Chromosomal Fusion in Primate Human Anscestry

8/8/2019 Chromosomal Fusion in Primate Human Anscestry

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P r o c . N a d l . A c a d . S c i . USAV o l . 8 8 , p p . 9 0 5 1 - 9 0 5 5 , O c t o b e r 1 9 9 1G e n e t i c s

O r i g i n o f human c h r o m o s o m e 2 : An a n c e s t r a lt e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o nJ . W. I J D O * t , A . B A L D I N I t , D . C . W A R D t , S . T . R E E D E R S * * , AND R . A . W E L L S * * H o w a r d H u g h e s M e d i c a l I n s t i t u t e a n d t D e p a r t m e n t o f G e n e t i c s , Y a l e U n i v e r s i t y S c h o o l o f M e d i c i n e , New H a v e n , CT 0 6 5 1 0C o m m u n i c a t e d b y A l a n G a r e n , J u l y 8 , 1 9 9 1ABSTRACT W e h a v e i d e n t i f i e d t w o a l l e l i c g e n o m i cc o s m i d s f r o m h u m a n c h r o m o s o m e 2 , c 8 . 1 a n d c 2 9 B , e a c hc o n t a i n i n g t w o i n v e r t e d a r r a y s o f t h e v e r t e b r a t e t e l o m e r i cr e p e a t i n a h e a d - t o - h e a d a r r a n g e m e n t , 5 ' ( T T A G G G ) , , -( C C C T A A ) , , 3 ' . S e q u e n c e s f l n g t h i s t e l o m e r i c r e p e a t a r ec h a r a c t e r i s t i c o f p r e s e n t - d a y human p r e t e l o m e r e s . B A L - 3 1n u c l e a s e e x p e r i m e n t s w i t h y e a s t a r t i f i c i a l c h r o m o s o m e c l o n e so f human t e l o m e r e s a n d f l u o r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o nr e v e a l t h a t s e q u e n c e s f l a n k i n g t h e s e i n v e r t e d r e p e a t s h y b r i d i z eb o t h t o b a n d 2 q 1 3 a n d t o d i f f e r e n t , b u t o v e r l a p p i n g , s u b s e t s o fh u m a n c h r o m o s o m e e n d s . W e c o n c l u d e t h a t t h e l o c u s c l o n e d i nc o s m i d s c 8 . 1 a n d c 2 9 B i s t h e r e l i c o f a n a n c i e n t t e l o m e r e -t e l o m e r e f u s i o n a n d m a r k s t h e p o i n t a t w h i c h t w o a n c e s t r a l a p ec h r o m o s o m e s f u s e d t o g i v e r i s e t o human c h r o m o s o m e 2 .S i m i l a r i t i e s i n c h r o m o s o m e b a n d i n g p a t t e r n s a n d h y b r i d i z a -t i o n h o m o l o g i e s b e t w e e n a p e a n d h u m a n c h r o m o s o m e s s u g -g e s t t h a t h u m a n c h r o m o s o m e 2 a r o s e o u t o f t h e f u s i o n o f t w oa n c e s t r a l a p e c h r o m o s o m e s ( 1 - 3 ) . M o l e c u l a r d a t a s h o w e v -i d e n c e t h a t t h i s e v e n t m u st h a v e o c c u r r e d o n l y a f e w m i l l i o ny e a r s a g o ( r e f s . 4 a n d 5 a n d t h e r e f e r e n c e s t h e r e i n ) . A l t h o u g ht h e p r e c i s e n a t u r e o f t h i s p u t a t i v e f u s i o n i s u n k n o w n , c y t o -g e n e t i c d a t a p o i n t t o e i t h e r a c e n t r o m e r i c o r t e l o m e r i c f u s i o ni n t h e v i c i n i t y o f r e g i o n 2 q l ( 1 , 2 , a n d 6 ) . T h e o b s e r v a t i o n t h a tt e l o m e r i c DNA i s p r e s e n t i n c h r o mo s o m a l b a n d q 1 3 s u g g e s t st h a t t e l o m e r e s , t h e e x t r e m e e n d s o f c h r o m o s o m e s , may h a v eb e e n i n v o l v e d i n t h i s f u s i o n ( 7 , 8 ) . N o r m a l l y , t e l o m e r e s f o r ma d y n a m i c b u f f e r a g a i n s t l o s s o f i n t e r n a l s e q u e n c e a n dp r e v e n t c h r o m o s o m e s f r o m f u s i n g ( f o r r e v i e w , s e e r e f . 9 ) . B yc o n t r a s t , n o n t e l o m e r i c DNA e n d s a r e s u b j e c t t o d e g r a d a t i o nb y n u c l e a s e s a n d t o f u s i o n b y l i g a t i o n ( 1 0 , 1 1 ) .T h e t e r m i n i o f h u m a n c h r o m o s o m e s c o n s i s t o f h e a d - t o - t a i lt a n d e m a r r a y s o f TTAGGG, r u n n i n g 5 ' - - 3 ' t o w a r d t h e e n d o ft h e c h r o m o s o m e , w i t h a v e r a g e l e n g t h s o f 5 - 1 0 k i l o b a s e s ( k b )i n s o m a t i c c e l l s ( 7 , 1 2 , 1 3 ) . T h e p r o x im al e n d s o f t h e s e a r r a y sc o n t a i n d e g e n e r a t e f o r m s o f t h i s r e p e a t , s u c h a s ( T T G G G G ) ,a n d ( T G A G G G ) J , ( 1 4 ) . S e q u e n c e s a d j a c e n t t o t h e s e s i m p l er e p e a t s h a v e b e e n c h a r a c t e r i z e d i n a n u m b e r o f h u m a nc h r o m o s o m e s a n d s h o w n t o c o n s i s t o f r e p e t i t i v e e l e m e n t s ,e a c h s h a r e d b y a s u b s e t o f a l l c h r o m o s o m e s ( 1 3 , 1 5 - 1 7 ) . I na d d i t i o n , s t r e t c h e s o f t e l o m e r i c r e p e a t s a r e p r e s e n t a t i n t e r -

s t i t i a l s i t e s , u s u a l l y i n s u b t e l o m e r i c r e g i o n s b u t a l s o a t ad i s t i n c t i n t e r n a l s i t e w i t h i n b a n d 2 q 1 3 ( 8 ) . W e d e s c r i b e h e r et h e a r c h i t e c t u r e o f t h e s e q u e n c e a t t h i s i n t e r n a l l o c u s a t2 q 1 3 , w h i c h r e p r e s e n t s a r e l i c o f t h e f u s i o n o f t w o a n c e s t r a la p e c h r o m o s o m e s i n t h e e v o l u t i o n o f h u m a n c h r o m o s o m e 2 . 1 1MATERIALS A ND METHODS

L i b r a r y S c r e e n i n g . A p p r o x i m a t e l y 1 . 4 x 1 0 6 c o l o n i e s f r o ma h u m a n g e n o m i c c o s m i d l i b r a r y c o n t a i n i n g Mbo I p a r t i a ld i g e s t i o n f r a g m e n t s o f 3 5 - 4 1 k b i n v e c t o r p W E 1 5 , p r o p a -g a t e d i n h o s t NM554 ( S t r a t a g e n e ) , w e r e s c r e e n e d w i t h p S C 4 ,

a h u m a n g e n o m i c 3 0 0 - b a s e - p a i r ( b p ) A l u I f r a g m e n t p r e s e n ta t t h e s u b t e l o m e r i c r e g i o n s o f f i v e d i f f e r e n t c h r o m o s o m e s , a sw e l l a s a t a s i n g l e n o n t e r m i n a l l o c u s a t 2 q 1 3 , d e s c r i b e de l s e w h e r e ( 8 ) . S i x t y p o s i t i v e s w e r e s c r e e n e d s u b s e q u e n t l yw i t h a ( T T A G G G ) " p r o b e ( n v a r i e s b e t w e e n 1 0 a n d 1 0 0 0 ) .F i f t e e n c o s m i d s h y b r i d i z e d t o b o t h p S C 4 a n d ( T T A G G G ) , .C o s m i d M a p p i n g t o C h r o m o s o m e 2 . P r o b e p S C 4 d e t e c t sf i v e d i f f e r e n t s i z e f r a g m e n t s o n a P s t I d i g e s t o f t o t a l h u m a nDNA r e p r e s e n t i n g t h e d i f f e r e n t c h r o m o s o m a l l o c i . O f t h e s e ,a 2 . 5 - k b P s t I f r a g m e n t w a s a s s i g n e d t o c h r o m o s o m e 2 b ym e a n s o f h y b r i d i z a t i o n o f p S C 4 t o 3 4 s o m a t i c c e l l h y b r i d l i n e s( o b t a i n e d , i n p a r t , f r o m B I O S , New H a v e n , C T ) . W e i d e n -t i f i e d t w o c o s m i d s , c 8 . 1 a n d c 2 9 B , c o n t a i n i n g b o t h( T T A G G G ) , a n d t h e s a m e 2 . 5 - k b f r a g m e n t d e t e c t e d b y p S C 4t h a t m a p s c o n s i s t e n t l y t o c h r o m o s o m e 2 o n l y a n d , t h e r e f o r e ,t h e s e t w o c o sm i d s m u s t o r i g i n a t e f r o m c h r o m o s o m e 2 ( d a t an o t s h o w n ) .R e s t r i c t i o n M a p p i n g o f G e n o m i c C o s m i d s . R e s t r i c t i o n m a p so f g e n o m i c c o s m i d s c 8 . 1 a n d c 2 9 B w e r e c o n s t r u c t e d b y u s i n gp a r t i a l d i g e s t s o f c o s m i d s h y b r i d i z e d t o k i n a s e - l a b e l e d T 3 a n dT 7 p r i m e r s , a s w e l l a s c o s m i d d o u b l e d i g e s t s p r o b e d w i t hs u b c l o n e i n s e r t s .DNA S e q u e n c i n g . DNA s e q u e n c i n g w a s d o n e b y u s i n g t h ed i d e o x y n u c l e o t i d e c h a i n - r e a c t i o n p r o c e d u r e . S u b c l o n e s w i t hs u i t a b l e i n s e r t s i z e s w e r e g e n e r a t e d f r o m c l o n e c 8 . 1 . S e -q u e n c e s w e r e d e t e r m i n e d e i t h e r b y s e q u e n c i n g b o t h DNA

s t r a n d s o r b y s e q u e n c i n g t h e s a m e DNA s t r a n d t w i c e .F l u o r e s c e n c e I n S i t u H y b r i d i z a t i o n . S t a n d a r d m e t a p h a s es p r e a d s w e r e p r e p a r e d f r o m c u l t u r e d p h y t o h e m a g g l u t i n i n -s t i m u l a t e d p e r i p h e r a l b l o o d l y m p h o c y t e s . S i x u n r e l a t e d i n -d i v i d u a l s w e r e s t u d i e d . C h r o m o s o m e p r e p a r a t i o n s w e r e h y -b r i d i z e d i n s i t u w i t h p r o b e s b i o t i n y l a t e d b y n i c k t r a n s l a t i o n ,u n d e r s u p p r e s s i o n c o n d i t i o n s , e s s e n t i a l l y a s d e s c r i b e d b yL i c h t e r e t a l . ( 1 8 ) . T h e h y b r i d i z a t i o n w a s d o n e a t 3 7 C i n 2 Xs t a n d a r d s a l i n e c i t r a t e ( S S C ) / 5 0 o ( v o l / v o l ) f o r m a m i d e / 1 0 o( w t / v o l ) d e x t r a n s u l f a t e / D N a s e I ( 1 . 5 m g / m l ) - c u t h u m a ng e n o m i c DNA ( a v e r a g e s i z e , 3 0 0 - 6 0 0 b p ) / b i o t i n y l a t e d p r o b ea t 3 , u g / m l / s o n i c a t e d s a l m o n s p e r m DNA a t 1 m g / m l . T h ep r o b e w a s d e n a t u r e d i n t h e h y b r i d i z a t i o n m i x t u r e a t 7 5 C f o r1 0 m i n a n d a n n e a l e d a t 3 7 C f o r 2 0 m i n . P o s t h y b r i d i z a t i o nw a s h i n g w a s a t 4 2 C i n 2 x S S C / 5 0 % o f o r m a m i d e f o l l o w e d b yt h r e e w a s h e s i n 0 . 5 x SSC a t 6 0 C . C h r o m o s o m e i d e n t i f i c a -t i o n w a s b a s e d o n i n s i t u h y b r i d i z a t i o n b a n d i n g p r o d u c e d b ya d d i n g h e a t - d e n a t u r e d d i g o x i g e n i n - 1 1 - d U T P ( B o e h r i n g e rM a n n h e i m ) - l a b e l e d A l u - P C R p r o d u c t s i n t h e h y b r i d i z a t i o nm i x t u r e ( = 2 , u g / m l a f t e r t h e r e a n n e a l i n g s t e p ) . T h i s t e c h n i q u ep r o d u c e s a n R - b a n d i n g p a t t e r n s u i t a b l e f o r g e n e m a p p i n gs t u d i e s ( 1 9 ) . B i o t i n - l a b e l e d DNA w a s d e t ec t e d w i th f l u o r e s -c e i n i s o t h i o c y a n a t e - c o n j u g a t e d a v i d i n DCS ( 5 p k g / m l ) ( V e c -t o r L a b o r a t o r i e s ) . D i g o x i g e n i n - l a b e l e d DNA w a s d e t e c t e d b yt T o whom r e p r i n t r e q u e s t s s h o u l d b e a d d r e s s e d . P r e s e n t a d d r e s s : I m p e r i a l C a n c e r R e s e a r c h F u n d , L o n d o n , U n i t e dK i n g d o m .P r e s e n t a d d r e s s : D e p a r t m e n t o f I n t e r n a l M e d i c i n e , T h e T o r o n t oH o s p i t a l , T o r o n t o , O n t a r i o , C a n a d a .I T h e DNA s e q u e n c e r e p o r t e d i n t h i s p a p e r h a s b e e n d e p o s i t e d i n t h eG e n B a n k d a t a b a s e ( a c c e s s i o n n o . M 7 3 0 1 8 ) .

