Catálogo de productos 2006 - fivlab.com³n in Vitro ... El cultivo in Vitro de embriones humanos...

Catálogo de productos 2006 Medios para reproducción asistida Edición electrónica

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CO N T E N I D O S

Abreviaciones usadas en el catalogo .............................................................................................. . . . 2Marcas registradas .......................................................................................................................... . . . .2Símbolos de las etiquetas de los productos ..................................................................................... . . . .2Tecnología ...................................................................................................................................... . . . .3SSR® (Reemplazo de suero sintético) ............................................................................................. . . . .3SynVitro® ...................................................................................................................................................................................................................... . . .Condiciones de la incubadora ......................................................................................................... . . . .4Control de calidad ........................................................................................................................... . . . .5La calidad es nuestra piedra angular ............................................................................................... . . . .5Estándares ....................................................................................................................................... . . . .5Primero la seguridad del paciente ................................................................................................... . . . .5Testeo de control de calidad ........................................................................................................... . . . .5

Recuperación de ovocitos ................................................................................................ . . . .7SynVitro®Flush ............................................................................................................................... . . . .8Medio de cultivo ............................................................................................................................. . . . .9

Preparación de esperma ................................................................................................. . .. .11Como elegir un medio para la preparación de esperma .................................................................. . . 11Medio de preparación de esperma ................................................................................................... .. .12SupraSperm®System ....................................................................................................................... .. .15

Fertilización, Cultivo y transferencia de embriones .................................................... . .. .17Como elegir un medio de fertilización ........................................................................................... .. .17Como elegir un medio de cultivo ................................................................................................... .. .17Medio Universal IVF ...................................................................................................................... .. .18ISM1™, ISM2™ y UTM™ ............................................................................................................................................................................... . . .21BlastAssist®System ........................................................................................................................ .. .24

Microtecnicas ................................................................................................................... . .. .27Como elegir un medio para microtecnicas ..................................................................................... .. .28SynVitro®CumulaseTM ....................................................................................................................................................................................... . . .29SynVitro®Hyadase .......................................................................................................................... .. .30Como elegir un medio de inmovilización de la esperma ................................................................ .. .32SpermSlow™ ............................................................................................................................................................................................................... . . .33Grado clínico PVP y medio PVP .................................................................................................... .. .36Medio de mantenimiento SynVitro®ICSI........................................................................................ .. .38Parafina liquida ............................................................................................................................... .. .40Solución Tirodes acidulada ............................................................................................................ .. .42Medio de biopsia ............................................................................................................................. .. .44

Criopreservación ............................................................................................................. . . .46Como elegir un medio de criopreservación .................................................................................... .. .46Medio de congelado de esperma .................................................................................................... .. .47OocyteFreeze™ ......................................................................................................................................................................................................... . . .50OocyteThaw™ ............................................................................................................................................................................................................ . . .52Sistema de congelado de embriones ............................................................................................... .. .54Sistema de descongelado de embriones .......................................................................................... .. .56BlastFreeze™ ............................................................................................................................................................................................................... . . .58BlastThaw™ ................................................................................................................................................................................................................. . . .60Vitrificación congelado MediCult .................................................................................................. .. .62Vitrificación descongelado MediCult ............................................................................................. .. .65

Maduración in Vitro (IVM®) ......................................................................................... . . .67Explicaciones graficas .................................................................................................................... .. . . .

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Abreviaciones usadas en el catálogo Símbolos de las etiquetas de los productos

EBSS = Solución salina balanceada de Earle

HSA = Albúmina de suero humano

MCDB 302 = Modificación de Ham's F10 y F12

PBS =Fosfato tamponado salino Dulbecco

SSR® = Reemplazo de suero sintético

Marcas registradas

Marcas comerciales registradas:

BlastAssist®, IVM®, SSR®, SupraSperm® and SynVitro®.

Marcas comerciales no registradas:

BlastFreezeTM, BlastThawTM, HybritestTM, ISMTM, ISM1TM, ISM2TM, McGill CryoleafTM, OocyteFreezeTM, OocyteThawTM, SpermSlowTM, SynVitro® CumulaseTM and UTMTM.

No reutilizar

Usar antes de

Marcado CE

Fabricante

Número de catálogo

Código de lote

Esterilizado usando técnicas de procesamiento asépticas (filtración)

Esterilizado usando la técnica de procesamiento e-beam

Mantener alejado de la luz solar

Instrucciones de consulta

Limitación de temperatura de 2°C a 8°C

Limitación de temperatura de 2°C a 25oC

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TE C N O L O G I A

SSR® (Reemplazo de suero sintético)

Tradicionalmente, el suero de paciente fue usado como una fuente de proteínas en IVF en humanos para el cultivo de embriones. Sin embargo, el uso del suero de paciente tiene bastantes inconvenientes. Por ejemplo, las proteínas del suero tienen macromoléculas adosadas, las cuales incluyen hormonas, vitaminas, ácidos grasos, iones de ligando quelato y pirógenos. La concentración de esas macromoléculas puede variar dependiendo del paciente y del ciclo menstrual. Esto hace que la comparación entre series de medio que contienen suero de paciente sea prácticamente imposible. Asimismo, hay evidencia que el suero de paciente contiene sustancias que son perjudiciales para embriones in Vitro. El uso de HSA de grado farmacéutico supera estas desventajas.

Sería una gran ventaja eliminar los componentes del suero indefinidos y muchas veces variables, para crear un medio solo definido químicamente. A principio de los años ochenta, numerosos investigadores, incluyendo al profesor noruego Kjell Bertheussen, investigaban el problema de la variabilidad del suero.

El profesor Bertheussen desarrollo el S SR®, que es usado en los medios de MediCult hoy en día. El componente principal de S SR®, es un tampón iónico de metal, compuesto de una mezcla balanceada de hierro y pequeñas concentraciones de metales. Reducidas cantidades de agentes ligandos quelatantes como el EDTA, han sido incluidos en la composición para asegurar la estabilidad de los metales ante la precipitación y para inhibir la formación de especies reactivas al oxigeno. La transferían ha sido sustituida por un reemplazo sintético.

SSR® esta completamente definido químicamente y esta libre de proteínas, lípidos y glicanos, excepto por la presencia de insulina humana recombinante. En 1990 Holst et al. uso un medio con SSR® de MediCult complementado con un 1% de HSA en una prueba clínica. Usando este sistema, obtuvieron índices de fertilización, división celular e implantación equivalentes comparados a la complementación de suero. Forsdahl et al., 1994 y Bertheussen et al., en 1997, mostraron que el medio Universal IVF libre de suero y el medio M3 fueron capaces de soportar el desarrollo in Vitro de embriones humanos hasta la etapa blastular, sin perjudicar el proceso de fertilización o el índice de implantación.

Hoy los medios de MediCult contienen SSR®, su composición ha sido patentada en todo el mundo.

SynVitro®

Todos los productos SynVitro® son puramente sintéticos y definidos químicamente. Estos productos no contienen HSA u otros componentes de origen biológico. Tampoco contienen antibióticos o Rojo Fenol. La formula contiene SSR®, que aumenta la consistencia y la estabilidad del producto durante su periodo de conservación.

Referencias Bertheussen K et al. (1997) 10th World Congress on IVF and Assisted Reproduction, Vancouver, p1 99-204 (MC- 138) Forsdahl F et al. (1994) Abstracts of the 10th Annual Meeting of ESHRE, Brussels, p142 (MC-89) Holst N et al. (1990) Journal of In Vitro Fertilization and Embryo Transfer 7(1): 47-53 (MC-44)

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CONDICIONES DE LA INCUBADORA

La optimización de los resultados en ART es un proceso constante cada vez mas enfocado en la imitación del medio in vivo.

Como resultado, se han desarrollado nuevos medios de cultivo, como ISM y BlastAssist System, para proveer de condiciones optimas de cultivo para cualquier etapa del embrión humano. Todos los medios MediCult están compuestos por concentraciones de sal fisiológica, con el fin de minimizar el estrés de pH u osmótico al cambiarlo de un medio a otro.

Condiciones de la incubadora Durante muchos años, las condiciones de una incubadora estándar, en la mayoría de los laboratorios ART, ha sido 5% CO, en aire con pequeños ajustes dependiendo de la altura sobre el nivel del mar.

Dióxido de carbono (CO2) El CO2 es una parte del sistema tampón de bicarbonato con la reacción equilibrante.

CO2 + H2O ----- H2CO3----- H+ + HCO3-

Los medios MediCult contienen HCO3- en una

concentración correspondiente al pH 7.2-7.4 cuando son equilibrados en CO2 5-6 %. El pH es una medida de la concentración de H+.Cuanto mas alta sea la concentración de CO2 en el medio, mas bajo es el pH. Nosotros generalmente recomendamos un 5% de CO2.

Otra consideración a tener en cuenta al tomar una decisión sobre la concentración de CO2 es la cantidad de trabajo de la incubadora. Cuantas mas veces se abra y se cierre la incubadora, menor va a ser la concentración de CO2 en la incubadora y mayor va a ser el tiempo de equilibrado. Por ende, se recomienda tener incubadoras diferentes para el equilibrado y el cultivo, aumentando la concentración de CO2 al 6% mientras el nivel de trabajo aumenta.

Oxigeno (O2) El consumo de oxigeno es relativamente constante desde la etapa unicelular hasta la etapa mórula, para crecer abruptamente en la etapa blastular (Thompson JG et al., 1996; Houghton FD et al., 1996).

La concentración de O2 en el oviducto es 40% o menos de la que se encuentra en la atmósfera (Leese HJ, 1995). El útero tiene una concentración aun menor (Fisher & Bavister, 1993). Por ende, los embriones se encuentran con un cambio de concentración de oxigeno, al progresar por el tracto reproductivo. Se ha demostrado que en condiciones en las que la concertación de oxigeno durante la incubación esta en el rango del 5-7%, se produce un aumento en la proporción de los embriones de ratones que están por alcanzar la etapa blastular y en el numero de células en la etapa blastular. La actividad metabólica del embrión cultivado en una baja tensión de O2 , se correlaciona mejor que in vivo. Se muestra un incremento en la recepción de oxigeno y en la oxidación de piruvato, en comparación con los embriones cultivados en 20% O2, (Hooper et al., 2001). Aunque se le reduzca el O2, la tensión al 2% ha demostrado ser beneficiosa para los avances en los embriones bovinos luego de la compactación. (Thompson et al., 2000).

El cultivo in Vitro de embriones humanos puede verse beneficiado, si la tensión O2 de la incubadora se reduce a valores entre 2-7%. Nosotros recomendamos mantenerla en 5%.

Referencias Fischer B & Bavister BD (1993) Journal of Reproduction and Fertility 99(2): 673-679 Hooper K et al. (2001) Theriogenology 55:334 Houghton FD et al. (1996) Molecular Reproduction and Development 44:576-485 Leese HJ (1995) Human Reproduction Update 1:91 Thompson JG et al. (2000) Journal of Reproduction and Fertility 118:47-55

Thompson JG et al. (1996) Journal of Reproduction and Fertility 106:299-306

5

Control de Calidad

La calidad es nuestra piedra angular Para MediCult, ofrecer productos de alta calidad, que aseguran resultados consistentes y óptimos y a su vez son seguros para nuestros pacientes, es esencial.

