ANALISIS DE LAS CELULAS SANGUINEAS DE AVES Y REPTILES POR MICROSCOPIA DE LUZ

Omar Maya García1, Marco Antonio Alfonso Mendez1, Rosa A. Pérez Gutiérrez, Rosa Maria C. Ortiz Najera1 y Claudia Sierra Castillo1,2. Laboratorio de Biología Celular de

la Facultad de Ciencias Biologicas1, Laboratorio de Bioingeniería Acuícola del Centro de Investigaciones Biológicas de la UAEM. Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa Cuernavaca Morelos.

Correo electrónico: clan_sierra@yahoo.com

Introducción: La sangre es un tejido conjuntivo cuya matriz es liquida, esta compuesto por eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Los eritrocitos representan alrededor del 43 al 45 % del volumen sanguíneo, son los transportadores primarios del oxígeno de las células y de los tejidos corporales [1]. En el humano los leucocitos son las células con núcleo, según su forma y la presencia o ausencia de gránulos citoplasmáticos pueden ser agranulares, que incluyen a los linfocitos y monocitos y los granulares que comprenden a los neutrofilos, eosinofilos y basofilos. Los leucocitos desempeñan un papel importante en el mecanismo de inmunidad innata y adaptativa en la que participan los componentes celulares y humorales, que se activan ante la presencia de un antígeno en el organismo. Las plaquetas son fragmentos no nucleares del citoplasma, en forma de discos pequeños, de distribución variable que en respuesta al daño endotelial se agregan y liberan su contenido [2]. La identificación y conteo de las células sanguíneas puede llevarse a cabo con diferentes técnicas de laboratorio, un frotis de sangre periférica es un método ideal para la identificación de los diferentes tipos de células sanguíneas, se tiñe y se observa en el microscopio de luz. Algunos colorantes tiñen los componentes de las células en respuesta a la reacción de tinción lo que nos permite realizar los conteos diferenciales para estimar los valores relativos de cada uno de los leucocitos en sangre. Algunos componentes citoplasmáticos de los leucocitos se tiñen con el azul de metileno; las enzimas hidroliticas pueden captar los azures (tintes producidos por la oxidación del azul de metileno) y muestran un color púrpura claro; otros pueden captar la eosina y otros mas pueden captar otros compuestos de los colorantes produciendo un color rosa pálido o violeta. La tinción con los colorantes de Wright y Leishman son dos de las técnicas asas frecuentemente por sus características de tinción que son similares [3]. Estudios realizados en algunas especies de aves, han revelado diferencias en la morfología de los eritrocitos en base a características descritas para mamíferos. Poseen glóbulos rojos maduros enucleados, permitiendo un espacio adicional para el transporte de hemoglobina, a diferencia de las aves donde este grupo celular es de forma elíptica y poseen núcleo. Por otra parte, una característica particular de los leucocitos en aves es la presencia de heterofilos en lugar de neutrofilos, estas células son de tamaño variable con presencia de corpúsculos acidofilos en forma de bastón y poseen actividad igual a la de los neutrofilos que fagocitan y destruyen bacterias [4]. Justificación: En reptiles los estudios hematológicos que se han realizado son pocos; sin embargo, poseen similitudes con los grupos celulares presentes en las aves, lo que indica probablemente que los heterofilos se han conservado evolutivamente entre estos organismos. En humanos el conteo diferencial de leucocitos y los cambios morfológicos de los eritrocitos proporcionan marcadores que favorecen diagnósticos específicos para determinar su estado de salud, aspectos de su metabolismo y fisiología. Tomando en cuenta la importancia de la determinación de los componentes celulares de la sangre, en el presente trabajo pretendemos estudiar la aplicación de estos métodos en reptiles, que nos permitirán conocer mas acerca de su biología general, ya que los reptiles son un recurso potencial y económicamente importante que se debe proteger y utilizar adecuadamente debido a que juegan un papel fundamental en el ecosistema. Objetivo general: Aplicar técnicas de tinción que permitan la identificación y comparación de las diferentes células sanguíneas en aves: Gallus gallus y de tres especies de reptiles representativos: Boa constrictor, Iguana iguana y Scelopurus horridus.

Metodología: La obtención de muestras de sangre periférica en reptiles se obtiene de la vena caudal y del ave de la vena yugular, se realizan frotis sanguíneos de cada una de las muestras. Posteriormente se tiñen con la técnica de Wright y Leishman y se realiza el conteo diferencial de leucocitos. Se toma como referencia los estudios realizados en el humano. Resultados: Los eritrocitos de los reptiles a diferencia de los mamíferos que no poseen núcleo y son en general esféricos, presentan forma ovalada con núcleos pleomórficos similares a los de las aves. Los heterófilos son numerosos y con gránulos de forma alargada. El resto de los leucocitos observados conservan sus características de tinción similares a las de los mamíferos, los trombocitos son pocos y están distribuidos en pequeños grupos. El conteo diferencial de leucocitos revelo variaciones en los valores. La identificación de los grupos celulares de las especies muestreadas se detallan en la figura 1, las cuales fueron teñidas con los colorantes de Wright y Leishman. Conclusiones:

• El patrón de tinción se conserva en mamíferos, aves y reptiles; sin embargo, existen diferencias significativas entre las tres clases de vertebrados.

• Los eritrocitos en mamíferos son de forma circular, bicóncava y con ausencia de núcleo, en las aves y reptiles los eritrocitos son alargados y nucleados.

• Al igual que en las aves los reptiles presentan heterofilos, a diferencia de los mamíferos donde estos son sustituidos por neutrofilos.

• Los resultados obtenidos aportan información importante de las características de cada grupo celular de los reptiles que servirán como base para estudios posteriores.

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Referencias: [1] Hall, G. Tratado de Fisiología Médica, McGraw-Hill Interamericana.2000. [2] Estarda, F. E. y Uribe, A. M. Atlas de Histología de los Vertebrados. Editorial UNAM, (2002) 48. [3] Aguilar, M. M. y Bello B. C. Manual General de Técnicas Histológicas e Histoquímicas. Editorial las Prensas de la Ciencia, (1996) 130. [4] Ma. De la Luz y Charles Noriega, Manual de Hematología Aviar. Fac de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM, (2004) 5, 35-36.

• Dra. Claudia Sierra Castillo, Profesor Investigador Asociado “C” Laboratorio de Biología Celular de la Facultad de Ciencias Biológicas; LAB. De Bioingeniería Acuícola, Centro de investigaciones Biológicas de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa clan_sierra@yahoo.com

• Omar Maya García. Estudiante de la Facultad de Ciencias Biológicas de la UAEM. Fax y Tel 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa

Fig. 1. Grupos celulares en la sangre de: a) pollo, Gallus gallus, b) Iguana verde, Iguana iguana, c) lagartija Sceloporus horridus y d) serpiente Boa constrictor. Leucocitos: (H) heterófilo, (E) eosinófilo, (B) basófilo, (M) monocito, (L) linfocito y (T) trombocito. Los eritrocitos en todos los casos son ovalados, sus núcleos son céntricos, con marcado pleomorfismo nuclear. Se observaron basófilos degranulando en las muestras sanguíneas de la boa y la lagartija.

• Marco Antonio Alfonso Méndez. Laboratorio de Biología Celular de la Facultad de Ciencias Biológicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa malfme@gmail.com

• Rosa América Pérez Gutiérrez Laboratorio de Biología Celular de la Facultad de Ciencias Biológicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa

• Rosa Maria Ortiz Najera Técnico Académico del Laboratorio de Biología Celular de la Facultad de Ciencias Biológicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa.