativement une demi-vie assezlongue, de 5 à 7 jours et, hormis dans lecas du syndrome néphrotique, elle est peuaffectée par un dysfonctionnement rénal.Un pic transitoire est associé à la phasede distribution, après quoi la concentrationcirculante connaît une diminutionconstante et très progressive. Lesprélèvements sanguins pour le dosage de

la digitoxine doivent donc être réalisésjuste avant l'administration d'une nouvelledose et, en aucun cas, moins de 6 h aprèsla dernière dose, afin que lesconcentrations tissulaire et plasmatiqueaient eu le temps de s'équilibrer.Le dosage sérique peut aider à évaluerl'observance thérapeutique et à ajuster laposologie pour parvenir à la concentrationplasmatique souhaitée. Le suivi de laconcentration de digitoxine circulante estparticulièrement intéressant quand descomplications rénale ou entérohépatiqueexistent, ou lors de traitements associés àdes médicaments comme la quinidine, quisont susceptibles d'influer sur lapharmacocinétique de la digitoxine.Néanmoins, il faudra se rappeler que larelation entre la concentration circulante etla réponse clinique varie beaucoup d'unindividu à l'autre, en raison des nombreuxparamètres mis en jeu. Ceci est reflété parle chevauchement considérable desconcentrations toxiques et desconcentrations thérapeutiques citées dansla littérature.

Ainsi, des taux de digitoxine circulanted'environ 10 à 25 ng/ml sont observéschez la plupart des patients pour lesquelson obtient une réponse satisfaisante à ladigitoxine, cependant que des tauxsupérieurs à 45 ng/ml sont habituels chezles patients qui présentent des signes detoxicité à la digitoxine.2,4,16 Mais desconcentrations supérieures auxconcentrations thérapeutiques usuellespeuvent être nécessaires pour traitercertaines arythmies. Inversement, desconcentrations plasmatiques pourtant bieninférieures à 45 ng/ml peuvent donner lieuà des symptômes de toxicité chez despatients sensibilisés à l'action de lamolécule, dans le cas, par exemple, d'unekaliémie abaissée. Quoi qu'il en soit, plusle taux de digitoxine circulante est élevé,plus la probabilité est grande que desmanifestations cliniques de toxicité soientimputables à la molécule, et moins ce tauxest élevé, moins la probabilité est grande.

Le dosage sérique devra venir compléterl'appréciation clinique et non s'ysubstituer. Une valeur isolée ne devra pasêtre utilisée comme seul critèred'appréciation de l'efficacité ou de latoxicité, elle devra toujours être replacéedans son contexte clinique.


Principe du testIMMULITE 2000 Digitoxine est unimmunodosage enzymatiquechimiluminescent par compétition enphase solide.Cycles d'incubation : 1 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsRecueil des échantillons sur tubes secs(sans anticoagulant) ou héparinés, etséparer le plasma des cellules. Noterl'heure de prélèvement.Pour éviter des mesures trompeusesrévélant une concentration élevée dedigitoxine, les échantillons devront êtreprélevés juste avant une nouvelleadministration du produit et en aucun cas,moins de 6 h après la dernière dose, afinque les concentrations tissulaire etplasmatique aient eu le temps des'équilibrer.

Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.

La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret Digitoxine IMMULITE 2000 n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Volume nécessaire : 10 µl de sérum.

Conditions de conservation :7 jours à +2°C/+8°C ou 2 mois à –20°C.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.

Réactifs : Conserver les réactifs à +2°/+8 °C. Éliminer les déchets conformémentaux lois en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : Éviter lescontaminations et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).

Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes Digitoxine(L2DG12)Avec code-barres. 200 billes revêtues d'unanticorps polyclonal de lapin dirigé contrela digitoxine. Stable à +2/ +8 °C jusqu'à ladate de péremption.L2KDG2: 1 cartouche.L2KDG6: 3 cartouches.

Cartouche à réactif Digitoxine(L2DGA2)Avec code-barres. 11,5 ml de solutiontamponnée de phosphatase alcalined'intestins de veau conjuguée à ladigitoxine dans un tampon. Stable à +2/+8 °C jusqu'à la date de péremption.L2KDG2: 1 cartouche.L2KDG6: 3 cartouches.


Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs Digitoxine (LDGL, LDGH)Deux flacons (« haut » et « bas ») de 4 mlchacun, de digitoxine dans du sérumhumain prétraité, avec conservateur.Stable à +2°/ +8°C pendant 30 jours aprèsouverture, ou 6 mois (aliquoté) à –20°C.L2KDG2: 1 jeu. L2KDG6: 2 jeux.Avant de procéder à un ajustement, placerles étiquettes correspondant à l'aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes enverre de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournisséparémentL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)

SDCM : Contrôle multiparamétrique àdeux niveaux de concentrationEgalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes;Contrôle.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation de l'IMMULITE 2000.

Se reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2000 pour : la préparation, ledémarrage du système, le dilution, lesajustements, le dosage et les procéduresde contrôle de qualité.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle de qualité :Utiliser des contrôles ou des pools desérums avec au moins deux niveaux deconcentration (faible ou élevé)d'digitoxine.

Concentrations ThérapeutiquesLes résultats suivants sont rapportés dansla littérature pour les concentrationsthérapeutique et toxique circulantes dedigitoxine.16

ng/ml nmol/l

Concentrationsthérapeutiques

10–25 13–33

Taux de toxicité >45 >59

Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesDe nombreux facteurs d'ordrephysiologique, pharmacologique,pathologique ou génétique sontsusceptibles d'influer sur l'interprétationdes résultats (se reporter à la section« Présentation générale »).En cas de surdosage, les prélèvementsdevront être réalisés avant administrationd'un antidote à base de fragments Fabanti-digitoxine (Digibind®, par exemple),dans la mesure où ces derniersinterfèreront avec n'importe quelleméthode d'immunodosage de ladigitoxine. Une fois qu'une tellepréparation a été administrée, un dosageprécis de la digitoxine ne peut être obtenuque par des techniques spécialisées (quine sont pas disponibles en routine dans laplupart des services hospitaliers) jusqu'àce que les fragments Fab aient totalementété éliminés : ceci prend plusieurs jourschez des patients ayant une fonctionrénale intacte et une semaine ou plus encas d'insuffisance rénale. En plus de leurseffets in vitro, ces préparationsadministrées en intraveineuseoccasionnent une élévation rapide de ladigitoxine totale circulante liée auxfragments Fab, qui est biologiquementinactive mais peut être détectée par uneméthode immunologique.15

La présence d'Uzara® dans le sérum depatients peut entrainer des résultatsfaussement élevés en Digitoxine

Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir Boscato


LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont donnés en ng/ml. (En l'absenced'indication contraire, tous les résultats ontété obtenus sur des échantillons sériquesrecueillis en tubes, sans gel ni activateurde la coagulation.)Facteur de conversion :ng/ml × 1,307 → nmol/lDomaine de mesure : 5 – 60 ng/ml(6,5 – 78 nmol/l),

Sensibilité analytique : 1 ng/ml(1,3 nmol/l)Précision : les échantillons ont été dosésen duplicata sur plusieurs jours, pourobtenir un total de 40 séries et 80 replicata(Voir le tableau « Precision ».)Test de dilution : Des échantillons ontété dosés à différentes concentrations.(Voir le tableau « Linearity » pour desdonnées représentatives.)

Test de récupération : les échantillonstestés ont été chargés dans un rapport de1 à 19 avec trois solutions de digitoxine(193, 385 et 770 ng/ml). (Voir le tableau «Recovery » pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : L'anticorps utilisé esthautement spécifique de la digitoxine.(Voir le tableau « Specificity ».)Bilirubine : La présence de bilirubine,conjuguée ou non, n'a aucun effet sur le

dosage ni sur sa précision si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.

Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 600 mg/dl.

Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.

Autres types d'échantillons: Pourestimer l'effet de l'utilisation de différentstype d'échantillons, 20 volontaires ont étéprélevés sur tubes en plastique secs,héparinés, EDTA et sur tubes en plastiquevacutainer SST® Becton Dickinson. Desvolumes égaux de ces différentséchantillons ont été mélangés avecplusieurs concentrations d' Digitoxine pourobtenir des valeurs à l'intérieur dudomaine de mesure du test puis dosésavec le protocole l'IMMULITE 2000Digitoxine.(Héparine) = 0,90 (Sérum) + 0,26 ng/mlr = 0,987