Las quejas son tratadas de acuerdo a procedimientos documentados, para asegurar una rápida respuesta para las observaciones del cliente. Acciones correctivas y preventivas pueden ser implementadas en caso de necesidad.

La respuesta del cliente es crucial, Usted es la fuente de inspiración para que nuestros productos sigan mejorando día a día.

Los medios de cultivo de MediCult tienen un nivel de endotoxina de ~ 0.1 EU/ml, el mas bajo del mercado, que asegura la mejor condición para los embriones.

Estándares

La planta de fabricación de MediCult en Jyllinge, Dinamarca funciona bajo normas ISO 9001 e ISO 13485 como sistemas de aseguramiento de la calidad con regulares inspecciones de recertificación. Todos los procedimientos están de acuerdo a las Buenas Normas de Manufactura (GMP). La fabricación se lleva a cabo en áreas limpias clasificadas como D y A (GMP).

El monitoreo y control de calidad cubre todos los procesos desde la recepción de materias primas hasta el producto final incluyendo desarrollo de productos.

MediCult ha sido el primer proveedor de medio de cultivo para ART basado en esas certificaciones y estándares.

Los productos vendidos en USA tienen aprobación bajo el proceso 510(k) de la FDA.

La Seguridad del Paciente Primero

Es importante para MediCult el entregar medio de cultivo que sea seguro para los pacientes:

• SSR® es usado para reemplazar en parte la HSA.

• Materias primas de grado farmacéutico como fuente de proteínas (ej. Albúmina de suero humano) y otros ingredientes activos.

• El agua de MediCult cumple con los requisitos de la Farmacopea Europea para agua purificada.

• Los métodos farmacopeicos para el control de calidad son aplicados en tanto estén disponibles.

• El periodo de conservación es validado (la estabilidad es evaluada en condiciones similares a las de uso)

• Los productos son empacados en cajas a prueba de violaciones con un paquete completo adicional.

• El envío de los productos se realiza en cajas aislantes con elementos que aseguran condiciones térmicas óptimas.

Test de control de calidad Los productos finales son testeados con una combinacion de los siguientes tests QC, de acuerdo con nuestras especificaciones.

• Test de pH (Ph. Eur. Edición actual)

• Prueba de osmolaridad (Ph. Eur. Edición actual)

• Mouse Embryo Assay (MEA)

Embriones de ratones de 1 célula o de 2 células son cultivados de acuerdo al uso destinado. Los embriones son cultivados en un medio de testeo y en un medio de control por 72 horas (para 2 células) o por 96 horas (para una célula) respectivamente. MediCult requiere un mínimo de 80% de índice de formación para blástulas expandidas.

(Las pautas de FDA requieren un 70% de índice de formación para blástulas expandidas).

Todos los resultados finales relevantes son testeados por un test de MEA.

• Hybritest™

El patentado Hybritest™, es empelado en condiciones libres de proteínas. Esto incrementa la sensibilidad del test a las sustancias toxicas sin efectos de “enmascarado” de proteínas, particularmente albúmina. La combinación única del Hybritest™y del test MEA, asegura que la clínica puede estar segura que los medios no son tóxicos para los embriones.

Las células del hibridoma son cultivadas en medio de testeo por 4 días. MediCult requiere un mínimo incremento de 10 veces en el conteo de células después de 4 días. Materias primas criticas están sujetas a inspección con el Hybritest™.

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• Test de endotoxinas LAL (Ph. Eur. edición actual)

MediCult ofrece productos con el menor límite de endotoxinas en medio ART listos-para-usar en el mercado. Los medios de cultivo MediCult tienen un nivel de endotoxinas de ~ 0.1 EU/ml, para asegurar las mejores condiciones para los embriones.

• Test de esterilidad (Ph. Eur edición actual) Todos los productos son filtrados de modo estéril y cada serie es testeada por su esterilidad.

• Test de supervivencia del espermatozoide Este test tiene como intención demostrar la ausencia de sustancias que reducirían la viabilidad de los espermatozoides.

El test de supervivencia del espermatozoide esta basado en el CASA (análisis de semen automatizado por computadora) en resolución con VAP (velocidad de camino), VSL (velocidad progresiva promedio), VCL (rapidez de camino) y frecuencia de latido. La incubación en el medio toma hasta 18 horas,

• Test de inmovilización de la esperma

La esperma con características motrices normales son mezcladas con el medio. Para aprobar el test, el VAP, VSL y VCL de la esperma suspendida en el medio debe estar por debajo de los 30 µm/seg.

Recuperación de Ovocitos 7

RECUPERACION DEL OOCITO

Para recolectar ovocitos, se utiliza un medio de cultivo para lavar los folículos y el cumulus de ovocitos.

Composición

SynVitro® Flush

SynVitro®Flush es un medio de lavado puramente sintético diseñado para ser utilizado in vivo. Este medio garantiza un medio óptimo y con pH estable, para la recuperación del ovocito y su transporte desde la sala de operaciones hasta el laboratorio de embriología.

La formulación definida químicamente muestra excelentes propiedades de manipulación, aunque no contenga albúmina u otros componentes de origen biológico. Por ende, cuando es usado en procedimientos in vivo, SynVitro®Flush no presenta riesgos de transmisión de elementos potencialmente patógenos. El producto no contiene antibióticos y se

recomienda darle un solo uso.

SynVitro®Flush esta complementado con Heparina, que reduce la coagulación de la sangre

si esta está presente luego de lavar los folículos.

Un estudio clínico aleatorio ha demostrado que SynVitro®Flush es tan efectivo como el medio de cultivo que contiene HSA (Ziebe, 2000)

EBSS SynVitro® Flush Flushing suplementado con: Medium

SSR® Reemplazo de Suero Sintético)

Piruvato de Sodio

Bicarbonato de Sodio

HEPES

HSA (Albúmina de Suero Humano)

Penicilina

Estreptomicina

Rojo fenol

Recuperación de Ovocitos 8

SynVitro®Flush

Productos

1584 0125 SynVitro®Flush, (125 ml) 1576 0125 SynVitro®Flush con 10 IU/ml Heparina,

(125 ml)

Uso propuesto SynVitro®Flush es para la recuperación y el lavado de ovocitos humanos.

Composición EBSS complementado con: • SSR® (Reemplazo de Suero sintético)

• Piruvato de sodio

• Bicarbonato de sodio

• HEPES

El medio es listo-para-usar. Para estabilizar el pH fuera de la incubadora se incluyo HEPES en la formulación del medio. SynVitro®Flush también esta disponible con heparina- 10 IU/ml (Product No. 1576)

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. EL periodo de conservación mínimo es 5 semanas desde el día de envío desde Dinamarca. SynVitro®Flush no contiene antibióticos y se recomienda utilizarlo solo una vez.

Test de control de calidad • Esterilidad testeada

• pH testeado

• Osmolaridad testeada

• Ph. Eur. endotoxina testeada ~ 0.1 EU/ml

• Mouse Embryo Assay (MEA) testeado

Nota: Los resultados de cada serie son registrados en el certificado de análisis, que esta disponible bajo solicitud.

Documentación clínica

En un estudio aleatorio realizado en Dinamarca, SynVitro®Flush ha sido comparado con el medio que contiene HSA. El estudio incluía ciclos 107 IVF/ICSI y un máximo de 2 embriones fueron transferidos en cada grupo, con la excepción de 3 casos en los cuales se transfirieron 3 embriones. No se registraron experiencias adversas en ninguno de los dos grupos, durante la recuperación de ovocitos. La tasa de embarazo por ciclo cumplido y la tasa de implantación por embrión transferido fueron similares en ambos grupos.

Índice de índice de índice de índice de

Recuperación Clivaje embarazo implantación

S. Ziebe, A. Sunde, K. Erb, University hospitals in Copenhagen and Odense, Denmark, ESHRE 2000, Bologna, Italy

Referencias Ziebe S et al., ESHRE 2000, Bologna, Italy. 0-0 185 (MC-306)

%

100

75

50

25

0

9 Recuperación de Ovocitos

Flushing Medium- Medio de cultivo

Productos

1084 xxxx Flushing Medium, (5x60 ml, 125 ml)

1076 xxxx Flushing Medium con 10 IU/ml Heparina, (5x60 ml, 125 ml)

Uso propuesto El Flushing Medium es para la recuperación y el lavado de ovocitos humanos.

Composición EBSS complementado con: • SSR® (Reemplazo de Suero sintético)

• HSA

• Piruvato de Sodio

• Bicarbonato de Sodio

• HEPES

• Penicilina

• Estreptomicina

• Rojo Fenol

Este medio es listo-para-usar. Contiene SSR® y HSA. Para estabilizar el pH fuera de la incubadora, se incluyo HEPES en la formulación. Flushing Medium esta disponible con heparina - 10 IU/ml (Product No. 1076). Flushing Medium solo esta disponible con Rojo Fenol.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. Para mantener el medio de cultivo en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. Test de control de calidad • Esterilidad testeada

• pH testeado


• Ph. Eur. endotoxina testeada < 0.1 EU/ml


Nota: Los resultados de cada serie son registrados en el certificado de análisis, que esta disponible bajo solicitud..

Documentación clínica Varios documentos científicos se refieren al uso clínico del Flushing Medium.

Referencias Bar-Hava I et al. (1997) Fertility and Sterility 68(4):653-7 (MC-158) Bersinger NA et al. (1995) Hum Rep 10(8):2149-54 (MC-17) Biljian et al. (1997) Fertility and Sterility 68(6):1132-1133 (MC-167) Calderson G et al. (1995) Hum Rep 10(11):2835-39 (MC-13) Hojgaard J et al. (2001) Hum Rep 16(4):696-702 (MC-305) Kahn JA (1993) Hum Rep 8(9):1414-19 (MC-16) Virant-Klun I et al. (2003) Hum Rep 18(5): 1070-1076 (MC-323) Ziebe S et al., ESHRE 2000, Bologna, Italy (MC-306)

10 Recuperacion de Ovocitos

Instrucciones de uso

Preparación de Esperma 11

PREPARACION DE LA ESPERMA

Las dos técnicas mas usadas, para la purificación y separación del semen, son: el método swim-up y el método de centrifugación de densidad de gradiente. Cada método selecciona la esperma más móvil para la muestra de inseminación. Ambos métodos han demostrado que la esperma móvil seleccionada, tiene una morfología superior comparada con la esperma en la muestra original de semen. El método de densidad de gradiente es rápido, se requieren solo entre20 y 40 minutos de centrifugado, y es efectivo para cualquier calidad de semen de muestra. El método Swim-up requiere entre 30 y 60 minutos de incubación.

Usando el método swim-up, la esperma se mantiene intacta y cubierta con el medio (medio de preparación de la esperma) permitiéndole que los espermatozoides móviles “nadar “ desde desechos. Con el método de densidad de gradiente, (SupraSperm®), la esperma pasa por diferentes gradientes por medio del centrifugado y espermas móviles son encontrados en la pella final. El método actual de densidad de gradiente esta basado en partículas de sílice coloidal recubiertas.

