申请书 NSFC 2017 - caasiar.caas.cn/docs/2018-03/20180308210349538568.pdf电话 010-62815984...

申请代码 C200502

受理部门

收件日期

受理编号 3177102023

国家自然科学基金

申请书（2 0 1 7 版）

资助类别：面上项目

亚类说明：

附注说明：常规面上项目

项目名称：蛋白质磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理

申请人：张德权电话： 010-62815984

依托单位：中国农业科学院原子能利用研究所

通讯地址：北京市海淀区圆明园西路2号中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所）

邮政编码： 100193 单位电话： 010-62813045

电子邮箱： [email protected]

申报日期： 2017年02月25日

国家自然科学基金委员会

NSFC 2017

基本信息

申

请

人

信

息

姓名张德权性别男出生年月

1972年01月民族汉族

学位博士职称研究员每年工作时间（月） 8

电话 010-62815984 电子邮箱 [email protected]

传真 010-62818740 国别或地区中国

个人通讯地址北京市海淀区圆明园西路2号中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所）

工作单位中国农业科学院原子能利用研究所/畜产品加工研究室

主要研究领域肉品科学

依托单位信息

名称中国农业科学院原子能利用研究所

联系人王杕电子邮箱 [email protected]

电话 010-62813045 网站地址

合作研究单位信息

单位名称

项

目

基

本

信

息

项目名称蛋白质磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理

英文名称Mechanism of muscle glycogen phosphorylase isoenzymes activityregulated by protein phosphorylation in postmortem

资助类别面上项目亚类说明

附注说明常规面上项目

申请代码 C200502.畜产食品 C200602.畜产食品贮藏与保鲜

基地类别农业部农产品加工重点实验室

研究期限 2018年01月01日 -- 2021年12月31日研究方向：肉与肉制品

申请直接费用 72.5000万元

中文关键词冷却肉；品质；糖原磷酸化酶；同工酶；磷酸化

英文关键词chilling meat; quality; glycogen phosphorylase; isoenzyme;phosphorylation

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国家自然科学基金申请书 2017版

版本：17010000003771356

中

文

摘

要

糖原磷酸化酶通过调控畜禽宰后早期糖酵解影响肉品品质，经典的糖原磷酸化酶调控理论认为糖原磷酸化酶磷酸化修饰后形成糖原磷酸化酶A启动糖酵解，本项目组近期研究发现糖原磷酸化酶存在多种同工酶，其活性受磷酸化调控，但具体机理尚不清楚。本项目以糖酵解差异显著肌肉为试验材料，通过宰后肌肉原位模型鉴定不同磷酸化水平糖原磷酸化酶同工酶活性消长规律；确证宰后肌肉糖酵解过程糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点及其对活性作用；构建原位模型和离体模型，确证蛋白激酶、碱性磷酸酶对糖原磷酸化酶同工酶磷酸化和酶活的调控作用；调节催化底物、代谢产物和磷酸化基团供体浓度，分析糖原磷酸化酶同工酶活性变化；纯化不同磷酸化水平的糖原磷酸化酶同工酶，解析磷酸化修饰对同工酶α-螺旋、β-折叠、分子间作用力的影响，揭示磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理，丰富和发展糖酵解调控肉品质理论。

英

文

摘

要

Glycogen phosphorylase regulates meat quality through glycolysis in earlypostmortem. Glycogen phosphorylase turns into glycogen phosphorylase A byphosphorylation and then startup glycolysis according to the classic theory.However, our recent research show that there are many glycogen phosphorylaseisoenzymes, whose activity are regulated by phosphorylation, but the regulationmechanism is still unknown. In this project, activity characteristics of glycogenphosphorylase isoenzymes modified by phosphorylation will be identified in thepostmortem situ model using muscle samples with different glycolysis levels. Thephosphorylation sites of glycogen phosphorylase isoenzymes and their effects onactivity during postmortem will be studied. Furthermore, the in situ and in vitromodel will be established to explore the influence of protein kinase and alkalinephosphatase on the phosphorylation and activity of glycogen phosphorylaseisoenzymes and to analyze the glycogen phosphorylase isoenzymes’ activity byregulating the content of catalytic substrates, metabolites and phosphate groupdonators. Glycogen phosphorylase isoenzymes with significantly differentphosphorylation will be purified to analyze the fundamental differences ofalpha-spiral, beta sheet and intermolecular force. The aim of this project is toreveal mechanism of glycogen phosphorylase isoforms' activity regulated byphosphorylation and improve current theory on muscle quality regulated byglycolysis. NSFC 20