(EDTA) = 0,89 (Sérum) + 0,39 ng/mlr = 0,973

(SST) = 1,07 (tubes ordinaires) – 0,07 ng/mlr = 0,975

Moyennes :7,96 ng/ml (Sérum)7,46 ng/ml (Héparine)7,50 ng/ml (EDTA)8,48 ng/ml (SST)

Comparaison de méthodes 1 : le test aété comparé à l'IMMULITE Digitoxine deDPC sur 86 échantillons (intervalle deconcentrations : 7 à 57 ng/ml environ. Voirgraphique). Par régression linéaire :(IML 2000) = 0,97 (IML) – 0,4 ng/mlr = 0,98

Moyennes :24,0 ng/ml (IMMULITE 2000)25,1 ng/ml (IMMULITE)

Comparaison de méthodes 2 : Le test aété comparé au test Coat-A-CountDigitoxine de DPC sur 89 échantillonsdont les concentrations allaient d'environ 5à 55 ng/ml. Voir graphique.) Parrégression linéaire :(IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) – 1,1 ng/mlr = 0,98

Moyennes :24,2 ng/ml (IMMULITE 2000)24,1 ng/ml (Coat-A-Count)


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IMMULITE 2000 DigitossinaUso: Per dosaggi diagnostici in vitro conl'analizzatore IMMULITE 2000 — per lamisurazione quantitativa della digitossinanel siero, quale ausilio nellasomministrazione terapeutica di questocardioglicoside.Codice: L2KDG2 (200 test),L2KDG6 (600 test)Codice del Test: DGT Colore: Rosso

Riassunto e Spiegazione delTestLa Digitossina è un glicoside cardiaco adazione estesa utilizzato nel trattamento delcollasso congestizio del cuore ed inalcune aritmie. E' strutturalmente identicoalla digossina eccetto che per l'assenza diun gruppo idrossile individuale. Essendomeno polare, la Digitossina vieneassorbita in maniera più completa, ecircola di più legata alle proteine. Vienemetabolizzata estensivamente nel fegato,in forma attiva ed inattiva. La Digitossinaha un'emivita comparativamente estesa di5–7 giorni ed, eccetto nella sindromenefrotica, non viene influenzata dalladisfunzione renale.

Un picco transitorio è associato alla fasedi distribuzione; in seguito, il livellocircolante declina costantemente ed inmodo molto graduale. Per questo motivo, icampioni di sangue per l'analisi dellaDigitossina dovrebbero essere prelevatiprima della dose successiva — o in ognicaso non meno di 6 ore dopo la doseprecedente — per consentire che i livellidel plasma e dei tessuti si riequilibrino.Le determinazioni del siero possonoaiutare nella verifica della conformità enella regolazione della dose perraggiungere la concentrazione di plasma

desiderata. Il controllo dei livelli circolantidi Digitossina è particolarmenteimportante quando ci sono complicazionienteroepatiche o renali, e durante laterapia concomitante con farmaci come laquinidina, che può influenzare lefarmacocinetiche della Digitossina.Occorre tenere presente che il rapporto tralivello circolante e risposta clinica variamolto da individuo ad individuo, a causa dimolti fattori. Questo fatto è dimostratodalla sovrapposizione considerevole trarange terapeutici e tossici riassunti inletteratura.Per questo motivo, si osservano livellicircolanti di circa 10–25 ng/mL nellamaggior parte dei pazienti che mostranouna risposta terapeutica soddisfacentealla Digitossina, mentre i livelli superiori a45 ng/mL sono tipici di pazienti consintomi di intossicazione daDigitossina.2,4,16 Concentrazioni superiorial range terapeutico convenzionalepossono essere richieste per controllarealcune aritmie. D'altro canto, i livellicircolanti molto inferiori a 45 ng/mLpossono causare sintomi di intossicazionein pazienti resi più sensibili all'azione delfarmaco da un livello di potassio diminuito.Nonostante questo, più è elevato il livellocircolante, più probabile è che i sintomiclinici di intossicazione possano essereattribuiti al farmaco — e viceversa.Le determinazioni del siero devonosupportare il giudizio clinico; non lodevono sostituire. Un valore isolato nondovrebbe essere utilizzato come unicocriterio per la valutazione dell'efficacia odella tossicità; ma, dovrebbe essereinterpretato nel contesto globale dellostudio clinico.

Principio del DosaggioL'IMMULITE 2000 Digitossina é undosaggio immunoenzimatico in fasesolida, in chemiluminescenzaCicli d'incubazione: 1 × 30 minuti.