9 0 5 1

T h e p u b l i c a t i o n c o s t s o f t h i s a r t i c l e w e r e d e f r a y e d i n p a r t b y p a g e c ha r gep a y m e n t . T h i s a r t i c l e m u s t t h e r e f o r e b e h er e by m a r k e d " a d v e r t i s e m e n t "i n a c c o r d a n c e w i t h 1 8 U . S . C . 1 7 3 4 s o l e l y t o i n d i c a t e t h i s f a c t .


2/5

P r o c . N a t l . A c a d . S c i . USA 8 8 ( 1 9 9 1 )u s i n g a r h o d a m i n e - c o n j u g a t e d a n t i - d i g o x i g e n i n a n t i b o d y( B o e h r i n g e r M a n n h e i m ) . T e n m e t a p h a s e s p r e a d s w e r e a n a -l y z e d p e r e x p e r i m e n t .

RESULTSI d e n t i f l i c a t i o n a n d C h a r a c t e r i z a t i o n o f G e n o m i c C o s m i d sM a p p i n g t o B a n d 2 q 1 3 . To i n v e s t i g a t e t h e a r c h i t e c t u r e o f t h i sp u t a t i v e f u s i o n p o i n t , we i s o l a t e d g e n o m i c c o s m i d s c o n t a i n -

A

i n g t h e t e l o m e r e - l i k e r e p e a t s f r o m b a n d 2 q 1 3 . A humang e n o m i c c o s m i d l i b r a r y w a s s c r e e n e d w i t h a ( T T A G G G ) "p r o b e a n d a l s o w i t h p S C 4 ( 8 ) . C o s m i d s c o n t a i n i n g b o t h( T T A G G G ) " a n d p S C 4 w e r e a s s i g n e d t o c h r o m o s o m e s b ym e a n s o f h y b r i d i z a t i o n t o 3 4 s o m a t i c c e l l h y b r i d l i n e s ( d a t an o t s h o w n ) . W e i d e n t i f i e d t w o c o s m i d s , c 8 . 1 a n d c 2 9 B , t h a tmap c o n s i s t e n t l y t o c h r o m o s o m e 2 , a c c o r d i n g t o t h e s p e c i f i cl e n g t h o f t h e p S C 4 - h y b r i d i z i n g f r a g m e n t t h e y c o n t a i n , w h i c hi s o n l y s h a r e d w i t h c h r o m o s o m e 2 - c o n t a i n i n g h u m a n - r o d e n t99H HH H

No8. 113b pSC4 612 M7 -Ap613 V 4 . 84 1 - -

FRAGMENTA F R A G M E N T S

c29B 1**j* _JvB1f 79BVj H B 1 91RVRiII RN o s . i 11 p 6 S C 4 W 7 6 1 2 6 1 7 A p . 6 1 3 V 4 . 3 -kb-.S E Q U E N C E D

I4N V E R T E D R E P E A TB

1 G T G C C C C G G C G C C A C G A G G G C G C T G G C G A C C A C T G T A A G C A A G A G A G C C :8 1 GGCCGGCCGC CTTT GCGA TG GC GG A GTTCC GTTCTCCTCA GCA A GA CCC

- ' T r i C r C C T C h 7 R T ( C ! ( C T I r c f i r r n C r C I Z G C XGGAGAGCACC G C AG G G C G AC CTGCGTTG2TC

1 6 1 T C T C C A C A A TGTT ACC.CCAM C TTC A C CM M CC Cx&TCAA2 4 1 CGCGAGGCGA G C T G Q Q T T C T GCTCAGCACA GACCTGGGGG TCACCGTAAA GATGGAGCAG CATTCCCCTA AGCACAGAGG3 2 1 T T G G G G C C A C T G C C T G G C T T T G T G A C A A C T C G G G G C G C A T C A A C G G T G A A T A A A A T C T T CCCGGTTGCA GCCGTGAATA4 0 1 A T C A A G G T C A G A G A C C A G T T A G A G C G G T T C A G T G C G G A A A A C G G G A A A G A AAAAGCCCCT CTGAATCCTG GGCAGCGAGA4 8 1 TTATCCCAAA GCAAGGCGAG GGGCTGCATT GCAGGG

TGAGGGTITGGGTTTTAGGGTTAGGGGTTAGGGTTAGGGCCCCAACCCTAACCCTAC C C T T A ACCCCAACCCCAGCCCTAACCCTAACCCTAACCCTCA

TGAGGGTTGGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGCCCCAACCCTAACCCTAACCCTAACCCCTAACCCCAACCCCTAACCCCTACCCCTAACCCTCA

T T A G G GT T A G G GT T A G G GT T G G G GT T A G G G

CTAACCCTACCCAAAGCCTAAAACCCTAACCCTAACCCCAACCCTACCCTAACCCTAGCCCTCA

T T T G G G T T G G G GTTAGGGG TAGGGGT T A A G G TrTGGGGTTGGGGG T T G G G GTAAGGG T T A A G G GCCCTAA CCCTAACCCCTA CCCCTAACCCTAA CCCTAACCCTAAAA CCGTGACCATAA CCCTAAACCCCTATA CCCTAACCCTTA CCCTAACCCCAA CCCCAAACCCCTAA CCCTAACCCTAG CCCTAACCCTCA CCCTAA

TTGGGGTAGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGCCCCTAACCCCAACCCTACCCTGACCCTAACCCTAACCCTACCCAACCCCTACCCTAACCCAA

T T G G G GTCAGGGT T G G G GT T A G G G GT T G G G GCCCCTAAC C C T T A ACCCTAACCTTGACCCTAAACCCTACCTAACCCTAACCCTAACCCTCA

TTGGGGTCAGGGTTGGGGTAGGGGT T G G G GCCCCAACCCTTAACCCAACCCTGACCCTAACCCCTACCCTTAACCCAACCCCTAACCCTAA

CGTCTGTGC TGAGAAGAAT G C T C G T C C G C CTTTAAGGTG C C C C G T C T G T G C T C A A Q C A G A G C A C GTCCGCCGTCCATCCCT r A C CC C C CT C T CA C TC A r a r A T r C T r C T ( ! ! r c C C T T c CCAATACCC C r - A A G T C T C T Q C C A C ; A f C A - Q A