Como elegir los medios para la preparacion de la esperma

* El medio de preparación de la esperma esta disponible sin Rojo Fenol

Medio de preparación SupraSperm® de la esperma

Método swim-up

Lavado de la esperma

Método de densidad de gradiente

EBSS

HSA


Penicilina

Rojo Fenol*

Composición Medio de preparación SupraSperm®System SupraSperm®100de esperma SupraSperm®90

Suspensión coloidal de partículas de sílice


Piruvato de Sodio

HEPES

Streptomycin

Preparacion de Esperma 12

Medio de preparacion de la esperma

Productos

1070 xxxx Medio de preparación de la esperma con Rojo Fenol, (2x10 ml, 10x10 ml, 60 ml, 5x60 ml)

1069 xxxx Medio de preparación de la esperma sin Rojo Fenol, (10x10 ml, 60 ml, 5x60 ml)

Uso propuesto El medio de preparación de la esperma es para el lavado de la esperma y para el aislamiento de esperma viable y móvil, tanto por el método de swim-up como por el método de densidad de gradiente SupraSperm®

(Product No. 1091/1092/1097).

Composición EBSS complementado con: • SSR® (Reemplazo de suero sintético)

• HSA



• HEPES

• Penicilina

• Estreptomicina

• Rojo Fenol (Excepto el Producto No. 1069)

Este medio listo-para-usar ha sido diseñado para ser usado fuera de la incubadora y tiene una composición similar al medio Universal IVF. Esta basado en EBSS y contiene SSR® y HSA. Para seguir estabilizando el pH para el uso fuera de la incubadora, se ha incluido HEPES en la formulación. Este medio también esta disponible sin Rojo Fenol.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.

Documentación clínica Varios documentos científicos se refieren a su uso clínico. Por favor remítase a la lista de referencias que figura abajo.


• pH testeado



• Test de supervivencia de la esperma


Preparacion de Esperma 13

Referencias Bar-Hava I et al. (1997) Fertility and Sterility 68(4):653-7 (MC-158) Berkovitz A et al.(2005) Hum Rep 20(1): 185-190 (MC-364) Garrido N et al. (2004) Hum Rep 19(11):2581-2586 (MC-354) Kahn JA (1993) Hum Rep 8(9): 1414-19 (MC-16) Kovacic B (2002) Fertility and Sterility 77(3):529-536 (MC-292) Lähteenmäki A (1995) Hum Rep 10(1): 142-47 (MC-23) Lähteenmäki A (1995) Hum Rep 10(12):3124-29 (MC-1 1) Matyas S et al. (2002) Andrologia 34:248-254 (MC-326) Mikkelsen A et al. (1999) Hum Rep 14(7):1847-1851 (MC-357) Mikkelsen A et al. (2001) RBM Online 3(3):199-204 (MC-359) Mikkelsen A et al. (2001) Hum Rep 16(5):862-867 (MC-361) Mikkelsen A et al.(2001) Reproduction 122:481-486 (MC-362) Nuojua-Hattunen S (1997) Fertility and Sterility 67(5):939-42 (MC- 126) Romero J (1996) Fertility and Sterility 65(4):877-9 (MC-34) Smith S et al. (2000) Fertility and Sterility 73(3):541-544 (MC-363) Strohmer H et al. (1997) Hum Rep 12(7):1403-08 (MC-153) Ziebe S et al. (1997) Acta Obstet Gynecol Scand 76:335-39 (MC-174)

14 Preparacion de Esperma


15 Preparación de Esperma

SupraSperm®

Productos 1097 xxxx SupraSperm®1 00,

(60 ml, 2x60 ml, 500 ml) 1091 xxxx SupraSperm®90, (60 ml, 500 ml)

1092 xxxx SupraSperm®System, 80/55 (2x10 ml, 2x60 ml)

La composición es una solución salina que contiene una suspensión coloidal de partículas de sílice recubiertas con sileno.

Uso propuesto

SupraSperm® es para la aislamiento de espermatozoides viables por el método de densidad de gradiente.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. SupraSperm® 100 tiene un periodo de conservación mínimo de 52 semanas desde el día de envío desde Dinamarca. Test de control de calidad • Esterilidad testeada

• pH testeado


• Endotoxina testeada ~ 1.0 EU/ml



Documentación clínica El sistema SupraSperm®es comparable con el PureSperm® (NidaCon International AB) en relación con el rendimiento y la calidad de los espermatozoides. 18 muestras fueron divididas en dos y se testearon en paralelo. No se registro una diferencia significativa en el número total de células de esperma, en las células de esperma móvil y las células de esperma progresivamente móvil (Ziebe S, 1999).

Composición

SupraSperm 100 SupraSperm 90 SupraSperm System 80% SupraSperm System 55%

Solución salina con partículas de sílice cubiertas de silano coloidal

100 %

90 %

80 %

55 %

MediCult Sperm Preparation Medium

-

20 %

20 %

45%


16 Preparación de Esperma

Fertilización, Cultivo Embrionario y Transferencia 17

FERTILIZACION, CULTIVO DEL EMBRION Y TRANSFERENCIA

Fertilización/ inseminación

Dependiendo de la calidad del semen, la inseminación se lleva a cabo por IVF o ICSI, para proveer la mayor cantidad de ovocitos fertilizados posible.

Los procedimientos ICSI están descriptos en la sección “MICROTECNICAS"

Como elegir un medio de fertilización

Para conseguir resultados óptimos en la fertilización se recomienda usar el método Universal IVF, como un medio dedicado a la fertilización, ya que el alto contenido de glucosa en el medio Universal IVF ayuda a la capacitación del espermatozoide. Sin embargo, todos los medios de cultivo MediCult contienen glucosa en una concentración suficiente para la fertilización y por ende, pueden ser usados como medios de inseminación. Dependiendo del sistema de cultivo, la inseminación puede ser llevada a cabo en un medio Universal IVF (Producto No. 1030/1031), en un medio BlastAssist® 1 (Producto No. 1039/1040) o en un medio ISM1TM (Producto No. 1050/1150).

Cultivo de embriones

Los ovocitos y los embriones se cultivan en un medio que provea de condiciones físicas y químicas que imiten el medio in vivo. A medida que el embrión se desarrolla, su dependencia del medio cambia, por ende se recomienda un sistema secuencial de medios.

Como elegir los medios de cultivo

Como elegir los medios de cultivo

MediCult ofrece diferentes medios de cultivo.

ISM1TM & ISM2TM ISM1TM para fertilización y cultivo optimo de embriones en etapa de clivaje hasta el día 3. ISM2TM para cultivo blastular después de la selección en ISM1TM.

Sistema BlastAssist® El sistema BlastAssist es el sistema optimo de secuencia de medios para el dedicado cultivo blastular.

Porque diferentes sistemas de cultivo? La selección de embriones para transferencia esta basado en el desarrollo y la morfología del embrión. El desarrollo del embrión puede estar influenciado tanto de manera positiva como de manera negativa por los mismos componentes del ambiente. El efecto depende de las concentraciones y de la etapa de desarrollo del embrión.

Las composiciones de los medios tienen varias influencias en el desarrollo y la morfología del embrión, ofreciendo diferentes posibilidades para la selección del embrión en diferentes etapas del desarrollo.

Las condiciones óptimas de cultivo dependen de sus rutinas de laboratorio.

ISM1TM ISM2TM Sistema BlastAssist®

Usted realiza la transferencia del embrión Día 2-Día 3

Usted realiza la transferencia embrionaria Día 2/Día 3/Día 5 y elige el cultivo blastular dependiendo del numero de embriones en Día 2/Día 3

Usted realiza la transferencia del embrión Día 3-Día 5 y elige el cultivo blastular dependiendo del numero de ovocitos recolectados

Usted realiza la transferencia del embrión Día 3 y Día 5

Para transferencia

en día 3 o 5

Fertilización, Cultivo Embrionario y Transferencia Embrionario 18

Medio Universal IVF

Productos

1031 xxxx Medio Universal IVF, (10 x 10 ml, 60 ml, 5 x 60 ml)

1030 xxxx Medio Universal IVF sin Rojo Fenol, (10 x 10 ml, 60 ml, 5 x 60 ml)

Uso propuesto El medio Universal IVF se utiliza para la fertilización, el cultivo hasta la etapa celular 2-8 y para la transferencia de embriones.

Composición EBSS complementado con:

• SSR® (Reemplazo de suero sintético)

• HSA



• Penicilina

• Estreptomicina

• Rojo Fenol (excepto Producto No. 1030)

El medio Universal IVF ha sido diseñado para estar a la altura de las necesidades de los embriones jóvenes.

Su formula lista-para-usar contiene SSR y HSA. Las fuentes de nutrientes son la glucosa, la cual ayuda a la capacitación de la esperma durante el proceso IVF, y piruvato de sodio para el desarrollo temprano del embrión.

Es un medio tamponado con el sistema tampón de bicarbonato de sodio fisiológico. Fuera de la incubadora el pH del medio va a aumentar. El medio esta disponible con y sin Rojo Fenol.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el Medio Universal IVF en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. SupraSperm® 100 tiene un periodo de conservación mínimo de 52 semanas desde el día de envío desde Dinamarca. El producto debe almacenarse con un mínimo espacio en la parte superior para evitar la reducción del nivel de bicarbonato de sodio del medio.

Test de control de calidad

• Esterilidad testeada

• pH testeado





Documentación clínica Varios estudios comparativos han documentado la superior eficacia del Universal IVF como un medio de fertilización y clivaje, y más de 150 documentos científicos de todo el mundo apoyan su uso clínico.

Tomamos como ejemplo el estudio realizado por I. Spyropoulou et al. 1999, el cual comparaba el resultado de la fertilización in Vitro y la transferencia embrionaria seguida del cultivo de embriones humanos, individualmente o en grupos, antes de la transferencia del día 2.


159 mujeres con una edad promedio de 32 años (25-37) fueron elegidas aleatoriamente para el cultivo individual (78 ciclos) o el cultivo grupal (81 ciclos), los embriones fueron fertilizados y cultivados usando el medio universal IVF. El número promedio de embriones transferidos fue de 2,3. El estudio demuestra que el medio Universal IVF puede apoyar solo el desarrollo del embrión, por ende, el cultivo grupal de embriones humanos no es necesario.

Cultivo en medio Universal IVF día 2 de transferencia

Spyropoulou et al . 1999

Estables, altos índices de fertilización A través de su composición y estabilidad avanzada, el medio Universal IVF ha proporcionado, durante más de una década, índices de fertilización muy convincentes.

