Diagnóstico Laboratorial VIH

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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (V.I.H.) DIAGNOSTICO LABORATORIAL

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Diagnostico Laboratorial Vih Colegio Medico Pando

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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (V.I.H.)

DIAGNOSTICO LABORATORIAL

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PRUEBAS LABORATORIALES

• Diagnóstico de la Infección del VIH– Screening (tamizaje)– Confirmatorio

• Pruebas complementarias para el seguimiento de paciente con la infección– Recuento de de Linfocitos CD4/CD8– Carga Viral

• Pruebas de Rutina– Hemograma– Orina– Baciloscopia– Parasitológico– Otros

leucopenia

linfopenia

trombocitopenia

VSG elevada

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DIAGNOSTICO DE LA INFECCION POR EL VIH

Page 4: Diagnóstico Laboratorial VIH

METODOS• METODOS DIRECTOS

- Aislamiento viral: Cultivo viral H9

- PCR : Detección de fracciones antigénicas

del virus ó genoma viral

• METODOS INDIRECTOS

- Detectan la presencia de anticuerpos específicos contra el VIH por medio de técnicas serológicas.

* TEST RAPIDOS * IFI * ELISA

* WESTERN BLOT * LIA

La técnica mas utilizada actualmente para el screening serológico es el test de ELISA y en menor proporción los Test Rápidos (OMS)

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TAMIZAJE SEROLOGICOELISA

Negativo Positivo/Indeterminado Repetidamente

Correr una nueva muestra

Repetidamente POSITIVO

Etapa

(1)

WESTERN BLOT

Negativo Indeterminado Positivo

Correr una nueva muestra 30 a 60 días después

Repetir etapas 1 y 2

Etapa

(2)

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PRUEBAS RAPIDAS

Buena sensibilidad

Económicas y rápidas

Baja Especificidad

CULTIVOS CULTIVOS VIRALES VIRALES

Buena especificidadLentas, baja sensibilidad

Complicado. Costo

ELISAELISA

Buena Sensibilidad y Especificidad

Sencillo y rápido

Periodo de Ventana

Costo

WESTERN WESTERN BLOTBLOT

Confirmatorio, alta Sensibilidad y Especificidad.

Seguro

Elevado Costo

Contaminación

Especificidad

Costo

GenotipificaciónPeriodo de Ventana PCRPCR

TEST TEST VENTAJAS VENTAJAS DESVENTAJAS DESVENTAJAS

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PRUEBA RAPIDA PARA VIH

(INMUNOCROMATOGRAFIA)

Gaby Fabiola Mamani V.

BIOQUIMICA

Page 8: Diagnóstico Laboratorial VIH

PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA)• ObjetivoObjetivo

“ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ”• Fundamento

- - Método cualitativo indirecto basado en

el principio de adsorción selectiva de

inmunoglobulinas.

Page 9: Diagnóstico Laboratorial VIH

Prueba rápida para VIH

Page 10: Diagnóstico Laboratorial VIH

Prueba rápida para VIH

Page 11: Diagnóstico Laboratorial VIH

Prueba rápida para VIH

Page 12: Diagnóstico Laboratorial VIH

8. Coloque la muestra de sangre completa colectada en el capilar en la

superficie absorbente, y espere un minuto

Prueba rápida para VIH

Page 13: Diagnóstico Laboratorial VIH

Prueba in Vitro

Tarjetas de ensayo recubiertas de antígeno recombinante del VIH 1 y VIH 2 y de

péptidos sintéticos.

Laboratorios Abbott

Page 14: Diagnóstico Laboratorial VIH
Page 15: Diagnóstico Laboratorial VIH

ENZIMOINMUNOENSAYO

(ELISA)

Page 16: Diagnóstico Laboratorial VIH

TEST DE ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)

• ObjetivoObjetivo

“ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ”• Fundamento

- - Método enzimático, cualitativo indirecto

basado en el principio de “Sandwich” en un

solo paso

Page 17: Diagnóstico Laboratorial VIH

FUNDAMENTO

Antígenos VIH1/2

Anticuerpos Suero o Plasma

ConjugadoAntígenos

HIV1/2 marcado con Enzima HPR

ConjugadoAntígenos

HIV1/2 marcado con Enzima HPR

Sustrato(Sustrato

Enzimático + Cromógeno)

H2SO4

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POSITIVO Presencia de anticuerpos HIV