ACGCAGCTCC GCCCTCGCGA T G C T C T I T C G G CTGTGTGCTA AAGAGAACGC AACTCCGCCC TCGCAAAGGC GGCGCCGCCGC C C A G C C G G A G CGCCGCCCGCCCGAG f A C Q G Q A 2 A f G f G Z G f a C 2 C f a C f a G Q A C C C i G A G A G 2 C 2 C f a G Q f i C f a C 2 G j Gr a C Q i a f G f G f i G ~ f C Q G fAQ(XCfaG G A G r a C f a C r a G G . C f C 2 G A G rC G W X G Q G C r C G C

F I G . 1 . ( A ) R e s t r i c t i o n m a ps o f c o s m i d s c 8 . 1 a n d c 2 9 B i n d i c a t e t h a t t h e y ar e a l l e l i c . T h i c k b a r s i n d i c a t e p o s i t i o n s o f s u b c l on e s t h a t wereu s e d i n h y b r i d i z a t i o n s t u d i e s t o s h o w t h a t t h e two c o s m i d s c o n t a i n h o m o l o g o u s sequences i n t h e s a m e o r d e r . B , B a m H I ; B g , B g i H ; H , H i n d I I I ;R , E c o R I ; a n d V , EcoRV. ( B ) DNA sequence o f r e g i o n i n d i c a t e d i n A s h o w s d e g e n e r a t e h e a d - t o - h e a d a r r a y s o f a t a n d e m r e p e a t h a v i n g t h econsensus TTAGGG. Th e u n d e r l i n e d f l a n k i n g sequences show 80% i d e n t i t y over 2 6 9 b p ( w h e n i n v e r t e d ) a n d were 95% ( l e f t o f t e l o me r e r e p e a t )a n d 9 0 % o ( r i g h t o f t e l o me r e r e p e a t ) i d e n t i c a l t o s e q u e n c e s f o u n d a d j a c e n t t o t h e t e l o m e r i c tandem r e p e a t s i n c l o n e s pTH14 a n d T e l S a u 2 . 0 ,r e s p e c t i v e l y ( 1 3 , 1 7 ) . Th e d a s h e d l i n e i n d i c a t e s s e q u e n c e c o n s i s t i n g o f a 2 5 - b p r e p e a t u n i t w i t h a n 88 % G + C c o n t e n t .

9 0 5 2 G e n e t i c s : I J d o e t a l .

TGAGGGTAGGGTCAGGGTTAGGGGTAGGGGTTAGGGCCCAAACCCTTAACCCTAACCCTTAACCCTACCCCTAACCCTAACCCTAACCCTAACCCTCA

TGAGGGT T G G G GT T A G G GT T A G G G GTAGGGT T A G G G GCCCCAACCCTTACCCTAACCCTTAACCCTAAC C C C A ACCCCTAACCCAACCCCTACCCTAA

5 1 75 7 76 3 66 9 97 6 48 2 48 8 39 4 5

1 0 0 41 0 6 71 1 3 21 1 9 31 2 5 31 3 1 31 3 7 41 4 3 5

1 4 8 21 5 6 11 6 4 11 7 2 11 8 0 1


3/5

P r o c . N a t l . A c a d . S c i . USA 8 8 ( 1 9 9 1 ) 9 0 5 3A B

0 6 0 1 2 0 1 8 0 2 4 0 0 3 0 6 0 1 2 0 8 0 2 4 0

An.~~~~~~~~

F I G . 2 . S e n s i t i v i t y o f t h e s e q u e n c e s h y b r i d i z i n g t o p r o b e 8 1 7 i nH T Y 2 4 3 ( A ) a n d t o p r o b e A p a 8 1 3 i n HTY275 ( B ) t o d i g e s t i o n w i t hB A L - 3 1 n u c l e a s e . H i g h - m o l e c u l a r - w e i g h t DNA i s o l a t e d f r o mHTY243 a n d HTY275 w a s t r e a t e d w i t h B A L - 3 1 n u c l e a s e f o r t h ei n d i c a t e d t i m e i n m i n a t 3 0 " C . T h e DNA w a s t h e n c l e a v e d w i t h P s tI ( H T Y 2 4 3 ) o r E c o R I ( H T Y 2 7 5 ) a n d , a f t e r t r a n s f e r t o m e m b r a n e ,h y b r i d i z e d t o p r o b e s 8 1 7 a n d A p a 8 1 3 , r e s p e c t i v e l y . W e h a v e a t t r i b -u t e d t h e f o c u s i n g o f t h e A p a 8 1 3 - h y b r i d i z i n g f r a g m e n t s o b s e r v e d a t1 2 0 m i n t o a d e c r e a s e d B A L - 3 1 d i g e s t i o n r a t e w h e n t h e e n z y m er e a c h e s t h e C + G - r i c h a r e a ( 2 1 ) , m a r k e d w i th a d a s h e d l i n e i n F i g .1 B .h y b r i d s . F l u o r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n e x p e r i m e n t s l o -c a l i z e d t h e s e c o s m i d s t o b a n d 2 q 1 3 . R e s t r i c t i o n a n a l y s i s a n ds t u d i e s o f e i g h t s u b c l o n e s o f t h e s e c o s m i d s r e v e a l e d t h a t t h e ya r e a l l e l i c ( F i g . 1 A ) . B o t h c o s m i d s c o n t a i n a r r a y s o f at e l o m e r e - l i k e r e p e a t . B y s e q u e n c e a n a l y s i s , t h e t e l o m e r e -h y b r i d i z i n g r e g i o n i n c l o n e c 8 . 1 w a s f o u n d t o c o n s i s t o f t w od e g e n e r a t e a r r a y s o f TT A G G G i n a n i n v e r t e d ( h e a d - t o - h e a d )a r r a n g e m e n t ( F i g . 1 B ) . T h e f l a n k i n g s e q u e n c e s a r e a l s oa r r a n g e d i n a n i n v e r t e d f a s h i o n a n d s h o w 8 0 % i d e n t i t y o v e r2 6 9 b p a n d a r e a l s o 95% a n d 9 0 % o i d e n t i c a l w i t h s e q u e n c e sf o u n d a d j a c e n t t o c l o n e d " t r u e " t e l o m e r e s , p T H 1 4 a n dT e l S a u 2 . 0 , r e s p e c t i v e l y ( 1 3 , 1 7 ) .A