índice de fertilización Ciclos Hammadeh et al 1992 78 50 Karamalegos & Bolton 1999 70,7 230 Vlaisavljevic 2001 77,7 187 Erb 2004 69 950 Frydman 2004 71 1546 Kattera & Chen 2004 74,5 1725

Referencias

Bertheussen K et al. (1997) IVF World Congress, Vancouver, p199-204 (MC-138) Chen C et al. (2003) Hum Rep 18(10):2118-2121 (MC-333) Coskun S et al. (2000) Hum Rep 15(9):1947-1952 (MC-273) De Neuborg D et al. (2002) Hum Rep 17(10):2621-2625 (MC-317) Erb K et al. (2004) MediCult multi-centre study; MediCult Scientific Meeting 2004 Forsdahl F et al. (1995) J Ass Reprod & Genetics 12(3), OC 124, (MC-122) Frydman N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353) Hammadeh et al. (1993) (MC-35) Holst N et al. (1990) J IVF & ET 7(1):47-53 (MC-44) Hunter H R et al. (2003) Human Fertility 6(4):219 (MC-337) Jaroudi K et al. (2004) Hum Rep 19(3):645-648 (MC-342) Kahn JA (1993) Hum Rep 8(2):247-52 (MC-2) Karamalegos & Bolton (1999) Hum Rep 14(7):1842-1846 (MC-263) Kattera S et al. (2003) Fertility and Sterility 8(4): 1017-1021 (MC-334) Kattera & Chen (2004) Hum Rep 19(2):294-299 (MC-341) Kovacic B (2002) Fertility and Sterility 77(3):529-536 (MC-292) Maroulis GB et al. (1995) J Ass Reprod & Genetics 12(3):758-60 (MC-60) Menezo Yet al. (2000) Hum Rep 15(8):1776-1780 (MC-272) Plachot M et al., ESHRE 1999, Abstr. Book 1, 215-216 (MC-293) Smith S et al. (2000) Fertility and Sterility 73(3):541-544 (MC-363) Spyropoulou et al. (1999) Hum Rep 14(1):76-79 Vlaisavljevic et al. (2001) Hum Rep 16(11):2379-2383 Zavos PM, ESHRE 1995, Abstr. 222, p106 (MC-40)

%

75

50

25

Cultivo individual (IC)

Cultivo grupal (GC)


ISM1™, ISM2™ y UTM™

1050 xxxx ISM1™, (10 ml, 60 ml)

1051 xxxx ISM2™, (10 ml, 60 ml)

1052 0010 UTM™, (10 ml)

Sin Rojo Fenol:

1150 xxxx ISM1™, (10 ml, 60 ml)

1151 xxxx ISM2™, (10 ml, 60 ml)

1152 0010 UTM™, (10 ml)

Uso propuesto ISM1™ puede ser usado para la inseminación IVF y para el cultivo de embriones hasta el día 3.

ISM2™ es para el cultivo de embriones desde el día 3 hasta la etapa blastular. UTM™ esta diseñado especialmente para la transferencia de embriones.

*ISM1TM, ISM2TM and UTMTM are also available without Phenol Red.

Composición ISM1™ contiene metionina, que es esencial para el proceso de impresión de los embriones. El hialuronato que se utiliza en UTM™, deriva de una fuente no animal y esta autorizado para el uso terapéutico en los humanos. El medio esta tamponado con el sistema tampón de bicarbonato de sodio fisiológico. Fuera de la incubadora el pH del medio aumentara. Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener los productos en condiciones optimas, recomendamos que sean utilizados dentro de los 7 días de estar abiertos. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. El producto debe almacenarse con un mínimo espacio en la parte superior para evitar la reducción del nivel de bicarbonato de sodio del medio.

Piruvato

Productos

Con Rojo Fenol

Composición ISM1TM ISM2TM UTMTM

HSA

Hialuronato

Sales fisiológicas

Glucosa

Piruvato

Amino ácidos

Vitaminas

Insulina

Colesterol

EDTA

Bicarbonato de sodio

Penicilina Estreptomicina

Rojo Fenol








Documentación clínica Un estudio llevado a cabo en la Universidad Hospital de Odense, Dinamarca, en la Universidad Hospital de Uppsala, Suecia y en la clínica Novum en Varsovia, Polonia entre septiembre del 2003 y abril del 2004, comparo ovocitos hermanos cultivados en ISM1TM y cultivados en el medio Universal IVF.

Conclusión

ISM1TM tiene mejores resultados en el desarrollo de embriones (mas de 4 células, < 10% fragmentación) y un mayor numero de “embriones de buena calidad” para criopreservación.

Esta conclusión esta respaldada por el estudio de Fechtali et al. 2004.

En este estudio, el efecto de respaldo de ISM1TM hacia los embriones, demuestra ser mayor, cuanto mas complejas son las indicaciones del paciente.

Referencias Cassuto N et al. (2003) Fertility and Sterility 80(2):462-463 (MC-33 1) Fechtali B et al. (2004) Hum Rep 1 9(suppl. 1): i 147 Findikli N et al. (2003) APART Meeting, Vienna, Oral Presentation (MC-339) Frydman N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353) Lamandin E et al. (2003) Fertility and Sterility 80(suppl. 3):S172 (MC-335) Mendoza R et al. (2003) Revista Iberoamericana de Fertilidad 20(5):242-243 (MC-340) Ménézo Y et al. (2003) Fertility and Sterility 80(suppl. 3):S277 (MC-336)

Todos los Más complejas Todos los Más complejas pacientes indicaciones pacientes indicaciones

4 células con puntuación A o BEmbriones de buena calidad

Todos Más complejaspacientes indicaciones

Todos Más complejasPacientes indicaciones

Embriones criopreservados Criopreservados “Embriones de buena calidad”

Fertilizacion, Cultivo Embrionario y Transferencia 23

Instrucciones para su uso


Sistema BlastAssist®

Productos

1039 2010 BlastAssist®System, (2 x10 ml)

1040 2010 BlastAssist®System without Phenol Red, (2 x10 ml)

Uso propuesto El sistema BlastAssist® consiste de dos medios (medio 1 y medio 2) que están diseñados para trabajar como un sistema secuencial. El medio BlastAssist®1 es usado para el procedimiento de inseminación IVF, y el cultivo hasta la etapa celular 4-6.

El medio BlastAssist®2 es usado para el cultivo de embriones desde el día 2 hasta la etapa blastular, y para la transferencia de embriones cultivados usando el sistema BlastAssist®.

Composición El medio es tamponado con el sistema tampón de bicarbonato de sodio fisiológico. Fuera de la incubadora el pH del medio crecerá.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. El periodo de conservación mínimo es de 26 días a partir del día de envío desde Dinamarca.

* BlastA ssist®System is also available without Phenol Red.

Para mantener los productos en condiciones optimas, recomendamos que sean utilizados dentro de los 7 días de estar abiertos. El producto debe almacenarse con un mínimo espacio en la parte superior para evitar la reducción del nivel de bicarbonato de sodio del medio.



• pH testeado



• Embryo Assay (MEA) testeado


Medio 1 Medio2 SSR® (Reemplazo de Suero Sintético)

HSA Sales Fisiológicas

Glucosa

Piruvato Lactato

Amino ácidos L-glutamina

Taurina EDTA


HEPES

Penicilina Estreptomicina

Rojo Fenol*


Documentacion clinica Una publicación de Virant-Klun et al, 2003 concluyo en que la formación de blástulas es un buen indicador de resultados clínicos luego del ICSI con TESE.

Luego de cultivar hasta el día 5 (etapa blastular) hay un Un estudio reciente en el Centro de medicina y cirugía reproductiva en Hawaii, compare el sistema BlastAssist® con el GIII-seriesTM (Vitrolife) para el cultivo de blástulas utilizando embriones hermanos. “crecimiento significativo en la división celular y en el desarrollo y formación de blástulas.” usando el sistema BlastAssist®. Los autores concluyen que el sistema BlastAssist® complementado con HSA es superior a los embriones comparados con los medios GIIITM complementado con HSA recombinante

Formacion de blastulas %

Desarrollo de

blástulas

Etapas de desarrollo de blastulas

El sistema BlastAssist® ha demostrado que consigue un desarrollo blastular superior comparado con otros medios.

El análisis prospectivo de cultivo de embriones hermanos con el sistema BlastAssist® versus el sistema G1.2/2.2 (Vitrolife) fue llevado a cabo en la clínica HART en Japón por el Dr. Takashi y sus colegas.

Los ovocitos 2PNde 105 pacientes (de edad promedio de 35.5 años) fueron tratados con el Sistema BlastAssist® o con el sistema G1.2/G2.2 (Vitrolife), aleatoriamente. El numero promedio de 2PN fue 8.7.

Desarrollo de blástulas Buena calidad (puntaje = 3AA)

Ref: Takahashi et al.

Referencias Chesmore J et al. (2005) Fertility and Sterility 83(2):S31-32 (MC-370) Fukunaga N et al. (2003) Hum Rep 1 8(suppl. 1 ):P-436 (MC-330) Glew A et al. (2003) Human Fertility 6(3): 156 (MC-322) Hentemann M et al. (2000) XIII Nordic IVF con-gress, Reykjavik, Iceland, P 6 (MC-325) Lambert H et al. (2005) Hum Rep 20(suppl.1):i156 (MC-371) Nilsson S et al. (2005) Fertility and Sterility 83(6): 1849-1851 (MC-377) Takahashi et al.(2003) MediCult Scientific workshop Madrid, Spain Verheyen G et al. (2003) Hum Rep 1 8(suppl. 1) (MC-327) Virant-Klun I et al. (2003) Hum Rep 18(5):1070-1076 (MC-323) Virant-Klun I et al. (2003) Fertility and Sterility 79(6): 1428-1433 (MC-324) Virant-Klun I et al. (2003) ESHRE 2003, Poster P - 394 (MC-329)

40

30

20

10

0

Resultados clínicos luego de TESE-ICSI

Transferencia día 2 (Medio Universal IVF)

Transferencia día 5(Sistema BlastAssist®)

Sistema BlastAssist®

GIII-seriesTM (Vitrolife)

%

0

Sistema BlastAssist

G1.2/G2.2 (Vitrolife)

26 Fertilizacion, Cultivo Embrionario y Transferencia


Microtécnicas 27

MICROTECNICAS

La inserción mecánica de un espermatozoide en el citoplasma de un ovocito, se llama Inyección de Esperma Intra Citoplásmica (ICSI). Esto se realiza para lograr la fertilización de los hombres cuyos gametos son incapaces de penetrar la Zona Pelúcida del ovocito. Bajo una importante lente de aumento, un simple espermatozoide es aspirado dentro de una micro-pipeta de vidrio con una punta afilada, montada en un micro manipulador hidráulico. Una segunda micro-pipeta es usada para anclar el ovocito. Luego, la aguja de inyección penetra la Zona Pelúcida, la capa, externa y gruesa, de glicoproteinas que recubre el ovocito.

La técnica ICSI ha demostrado claras ventajas en los índices de fertilización y embarazo sobre las técnicas de micro inyección, utilizadas anteriormente.

MediCult tiene ofrece una serie de productos listos-para-usar, basados en formulas de alta calidad y materias primas para ayudar a procesar los gametos antes del ICSI.

• SynVitro®CumulaseTM y SynVitro®Hyadase esta disponible para la remoción enzimática del complejo cúmulos de los ovocitos.

• SpermSlowTM, el Medio PVP y el grado clínico PVP para inmovilizar los espermatozoides.

• El medio de contención SynVitro®ICSI para contener al ovocito mientras se realiza la inyección de esperma durante el procedimiento ICSI.