Prelievo dei CampioniPrelevare il sangue in provette semplici(senza anticoagulanti) o in provetteeparinizzate, e separare il siero dallecellule. Occorre annotare l'ora delprelievo.


Per evitare risultati erroneamente elevatidi Digitossina, i campioni dei pazientidevono essere prelevati poco prima delladose successiva — o in ogni caso nonmeno di sei ore dopo la somministrazionedi questo glicoside cardiaco.Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.I campioni emolizzati possono indicare untrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2000 Digitossina non é statoverificato con tutte le possibili variazioni ditipi di provette. Consultare la sezioneriguardante i Campioni Alternativi perdettagli sulle provette testate.Volume Richiesto: 10 µL siero.

Conservazione: 7 giorni a 2–8°C o2 mesi a –20°C.

Avvertenze e precauzioniAd uso diagnostico in vitro.

Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminaresecondo le normative di legge vigenti.Seguire le precauzioni universali, emanipolare tutti i componenti come sepotessero trasmettere agenti infettivi.Sono stati dosati i materiali di origineumana e sono stati trovati non reattivi perla Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acqua

per evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.Substrato chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica).

Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali fornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette Digitossina(L2DG12)Con codice a barre. 200 sferette coattatecon un anticorpo policlonale di coniglioanti-Digitossina. Stabile a 2–8°C fino alladata di scadenza.L2KDG2: 1 Confezione.L2KDG6: 3 Confezioni.

Porta Reagente Digitossina (L2DGA2)Con codice a barre. 11,5 mL di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conDigitossina in un tampone. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.L2KDG2: 1 Porta Reagente.L2KDG6: 3 Porta Reagenti.

Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori Digitossina (LDGL, LDGH)Due flaconi (Basso ed Alto), 4 mLciascuno, di Digitossina in siero umanoprocessato, con conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per6 mesi (aliquotato) a –20°C.L2KDG2: 1 set. L2KDG6: 2 set.

Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste (fornite col kit) sulle provette dellealiquote cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Componenti del kit fornitiseparatamenteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di Lavaggio dell'Ago


L2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)SDCM: Controllo bi-livello, multicostituito

Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; Provette;controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per prestazioni ottimali, èimportante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinite nel Manuale dell'OperatoreIMMULITE 2000.Vedi Manuale dell'Operatore IMMULITE2000 per: preparazione, messa a punto,diluizione, calibrazione, dosaggio eprocedure di controllo di qualità.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.

Controllo di Qualità: Utilizzare controlli opool di sieri con almeno due livelli (alto ebasso) di Digitossina.

Range TerapeuticoI risultati seguenti sono presenti inletteratura per i livelli terapeutici e tossicidi Digitossina in circolo.16

ng/mL nmol/L

Range terapeutico 10–25 13–33

Livello di tossicità >45 >59

Considerare questi limiti soltanto comelinee guida. Ogni laboratorio dovrebbestabilire i propri range di riferimento.

LimitiMolti fattori fisiologici, farmacologici,patologici e genetici possono influenzarel'interpretazione dei risultati (vedi sezioneRiassunto e Spiegazione).Nei casi di sovradosaggio, i campionidevono essere ottenuti prima disomministrare l'antidoto immuno Fab dellaDigitossina (p.e. Digibind®) poichè èprobabile che questi interferiscano con ildosaggio della Digitossina. Dopo lasomministrazione del preparato, èpossibile eseguire determinazioni accuratedella Digitossina soltanto mediantetecniche specializzate (non comunementedisponibili in molti centri clinici). Iframmenti Fab sono stati eliminati dal

corpo; questo processo richiede alcunigiorni con una funzione renale intatta, eduna settimana o più per pazienti condisfunzioni renali. Oltre agli effetti in vitro,questi preparati, somministrati per viaendovenosa, causano un aumento rapidonei livelli di Digitossina circolantefarmacologicamente inattiva Fab legatache può essere individuataimmunologicamente.15

La presenza di Uzara® nel siero deipazienti può risultare in risultati didigitossina falsamente elevati.

Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenuticon questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedi tabelle e grafici per datirappresentativi delle prestazioni deldosaggio. I risultati sono espressi inng/mL. (Se non diversamente annotato,tutti i risultati sono stati generati dacampioni di siero prelevati in provettesenza barriere di gel o additivi chefavoriscano la coagulazione.)

