Cuantificación de

esteroles y estéril

esteres en alimentos y

bebidas fortificadas

por CG/FID

Presenta: Stefi Castillejos

Márquez

Maestría en ciencias: Productos

naturales y alimentos

1

Clement L.M., Hansen, S.L., Costin, C.D., Perri, G.L. (2010). Quantitation of

sterols and steryl esters in fortified foods and beverages by CG/FID. J am Oil

Chem Soc, 87:973-980

Introducción

2

-Esteroles

libres

-Estéril

esteres

-Estéril

glucósidos

-Estéril

glucósidos

acilados

Introducción

3

Esteroles libres

Estéril glucósidos

Estéril glucósidos

acilados

4

Introducción

Fitoesteroles

Añadidos a

alimentos

Alimentos a

personas que

desean baja LDL

Propiedades

-Arteroescleroticas

-Antiinflamatorias

-antioxidantes

• Métodos para determinación de esteroles

en alimentos

5

Introducción

Hidrólisis ácida

y/o

Extracción de

lípidos.

y/o

Saponificación

de esteroles

libres

Extracción y

separación,

purificación de

esteroles no

saponificables

Formación de

derivados de

esteroles

Análisis CG

Capilar con

detector FID o

acoplado a

masas

Procedimientos Experimentales

• Preparación de soluciones estándar

• Para análisis de soluciones estándar se

utilizo TMS (trimetil silano)

6

Solución Stock

O estándar

interno

Epicoprotanol y

5β- colestan-3α-

ol

• Saponificación alcalina: preparación de

bebidas y alimentos.

• Hidrólisis ácida saponificación alcalina

7

Procedimientos Experimentales

Muestra + Solución

Stock + NaOH:MeOH

2.3N

Muestra + Solución

Stock + HCL 3N Fase orgánica

Fase

orgánica

+ NaOH:MeOH

2.3N

8

Procedimientos Experimentales

• Análisis por cromatografía de Gas

– Condiciones CG, inyección Split

9

Procedimientos Experimentales

Fase estacionaria:

Columna no polar Detector: FID

Gas acarreador:

hidrógeno

Flujo: 0.8mL/min

Programa de

temperaturas: 200-

300°C, velocidad:

3°C/min.

Permanencia

11.67min

Volumen de

inyección: 1 micro

litro

Flujo de gases del

detector: Aire

450mL/min.

H: 40mL/min

N: 45mL/min

Proporción Split:

1:10, [IS]≥[1mg/ml]

1:100. [IS]≤ [1mg/ml]

– Condiciones CG acoplado a masas

10

Procedimientos Experimentales

Fase estacionaria:

Columna no polar

Volumen de

inyección: 1 micro

litro

Programa de

temperaturas: 200-

300°C, velocidad:

3°C/min.

Permanencia

11.67min

Detector:

cromatografo de

masas

Gas acarreador:

Helio

Flujo: 1.1 mL/min

-Temperaturas

Liner: 340°C

Entrada:325°C

• Cuantificación de esteroles

– Determinación de pureza del estándar interno 1. Determinación del área de los picos de Epicoporostanol y 5β-

colestan-3α-ol.

2.

11

Procedimientos Experimentales

– Cuantificación de esterol utilizando el factor

teórico de corrección.

12

Procedimientos Experimentales

Resultados y discusión

13

Separación cromatografica

Esterol Tiempo (min)

Hidrocarbonos C14:0 2.40

Hidrocarbonos C38:0 44.55

Ácidos grasos como derivados de TMS, C10:0 2.55

Ácidos grasos como derivados de TMS, C24:0 22.60

Tocoferoles y Tocotrienoles como derivados de TMS 24.10-26.50,

28.50-29.00 y

31.40

Escualeno y Escualano 18.70-22.40

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Resultados y discusión

• Exactitud y repetitividad

– Contenido de esteroles en alimentos y

bebidas formuladas con esterol y estéril

esteres concentrados

15

Resultados y discusión

Análisis de los concentrados de esterol y estéril

esteres concentrados

Análisis de alimentos y bebidas formuladas con esterol y estéril

esteres concentrados

16

Resultados y discusión

17