El medio con los gametos es recubierto con parafina liquida durante el proceso.

Hatching Asistido La investigación empírica sugirió que los embriones que tienen una Zona Pelúcida gruesa en el día 2, tienen un pronóstico para implantación, menos favorable que aquellos embriones que han sido sometidos a la incubación asistida. Por ende, la incubación asistida puede tener un efecto favorable en determinadas circunstancias. Para este propósito, MediCult cuenta con la Solución Acidificada Tirodes, para la disección química de la Zona Pelúcida.

Biopsia del embrión Los blastómeros removidos del embrión pueden ser usados para ensayos citogenéticos, esto es un arma de diagnostico muy importante para los pacientes que puedan ser potenciales transmisores de desordenes genéticos hereditarios.

La biopsia del embrión es equivalente al Chorionic Villius Sampling (CVS) o al Amniocentésis, el diagnostico de una célula, es equivalente al diagnostico prenatal. Las biopsias celulares pueden ser extraídas de ovocitos/embriones en tres etapas diferentes, es decir, ovocitos/ cigotas, embriones en etapa de clivaje celular 6-10 o embriones en etapa blastular. MediCult provee un Medio de Biopsia para facilitar el proceso de biopsia blastómera. La formula del medio no contiene iones de calcio ni iones de magnesio.

Microtecnicas 28

Como elegir los medios de microtecnicas

Medios para caracteristicas de denudacion

SynVitro®CumulaseTM Productos derivados de animales

Enzima humana recombinante Extractos testiculares de animales del matadero

Pureza extremadamente alta Baja pureza > 99% puro Típicamente Bovino < 5% puro. Típicamente Ovino<

15% puro

No toxico para los ovocitos Toxico para los ovocitos con el tiempo − duración de la denudación no es importante - el tiempo de denudación time debe ser corto

Enzima humana usada para ovocitos humanos Enzima animal usada para ovocitos humanos − sin riesgo de reacción alérgica - riesgo de reacción alérgica

Sin riesgo de transmisión de enfermedad animal riesgo genuino de transmisión

SynVitro® SynVitro® SpermSlowTM PVP PVP SynVitro® Parafina Tyrodes Medio CumulaseTM Hyadase grado Medio ICSI Liquida Acidulado para

clínico Contención Biopsia

Remoción complejo cumulus

Inmovilización espermatozoides

Selección espermatozoides maduros

Contención del

ovocito durante ICSI

Biopsia blastómera

Cobertura del medio de cultivo

Perforación

zona pelúcida

Microtecnicas 29

SynVitro®Cumulase™

15123000 SynVitro®Cumulase™, (3 x 0.5 ml)

Uso propuesto SynVitro® Cumulase™ es para la remoción de complejos celulares (cúmulos y corona radiata) que rodean al ovocito durante la preparación para el procedimiento ICSI.

Composición

• Reemplazo de suero sintético (SSR®)

• Hialuronidasa humano recombinante (rHuPH20)

• Glucosa

• Sales fisiológicas

• HEPES

SynVitro® Cumulase™ es un producto listo-para-usar, el cual consiste de un medio puramente sintético y básico, complementados con 80 U/ml de enzima de hialuronidasa. El hialuronidasa es un producto 100% humano recombinante (rHuPH20).

El hialuronidasa humano recombinante, es producido en un sistema de expresión de mamíferos, libre de productos animales, el cual permite la purificación de la glicoproteina humana hasta la homogeneidad con una pureza 100 veces mayor a los preparados usados normalmente.

SynVitro® Cumulase™ es el producto mas seguro y de mayor calidad del mercado. SynVitro® Cumulase™ no contiene albúmina de suero humano (HSA) ni antibióticos.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto.




• pH testeado



Documentación clínica Un estudio de hermanos ubicados aleatoriamente, realizado por Taylor et al. (2005), en el cual se comparaban el Cumulase™ y el hialuronidasa bovino, mostró índices de fertilización significativamente mayores (81.2% vs. 72.7%) y de desarrollo embrionario en el día 3, usando Cumulase™. Los autores concluyen que la enzima humana recombinante, es una alternativa segura y efectiva de los productos derivados de animales.

Un estudio de toxicidad, realizado por Behr et al. 2005, mostró diferencias significativas, luego de una larga exposición de los ovocitos a Cumulase™y a hialuronidasa bovino. Luego de 60 minutos de exposición, los índices de fertilización de los ovocitos eran de 68% en Cumulase™ y de 33% en un producto animal.

Referencias Behr et al. (2005)Fertility and Sterility 83(5) suppl. 1, S19 Nagy et al. (2005) Hum Rep 20 (suppl. 1):O-213 (MC-372) Taylor et al. (2005) Fertility and Sterility 84 (suppl. 1):S368

Microtecnicas 30

SynVitro®Hyadase

Producto 15115001 SynVitro®Hyadase, (5 x 1 ml)

Uso propuesto

SynVitro®Hyadase es para la remoción del complejo cumulus y de la corona radiata que rodean al ovocito durante la preparación del ICSI.

Composición


• Hialuronidasa (fuente no bovina, autorizado para el uso terapéutico en humanos)

• Glucosa




• HEPES

SynVitro®Hyadase es un producto listo-para-usar de un medio puramente sintético y básico, complementado con 80 IU/ml de enzima de hialuronidasa. La materia prima del hialuronidasa viene de una fuente no bovina, autorizada para el uso terapéutico en humanos.

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. El periodo de conservación mínimo es de 5 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto.

Testeo de control de calidad • Esterilidad testeada


• pH testeado



Documentación clínica SynVitro®Hyadase ha sido testeado en el Hospital Universidad de Trondheim, Noruega, en comparación con el hialuronidasa clásico de MediCult. Los ovocitos hermanos del mismo paciente fueron divididos en dos grupos y denudados usando SynVitro®Hyadase y Hialuronidasa de MediCult respectivamente. Los resultados mostraron que nos hay una diferencia significativa en la efectividad clínica entre SynVitro®Hyadase y MediCult Hialuronidasa, en lo que respecta los índices de fertilización y de clivaje.

Tampoco se vieron diferencias en la calidad morfológica de los embriones desarrollados desde ovocitos fertilizados, que habían sido denudados, usando cualquiera de los dos productos con hialuronidasa. Se recomendó el uso de SynVitro®Hyadase sin componentes de origen humano u otras sustancias biológicas y el Hialuronidasa fue removido del mercado.

Referencias Plachot M et al. (2002) Hum Rep 17(2):362-369 (MC-302) Ziebe S et al. (1997) Acta Obstet Gynecol Scand 76:335-39 (MC-174)

Microtecnicas 31


Microtecnicas 32

Como elegir un medio de inmovilizacion de la esperma

MediCult ofrece tres medio listos-para-usar:

Características de los medios de inmovilización de la esperma.

SpermSlowTM presenta una alternativa natural al PVP, ya que esta hecho principalmente de hyaluronate (HA), una sustancia natural que se encuentra en el complejo cumulus que rodea al ovocito. La materia prima del hyaloronate es el hyaluronate de sodio pH Eur. SpermSlowTM no tiene efectos ni tóxicos ni inmunológicos en la esperma ni en los huevos. Posee características diferentes en comparación con el PVP, pero como el PVP, es fácil de utilizar. Dos factores diferencian el HA del PVP: 1) Factor de incremento de seguridad: el HA es parte del ambiente natura del ovocito y es completamente biodegradable. 2) Selección basada en la calidad: El principio de selección en SpermSlowTM se basa en la esperma unida al HA por medio de los receptores ubicados en las cabezas de la esperma. Un espermatozoide puramente maduro se unirá efectivamente, por ende, es posible seleccionar solo esperma competitiva con una mayor madurez de desarrollo e integridad de ADN (Huszar et al. 2003a + b).

Referencias Barak Y et al. (2001) Fertility and Sterility 76(3) suppl 1, S17 (MC-348) Huszar et al. (2003a) Fertility and Sterility 79(suppl 3):1616-1624 Huszar et al. (2003b) RBM Online 7(4):462-468 Ménézo & Nicollet (2004) Montreal, study available from MediCult.

SpermSlowTM PVP PVP Clinical Medium Grade


HSA

Polyvinylpyrrolidona (PVP)+ Sperm Preparation Medium

Hyaluronate

SpermSlowTM PVP

Movilidad

Inmovilización

Selección de espermatozoide maduro No nocivo para los ovocitos durante procedimientos ICSI Biodegradable para ovocitos

HEPES

Penicilina


Estreptomicina

Rojo Fenol

33 Microtecnicas

SpermSlow™

Producto 1094 4000 SpermSlow™, (4 x 0.1 ml)

Uso propuesto SpermSlow™ es usado para hacer mas lento el movimiento de los espermatozoides y para seleccionar la esperma viable mas madura, requerida para la inyección intracitoplásmica de esperma (ICSI).

Composición • Hyaluronate

• HSA (Albúmina de suero humano)

• Piruvato

• Glucosa y metabolitos derivados


• Aminoácidos

• Nucleótidos

• Vitaminas


• Penicilina

• Estreptomicina

SpermSlow™ esta compuesto principalmente de hyaluronate (HA), el cual es el principal componente del cumulus de la célula matriz de los ovocitos maduros. La HA es una cadena polimérica de azucares, que proviene de la familia de los glycosaminoglicanos (GAG) y consiste de un N- acetilglucosamina y acido glucónico.

El uso de HA como una solución viscosa para reemplazar el PVP, para inmovilización de espermatozoides antes del ICSI, fue desarrollado originariamente por el Dr. Yona Barak. SpermSlow™ es preparado con un medio de dilución especifico, diseñado por el Prof. Yves Ménézo. Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. El periodo de conservación mínimo es de 12 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto.





Documentación clínica Menezo & Nicollet 2004 concluyen que la composición de SpermSlow™, permite una mayor viscosidad del producto basado en hyaluronate, ofrece también una buena alternativa al PVP. También alcanza mejores resultados, poco significativos en los índices de embarazo. Esta mejora puede estar relacionada a la selección de espermatozoides viable, por medio de la unión del hyaluronate (Kovacs et al., 2004). Mas de 200 pacientes fueron seleccionados en un estudio controlado y divididos en dos grupos. La edad de los pacientes era la misma en ambos grupos (33.6 años). Los ovocitos de 110 pacientes fueron inyectados con esperma, inmovilizados en Grado Clínico PVP, por otra parte, los ovocitos de 92 pacientes fueron inyectados con esperma e inmovilizados con SpermSlow™.

Microtecnicas 34

Inmediatamente después del ICSI, los ovocitos fueron cultivados durante la noche en ISM1™. La fertilización fue controlada por las apariciones de pro núcleos, y los embriones fueron cultivados durante 48 horas en ISM1™ fresco. La transferencia embrionaria tuvo lugar en el día 2 en UTM™ y se transfirieron 2 embriones por paciente, como máximo. Los índices de implantación, los índices de embarazo clínico y los índices de perdida del embarazo, fueron registrados.

No hay grandes diferencias en el puntaje del embrión y el número de embriones transferidos: SpermSlow™ 166/88 = 1.88 and PVP 195/1 05 = 1.86. There were 5 miscarriages in each group.