Fattore di Conversione:ng/mL × 1,307 → nmol/LRange di calibrazione: 5 – 60 ng/mL(6,5 – 78 nmol/L),Sensibilità analitica: 1 ng/mL(1,3 nmol/L)

Precisione: Sono stati dosati campioni induplicato nel corso di diversi giorni per untotale di 40 sedute ed 80 replicati. (Veditabella "Precision".)


Linearità: I campioni sono stati dosati avarie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” perdati rappresentativi.)Recupero: Sono stati dosati campioni 1:19 con tre soluzioni di Digitossina (193,385 e 770 ng/mL). (Vedi tabella“Recovery” per dati rappresentativi).Specificità: L'anticorpo è molto specificoper la digitossina. (Vedi tabella"Specificity".)

Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto entro il range di precisionedel dosaggio.

Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 600 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Tipo di Campione Alternativo: Perdeterminare l'effetto di campionialternativi, è stato prelevato del sangue da20 volontari in provette di plasticasemplici, eparinizzate, EDTA e BectonDickinson vacutainer SST®. Ad egualivolumi di campioni misti sono stateaggiunte varie concentrazioni diDigitossina per ottenere valori lungol'intero range di calibrazione del dosaggioe quindi dosati con il kit IMMULITE 2000Digitossina.(Eparina) = 0,90 (Siero) + 0,26 ng/mLr = 0,987

(EDTA) = 0,89 (Siero) + 0,39 ng/mLr = 0,973

(SST) = 1,07 (provette semplici) – 0,07 ng/mLr = 0,975

Valore medio:7,96 ng/mL (Siero)7,46 ng/mL (Eparina)7,50 ng/mL (EDTA)8,48 ng/mL (SST)

Comparazione di metodi 1: L Il dosaggioè stato comparato al Dosaggio IMMULITEDigitossina della DPC in 86 campioni dipazienti. (Range di concentrazione: da 7fino a 57 ng/mL. Vedi grafico.) Conregressione lineare:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 0,4 ng/mLr = 0,98

Valore medio:24,0 ng/mL (IMMULITE 2000)25,1 ng/mL (IMMULITE)

Comparazione di metodi 2: Il dosaggio èstato comparato al dosaggio DPCDigitossina Coat-A-Count in 89 campionidei pazienti. (Range di concentrazione: da5 fino a 55 ng/mL. Vedi grafico.) Conregressione lineare:(IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) – 1,1 ng/mLr = 0,98

Valore medio:24,2 ng/mL (IMMULITE 2000)24,1 ng/mL (Coat-A-Count)

Assistenza tecnicaAll'Estero: Contattare il ProprioDistributore Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell’ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 DigitoxinaUtilização: Para o doseamentoquantitativo diagnóstico in vitro dadigitoxina no soro, em conjunto com oanalisador IMMULITE 2000 como auxíliona administração terapêutica destecardioglicosído.Números de catálogo:L2KDG2 (200 testes),L2KDG6 (600 testes)Código do teste: DGT Cor: Vermelho

Sumário e explicação do testeA digitoxina é um glicosído cardíaco deactuação longa usado no tratamento deinsuficiência cardíaca congestiva e certasarritmias. A sua estrutura é idêntica à dadigoxina excepto pela ausência de umúnico grupo de hidroxilos. Por ser menospolar, a digitoxina é absorvida maiscompletamente, e circula na sua maioria,ligada a proteínas. É metabolizada,extensivamente, no fígado para a formaactiva e inactiva. A digitoxina possui umtempo de meia-vida comparativametnelongo, de 5 a 7 dias e, excepto nosíndrome nefrótico, em grande parte nãoé afectada pela disfunção renal.


Um pico transitório está associado com afase de distribuição; daí em diante o nívelde circulação exibe um declínio muitogradual e constante. Desta forma, asamostras de sangue para análise dedigitoxina devem ser colhidas logo antesda próxima dose — ou nunca menos de 6horas após a dose anterior — parapermitir o tempo necessário para os níveisde plasma e tecido atingirem o equilíbrio.As determinações no soro podem auxiliarna verificação de conformidade e noajuste da dose para alcançar umaconcentração de plasma desejada. Amonitorização dos níveis de digitoxinacirculante é especialmente valiosa quandohouver complicações renais ouenteroepáticas e durante terapiasimultânea com drogas como quinidina.que podem afectar a farmacocinética dadigitoxina.É importante lembrar, no entanto, que arelação entre os níveis circulantes e aresposta clínica varia enormemente de umindivíduo para outro, devido aos váriosfactores em actuação. Isto é reflectido nasobreposição considerável entre valoresterapêuticos e tóxicos, resumidos naliteratura.