17

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项目组主要参与者（注: 项目组主要参与者不包括项目申请人）

编号姓名出生年月性别职称学位单位名称电话电子邮箱每年工作时间（月）

1 李铮 1986-11-03 女助理研究员博士中国农业科学院原子能利用研究所

010-62819392 [email protected] 4

2 陈丽 1986-05-17 女助理研究员硕士中国农业科学院原子能利用研究所


3 杜曼婷 1991-10-25 女博士生硕士中国农业科学院原子能利用研究所


4

DadjiStephaneSerge Bonny

1975-06-14 男博士生硕士中国农业科学院原子能利用研究所


5 曹立创 1991-01-01 男硕士生学士中国农业科学院原子能利用研究所


总人数高级中级初级博士后博士生硕士生

6 1 2 0 0 2 1

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国家自然科学基金项目资金预算表

项目申请号：3177102023 项目负责人：张德权金额单位：万元

序号科目名称金额备注

(1) (2) (3)

1 一、直接费用 72.5000用于原材料、试剂耗材采购和

测试化验加工等

2 1、设备费 0.0000

3 (1)设备购置费 0.00

4 (2)设备试制费 0.00

5 (3)设备改造与租赁费 0.00

6 2、材料费 27.10用于原料肉、实验用抗体、标

准品和耗材等

7 3、测试化验加工费 12.40 用于酶纯化和结构鉴定

8 4、燃料动力费 3.00 能独立核算的设备用电和水费

9 5、差旅/会议/国际合作与交流费 16.00 采样、交流过程中发生的费用

10 6、出版/文献/信息传播/知识产权事务费 4.00文献查阅、打复印，文章版面

费等

11 7、劳务费 8.40直接用于项目研究的研究生的

劳务费

12 8、专家咨询费 1.60就项目相关内容咨询专家发生

的费用

13 9、其他支出 0.00

14 二、自筹资金来源 0.00

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预算说明书（定额补助）

（请按《国家自然科学基金项目资金预算表编制说明》中的要求，对各项支出的主要用途和测算理由及合作研究

外拨资金、单价≥10万元的设备费等内容进行详细说明，可根据需要另加附页。）

对本项目的研究内容进行科学核算，综合计算开展研究所需的原材

料费、所用试剂/药品费、加工测试费、差旅/会议/国际合作与交流费等，

共申请资助经费72.50万元，具体如下：

一、直接费用：72.50万元

1．设备费：0万元

2．材料费：27.10万元

原材料费（9.00万元）：主要用于采样、购买采样容器等相关用品5.00

万元；玻璃制品、塑料制品等实验室易耗品4.00万元。其中购买实验过程

中消耗的原料肉400公斤，原料费及运输费用按100元/公斤，计4.00万元；

液氮罐、保温箱等费用1万元；玻璃制品200个，单价按100元，计2.00万

元；塑料制品500个，单价按40元/个，计2.00万元。

试剂/药品费（18.10万元）：主要用于购买试剂盒、抗体、反应底物、

标准品等13.50万元，缓冲液、提取液等常规试剂4.60万元。购买糖原磷

酸化酶同工酶活性测定试剂盒20个，每个3000元，计6.00万元；蛋白质含

量测定试剂盒20个，每个1500元，计3.00万元；抗体10种，每种3000元，

计3.00万元；糖原、磷酸-1-葡糖糖、AMP等标准品5种，每种3000元，计

1.50万元；Tris、DTT、甘氨酸、过硫酸胺、TEMED、SDS、PRO-Q染料、

SYPRO Ruby染料、乙醇、冰乙酸、甲醇等试剂约50种，进行糖原磷酸化

酶同工酶纯化、结构、活性和功能检测实验，共约消耗200瓶，按平均230

元/瓶，共计4.60万元。

3．测试化验加工费：12.40万元

主要用于肌肉蛋白质成分分离纯化、磷酸化位点鉴定和蛋白质结构分析

等所需费用。在国家蛋白质科学研究（北京）清华基地冷冻电镜平台完

成蛋白质大分子三维结构和功能检测、分析样品20个，2500元/个，计5.00

万元；在中国农业科学院农产品加工研究所农业部农产品加工重点实验

室（本单位内部独立经济核算单位）完成圆二色谱、傅立叶变换光谱、

荧光光谱、制备色谱等测试，样品25个，2000元/个，计5.00万元，完成

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质谱鉴定蛋白质20种，1200元/样品，计2.40万元。

4．燃料动力费：3.00万元

主要用于实验所需样品的前处理、肉样解冻、绞碎、蛋白质离心、

纯化和低温保存。其中绞碎机、制冰机、离心机、层析冷柜、超低温冰

箱等仪器用电、耗水需单独计量。本项目预计平均电耗240度/月，水耗65

吨/月，按40个月计，按每度电0.94元计算，每吨水8.15元计算，共计水电

费3.00万元。

5．差旅/会议/国际合作与交流费：16.00万元

差旅费5.00万元：主要用于开展实验、考察、国内学术交流等所需的

外埠差旅费和市内交通费等。预计项目实施过程需到外地出差8人次/年，

每次3天，平均外埠交通费和住宿费按1000元/人次，出差补助费平均按100

元/人/天计，共需外埠差旅费（1100×8+100×3×8）×4=4.48万元。市

内交通费0.52万元。

会议费3.00万元：预计项目实施过程中需召开3次研讨会，平均每次

会议规模25人，会期1天，按照400元/人/天的标准执行，共需会议费3.00

万元。

国际合作与交流费8.00万元：主要用于项目组成员出国交流，计划派

1人次参加世界肉类科技大会，共7天，国际旅费按3.00万元/人次计，出

国补贴按照国家相关规定执行，住宿、伙食、公杂费合计1.00万元，共4.00

万元；邀请外国专家来所开展磷酸化调控肌肉品质作用机理学术交流1

人·次，为期7天，机票及食宿费用4.00万元。

6．出版/文献/信息传播/知识产权事务费：4.00万元

主要支付论文版面费、文献检索费、打印费、复印费等。发表中文

核心期刊论文4篇，按版面费3000元/篇，计1.20万元；预计购买资料40份，

每份100元，计0.40万元；文献检索3次，每次3000元，计0.9万元；打印、

复印资料500份，每份30元，计1.50万元。

7．劳务费：8.40万元

培养3名研究生，其中博士生2名，硕士生1名，人均工作时间按30个

月计算，博士研究生劳务费按1000元/月计、硕士研究生劳务费按800元/

月计，研究生劳务费＝30月/人×（2人×1000元/月/人＋1人×800元/月/

人）＝8.40万元。

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8．专家咨询费：1.60万元

根据项目任务，执行过程中需召开技术研讨会2次，每次聘请高级职称专

家10人进行咨询和培训，咨询费按800元/人/天计算，每次会议1天，共需

专家咨询费800元/人/次×10人×2次=1.60万元。

9．其他支出：0万元

二、自筹资金来源

无。

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报告正文

参照以下提纲撰写，要求内容翔实、清晰，层次分明，标题突出。

请勿删除或改动下述提纲标题及括号中的文字。

（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）：

1．项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及发展动态分

析，需结合科学研究发展趋势来论述科学意义；或结合国民经济和社

会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述其应用前景。附主要参

考文献目录）；

（1）糖原磷酸化酶启动宰后肌肉糖酵解，磷酸化修饰调节糖原

磷酸化酶活性

糖酵解是影响畜禽宰后肌肉食用品质的最主要生化途径，决定肌

肉成熟进程。快速和（或）过度糖酵解产生 PSE 肉和类 PSE 肉，而

糖酵解不足则产生 DFD 肉，PSE、类 PSE 和 DFD 肉都是劣质肉。据

统计我国每年畜禽宰后劣质肉高达315万吨，经济损失超过200亿元，

因此，调控宰后肌肉糖酵解是肉品行业和肉品科学家关注的热点和难

点。已有研究表明，畜禽宰后初期缓解糖酵解是解决 PSE 肉和类 PSE

肉的关键，相反地，避免 DFD 肉的关键是增加肌肉初期糖酵解水平

（尹靖东，2011；Huff Lonergan et al. 2010）。大量研究表明，调控糖

原磷酸化酶的活性是调控宰后肌肉初期糖酵解水平的关键（Li et al.