1/2 (color amarillo)

PLACA DE ELISAPLACA DE ELISANEGATIVO Ausencia de Anticuerpos

para VIH1/2 (Sin color)

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L EC T OR D E E

L I S A

Se lee a 450/630 nm

Lectura de la reacción final

Page 20: Diagnóstico Laboratorial VIH

INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBACALCULOS (Organón Teknika)

Validación del Test

* CN < 0.250 (Control Negativo)

* CP1 - CNx > 0.400 (Control Positivo)

* El CP2 - CNx > 0.400

* El Cutt Off = CNx + 0.100 = valor “x”

Valores mayores al Cutt Off, son Positivos Valores menores al Cutt Off, son Negativos Valores +/- 10% del Cutt Off, Indeterminados

Page 21: Diagnóstico Laboratorial VIH

WESTERN BLOT

(TEST CONFIRMATORIO)

Page 22: Diagnóstico Laboratorial VIH

TEST DE WESTERN BLOT

• Objetivo- Detectar anticuerpos específicos

contra el VIH1/2

• Fundamento• Test Inmunolineal o ELISA en banda, que detecta anticuerpos

• Lisado viral de células infectadas, sometidos a electroforésis en gel de poliacrilamida y transferido a hojas de nitrocelulosa

Page 23: Diagnóstico Laboratorial VIH

• POSITIVO- Si dos bandas presentan intensidad >1+ en relación

al control , - Una banda de envoltura y la p24- Presencia de bandas gp120, gp41, p31, p24 y p17

para HIV1- Proteínas gp105 y gp36 para HIV2

Criterios de interpretación

gp120 gp41 p31 p24 p17

3+ 1+ +/-

Control

gp105 gp36

Page 24: Diagnóstico Laboratorial VIH

• INDETERMINADO- Si dos o mas bandas presentan intensidad +/-- Si una banda presente intensidad <1+ y el resto son negativos en relación al control

Criterios de interpretación

• NEGATIVO• Si todas las bandas presentan valoración <+/-• Ausencia de proteínas

3+ 1+ +/-

Control

3+ 1+ +/-

Control Gp120 p24

Page 25: Diagnóstico Laboratorial VIH

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL SEGUIMIENTO DE PARA EL SEGUIMIENTO DE

PACIENTES POSITIVOSPACIENTES POSITIVOS

Page 26: Diagnóstico Laboratorial VIH

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS

• Test para el seguimiento de pacientes VIH Positivos

– Recuento de Linfocitos CD4/CD8

– Carga Viral

Page 27: Diagnóstico Laboratorial VIH

RECUENTO DE LINFOCITOS CD4/CD8

• Citometría de flujo– Tamaño celular – Complejidad interna o gránulos internos– Intensidad relativa de la Fluorescencia

• ELISA (Enzimoinmunoensayo)

• Inmunofluorescencia (IFI)

Page 28: Diagnóstico Laboratorial VIH

CITOMETRO DE FLUJO EPICS XL PECKMAN COULTER

Page 29: Diagnóstico Laboratorial VIH

Fundamento del Citómetro de Flujo

Page 30: Diagnóstico Laboratorial VIH

• El Recuento de CD4/CD8, tiene como finalidad de evaluar el estado inmunológico de la persona infectada

• Valores de referencia:– Células CD4+ varían entre 600 a 1500 células

por mm3 de sangre– Células CD8+ varia entre 300 a 800 células

por mm3 de sangre– Relación de células CD4+ vs. CD8+ es de 2:1

PARAMETROS DEL RECUENTO DE CELULAS CD4/CD8

Page 31: Diagnóstico Laboratorial VIH

– Superiores a 500 celulas CD4+ (Buen estado de salud)– Entre 200 y 500 celulas CD4+

• Incrementa riesgo de Herpes, Aftas, Infecciones en piel, Infecciones pulmonares, TB

• Enfermedades Oportunistas Pneumonia por Pneumocistis Carini, Citomegalovirus

– Entre 50 y 200 células CD4+• Se incrementa el riesgo por PCP y otras enfermedades oportunistas• Se recomienda ya el tratamiento preventivo• Inferiores a 100, considerar el tratamiento preventivo para

enfermedades oportunistas e infecciones masivas por hongos.

– Inferiores a 50 células CD4+• Se incrementa riesgo de enfermedades oportunistas• Continuar con terapias preventivas

VALORES ABSOLUTOS

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CARGA VIRALCARGA VIRAL

Page 33: Diagnóstico Laboratorial VIH

DETECCIÓN DE RNA VIRAL

• AMPLICOR HIV MONITORTM Test

(Roche Diagnostic Systems)

• QuantiplexTM HIV RNA Assay

(Chiron Corporation)

• NASBA HIV-1 RNA QT

(Organon Teknika)

CARGA VIRALCARGA VIRAL

Page 34: Diagnóstico Laboratorial VIH

• La carga viral nos indica la actividad del virus

• Herramientas

– Niveles de RNA Viral

– Nivel de riesgo del desarrollo de la enfermedad

– Reacción a la terapia antirretroviral:

• Iniciar, modificar o incrementar medicamentos

– Si la droga o medicamento esta dando o no resultado y cuando empieza a perder su efectividad

CARGA VIRALCARGA VIRAL

Page 35: Diagnóstico Laboratorial VIH

• Muestra de sangre (plasma sanguíneo)• Múltiples copias del virus presente en la

muestra• Proceso matemático se da el número estimado

de las partículas virales presentes en la muestra(200 –1.000.000 copias/ml)

• Margen de error del 20%• Utilizar el mismo laboratorio y examen para el

seguimiento y los cambios de la carga viral

CARGA VIRALCARGA VIRAL

Page 36: Diagnóstico Laboratorial VIH

• Los niveles altos de RNA Viral se correlacionan con bajos recuentos de Linfocitos CD4+

• Niveles superiores a 100.000 copias/ml propensas a desarrollar la enfermedad SIDA

• Niveles inferiores a 10.000 copias/ml disminuye el riesgo a la enfermedad

CARGA VIRALCARGA VIRAL

Page 37: Diagnóstico Laboratorial VIH

CARGA VIRALCARGA VIRAL

METODO AMPLICOR (Roche) RT-PCR

NASBA HIV-1 RNA QT Amplificación isotérmica de RNA

QUANTIPLEX HIV-1 RNA

Rango de detección

200-750.000 400-10.000.000 500-800.000

Nivel de detección mínimo (Sensibilidad copias/ml)

200 400 240

Volumen de plasma

200 ul 1000 ul 2000 ul

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DIAGNOSTICO

PEDIATRICO

Page 39: Diagnóstico Laboratorial VIH

• La presencia de IgG materna en el recién nacido dificulta el diagnóstico.

• Seguimiento durante 15 a 18 meses con WB en forma seriada.

• Detección de antígeno, aislamiento viral y la PCR son de utilida, pero debe ser evaluado con:– Clínico

– Inmunológico

Page 40: Diagnóstico Laboratorial VIH

Factores que pueden influir en los resultados:

– Laboratorio– Reactivos– Tiempo de procesamiento – Horario de la toma de muestra– Presencia de infecciones– Falta de sueño– Estrés– Otros factores biológicos

Page 41: Diagnóstico Laboratorial VIH

• Para el diagnóstico de la Infección por el VIH– PRUEBA RAPIDA, nos permite realizar el tamizaje

serológico, mediante la detección de anticuerpos Anti -VIH1/2, con buena sensibilidad.

– ELISA, nos permite detectar los anticuerpos Anti-VIH1/2, con una alta sensibilidad y especificidad

– Es importante realizar el Test Confirmatorio de Western Blot, para dar un resultado final

CONCLUSIONES

Page 42: Diagnóstico Laboratorial VIH

• Para el seguimiento de pacientes con la infección, es importante:– El Recuento de Linfocitos CD4/CD8, debe ir paralelo a la

prueba Carga Viral– Evaluar el estado clínico del paciente

• Realizar seguimiento al paciente VIH positivo, en coordinación de:– Médico-Clínico, – Laboratorio y– Consejería– Adherencia permanente

CONCLUSIONES

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PREVENCIÓN

• Promoción a todo nivel social del uso del preservativo

• Tratamiento y prevención de otras enfermedades de transmisión sexual

• Programa de reparto de jeringas para drogadictos

Page 44: Diagnóstico Laboratorial VIH

BIOSEGURIDAD

TODO MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER

CONSIDERADO Y MANIPULADO COMO POTENCIALMENTE

INFECCIOSO

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