B

20-

1 0-

T h e i n v e r t e d a r r a n g e m e n t o f t h e 1 T A G G G a r r a y a n d t h ea d j a c e n t s e q u e n c e s , w h i c h a r e s i m i l a r t o s e q u e n c e s f o u n d a tp r e s e n t - d a y h u m a n t e l o m e r e s , i s p r e c i s e l y t h a t p r e d i c t e d f o ra h e a d - t o - h e a d t e l o m e r i c f u s i o n o f t w o c h r o m o s o m e s . A l t e r -n a t i v e l y , a s m a l l d u p l i c a t i o n a n d i n v e r s i o n , w h i c h c o u l d h a v ea r i s e n b y c ha n c e , m i g ht a c c o u n t f o r t h i s s t r u c t u r e . To d i s -t i n g u i s h b e t w e e n t h e s e p o s s i b i l i t i e s we i s o l a t e d s u b c l o n e s 8 1 7a n d A p a 8 1 3 , w h i c h f l a n k t h e t e l o m e r i c r e p e a t i n c l o n e c 8 . 1b u t l i e o u t s i d e t h e i n v e r t e d - r e p e a t r e g i o n d e m o n s t r a t e d b ys e q u e n c i n g ( F i g . 1 B ) . T h e s e f l a n k i n g s u b e l o n e s d e t e c t BAL-3 1 - s e n s i t i v e b a n d s , r e s p e c t i v e l y , i n HTY243 a n d H T Y 2 7 5 ,t w o i n d e p e n d e n t l y i s o l a t e d y e a s t a r t i f i c i a l c h r o m o s o m ec l o n e s t h a t c o n t a i n d i f f e r e n t h u m a n t e l o m e r e s ( F i g . 2 ) ( 2 0 ) .T h e s e d a t a p r o v i d e s t r o n g e v i d e n c e t h a t t h e i n v e r t e d r e p e a t si n c 8 . 1 a r o s e f r o m t h e h e a d - t o - h e a d f u s i o n o f a n c e s t r a lt e l o m e r e s .C tion f t h e S u b t e o m e r i c O r i g i n o f t h e S q u e n c e sF l a n k i n g t h e T e l o i n e r i c A r r a y . C o n f i r m a t i o n t h a t s e q u e n c eb l o c k s f r o m e i t h e r s i d e o f t h e 2 q 1 3 t e l o me r e r e p e a t a r e s i m i l a rt o s e q u e n c e s a t h u m a n s u b t e l o m e r e s w a s o b t a i n e d b y f l u o -r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n e x p e r i m e n t s . F r a g m e n t s A a n dB ( F i g . 1 A ) f r o m e i t h e r s i d e o f t h e t e l o m e r e r e p e a t i n c 8 . 1 ,u s e d a s p r o b e s i n f l u o r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n s o fm e t a p h a s e c h r o m o s o m e s , s h o w e d a d i f f e r e n t , b u t o v e r l a p -p i n g , c h r o m o s o m a l d i s t r i b u t i o n ( F i g . 3 A a n d B ) . B o t hf r a g m e n t s h y b r i d i z e d t o m o s t t e l o m e r i c b a n d s o f s e v e r a lc h r o m o s o m e s , a s w e l l a s t o t h e i n t e r s t i t i a l b a n d 2 q 1 3 ( F i g . 4A a n d B ) . An a d d i t i o n a l i n t e r s t i t i a l h y b r i d i z a t i o n s i g n a l w a so b s e r v e d w i t h f r a g m e n t B a t 3 p 1 4 i n 5 o f t h e 2 0 c h r o m o s o m e sa n a l y z e d . W e a l s o o b s e r v e d a w i d e r a n g e o f s i g n a l i n t e n s i t yb e t w e e n d i f f e r e n t c h r o m o s o m e s a n d b e t w e e n h o m o l o g o u sc h r o m o s o m e s , e s p e c i a l l y w i t h f r a g m e n t B . I n s o m e c a s e so n l y o n e h o m o l o g u e w a s l a b e l e d i n e a c h o f t h e 1 0 m e t a p h a s e ss t u d i e d ( i . e . , t h e t e l o m e r i c r e g i o n o n c h r o m o s o m e 6 p w i t hf r a g m e n t A ) . T h e p a t t e r n o f s i g n a l w a s c o n s i s t e n t f r o m c e l l t oc e l l w i t h i n a n i n d i v i d u a l b u t n o t f r o m i n d i v i d u a l t o i n d i v i d u a l( e . g . , i n a n u n r e l a t e d i n d i v i d u a l , f r a g m e n t A h y b r i d i z e d t oo n l y o n e c o p y o f c h r o m o s o m e 2 0 q ) ( d a t a n o t s h o w n ) . T h e s ed a t a , a l o n g w i t h t h e o b s e r v a t i o n s o f o t h e r s ( 1 7 , 2 2 ) , s u g g e s tt h a t t h e t e r m i n a l r e g i o n s o f h u m a n c h r o m o s o m e s a r e d y n a m i cs t r u c t u r e s , f r o m w hi c h s t r e t c h e s o f s e q u e n c e a r e g a i n e d a n dl o s t a t a r e l a t i v e l y h i g h f r e q u e n c y .

DISCUSSIONW e h a v e i s o l a t e d t w o a l l e l i c g e n o m i c c o s m i d s t h a t w e r el o c a l i z e d t o c h r o m o s o m e 2 , e a c h c o n t a i n i n g t w o a r r a y s o ft e l o m e r i c r e p e a t TT A G G G i n a n i n v e r t e d a r r a n g e m e n t .

o I- r I I ,1i r r l irT- ,r --- - r T - i r r-i t I, rrm v I l r r - r T I r T i l ^ r l f l T -, I T I1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 18 1 9 20 2 1 22 X Y20-10L

2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 15 16 17 1 8 1 9 20 2 1 2 2 X Y

F I G . 3 . H y b r i d i z a t i o n s i g n a l s o b t a i n e d w i t h f r a g m e n t s A a n d B f r o m c o s m i d c 8 . 1 . T e n b a n d e d m e t a p h a s e s p r e a d s ( 2 0 c h r o m o s o m e s ) w e r ee x a m i n e d w i t h e a c h p r o b e . T h e n u m b e r o f c h r o m o s o m e s h y b r i d i z i n g w e r e s u m m a t e d f o r e a c h p o i n t a t w h i c h s i g n a l wa s o b s e r v e d . B o t h f r a g m e n t sh y b r i d i z e t o t h e m o s t t e l o m e r i c b a n d s o f s e v e r a l c h r o m o s o m e s ( a t 4 0 0 - b a n d r e s o l u t i o n ) a s w e l l a s r e g i o n 2 q 1 3 ( c o n f i r m e d a t 8 0 0 - b a n d r e s o l u t i o n )a n d s h o w a d i f f e r e n t b u t o v e r l a p p i n g c h r o m o s o m a l d i s t r i b u t i o n . An a d d i t i o n a l i n t e r s t i t i a l h y b r i d i z a t i o n wa s s e e n w i t h f r a g m e n t B a t r e g i o n 3 p 1 4i n 5 o f 2 0 c h r o m o s o m e s . N o t e t h a t , i n s o m e c a s e s , o n l y o n e t e l o m e r e w a s l a b e l e d i n e a c h m e t a p h a s e s p r e a d . F o r e x a m p l e , o n l y o n e 6 p t e r m i n u sh y b r i d i z e d w i t h f r a g m e n t A i n t h i s i n d i v i d u a l ; h y b r i d i z a t i o n o f b o t h 6 p t e l o m e r e s wa s n e v e r o b s e r v e d ( s e n s i t i v i t y o f t h e t e c h n i q u e i s s u c h t h a tt h e r e w a s f a i l u r e t o d e t e c t h y b r i d i z a t i o n a b o v e b a c k g r o u n d i n 3 o f 1 0 s p r e a d s ) . L i k e w i s e , one h o m o l o g u e wa s l a b e l e d on l q , 3 q , 8 p , 1 0 p , 1 2 p ,1 3 q , a n d 1 6 p w i t h f r a g m e n t B .