Referencias Barak Y et al. (1999) Alpha Symposium in Denmark; September 16-19, 0-23 (MC-347) Barak Y et al.(2001) Human Fertility 3:99-103 (MC-344) Huszar G et al. (2003) Fertility and Sterility 79(suppl.3): 16 16-24 (MC-346) Barak Y et al. (2001) Fertility and Sterility 76(3) suppl 1, S17 (MC-348) Kovacs et al. (2004)in: Essentials in IVF: Basic Research and Clinical Applications Kluwer Publ., pp179-200. Ménézo & Nicollet (2004) Study available from MediCult. Sabeur et al. (1998) Zygote 6:103-111 Yorozumi & Yanagimachi (2005) PNAS 102(40): 14209- 14214

índice índice Clínica preg. Clinica preg.transferenciaimplantación clínica índice por transferencia índice por r

Microtecnicas 35

Instrucciones para uso

Microtecnicas 36

PVP Grado clínico y PVP Grado clínico y medio PVP

Producto

1089 0001 Medio PVP, (1 ml) 1090 5000 PVP Grado Clínico

Sin Rojo Fenol (5 x 0.2 ml) Uso apropiado El PVP Grado clínico y el medio PVP son usados para hacer mas lento el movimiento de la esperma, como es requerido para la inyección de esperma intracitoplásmica (ICSI).

Composición

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Nuevas series de PVP Grado clínico, pueden ser congeladas a -20°C para aumentar el periodo de conservación 8 semanas. Antes de congelar, asegurarse que los cierres estén bien cerrados, y envolver individualmente los viales en film sellador de laboratorio (ej. Parafilm) EL medio PVP no puede ser congelado. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.


• Esterilidad testeada • Ph. Eur. endotoxina testeada ~ 0.1 EU/ml • Osmolaridad testeada • Supervivencia de la esperma testeada • Inmovilización de la esperma testeada


Referencias Al-Hasani et al. (1995) ESHRE, Abstr.040 (MC-41) Calderon G et al. (1995) Hum Rep 10(1 1):2835-39 (MC-13) Chen C et al. (2003) Hum Rep 18(10):2118-2121 (MC-333) Fischer R et al. (1996) Hum Rep 11(10):2197-99 (MC-117) Frydman, N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353)

Hassan HA et al. (1997) J MEFS 2(3):234-37 (MC-160) Kattera & Chen (2004) Hum Rep 19(2):294-299 (MC-341) Kovacic B (2002) Fertility and Sterility 77(3):529-536 (MC-292) Mikkelsen, A et al. (2003) RBM Online 6(4):416-420 (MC-360) Nicopoullos, J et al. (2004) Hum Rep 19(3):579-585 (MC-345) Oates R (1996) Hum Rep 11(1):133-38 (MC-30) Schwiady H et al. (1997) Hum Rep 12(6): 1227-29 (MC-155) Vlaisavljevic Vet al. (2001) Hum Rep 16(1 1):2379-2383 (MC-291)

Ziebe S et al. (1997) Acta Obstet Gynecol Scand 76:335-39 (MC- 174)

PVP Medio PVP Grado Clínico

SSR® (Reemplazo de

suero sintético)

HSA

Polyvinylpyrrolidona (PVP)+ Sperm Preparation Medium

HEPES

Penicilina

Estreptomicina

Rojo Fenol


Microtécnicas 37

Microtécnicas 38

El medio de sostén SynVitro® ICSI

Producto

1585 5001 Medio de mantenimiento SynVitro®ICSI, (5 x 1 ml)

Uso propuesto El medio de mantenimiento SynVitro®ICSI es para mantener los ovocitos durante el procedimiento ICSI de inyección de la esperma.

Composición EBSS complementado con: • SSR® (Reemplazo de suero sintético)

• Glucosa



• HEPES

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. El producto esta empacado en viales de uso único. Test de control de calidad • Esterilidad testeada



• pH testeada



Documentación clínica El medio de mantenimiento SynVitro®ICSI ha sido testeado, en la Universidad Hospital de Trondheim, en una practica de rutina de 15 meses. Luego de haber recuperado 290 ovocitos, un total de 3481 ovocitos fueron mantenidos en el medio de mantenimiento SynVitro®ICSI mientras eran sometidos al procedimiento ICSI. Se realizaron un total de 266 transferencias embrionarias.

Estos resultados corresponden a los resultados ICSI generales de la clínica. El numero promedio de embriones transferidos es 1,89.

Indice Indice Indice Fertilization embarazo implantación

Microtécnicas 39


Microtécnicas 40

Parafina Liquida

Producto

1010 xxxx Parafina liquida, (60 ml, 5 x 60 ml, 500 ml)

Uso propuesto La parafina liquida es usada como una cobertura de aceite para los medios de cultivo durante los procedimientos IVF e ICSI. Composición La parafina liquida, Ph Eur. ha sido pre-lavada con el medio universal IVF. Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo ya que puede producir burbujas. El periodo de conservación mínimo es de 16 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.



• Ph. Eur endotoxina testeada ~ 0.1 EU/ml



Además de ser sometido al HybritestTM y de ser una materia prima altamente refinada, la parafina liquida MediCult es pre-lavada usando el medio Universal IVF. El balance de sales inorgánicas y de albúmina de suero humano (HSA) en el proceso de lavado, ayuda al HSA a ligar potenciales componentes embriotóxicos y a saturar el aceite de parafina con lípidos esenciales de embriones. La parafina liquida no reduce los lípidos vitales del medio cuando es usada para cultivo en el laboratorio IVF.

La parafina liquida MediCult tiene el nivel mas bajo de endotoxina: < 0.1 EU/ml

EU/ml 1,0

0,5

0 Me

Ref.: Company product data sheets.

Referencias Bar-Hava I et al. (1997) Fertility & Sterility 68(4):655-57 (MC-158) Frydman N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353) Gabrielsen A et al. (2004) Hum Rep 19(10):2258-2262 (MC-351) Kovacic B et al. (2004) RBM Online 8(6):687-694 (MC-355) Kovacic et al. (2002) Fertility and Sterility 77(3):529-536 Le Du A et al. (2005) Hum Rep 20(2):420-424 (MC-366) Moser M et al. (2004) Hum Rep 19(3):573-578 (MC-349) Sousa M et al. (1999) Hum Rep 14(5):1279-1286 (MC-259) Virant-Klun I et al. (2003) Hum Rep 18(5):1070-1076 (MC-323) Vlaisavljevic V et al. (2001) Hum Rep 16(11):2379-2383 (MC-291) Zhu J (1996) Hum Rep 11(1):231-32 (MC-83) Ziebe S (1997) Acta Obstet Gynecol Scand 76:335-39 (MC-174)

CompañíaB

CompañíaC

Compañía A

MediCult

Microtécnicas 41


Microtécnicas 42

Solucion acidificada Tirodes

Producto

1060 5000 Solución acidificada Tyrodes, (5 x 0.2 ml)

Uso propuesto La solución acidificada Tyrodes es para el drilling químico de la Zona Pelúcida, para facilitar la incubación o remoción de blastómeros en conjunción con PGD (diagnostico de pre- implantación genética)

Composición • Sales fisiológicas

• Glucosa

• Polyvinylpyrrolidona (PVP)

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad

Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. El periodo de conservación mínimo es de 16 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca. El producto esta empacado en viales de uso único.



• pH testeado


Referencias Gabrielsen A et al. (2004) Hum Rep 19(10):2258-2262 (MC-351)

Microtécnicas 43


Microtécnicas 44

Medio de biopsia

Producto

1062 0010 Medio de biopsia, (1 x 10 ml)

Uso propuesto El medio de biopsia es para biopsias blastómeras de embriones en estado de clivaje para PGD (diagnostico de pre-implantación genética)

Composición


• HSA

• Glucosa

• Sales fisiológicas sin calcio ni iones de magnesio

• Aminoácidos


• HEPES

• Penicilina

• Estreptomicina


Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 5 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.




• pH testeado




Referencias Moutou C et al. (2003) Hum Rep 18(3):509-514 (MC-356)

45 Microtécnicas


Criopreservación 46

CRIOPRESERVACION

La creciente demanda de métodos exitosos de criopreservación, busca reducir el índice de embarazos múltiples en ART, desde la transferencia de pequeños números de embriones. Un procedimiento exitoso de congelado y descongelado asegura el mantenimiento de la integridad estructural de la célula, como también de sus características funcionales. El manejo adecuado de la presión osmótica es crucial para el éxito, es importante evitar el daño causado por la formación de hielo intracelular. Si el proceso de deshidratación ha sido inadecuado, se formaran grandes cristales intracelulares. Por ende, las células son deshidratadas antes y durante el proceso de enfriado. La criopreservación de gametos y embriones comprende una exposición inicial a crioprotectores, enfriando hasta temperaturas bajo cero, almacenamiento, descongelado y finalmente, la dilución y remoción de crioprotectores, con un retorno al ambiente fisiológico, el cual permite su desarrollo futuro. Todos los métodos de criopreservación desarrollados hoy en día, dependen de la presencia de dos o mas crioprotectores. 1 ,2-propanediol, glicerol, DMSO (dimethyl sulfoxide) y ethylene glycol son crioprotectores intracelulares (o penetrantes). Su peso molecular es relativamente bajo (MW<10).Los compuestos que, como resultado de su tamaño o polaridad, se mantienen en la solución intracelular, incluyen moléculas grades como la sucrosa, las proteínas y las lipoproteínas. El modo de acción de los crioprotectores es complejo. Ellos se adhieren al agua y reducen los efectos tóxicos de las altas concentraciones de otros compuestos. Además, ellos protegen las células durante el lento enfriamiento, cuando las células están muy deshidratadas y rodeadas de sales concentradas. En grandes concentraciones, los crioprotectores minimizan el daño causado por la formación de hielo, ya que los crioprotectores logran que el agua forme una estructura de cristal, en vez de cristales de hielo. Como elegir un medio de criopreservación

Vitrificación La vitrificación, o alcanzar un estado como el del cristal (-130°C para el agua), fue descrito primero como una potencial alternativa al congelamiento lento en 1985 (Rall et al. 1985). El daño a los ovocitos causado por el enfriamiento depende del tiempo, entonces, es necesario prevenir la formación de hielo y el daño, enfriando a una velocidad suficientemente rápida para solidificar el agua intracelular antes de pueda cristalizarse (Martino et al. 1996). Las condiciones extra e intracelulares que existen y hacen posible la crío supervivencia, a -30°C durante el enfriado lento son imitadas durante el proceso de vitrificación, pero a temperatura ambiente. Esto se logra exponiendo la célula a altas concentraciones de crioprotector para una breve equilibrado, seguido de un enfriado ultra rápido realizado sumergiéndola en nitrógeno líquido. La alta osmolaridad del medio de vitrificación deshidrata rápidamente a la célula y el sumergimiento en el nitrógeno líquido solidifica rápidamente la célula antes de que el agua intracelular restante, tenga tiempo de formar cristales de hielo dañinos. Dos aspectos importantes de esta técnica son los altos niveles de toxicidad del crioprotector a temperatura ambiente, y la habilidad de vitrificar (enfriar) y calentar (descongelar) suficientemente rápido, para evitar la formación de cristales y la desvitrificación (Vajta et al. 1998). Ya han nacido niños sanos después de la inseminación con ovocitos vitrificados. Estos obstáculos pueden ser superados. Otra ventaja de la vitrificación es que es posible observar el procedimiento completo en el laboratorio. El McGill Cryoleaf™ es un dispositivo de vitrificación y almacenamiento con un avanzado sistema de manipulación, lo cual facilita la descarga y almacenamiento de ovocitos/ embriones. La seguridad durante el almacenamiento ha mejorado, los ovocitos o embriones están doblemente protegidos del estrés y la contaminación, por un sistema de cubierta cerrada. El Dr. Chian y el Prof. Tan de la universidad de Mc Gill, Montreal, desarrollaron McGill Cryoleaf™ y los medios de vitrificación de MediCult.