Desta forma, os níveis circulantes deaproximadamente 10 a 25 ng/mL sãoobservados na maioria dos doentes queapresentam uma resposta terapêuticasatisfatória à digitoxina, enquanto níveissuperiores a 45 ng/mL são típicos emdoentes com sintomas de toxicidade pordigitoxina.2,4,16 Contudo, concentraçõessuperiores aos valores terapêuticosconvencionais podem ser necessáriaspara controlar certas arritmias. Por outrolado, níveis circulantes inferiores a45 ng/mL podem causar sintomas detoxicidade em doentes com maiorsensibilidade à áccão da droga devido a,por exemplo, um nível reduzido depotássio. Apesar disso, o mais provável éque os sintomas clínicos de toxicidadepossam ser atribuídos à droga — equanto mais baixo o nível, menor apossibilidade.As determinações no soro devemcomplementar o julgamento clínico, e nãosubstituí-lo. Não deve ser usado um valorisolado como único critério para aavaliação de eficiência ou toxicidade; ao

contrário, deve sempre ser interpretadodentro do contexto clínico total.

Princípio do ProcedimentoIMMULITE 2000 Digitoxina é umimunoensaio competitivo de fase sólida,de enzimas quimico-luminosas.Ciclos de incubação: 1 × 30 minutos.

ColheitaRecolha o sangue em tubos simples (semanti-coagulante) ou heparinizados, esepare o soro das células. A hora dacolheita deve ser anotada.Para evitar resultados enganosamentealtos de digitoxina, as amostras devemser colhidas logo antes da próxima dose— ou nunca menos de 6 horas apósadministração deste glicosído cardíaco.Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.

Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000Digitoxina não foram ainda testados comtodas as possiveis variações originadaspelos tipos de tubos. Consultar a secçãoTipos de Amostras Alternativas para obterdetalhes sobre os tubos que foramtestados.Volume de Amostra: 10 µL de soro.Estabilidade: 7 dias a 2–8°C, ou2 meses a –20°C.


PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8°C. Eliminar deacordo com as leis aplicáveis.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primas,obtidas de soro humano, foram testadas,revelando resultados negativos para asífilis, para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Utilize água destilada oudesionizada.

Materiais FornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessárias para oensaio.

Embalagem de pérolas de Digitoxina(L2DG12)Com código de barras. Contém 200pérolas revestidas com anticorpo policlonalde coelho de digitoxina. Estável até a datade validade a 2–8°C.L2KDG2: 1 embalagem pack.L2KDG6: 3 embalagens.

Embalagem de Reagente de Digitoxina(L2DGA2)Com código de barras. 11,5 mL defosfatase alcalina (de intestino de vitela)conjugada com digitoxina tamponizada.Estável até a data de validade a 2–8°C.L2KDG2: 1 embalagem.L2KDG6: 3 embalagens.

Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa,remova o remanescente daetiqueta com o cuidado de não danificar o

código de barras. Remova o selo dealumínio do topo da embalagem, encaixea tampa deslizante nas ranhuras everifique se a tampa desliza.

Ajustes de Digitoxina (LDGL, LDGH)Dois frascos (nível alto e baixo), de 4 mLcada, de digitoxina em soro humano, comconservante. Estável, após a abertura,durante 30 dias a 2–8°C, ou por6 meses (aliquotado) a –20°C.L2KDG2: 1 conjunto. L2KDG6: 2 conjuntos.Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas da alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") nos tubos deamostra de forma a que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.

Componentes do kit fornecidosseparadamenteL2SUBM: Substrato quiomioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)

SDCM: Controlo multiparamétrico de doisníveisTambém necessárioÁgua destilada ou desionizada; tubos deamostra; controlos.

Procedimento de doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador do IMMULITE2000.Consulte o Manual do Operador deIMMULITE 2000 para para instruçõessobre preparação, diluição, ajuste,doseamento e procedimentos de controlode qualidade.Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.

Amostras de controlo de qualidade:utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) dedigitoxina.