G e n e t i c s : Udo e t a l .

I I


4/5

P r o c . N a t l . A c a d . S c i . USA 8 8 ( 1 9 9 1 )

F I G . 4 . F l u o r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n o f f r a g me n t A ( a ) a n d f r a g m e n t B ( b ) t o m e t a p h a s e c h r o m o s o m e s . M e t a p h a s e s p r e a d s w e r ep r e p a r e d f r o m c u l t u r e d l y m p h o c y t e s a n d s i m u l t a n e o u s l y h y b r i d i z e d w i t h a b i o t i n y l a t e d A o r B p r o b e ( s h o w n i n r e d ) a n d d i g o x i g e n i n - l a b e l e dA l u - P C R p r o d u c t s ( s h o w n i n g r e e n ) t h a t g e n e r a t e a n R - ba n d in g p a t t e r n , a c c o r d i n g t o p u b l i s h e d p r o t o c o l s ( 1 9 ) .F l a n k i n g s e q u e n c e s a r e c h a r a c t e r i s t i c f o r t h e p r e t e r m i n a lr e g i o n s o f h u m a n c h r o m o s o m e s . T h e d a t a we p r e s e n t h e r ed e m o n s t r a t e t h a t a t e l o m e r e - t o - t e l o m e r e f u s i o n o f a n c e s t r a lc h r o m o s o m e s o c c u r r e d , l e a v i n g a p a t h o g n o m o n i c r e l i c a tb a n d 2 q 1 3 . T h i s f u s i o n a c c o u n t s f o r t h e r e d u c t i o n o f 2 4 p a i r so f c h r o m o s o m e s i n t h e g r e a t a p e s ( c h i m p a n z e e , o r a n g u t a n ,a n d g o r i l l a ) t o 2 3 i n m o d e r n h u m a n a n d m u s t , t h e r e f o r e , h a v eb e e n a r e l a t i v e l y r e c e n t e v e n t . C o m p a r a t i v e c y t o g e n e t i cs t u d i e s i n m a m m a l i a n s p e c i e s i n d i c a t e t h a t R o b e r t s o n i a nc h a n g e s h a v e p l a y e d a m a j o r r o l e i n k a r y o t y p e e v o l u t i o n ( 2 3 ,2 4 ) . T h i s s t u d y d e m o n s t r a t e s t h a t t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n ,r a t h e r t h a n t r a n s l o c a t i o n a f t e r c h r o m o s o m e b r e a k a g e , i sr e s p o n s i b l e f o r t h e e v o l u t i o n o f h u m a n c h r o m o s o m e 2 f r o ma n c e s t r a l a p e c h r o m o s o m e s .F u s i o n o f t e l o m e r e s i s a r a r e o c c u r r e n c e i n n o r m a l l y m -p h o b l a s t s a n d f i b r o b l a s t s , a l t h o u g h i t h a s b e e n o b s e r v e d i n2 0 - 3 0 % o f t h e c e l l s o f c e r t a i n t u m o r s , w h e r e i t a p p e a r s t o b en o n c l o n a l ( 2 5 - 2 9 ) . T h e t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n a t r e g i o n2 q 1 3 m u s t h a v e b e e n a c c o m p a n i e d o r f o l l o w e d b y i n a c t i v a -t i o n o r e l i m i n a t i o n o f o n e o f t h e a n c e s t r a l c e n t r o m e r e s , a sw e l l a s b y e v e n t s t h a t s t a b i l i z e t h e f u s i o n p o i n t . H y b r i d i z a -t i o n s t u d i e s s u g g e s t t h a t t h e r e i s a r e m n a n t o f a n a n c e s t r a lc e n t r o m e r e a t b a n d 2 q 2 1 , w h i c h i s c o n s i s t e n t w i t h t h e t e l o -m e r i c f u s i o n p r o p o s e d h e r e ( A . B . , u n p u b l i s h e d d a t a ) .T h e f r e q u e n c y w i t h w h i c h t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n h a sp a r t i c i p a t e d i n c h r o m o s o m e e v o l u t i o n c a n n o t r e a d i l y b ea s s e s s e d . M o r e a n c i e n t f u s i o n s t h a n t h e o n e d e s c r i b e d h e r emay n o t e a s i l y b e d e t e c t e d b e c a u s e o f s u b s e q u e n t m u t a t i o no f t h e t e l o m e r e - l i k e r e p e a t s a n d t h e i r f l a n k i n g r e g i o n s . T h eo b s e r v a t i o n o f a n a d d i t i o n a l w e a k i n t e r s t i t i a l h y b r i d i z a t i o ns i g n a l a t b a n d 3 p 1 4 i n 5 o f 2 0 c h r o m o s o m e s w i t h f r a g m e n tB c o u l d b e e x p l a i n e d b y t h e p r e s e n c e o f a m o r e d e g e n e r -a t e s u b t e l o m e r i c r e m n a n t o f a n o t he r t e l o me r e - te l o me r e f u -s i o n . T e l o m e r e - r e l a t e d s e q u e n c e s h a v e a l s o b e e n f o u n di n s u b t e l o m e r i c r e g i o n s o f m a n y h u m a n c h r o m o s o m e s ( 8 ) .I t h a s n o t , h o w e v e r , b e e n d e t e r m i n e d w h e t h e r t h e s e h a v ea r i s e n b y t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n o r b y a n o t h e r m e c h a n i s mo f i l l e g i t i m a t e r e c o m b i n a t i o n . I n t h e s i n g l e e x a m p l e t h a th a s b e e n s t u d i e d i n d e t a i l , a n i n v e r t e d t e l o m e r e a r r a y w a sn o t p r e s e n t .T h e l i k e l i e s t e x p l a n a t i o n f o r t h e r e l a t i v e l y s h o r t s t r e t c h o ft e l o m e r e - l i k e r e p e a t i n c o s m i d c l o n e c 8 . 1 , c o m p a r e d w i t h t h ea v e r a g e l e n g t h o f h u m a n t e l o m e r e s , i s t h e i n s t a b i l i t y o f a l o n gi n v e r t e d t a n d e m r e p e a t s e q u e n c e . An e x t e n s i v e i n v e r t e d