References see p.63

Criopreservacion 47

Medio de congelado de esperma

Producto

1067 0010 Medio de congelado de esperma (SFM), (1 x 10 ml)

Uso propuesto Para la criopreservación de espermatozoides humanos y de tejido de biopsias testiculares.

Composición


• HSA


• Glucosa

• Sucrosa

• Lactato de sodio

• Glicerol

• HEPES

• Penicilina

• Estreptomicina

El medio de congelado de esperma (SFM) tiene un protocolo fácil de realizar y adaptable, que sigue el 1:1 mix tradicional con plasma seminal. SFM debe ser usado con otros productos de preparado de esperma en el rango MediCult, con el fin de minimizar el shock ambiental de cambiar de condiciones de cultivo. Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. No congelar. Cuando el producto ha sido calentado, no debería refrigerarse de nuevo. Para mantener el producto en condiciones optimas, recomendamos que el producto sea utilizado dentro de los 7 días de estar abierto. El periodo de conservación mínimo es de 12 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.



• pH testeado

• Ph. Eur. endotoxina testeado ~ 0.1 EU/ml

• Supervivencia de esperma testeada

Nota: Los resultados de cada serie son registrados en el certificado de análisis, que esta disponible bajo solicitud

Documentación clínica SFM ha sido comparado con un medio tampón de yema de huevo usando Hemizona Assay. No se registraron diferencias en la movilidad de la esperma en el medio descongelado, pero el numero de esperma aglomerada en la zona fue 50% mas alto con SFM (Mahoney 1999).

Referencias Dafopoulos K et al. (2005) RBM Online 10(4):461-466 (MC-367) Garrido N et al. (2004) Hum Rep 19(1):2581-2586 (MC-354) Mahoney MC (1999) MRB laboratory (MC-249) Matyas S et al. (2002) Andrologia 34:248-254 (MC-326) Meseguer M et al. (2002) Fertility and Sterility 78(6): 1199-1202 (MC-321) Nicopoullos J et al. (2004) Hum Rep 19(3):579-585 (MC-345) Schrader M et al. (2002) Hum Rep 17(9):2338-2343, (MC-3 14) Sousa M et al. (2002) Hum Rep 17(7):1800-1810 (MC-3 11)


Crió preservación de ovocitos

OocyteFreeze™ y OocyteThaw™ Como el almacenamiento de ovocitos tiene ventajas claras, especialmente para pacientes jóvenes que están sometidos a quimioterapia u ovariectomia, ha sido un reto, encontrar métodos efectivos para la criopreservación de ovocitos, para los investigadores de ART. Uno de los pioneros en este campo, la Dra. Raffaella Fabbri, ha desarrollado y testeado formulas que contenían concentraciones variadas de sucrosa con un proceso de enfriamiento lento. Este trabajo resulto en las formulas de OocyteFreeze® y OocyteThaw®, que han sido desarrolladas y testeadas por la Dra. Fabbri en el Centro IVF, en la universidad de Bologna, Italia, han mostrado índices de supervivencia de hasta un 82%.

Referencias Fabbri et al. (2001) Hum Rep 16(3):411-416 (MC-275)


OocyteFreeze™

Producto

10485010 OocyteFreeze™, (5 x 10 ml) (Vial 1 x 3, Vial 2 y Vial 3)

Uso propuesto OocyteFreeze™ es para congelar ovocitos humanos.

Composición




• pH testeado

• Osmolaridad testeada (Vial 1)




Documentación Clínica Fabbri et al. 2001 demostraron que el índice de supervivencia depende del tiempo durante el cual los ovocitos estén expuestos al crioprotector, antes de que la temperatura disminuya. Prolongando el tiempo de exposición de 10 a 15 minutos, el índice de supervivencia de los ovocitos aumento de 56% a 70%.

Fabbri et al. ha comparado varias concentraciones de sucrosa y ha llegado a la conclusión que el índice de supervivencia aumenta en proporción con la concentración de sucrosa. Usando 0/3 M de solución sucrosa como la de OocyteFreeze™, el índice de supervivencia de ovocitos humanos fue de 82%.

Los resultados clínicos muestran índices de fertilización de 57% después del ICSI, con un índice de clivaje de 91% y una morfología del embrión satisfactoria.

Referencias Fabbri et al. (2001) Hum Rep 16(3):411-16 (MC-275)

Vial 1 Vial 2 Vial 3

PBS

HSA

Sacarosa

1, 2-propanediol


OocyteThaw™

Producto

1049 4010 OocyteThaw™, (4 x 10 ml) (Vial 1, Vial 2, Vial 3, Vial 4)

Uso propuesto OocyteThaw™ es para descongelar ovocitos humanos que fueron congelados con OocyteFreeze™ (Product No. 1048 5010).

Composición





• pH testeada

• Osmolaridad testeada (Vial 4)




Vial 1 Vial 2 Vial 3 Vial 4

PBS

HSA

1,2-propanediol

Sacarosa


Embryo Freezing Pack

Productos

1026 4010 Embryo Freezing Pack, (4 x 10 ml)

(Vial 1, Vial 2, Vial 3x2)

Uso propuesto Para congelar cigotos humanas y embriones en etapa de clivaje.

Composición PBS complementada con:


• HSA

El Embryo Freezing Pack contiene soluciones listas-para-usar con protocolos de 1,2 propanediol y de sucrosa, de acuerdo con el método de J. Testart et al. 1986. Se obtienen resultados óptimos de supervivencia al post descongelado, de cigotos y de embriones del día 2 (2-4 células).

El Embryo Freezing Pack es formulado usando el EFM tamponado de fosfato, una modificación de PBS con SSR® y HSA.





• pH testeado




Referencias Best L et al. (2002) Human Fertility 5(2):92 (MC-301) Blin A et al. (2002) Abstracts of the 20th Annual Meeting of ESHRE, O-257, i89-i90 (MC-350) Frydman N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353) Horne G et al. (1997) Hum Rep 12(3):542-547 (MC-130) Sousa M et al. (2002) Hum Rep 17(7):1800-1810 (MC-311) Testart J et al. (1986) Fertility and Sterility 46(2):268-272



Embryo Freezing Pack


Congelado de embriones

Productos

1098 4010 Embryo Thawing Pack, (4 x 10 ml)

(Vial 1, Vial 2, Vial 3, Vial 4)

Uso propuesto Para descongelar cigotos humanos y embriones en etapa de clivaje que fueron congelados en el Medio de congelado de embriones (Product No. 1026 4010).

Composición PBS complementada con:


• HSA

El Embryo Thawing Pack contiene soluciones listas-para-usar con protocolos de 1,2 propanediol y de sucrosa, de acuerdo con el método de J. Testart et al., 1986. Se obtienen resultados óptimos para cigotos y embriones del día 2 (2-4 células), luego de descongelar.

El Embryo Freezing Pack es formulado usando el EFM tamponado de fosfato, una modificación de PBS con SSR® y HSA.





• pH testeado




Referencias Best L et al. (2002) Human Fertility 5(2):92 (MC-301) Blin A et al. (2002) Abstracts of the 20th Annual Meeting of ESHRE, O-257, i89-i90 (MC-350) Frydman N et al. (2004) RBM Online 9(5):521-528 (MC-353) Horne G et al. (1997) Hum Rep 12(3):542-547 (MC-130) Sousa M et al. (2002) Hum Rep 17(7):1800-1810 (MC-3 11) Testart J et al. (1986) Fertility and Sterility 46(2):268-272


Criopreservacion de blastocitos

BlastFreeze™ y BlastThaw™ ayudan a optimizar los resultados del cultivo blastular. Los medios y la metodología fueron desarrollados por el Dr. Irma Virant- Klun (embriólogo) y el Dr. Tomaz Tomazevic (ginecólogo) junto con el grupo IVF en el Centro Universitario Medico en Ljubjana , Eslovenia. Las formulas han sido usadas exitosamente para congelar y descongelar los embriones mórulas y blastulares, usando protocolos basados en el principio de “dos pasos” publicado por Veiga y Ménézo 1997.

BlastFreeze™

Producto

1053 2010 BlastFreeze™, (2 x 10 ml) (Vial 1, Vial 2)

Uso propuesto BlastFreeze™ es para congelar embriones humanos blastulares.

Composición




• Esterilidad testeada • pH testeado • Ph. Eur. endotoxina testeada ~ 0.1 EU/ml • Mouse Embryo Assay (MEA) testeado

Nota: Los resultados de cada serie son registrados en el certificado de análisis, que esta disponible bajo solicitud .Referencias Ménézo Y (1996) in: Proceedings of ASRM, Boston, USA, p 006 Ménézo Y et al. (1998) Fertility and Sterility 70(3):583-584 (MC-225) Veiga & Ménézo (1997) in: Proceedings of the 10th World Congress of in Vitro Fertilization and Assisted Reproduction, Vancouver, Canada, pp. 49-53. Virant-Klun I et al. (2003) Fertility and Sterility 79(6): 1428-1433 (MC-324)

Vial 1 Vial 2

EBSS SSR® (Reemplazo de suero sintético)

HSA

Glicerol

Sucrosa

Piruvato de sodio


Penicilina

Estreptomicina

Rojo Fenol


BlastThaw™

Producto

1054 2010 BlastThaw™, (2 x 10 ml) (Vial 1, Vial 2)

Uso propuesto BlastThaw™ es para descongelar embriones humanos blastulares usando BlastFreeze™ (Producto No. 1053 2010) Composición




• pH testeado




Documentación clínica Durante el periodo de Enero 11995- Febrero 2003, se realizaron un total de 429 ciclos de descongelado, contando 933 blástulas descongeladas. La edad promedio de los pacientes era 34.7 ± 2.1 (24 - 45 años). El numero promedio de blástulas transferidas fue1.8 ± 1.1 (424 transferencias). Estos resultados muestran un índice de supervivencia del 80% aprox., y un índice de implantación de 15%, luego del congelado y descongelado de blástulas humanas. En 129 casos de transferencia de blástula simple, el índice de implantación fue de 19%. El índice de aborto promedio de 7%.