Valor TerapêuticoOs seguintes resultados encontram-seapresentados na literatura para níveis


circulantes tóxicos e terapêuticos dedigitoxina.16

ng/mL nmol/L

Valor terapêutico 10–25 13–33

Nível tóxico >45 >59

Considere estes limites apenas comodirectrizes. Cada laboratório deveestabelecer os seus próprios valores dereferência.

LimitaçõesVários factores fisiológicos,farmacológicos, patológicos e genéticospodem afectar a interpretação dosresultados (veja a secção de Sumário eExplicação).Em casos de dosagem excessiva, asamostras devem ser obtidas antes daadministração de preparações de antídotoimunológico Fab de digoxina (porexemplo, Digibind®) já que se espera queestes interfiram com qualquerprocedimento de imunoensaio dedigitoxina. Assim que tal preparação foradministrada, determinações exactas dedigitoxina podem ser feitas apenas portécnicas especializadas (que não estãohabitualmente disponíveis na maioria dasclínicas) até os fragmentos de Fab seremeliminados do corpo: este processodemora vários dias para doentes com afunção renal intacta, e uma semana oumais para doentes com deterioraçãorenal. Além dos efeitos in vitro, estaspreparações, administradasintravenosamente, causam uma elevaçãorápida na digitoxina total, ligada a Fab,farmacologicamente inactiva, que podeser detectada imunologicamente.15

A presença de Uzara® no soro depacientes pode dar origem a resultadosfalsamente elevados de digitoxina.Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador de

resultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em ng/mL. (Salvo referênciaem contrário, todos os dados provêm deamostras de soro colhidas em tubos semanticoagulantes, barreiras de gel ouaditivos promotores da coagulação.)Factor de conversão:ng/mL × 1,307 → nmol/LCalibração: 5 – 60 ng/mL(6,5 – 78 nmol/L),Sensibilidade Analítica: 1 ng/mL(1,3 nmol/L)Precisão: amostras foram ensaiadas emduplicado durante vários dias num total de40 ensaios e 80 duplicados. (Consulte atabela "Precision".)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob várias diluições. (Consultea tabela "Linearity" para dadosrepresentativos.)Recuperação: As amostras foramadicionadas na relação de 1 para 19 comtrês soluções digitoxina (193, 385 e770 ng/mL) antes do doseamento. (Vertabela de "Recovery" para dadosrepresentativos.)Especificidade: O doseamento éespecífico para digitoxina. (Ver tabela de"Specificity".)Bilirrubina: A presença de bilirubinaconjugada e não conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temefeito no procedimento dentro da precisãodo ensaio.

Hemólise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 600 mg/dL não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.


Lipémia: A presença de trigliceridos emconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio.Tipo de amostra alternativa: Paradeterminar o efeito de amostrasalternatives, foi colhido sangue de 20voluntários em tubos de plástico secos,com EDTA, heparinizados e tubos devacum SST® da Becton Dickinson. Avolumes iguais das mesmas amostrasforam adicionadas várias concentraçõesde Digitoxina para obter valores ao longoda gama de calibração do ensaio. Asamostras foram doseadas com oIMMULITE 2000 Digitoxina.(Heparina) = 0,90 (Soro) + 0,26 ng/mLr = 0,987

(EDTA) = 0,89 (Soro) + 0,39 ng/mLr = 0,973

(SST) = 1,07 (tubos simples) – 0,07 ng/mLr = 0,975

Médias:7,96 ng/mL (Soro)7,46 ng/mL (Heparina)7,50 ng/mL (EDTA)8,48 ng/mL (SST)

Comparação de Métodos 1: Odoseamento foi comparado ao DigitoxinaIMMULITE da DPC em 86 amostras dedoentes. (Zona de trabalho:aproximadamente: 7 – 57 ng/mL. Consulteo gráfico.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 0,4 ng/mLr = 0,98

Médias:24,0 ng/mL (IMMULITE 2000)25,1 ng/mL (IMMULITE)

Comparação de Métodos 2: Odoseamento foi comparado ao kit da DPCde Digitoxina Coat-A-Count em 89amostras. (Zona de trabalho:aproximadamente: 5 – 55 ng/mL. Consulteo gráfico.) Regressão linear:(IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) – 1,1 ng/mLr = 0,98

Médias:24,2 ng/mL (IMMULITE 2000)24,1 ng/mL (Coat-A-Count)

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