2012; Laville et al. 2009）。

糖原磷酸化酶具有 842 个氨基酸，启动糖原发生磷酸化反应形成

葡萄糖-1-磷酸，作为肌肉糖酵解的第一步，为糖酵解提供必需底物

（Lucia et al., 2008）。已有研究表明糖原磷酸化酶的活性受到氨基酸

共价修饰调控，磷酸化直接强化其活性（Browner and Fletterick, 1992；

D'Alessandro et al. 2012a, 2012b ；Huang et al. 2011）。乙酰化间接作

用其磷酸化进而抑制活性（Zhang et al., 2012）。阐明磷酸化调控宰后

肌肉糖原磷酸化酶活性机制，就能调控宰后肌肉糖酵解水平进而改善

肉嫩度、保水性等品质，最大限度的减少损耗。

（2）糖原磷酸化酶存在多种同工酶，不同亚型在宰后肌肉中磷

酸化修饰现象存在差异，但到底哪些同工酶具有磷酸化激活效应，目

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前尚不清楚

现有研究普遍认为糖原磷酸化酶（glycogen phosphorylase,

PYGM）第 14 位丝氨酸磷酸化后形成 PYGM A，具有催化糖原降解

的活性；而第 14 位丝氨酸去磷酸化后形成 PYGM B，失去催化活性，

因此糖原磷酸化酶的磷酸化状态至关重要。部分研究表明，动物脑、

肝脏和肌肉中存在不同的糖原磷酸化酶同工酶，其磷酸化水平存在差

异（Buchbinder et al. 2001；Schmid et al. 2009）。Montori-Grau 等（2009）

研究发现，大鼠小腿正外侧的比目鱼肌和胫骨前肌中的糖原含量没有

显著性差异，但其糖原磷酸化酶存在磷酸化差异，前者的活性远大于

后者。同样，Pöso 和 Puolanene（2005）报道宰后 0 h 和 24 h pH 值

不同的肌肉，糖原磷酸化酶的活性存在显著性差异。已有研究发现，

糖原磷酸化酶同工酶存在 24 个磷酸化修饰位点（图 1），丝氨酸、苏

氨酸和酪氨酸是糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化位点。

图 1 糖原磷酸化酶磷酸化修饰位点

不同磷酸化修饰水平决定不同蛋白酶的活性，磷酸化修饰后，糖

原磷酸化酶、烯醇酶、丙酮酸激酶等糖酵解酶活性升高，磷酸果糖激

酶、磷酸甘油醛激酶、磷酸甘油醛变位酶活性降低（D’Alessandro and

Zolla，2013）。另外，同工酶磷酸化修饰存在显著差异，Anderson（2014）

发现磷酸化葡萄糖变位酶 A 存在 6 种同工酶，但是只有等电点低的 5

种同工酶能够发生磷酸化，进一步研究发现，这 5 种同工酶的活性存

在差异（P <0.05）。项目组前期研究发现肉羊宰后肌肉成熟过程中，

糖原磷酸化酶存在 7 种同工酶，且都能发生磷酸化修饰；成熟 24 h

内，7 种糖原磷酸化酶的磷酸化水平逐渐减弱，同时 7 种同工酶的磷

酸化水平存在显著性差异（P <0.05）；嫩度高的样品中糖原磷酸化酶

同工酶的整体磷酸化水平和活性高于低嫩度样品（Chen et al., 2016），

进一步研究表明，磷酸化修饰改变糖原磷酸化酶同工酶活性（Li et al.,

2017）。因此，宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶会发生差异磷酸化修饰，

然而磷酸化修饰对糖原磷酸化酶同工酶活性的调节机理目前尚不清

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楚。

（3）糖原磷酸化酶同工酶磷酸化修饰后其结构发生变化，进而

影响同工酶的活性，但具体影响机理尚不明确

糖原磷酸化酶同工酶的结构决定酶的活性，其中催化调节域起关

键作用（Nelson and Cox, 2000）。催化调节域含 Ser14 和别构效应部

位，决定糖原磷酸化酶同工酶处于钝化态 PYGM B 或激活态 PYGM

A；磷酸化基团供体 AMP/ATP 是别构激活剂，与酶结合后促进 α-螺

旋形成使酶转化成激活态（王镜岩，2000；Sprang et al., 1988）。另外，

糖原结合域与催化调节域相结合形成狭窄裂缝，与糖原底物特异性结

合，辅助促进催化活性（Sprang et al., 1988）。有研究表明，磷酸化修

饰后，糖原磷酸化酶结合 AMP 和底物糖原的能力增强，其活性升高

（王镜岩，2000；Nelson and Cox, 2000），但磷酸化修饰后，肌肉糖