Referencias Ménézo Y (1996) in: Proceedings of ASRM, Boston, USA, p. 006 Ménézo Y et al. (1998) Fertility and Sterility 70(3):583-584 (MC-225) Veiga & Ménézo (1997) in: Proceedings of the 10th World Congress of in Vitro Fertilization and Assisted Reproduction, Vancouver, Canada, pp. 49-53. Virant-Klun I et al. (2003) Fertility and Sterility 79(6): 1428-1433 (MC-324)

Vial 1 Vial 2EBSS


HSA

Sucrosa

Piruvato de sodio


Penicilina

Estreptomicina

Rojo Fenol


MediCult Vitrification Freeze

Producto

1118 2001 MediCult Vitrification Freeze, Medio de equilibrado (1 ml) (Vial 1) Medio de vitrificación (1 ml) (Vial 2) 5 x McGill CryoleafTM

Uso propuesto Para el enfriamiento ultra rápido y el almacenamiento de ovocitos y embriones.

Composición

• Fracción de proteína de plasma (Humana) 5 %, USP.

• Glicol etileno

• 1 ,2-Propanediol

• Sucrosa



• L-glutamina


• Penicilina

• Estreptomicina

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz.. El producto es empacado en viales de uso único. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.



• Ph. Eur. endotoxina testeada 0.5 EU/ml

• Mouse Embryo Assay (MEA) testeada


McGill Cryoleaf™ El McGill Cryoleaf™ es un dispositivo de vitrificación y almacenamiento con un avanzado sistema de manipulación, lo cual facilita la descarga y almacenamiento de ovocitos/ embriones. La seguridad durante el almacenamiento ha mejorado, los ovocitos o embriones están doblemente protegidos del estrés y la contaminación, por un sistema de cubierta cerrada. El Dr. Chian y el Prof. Tan de la universidad de Mc Gill, Montreal, desarrollaron McGill Cryoleaf™ y los medios de vitrificación de MediCult.

Instrucciones de almacenamiento Almacenar en recipiente original a 25°C protegido de la luz.





Criopreservación

Documentacion clinica Numerosos estudios recientes han confirmado que los ovocitos y los embriones vitrificados tienen altos índices de supervivencia post descongelado.

n Indice de supervivencia %

Indice de embarazo%

Kuwayama 2005 a Ovocitos 64 91 41.3 Isachenko 2003 Ovocitos 59 71 40 Kuwayama 2005b D1 PN embriones 5881 100 - Kuwayama 2005b D3 embriones 897 98 27 Mukaida et al. 2003 Stehlik 2005 Takahashi et al. 2005 Osada et al. 2003

Blastocitos Blastocitos Blastocitos Blastocitos

725 41

1129 580

80,4 100 85.7 98.6

37 50

44.1 55.6

Teramoto et al. 2004 Blastocitos 197 100 57.7 Stehlik et al. 2003 Blastocitos 24 100 46.2 Kuwayama 2005b Blastocitos 6328 90 53

En ASRM 2005, el Dr. Ri-Cheng Chian, de McGill University, Montreal, Canada, presento un estudio de vitrificación realizado usando McGill CryoleafTM. Los resultados del estudio confirman los índices altos de éxito conseguidos por la vitrificación.

Chian et al. 2005

El McGill CryoleafTM esta diseñado como un dispositivo de almacenamiento cerrado para proteger al embrión del estrés y del riesgo de contaminación durante el almacenamiento.

Bielanski et al. 2000 observaron contaminación en sistemas de congelación abiertos al exponer embriones bovinos en nitrógeno líquido contaminado con virus sin observar contaminación en sistemas cerrados.

Otros han observado las mismas ventajas en los sistemas cerrados (Hata et al. 2003, Kuwayama 2005).

Referencias Bielanski et al. (2000) Cryobiology 40:110-116 Chian et al. (2005) Fertility and Sterility 84(suppl 1): S36 Hata et al. (2003) Fertility and Sterility 80(suppl 3): S142 Isachenko (2003) RBM Online 7(2):211-216 Kuwayama (2005a) RBM Online 11(3):300-308 Kuwayama (2005b) RBM Online 11(5):608-614 Martino et al. (1996) Biol Reprod 54:1059-1069 Mukaida et al. (2003) Hum Rep 1 8(2):384-39 1 Osada (2003) Fertility and Sterility 80(suppl. 3):S63 Rall et al. (1985) Nature 3 13:573-575 Stehlik et al. (2003) Fertility and Sterility 80(suppl 3):S 145-146 Stehlik et al. (2005) RBM online 11(1):53-57 Takahashi et al. (2005) Fertility and Sterility 84(1):88-92 Teramoto et al. (2004) Fertility and Sterility 82(suppl 2):S207 Vajta et al. (1998) Mol Reprod Dev 5 1:53-58

Survival Pregnancy Implantation rate rate rate

100

80

60

40

20

0

65 Criopreservación

MediCult Vitrification Thaw

Instrucciones de almacenamiento y estabilidad Almacenar en el contenedor original a 2-8 °C, protegido de la luz. El producto esta empacado en viales de uso único. El periodo de conservación mínimo es de 8 semanas a partir del día de envío desde Dinamarca.

Test de control de calidad • Esterilidad testeada • Ph. Eur endotoxina testeada 0.5 EU/ml • Mouse Embryo Assay (MEA) testeado


Producto

1119 5002 MediCult Vitrification Thaw, Medio de descongelado (2 ml) (Vial 1) Medio de dilución 1 (2 ml) (Vial 2) Medio de dilución 2 (2 ml) (Vial 3) Medio de lavado (2 ml) (Vial 4 x 2)

Uso propuesto EL MediCult Vitrification Thaw es para el descongelado de ovocitos y embriones humanos, congelados usando MediCult Vitrification Freeze (Producto No. 1118 2001)

Composición

• Fracción de proteína de plasma (Humana) 5 %, USP.

• Sucrosa



• L-glutamina


• Penicilina

• Estreptomicina

66 Criopreservación


67 In Vitro Maturation (IVM®)

MADURACION IN VI T R O (IVM®) La maduración In vitro es una tecnología de reproducción asistida (ART) innovadora, aplicable a parejas seleccionadas con un factor masculino, un factor tubario, infertilidad inexplicable y PCO/PCOS. Los ovocitos de la etapa de vesícula germinal inmadura (GV), son recuperados durante el ciclo natural de la mujer con un mínimo o sin tratamiento hormonal.

La maduración del ovocito hasta la metafase II tiene lugar in vitro usando el sistema MediCult IVM®.

Los protocolos ICSI o IVF estándar, son utilizados después de la maduración para la inseminación y la fertilización subsiguiente.

Los medios MediCult ART usados con el sistema MediCult IVM®.

Visión MediCult IVM® Nosotros nos esforzamos por transformar al IVM® en un tratamiento de infertilidad de primera línea, antes del tratamiento hormonal.

MediCult IVM® System is 510(k) cleared.

Concepto MediCult IVM® La dedicación y el la importancia del trabajo en equipo, combinado con los aspectos clínicos, como la selección de los pacientes, los tiempos de la obtención del ovocito y los procedimientos de laboratorio, van a incrementar las oportunidades de una implementación exitosa. El extensivo know- how, la información y el apoyo único, que incluye protocolos clínicos, esta disponible vía la red global de MediCult IVM®.

In Vitro Maturation (IVM®) 68

MediCult IVM® System

Productos 8221 4010 LAG Medium (10 ml ) (Vial 1) IVM®

Medium (10 ml) (Vial 2 x 3)

Uso propuesto

Vial 1: El medio LAG es para la preincubación de ovocitos inmaduros. Vial 2: El medio IVM es un medio basal para la maduración de ovocitos inmaduros con suplementos.

Composición Vial 1, LAG Medium: Solución salina balanceada de Earle (EBSS) complementada con:

• Reemplazo de suero sintético (S SR®) (USA: ART Supplement)

• Albúmina de suero humano(HSA)

• Glucosa



• Penicilina

• Estreptomicina

• Rojo Fenol

Vial 2, IVM® Medium:

• Glucosa

• Piruvato


• Aminoácidos

• Nucleótidos

• Vitaminas


• Penicilina • Estreptomicina • Rojo Fenol





• pH testeado • Ph. Eur. endotoxina testeada < 0.1 EU/ml




Instrucciones detalladas de manipulación de los medios LAG e IVM® son descriptas en el protocolo clínico t de laboratorio MediCult IVM®.La información esta disponible contactando [email protected].

In Vitro Maturation (IVM®) 69

Documentación clínica

Los medios MediCult IVM® han sido desarrollados con el Herlev University Hospital de Dinamarca y The Family Federation de Finlandia, Clinica de Infertilidad. En septiembre del 2005, ya han nacido 152 niños y hay 53 embarazos en proceso.

MediCult IVM® es indicado para usar:

• En mujeres con ciclos regulares, referidas debido al factor masculino y/o a una enfermedad tubaria.

• En mujeres con PCO

Este tratamiento es seguro y además elimina los efectos colaterales de los tratamientos con hormonas.

Los niños nacidos son sanos y tienen un desarrollo normal.

No. De niños

nacidos

Peso al Nacimiento (g)

variación (excl.dobles)

Sexo Hombre Mujer

Hijos únicosgemelos

DK 42 3770 18F 40S

3000-5260 24M 2T

SF 38 3525 25F 36S

2575-4300 13M 2T

Referencias Chian et al. (2004) Curr Opin Obstet Gynecol. 16(3):211-9 Cizek-Sajko M et al. (2005) Hum Rep 20(suppl 1):P-277, i103 (MC-374) Dal Canto M et al. (2005) Hum Rep 20(suppl 1):P-326, i119 (MC-376) Kovac V et al. (2005) Hum Rep 20(suppl 1):P-276, i102 (MC-373) Mikkelsen A et al. (1999) Hum Rep 14(7):1847-1851 (MC-357) Mikkelsen A et al. (2000) Hum Rep 15(8): 1685-1690 (MC-358) Mikkelsen A et al. (2003) RBM Online 6(4):416-420 (MC-360) Mikkelsen A et al. (2005) RBM Online 10(5):593-599 (MC-369) Soderstrom-Anttila et al. (2005) Hum Rep 20(6): 1534-1540 (MC-368) Suikkari A et al. (2005) Hum Rep 20(suppl 1):P-284, i105 (MC-375)

MediCult IVM® niños nacidos (numero acumulado)

MediCult provee una Línea completa de medios para ART

Un producto para cada etapa de la reproducción Asistida

E X P L I C A C I O N E S GR A F I C A S

Aspiración de espermatozoides

Aspirado arriba y abajo de la pipeta

Procedimiento de lavado

Centrifugado

Transferencia embrionaria (ET)

Cambio de medios

Fijado del embrión sujetando la pipeta y exposición a la solución Tyrodes acidulada

Transporte y transferencia de nitrógeno liquido al tanque de almacenamiento.

Tubo con tapa

Proteger de la luz

Temperatura

Temperatura ambiente

Etapa caliente

Temperatura ambiente con una corriente de CO2

Mantener en la incubadora

Tiempo en segundos

Tiempo en minutos

Tiempo en horas

Conteo de espermatozoides

Catálogo de productos 2006 - fivlab.com³n in Vitro ... El cultivo in Vitro de embriones humanos...

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