r e p e a t , a s d e s c r i b e d h e r e , m i g h t b e e x p e c t e d t o f a c i l i t a t e t h ef o r m a t i o n o f s e c o n d a r y , c r u c i f o r m s t r u c t u r e s . T h e a b i l i t y o fi n v e r t e d - r e p e a t s e q u e n c e s t o f o r m c r u c i f o r m s t r u c t u r e s h a sb e e n d e m o n s t r a t e d i n v i t r o ( 3 0 , 3 1 ) . B e c a u s e o f t h e f o r m a la n a l o g y b e t w e e n c r u c i f o r m s t r u c t u r e s a n d H o l l i d a y j u n c -t i o n s , b o t h a r e s u b j e c t t o s i t e - s p e c i f i c c l e a v a g e a n d , h e n c e ,r e s o l u t i o n b y s i n g l e - s t r a n d - s p e c i f i c n u c l e a s e s ( 3 2 , 3 3 ) . W es u g g e s t s u c h a p h e n o m e n o n c o u l d h a v e r e s u l t e d i n p r o g r e s -s i v e s h o r t e n i n g o f t h i s i n v e r t e d s e q u e n c e u n t i l r e l a t i v e s t a -b i l i t y w a s r e a c h e d .T h e c o s m i d c l o n e s d e s c r i b e d h e r e w i l l a l l o w t e s t i n g o f t h eh y p o t h e s i z e d a s s o c i a t i o n b e t w e e n t h e t e l o m e r e - l i k e s e -q u e n c e a t r e g i o n 2 q 1 3 a n d t h e r a r e f o l a t e - s e n s i t i v e f r a g i l e s i t e( F R A 2 B ) , w h i c h a l s o m a p s t o b a n d 2 q 1 3 ( 7 , 8 , 3 4 ) . A l t h o u g ht h e m e c h a n i s m u n d e r l y i n g c h r o m o s o m e f r a g i l i t y h a s n o t b e e nd e t e r m i n e d , i t i s c l e a r t h a t r a r e f r a g i l e s i t e s , i n c l u d i n gF R A 2 B , s e g r e g a t e a s c o d o m i n a n t t r a i t s , s o t h a t a h e r i t a b l ec i s - a c t i n g d i f f e r e n c e m u s t e x i s t i n t h e f r a g i l e c h r o m o s o m e .H a s t i e a n d A l l s h i r e ( 3 5 ) h a v e c i t e d s e v e r a l f e a t u r e s o f ap u t a t i v e t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n t h a t m a k e i t a n a t t r a c t i v ec a n d i d a t e f o r t h e f r a g i l e s i t e i n t h i s b a n d . I n t h e s o l e e x a m p l eo f a c o n s t i t u t i o n a l t e l o m e r e - t e l o m e r e f u s i o n i n h u m a n , a h i g hr a t e o f c h r o m o s o m e g a p s a n d b r e a k s w a s r e p o r t e d a t t h ef u s i o n p o i n t b e t w e e n c h r o m o s o m e s 6 a n d 1 9 , a l t h o u g h t h ep r e s e n c e o f r e s i d u a l t e l o m e r e r e p e a t s a t t h e f u s i o n p o i n t w a sn o t c o n f i r m e d ( 3 6 ) .T h e s e q u e n c e s c l o n e d i n c 8 . 1 a n d c 2 9 B p r o m i s e t o b ee x t r e m e l y u s e f u l r e a g e n t s f o r f u r t h e r s t u d y o f c h r o m o s o m ee v o l u t i o n . C o m p a r i s o n o f n u c l e o t i d e s e q u e n c e o f r e g i o n sf l a n k i n g t h e i n v e r t e d t e l o m e r e r e p e a t s a t b a n d 2 q 1 3 w i t hh o m o l o g o u s s e q u e n c e s a t h u m a n a n d a p e t e l o m e r e s s h o u l dc a s t s o m e l i g h t o n t h e n a t u r e o f t e l o m e r e e v o l u t i o n , a s t h ei n t e r s t i t i a l l o c a t i o n o f c 8 . 1 w i l l h a v e s h e l t e r e d t h e s e q u e n c e st h e r e i n f r o m g e n o m i c t u r n o v e r m e c h a n i s m s p e c u l i a r t o s u b -t e l o m e r i c s e q u e n c e s .

W e a r e g r a t e f u l t o M. R o c c h i ( U n i v e r s i t y o f B a r i , I t a l y ) f o rp r o v i d i n g t h e s o m a t i c c e l l h y b r i d l i n e R J 3 8 7 9 1 - C T 8 , U . F r a n c k e( H o w a r d H u g h e s M e d i c a l I n s t i t u t e , S t a n f o r d U n i v e r s i t y M e d i c a lC e n t e r , S t a n f o r d , C A ) f o r u s e o f a h y b r i d p a n e l a n d H . C . R i e t h m a n( W i s t a r I n s t i t u t e , P h i l a d e l p h i a ) f o r t h e h a l f - y e a s t a r t i f i c i a l c h r o m o -s o m e s HTY243 a n d H T Y 2 7 5 .