原磷酸化酶同工酶的结构如何变化？目前尚未进行深入研究。

通过文献查阅和项目组的前期研究发现，磷酸化修饰主要可能通

过五个方面影响糖原磷酸化酶同工酶的结构，进而影响其活性：（如

图 1 所示）：①糖原磷酸化酶同工酶发生磷酸化修饰后，特异性催化

降解肌糖原的水平发生分化，部分同工酶起主导作用；②糖原磷酸化

酶同工酶的磷酸化位点存在差异，催化活性强的同工酶第 14 位丝氨

酸发生磷酸化；③蛋白激酶、磷酸化酶激酶和碱性磷酸酶对糖原磷酸

化酶同工酶磷酸化或去磷酸化作用不同，导致磷酸化位点和活性不

同；④磷酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡萄糖、AMP、ATP 等内源因子仅对

部分糖原磷酸化酶同工酶活性起调控作用（Field et al., 2006; Jensen

and Richter., 2012）；⑤糖原磷酸化酶同工酶磷酸化修饰后，α-螺旋、

β-折叠增加，氢键和范德华力发生变化，影响酶活性。但上述假设

目前尚未得到确证。

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磷酸化

宰后肌肉糖酵解进程

肌糖原

磷酸-1-葡萄糖

磷酸-6-葡萄糖

乳酸AMP/ATP

糖原磷酸化酶同工酶

蛋白激酶/碱性磷酸酶

①-酶解

②-位点④-

内源因子调控

③-激酶调控

⑤-构象变化

图 2 磷酸化调控糖原磷酸化酶同工酶活性假设模型

（4）科学问题的提出

本项目的科学问题为蛋白质磷酸化如何调控糖原磷酸化酶同工

酶活性？目前肌肉糖原磷酸化酶活性作用机制的研究主要集中在 14

位丝氨酸磷酸化对其结构的调节及其内源因子对其活性的作用方面

（Nelson and Cox, 2000），主要研究磷酸化酶激酶、蛋白激酶、碱性

磷酸酶对糖原磷酸化酶同工酶活性的影响，AMP、ATP、葡萄糖、磷

酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡萄糖等内源因子对糖原磷酸化酶同工酶活性

的激活或抑制（Liu et al., 2015; Eronina et al., 2009），同时研究 14 位

丝氨酸磷酸化修饰前后活性差异的糖原磷酸化酶同工酶构象变化

(Sprang et al., 1988)。对糖原磷酸化酶同工酶磷酸化的研究，主要研

究病理状态下（如肝硬化、糖尿病、肌肉老化、肌肉供能不足、精神

发育阻滞等）和糖酵解不同的肌肉中糖原磷酸化酶同工酶活性水平的

差异（Bezborodkina et al., 2014; Kawaguchi et al., 2011; Montori-Grau

et al., 2009；Lucia et al., 2008），而 14 位丝氨酸磷酸化对同工酶的作

用，以及其他磷酸化位点对同工酶活性的作用机制尚缺乏具体研究。

尤其，畜禽宰后肌肉中到底哪些糖原磷酸化酶同工酶发生了磷酸化，

以及糖原磷酸化酶同工酶到底哪些位点发生磷酸化修饰后影响了糖

原磷酸化酶的活性？这些位点发生磷酸化修饰后如何影响糖原磷酸

化酶同工酶的功能、构象进而调控酶活？目前还没有进行系统研究。

为回答这上述问题，本项目拟以糖酵解差异显著的肌肉为试验材

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料，通过宰后肌肉原位模型，鉴定不同磷酸化水平下糖原磷酸化酶同

工酶活性消长规律；确证宰后肌肉糖酵解过程中糖原磷酸化酶同工酶

磷酸化修饰位点及其对活性的作用；构建原位模型和离体模型，确证

蛋白激酶、磷酸化酶激酶和碱性磷酸酶对糖原磷酸化酶同工酶磷酸化

和酶活的调控作用；调节催化底物、代谢产物和磷酸化基团供体浓度，

分析糖原磷酸化酶同工酶活性变化；纯化不同活性的磷酸化水平的糖

原磷酸化酶同工酶，解析磷酸化修饰对同工酶α-螺旋、β-折叠、分

子间作用力的影响。通过以上研究，揭示蛋白质磷酸化调控宰后肌肉

糖原磷酸化酶同工酶活性机理，丰富和发展糖酵解调控肉品质理论。

参考文献

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2002，第三版.

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by recruiting protein phosphatase 1. Cell Metabolism, 2012,

15:75-87.

