Component Resolved Diagnostics · •Risikomarkører •Ara h 2 peanut •Cor a 8 (LTP) hasselnød...
Transcript of Component Resolved Diagnostics · •Risikomarkører •Ara h 2 peanut •Cor a 8 (LTP) hasselnød...
Component Resolved DiagnosticsDSPAP 2011
Hotel Koldingfjord
Kirsten Skamstrup Hansen ovl.PhD.Pædiatrisk Klinik Gentofte
Allergicentret Gentofte Hospital
Terminologi
• Component Resolved Diagnostics (CRD)
• Component based microarray
• Allergen based microarray
• Molecular Diagnosis
Historie
• 1921 Prautznitz og Küstner• Overførbar serumfaktor
• 1967-69 IgE-antistof• Ishizaka, Denver, USA/Johansson, Stockholm, Sverige
• 1996-97• 3-D struktur Bet v 1 fra Birk, ALK, Hørsholm, DK
• Men komponenter ’gammel’ viden• ex. betydning af mælkeproteiner Høst, Odense
• 2010 de fleste ’major allergener’ karakteriserede• Sekvensbestemmelse, kloning
• Rene, rekombinante proteiner
• Mikroarrays
• Prospektiv undersøgelse af reaktiviteten overfor æble før og under en pollensæson
• 27 birkepollenallergikere
• Fødevareprovokationer før og under pollensæson: DBPCFC + åben prov
• SPT, IgE, HR, Immunoblot• oprenset Mal d 1 fra Golden Delicious æble
• Symptom- og medicinregistrering
• Resultater• Øget klinisk reaktivitet i pollensæson
• Test med oprenset Mal d 1 svagere respons –årsag major allergen koncentration lav!!!
Æble og birk
Skamstrup Hansen K, J Crom 2001
Sym
pto
msco
re
Før Under sæson
P<0.05
Pos prov
Neg prov
Fødevareprovokation æble
Sensibilisering og allergi
• IgE eller prik positiv = sensibilisering
• Symptomer = allergi
• Ingen IgE-test bedre end udgangsmaterialet
• Ingen IgE-test bedre end anamnese og provokation
Et allergen…
• Allergen• Antigen, som kan binde IgE…
• Allergenkilde• Kompleks matrix med mange antigener, både
• IgE-bindende og ikke-IgE-bindende
• Epitop• Aminosyresekvens på allergen, som kan binde IgE på mastcelleoverflade
• Allergenekstrakt• Oprenset fra allergenkilde
• ofte indeholdende flere forskellige allergenmolekyler og• forskellige isotyper af de enkelte molekyle• og andet…
• Recombinante allergener/komponenter
• Oprensede naturlige allergener/komponenter
ISAC - microarray
• 103 allergener fra 47 allergen kilder
• Rene proteiner• Flest rekombinante, få naturligt oprensede
• Markører i hjørner af biochip’pen
• 3-dobbelt bestemmelse
• 20 µl serum
• Semikvantitative resultater• ISU = ISAC Standardized Unit
• < 0.3 ISU til > 15 ISU
ImmunoCAP ISAC ® Immuno Solid phase Allergen Chip
• 2 år gammel pige
• Anafylaksi efter indtag af cashewnød
• Birk + kryds• Hasselnød• Hassel• El• Æble• Fersken• Ara h 8• Gly m 4
Case cashewnød
Case cashewnød
• Klinik• Fødevareprovokation positiv cashew, peanut
• Astma
• Rhinoconjunctivitis
• Blev jeg klogere af ISAC test?• Ana o 2 fra cashew negativ, men anafylaksi og pos provokation lav dosis
• Svær Bet v 1 sensibilisering?
• Ara h 2 svagt pos, og milde symptomer
• Sand multisensibilisering• flere allergenfamilier, flere arter, dyr, planter, mider• øget risiko for blivende allergisk sygdom, fortsat astma…
• Risikomarkører• Ara h 2 peanut
• Cor a 8 (LTP) hasselnød + andre LTP
• Fel d 1 større risiko for astma og Fel d 1, Bet v 1, Ara h 1, 2, 3 risiko for svær astma?
Von Haage M, foredrag, Stockholm, 2010
• Sensibiliseringsmønstre• Den enkelte patient
• mono- eller multisensibilisering
• krydsreaktivitet
• specifikke determinanter korreleret til sværhedsgrad og prognose
• Geografiske forskelle• pollentyper, klima
• spisevaner
• Antal tests måske reduceres• Ex. Bet v 1 forklarer OAS frugt, nødder
Fordele ved CRD
• Relativt få proteinfamilier• Struktur
• Funktion
• Vekslende grad af krydreaktivitet
• Ex. patogenesis related proteins• Ex. PR-10 ~ Bet v 1
• Relativt labile
• Ex. lagerproteiner
• Ex. Ara h 2
• Stabile
• Ex. lipid transfer proteins• Ex. LTP fra nødder, fersken etc.
• Stabile
Allergener
• Multicenter studie• Züric, Madrid, København
• Population• Hasselnøddeallergi med og uden pollenallergi (birk eller oliven)
• 20 hasselnød, 20 pollen minus hasselnød og 20 raske kontroller fra hvert center
• Ca 180 i alt
• Metoder• DBPCFC hasselnød, åbne provokationer kontroller
• IgE Phadia• Cor a 1, 2, 8, 9, 11, CCD, vicilin, bromelain + fuld ekstrakt• pollenallergen panel
Hasselnøddeallergi i Europa
• Resultater• Svære symptomer hyppigst i Spanien (5) mod 1 og 0 i Schweiz og DK
• LTP hyppigst i Spanien, men ikke pos hos alle med svære symptomer
• LTP Schweiz og DK ikke korreleret til sværhedsgrad af symptomer
Hasselnøddeallergi i Europa
LTPPR-10
DK Danmark
CH Schweiz
E Spanien
Skamstrup Hansen K et al. JACI 2009
Fordele ved CRD 2
• Adskille kliniske sygdomsenheder, samme allergen(kilde)• Ex. Hvede
• fødevareallergi hvede børn -5 gliadin (Tri a 19)• food-dependent, exercise-induced anaphylaxis hvede voksne Tri aA_TI + (Tri a 19)
• Specifik test før specifik behandling• Ex. Pollen
• birk = Bet v 1• græs = Phl p 1 og/eller 5• obs Alternaria og Profilin
• Ex. Insektstik• bi = Api m 1• hveps = Ves v 5 (ikke i ISAC nu)• obs CCD, hualuronidase
Pasuoluo K, JACI 2001, 2003
Battais F, Clin Exp all 2003
Matsuo H, J Immunol 2005
Heil C, Clin Exp All 2009
Andersson K, Int Arch All Imm 2009
De Graaf DC, J Proteomics 2009
Muller UR allergy 2009
Bilo BM, allergy 2009
Peanut
• Ara h 1, 2, 3, 6 primær sensibilisering• Ara h 8 PR-10
• Ara h 9 LTP
• Ara h 2 vigtigste allergen, børn med peanutallergi
• USA > Sverige > Spanien Ara h 1-3; Ara h 9 hyppig og tidligst debut i Spanien; Ara h 8 i Sverige
• Alle provokationspositive patienter positive Ara h 2
• Sensibilisering flere allergener risiko for svær reaktion
• Krydsreaktivitet• Mellem major-allergenerne
• Bælgfrugter, soya, lupin, mandel, paranød, (hasselnød)
Nicolau N, JACI 2010
Vereda A, JACI 2010
Bindslev-Jensen C, Eller E, Allergi-
centeret, OUH, u-publicerede data
Lewis SA, Clin Exp All 2005
Andre mulige applikationer
• Kat og hund• Fel d 1, 2, 3 primær sensibilisering
• Can f 1, 2, 5 primær sensibilisering
• Fel d 2 og Can f 3 (serum albumin) kryds med andre pattedyr
• Fel d 2 eller Can f 3 alene og ingen symptomer ved kontakt
• måske kan dyrene skånes!
• Latex• Hev b 1, 3, 5, 6 primær sensibilisering
• Obs profilin (Hev b 8) og CCD
Grönlund H, Int Arch All Immun 2009
Saarelainen S, Clin Exp Allergy 2004
Raulf-Heimsoth M, Clin Exp Allergy 2007
Pamies R, Ped Allergy Immunol 2006
…og mulige faldgruber
• De forkerte patienter• Milde symptomer
• Monosymptomatologi uden behov for behandling
• Allergi mælk/æg før provokation af småbørn• ovomocoid dog markør for mere blivende symptomer
• Forkerte allergener/komponenter• Bet v 1 ikke relevant udenfor birkezonen
• LTP kun interessant ved vurdering af sværere symptomer
• Positiv IgE bi/hveps, men ingen symptomer?
• Vi eksponeres ikke for rene komponenter…
• Fejlfortolkning af resultater• Profilin, CCD sjældent relevant i nord
• Positiv bi/hveps, ingen symptomer? Lægeansvar?
Overvejelser før CRD
• Hvornår?
• Når der er brug for mere viden om sensibiliseringsmønster
• Hvorfor?
• Vurdere risiko for svære symptomer, også ved provokation
• Prognose
• Uforklarede reaktioner
• Planlægning af specifik behandling
• Med hvad?
• Relevante komponenter eller irrelevante…
• Enkeltallergener eller ISAC
• Hvem bestiller og tolker?
• Kræver viden om allergener og allergensystemer
• Planlagt videre udredning/behandling, - ellers henvis
Konklusion
• CRD giver mulighed for vurdering af • Sensibiliseringsmønstre og sammenhæng mellem allergene komponenter
• Sammenhæng mellem sensibilisering og symptomer
• Måske udsige noget om risiko og prognose
• CRD en forudsætning for individualiseret behandling
• Fare for vis fejl- og overdiagnostisering
• Brug af enkeltkomponenter i forhold til arrays skal afklares
Fremtid
• ISAC • Flere komponenter
• Flere chips, mere målrettet forskellige sygdomsenheder?
• Flere kliniske studier før rutinebrug• Praktisk brugbare oplysninger eller ’aha’?
• Hvilke allergenfamilier?
• Hvilke symptomer?
• Mere forskning: Immunologi, genetik, epigenetik• Sammenhæng mellem sensibilisering og allergi
• Sammenhæng mellem eksposition, sensibilisering og allergi
• Epitope mapping