9 0 5 4 G e n e t i c s : U d o e t a L


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P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U S A 8 8 ( 1 9 9 1 ) 9 0 5 51 . D u t r i l l a u x , B . , R e t h o r d , M . 0 . & L e j e u n e , J . ( 1 9 7 5 ) A n n .G e n e t . 1 8 , 1 5 3 - 1 6 1 .2 . Y u n i s , J . J . & P r a k a s h , 0 . ( 1 9 8 2 ) S c i e n c e 2 1 5 , 1 5 2 5 - 1 5 2 9 .3 . W i e n b e r g , J . , J a u c h , A . , S t a n y o n , R . & C r e m e r , T . ( 1 9 9 0 )G e n o m i c s 8 , 3 4 7 - 3 5 0 .4 . K o o p , B . F . , G o o d m a n , M . , X u , P . , C ha n , K . & S l i g h t o m ,J . L . ( 1 9 8 6 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 3 1 9 , 2 3 4 - 2 3 8 .5 . A n d r e w s , P . ( 1 9 8 5 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 3 1 4 , 4 9 8 - 4 9 9 .6 . De G r o u c h y , J . , T u r l e a u , C . , F i n a z , C . & R o u b i n , M . ( 1 9 7 5 )C h r o m o s o m e V a r i a t i o n i n Human E v o l u t i o n , e d . B o y c e , A . J .( T a y l o r & F r a n c i s , L o n d o n ) , p p . 1 7 - 3 8 .7 . A l l s h i r e , R . C . , G o s d e n , J . R . , C r o s s , S . H . , C r a n s t o n , G . ,R o u t , D . , S u g a w a r a , N . , S z o s t a k , J . W . , F a n t e s , P . A . &H a s t i e , N . D . ( 1 9 8 8 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 3 3 2 , 6 5 6 - 6 5 9 .8 . W e l l s , R . A . , G e r m i n o , G . G . , K r i s h n a , S . K . , B u c k l e , V . J . &R e e d e r s , S . T . ( 1 9 9 0 ) G e n o m i c s 8 , 6 9 9 - 7 0 4 .9 . Z a k i a n , V . A . ( 1 9 8 9 ) A n n u . R e v . G e n e t . 2 3 , 5 7 9 - 6 0 4 .1 0 . M c C l i n t o c k , B . ( 1 9 4 1 ) G e n e t i c s 2 6 , 2 3 4 - 2 8 2 .1 1 . H a b e r , J . E . , T h o r n b u r n , P . C . & R o g e r s , D . ( 1 9 8 4 ) G e n e t i c s1 0 6 , 1 8 5 - 2 0 5 .1 2 . M o y z i s , R . K . , B u c k i n g h a m , J . M . , C r a m , L . S . , D a n i , M . ,D e a v e n , L . L . , J o n e s , M . D . , M e y n e , J . , R a t l i f f , R . L . & W u ,J . R . ( 1 9 8 8 ) P r o c . N a t l . A c a d . S c i . USA 8 5 , 6 6 2 2 - 6 6 2 6 .1 3 . d e L a n g e , T . , S h i u e , L . , M y e r s , R . M . , C o x , D . R . , N a y l o r ,S . L . , K i l l e r y , A . M . & V a r m u s , H . E . ( 1 9 9 0 ) M o l . C e l l . B i o l .1 0 , 5 1 8 - 5 2 7 .1 4 . A l l s h i r e , R . C . , D e m p s t e r , M . & H a s t i e , N . D . ( 1 9 8 9 ) N u c l e i cA c i d s R e s . 1 7 , 4 6 1 1 - 4 6 7 2 .1 5 . C r o s s , S . , L i n d s e y , J . , F a n t e s , J . , M c K a y , S . , M c G i l l , N . &C o o k e , H . ( 1 9 9 0 ) N u c l e i c A c i d s R e s . 1 8 , 6 6 4 9 - 6 6 5 7 .1 6 . C h e n g , J . - F . , S m i t h , C . L . & C a n t o r , C . R . ( 1 9 9 0 ) N u c l e i cA c i d s R e s . 1 9 , 1 4 9 - 1 5 4 .1 7 . B r o w n , W. R . A . , M a c K i n n o n , P . J . , V i l l a s a n t d , A . , S p u r r , N . ,B u c k l e , V . J . & D o b s o n , M . J . ( 1 9 9 0 ) C e l l 6 3 , 1 1 9 - 1 3 2 .1 8 . L i c h t e r , P . , T a n g , C . J . C . , C a l l , K . , H e r m a n s o n , G . , E v a n s ,G . A . , H o u s m a n , D . & W a r d , D . C . ( 1 9 9 0 ) S c i e n c e 2 4 7 , 6 4 - 6 9 .

1 9 . B a l d i n i , A . & W a r d , D . C . ( 1 9 9 1 ) G e n o m i c s 9 , 7 7 0 - 7 7 4 .2 0 . R i e t h m a n , H . C . , M o y z i s , R . K . , M e y n e , J . , B u r k e , D . T . &O l s e n , M . V . ( 1 9 8 9 ) P r o c . N a t l . A c a d . S c i . US A 8 6 , 6 2 4 0 - 6 2 4 4 .2 1 . L e g e r s k i , R . J . , H o d n e t t , J . L . & G r a y , H . B . ( 1 9 7 8 ) N u c l e i cA c i d s R e s . 5 , 1 4 4 5 - 1 4 6 4 .2 2 . W i l k i e , A . 0 . M . , H i g g s , D . R . , R a c k , K . A . , B u c k l e , V . J . ,S p u r r , N . K . , F i s c h e l - G h o d s a i n , N . , C e c c h e r i n i , I . , B r o w n ,W . R . A . & H a r r i s , P . C . ( 1 9 9 1 ) C e l l 6 4 , 5 9 5 - 6 0 6 .2 3 . W a r d , 0 . G . , W u r s t e r - H i l l , D . H . , R a t t y , F . J . & S o n g , Y .( 1 9 8 7 ) C y t o g e n e t . C e l l G e n e t . 4 5 , 1 7 7 - 1 8 6 .2 4 . W u r s t e r - H i l l , D . H . , W a r d , 0 . G . , D a v i s , B . H . , P a r k , J . P . ,M o y z i s , R . K . & M e y n e , J . ( 1 9 8 8 ) C y t o g e n e t . C e l l G e n e t . 4 9 ,2 7 8 - 2 8 1 .2 5 . F i t z g e r a l d , P . H . & M o r r i s , C . M . ( 1 9 8 4 ) Hum. G e n e t . 6 7 ,3 8 5 - 3 9 0 .2 6 . M o r g a n , R . , J a r z a b e k , V . , J a f f e , J . P . , H e c h t , B . K . , H e c h t , F .& S a n d b e r g , A . A . ( 1 9 8 6 ) Hum. G e n e t . 7 3 , 2 6 0 - 2 6 3 .2 7 . M a n d a h l , N . , H e i m , S . , K r i s t o f f e r s s o n , U . , M i t e l m a n , F . ,R o o s e r , B . , R y d h o l m , A . & W i l l e n , H . ( 1 9 8 5 ) Hum. G e n e t . 7 1 ,3 2 1 - 3 2 4 .2 8 . M a n d a h l , N . , H e i m , S . , A r h e d e n , K . , R y d h o l m , A . , W i l l 6 n , H .& M i t e l m a n , F . ( 1 9 8 8 ) C a n c e r G e n e t . C y t o g e n e t . 3 0 , 2 3 - 3 3 .2 9 . K o v a c s , G . , M u l l e r - B r e c h l i n , R . & S z i c s , S . ( 1 9 8 7 ) C a n c e rG e n e t . C y t o g e n e t . 2 8 , 3 6 3 - 3 6 5 .3 0 . G r o s s c h e d l , R . & H o b o m , G . ( 1 9 7 9 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 2 7 7 ,6 2 1 - 6 2 7 .3 1 . W i l l i a m s , W . L . & M u l l e r , U . R . ( 1 9 8 7 ) J . M o l . B i o l . 1 9 6 ,7 4 3 - 7 5 5 .3 2 . M i z u u c h i , K . , K e m p e r , B . , H a y s , J . & W e i s b e r g , R . A . ( 1 9 8 2 )J . M o l . B i o l . 1 5 6 , 2 2 9 - 2 4 3 .3 3 . L i l l e y , D . M . & K e m p e r , B . ( 1 9 8 4 ) C e l l 3 6 , 4 1 3 - 4 2 2 .3 4 . S u t h e r l a n d , G . R . & M a t t e i , J . F . ( 1 9 8 7 ) C y t o g e n e t . C e l l G e n e t .4 6 , 3 1 6 - 3 2 4 .3 5 . H a s t i e , H . & A l l s h i r e , R . C . ( 1 9 8 9 ) T r e n d s G e n e t . 5 , 3 2 6 - 3 3 1 .3 6 . D r e t s , M . E . & T h e r m a n , E . ( 1 9 8 3 ) C h r o m o s o m a 8 8 , 1 3 9 - 1 4 4 .

G e n e t i c s : Udo e t a l .

Chromosomal Fusion in Primate Human Anscestry

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