2．项目的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键科学问题（此

部分为重点阐述内容）；

2.1 研究内容

以宰后糖酵解潜力显著差异肌肉为试验材料，开展磷酸化调控

糖原磷酸化酶同工酶活性机理研究，具体开展以下五个方面的研究

工作。

（1）蛋白质磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶种类确证

分离、鉴定肌肉糖酵解潜力差异显著样品的糖原磷酸化酶同工酶

种类，分析宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶的活性变化（已完成）；研

究差异样品的糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化水平（已完成），确证其

在宰后肌肉糖酵解过程中糖原磷酸化酶同工酶磷酸化规律；分析磷酸

化修饰水平与糖原磷酸化酶同工酶活性的关系，确证磷酸化修饰的同

工酶。

（2）肌肉糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点鉴定及对酶活作用

研究肌肉糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化位点，分析磷酸化氨基酸

种类和比例，明确同工酶磷酸化位点差异；研究原位模型中糖原磷酸

化酶同工酶的活性，改变原位模型中同工酶的磷酸化水平，鉴定其磷

酸化位点的变化；分析磷酸化位点与糖原磷酸化酶同工酶活性的关

系，确证调控同工酶活性的磷酸化位点。

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（3）激酶和磷酸酶对肌肉糖原磷酸化酶同工酶磷酸化的影响

构建原位模型和离体模型，采用蛋白激酶、磷酸化酶激酶上调糖

原磷酸化酶同工酶磷酸化水平，解析糖原磷酸化酶同工酶增加的磷酸

化位点和酶活变化；基于原位模型和离体模型，通过碱性磷酸酶下调

糖原磷酸化酶同工酶磷酸化水平，解析糖原磷酸化酶同工酶减少的磷

酸化位点和酶活变化。

（4）内源因子对磷酸化修饰后糖原磷酸化酶同工酶活性的作用

分离、纯化肌肉糖原磷酸化酶同工酶，分析葡萄糖、磷酸-1-葡

萄糖、磷酸-6-葡萄糖对同工酶激活或抑制作用；构建肌肉糖原磷酸

化酶同工酶离体模型，研究 AMP、ATP 对糖原磷酸化酶同工酶发挥

活力的影响；通过磷酸化酶激酶上调同工酶磷酸化水平，验证葡萄糖、

磷酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡萄糖、AMP、ATP 与同工酶活性对应关系。

（5）磷酸化修饰对肌肉糖原磷酸化酶同工酶构象的影响

分离纯化不同酶活和磷酸化水平的糖原磷酸化酶同工酶，鉴定磷

酸化修饰水平和修饰位点不同的同工酶催化调节域构象差异，分析α

-螺旋、β-折叠、氢键、范德华力变化；改变肌肉糖原磷酸化酶同工

酶的磷酸化水平，解析其三级和四级构象的动态变化；分别建立糖原、

磷酸-1-葡萄糖、AMP 及 ATP 与糖原磷酸化酶同工酶单一作用模型，

研究添加物对同工酶构象和分子间作用力的影响。

2.2 研究目标

鉴定发生磷酸化的糖原磷酸化酶同工酶的种类，明确影响糖原磷

酸化酶同工酶活性的磷酸化位点，确证磷酸化调控糖原磷酸化酶同工

酶活性的途径及构象变化，阐明蛋白质磷酸化调控糖原磷酸化酶同工

酶活性的机理，完善和发展肌肉糖酵解理论，为糖酵解调控技术研发

提供理论参考。

2.3 拟解决的关键科学问题

阐明蛋白质磷酸化调控糖原磷酸化酶同工酶活性的机理，需解决

两个关键科学问题：

（1）确证影响糖原磷酸化酶活性的同工酶种类及与活性相关的

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磷酸化位点。畜禽宰后肌肉中糖原磷酸化酶同工酶磷酸化水平发生改

变，影响糖原磷酸化酶同工酶活性，但具体哪些同工酶发生磷酸化和

哪些磷酸化位点会影响糖原磷酸化酶同工酶活性是本项目的关键科

学问题之一。该项目拟采用磷酸化蛋白质组学、生物信息学、酶原底

物验证等技术，确证到底哪些同工酶发生了磷酸化修饰，以及哪些氨

基酸位点磷酸化会影响这些同工酶的活性，回答这一科学问题。

（2）明确磷酸化修饰对糖原磷酸化酶同工酶底物催化和空间构

象的调控作用。糖原磷酸化酶同工酶的活性主要受其激酶、内源因子

和同工酶构象调节，而磷酸化修饰又如何通过改变糖原磷酸化酶同工

酶底物催化能力和空间构象进而调控活性，是本项目的另一个关键科

学问题。该项目拟通过原位模型和离体模型，阐明激酶、内源因子对

糖原磷酸化酶同工酶活性的影响，同时采用圆二色谱和三维冷冻电子

显微图像采集等技术，阐明磷酸化修饰对糖原磷酸化酶同工酶二、三、

四级结构的作用途径，揭示磷酸化调控糖原磷酸化酶同工酶活性的机

理，回答这一科学问题。

3．拟采取的研究方案及可行性分析（包括研究方法、技术路线、

实验手段、关键技术等说明）；

3.1 研究方案与研究方法

基于糖酵解潜能、ATPase 活性、糖原含量、剪切力和滴水损失，

选取糖酵解差异显著的背最长肌样品，经 0、1、3、12、24 h 冷藏（4℃）

处理后直接制成实验样品或经液氮冷冻后放入-80℃超低温冰箱中待

用。

（1）磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶种类确证方案

采用磷酸化蛋白质组学和底物酶原法，鉴定糖酵解差异显著肌肉

样品中糖原磷酸化酶同工酶类型和磷酸化水平，具体方案如下：

——糖酵解差异显著肌肉的糖原磷酸化酶同工酶鉴定：冷冻样

品经绞碎、超声均质、离心后取上清液得到粗酶溶液，采用等电聚焦

电泳和 10%SDS-PAGE、PRO-Q Diamond 和 SYPRO Ruby 荧光染料

对磷酸化蛋白质进行染色，采用 Typhoon Trio 多功能激光成像系统

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进行扫描，分析糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化水平（已完成）；采用

等电聚焦电泳结合蛋白质免疫印迹，应用骨骼肌糖原磷酸化酶抗体做

一抗，检测糖原磷酸化酶同工酶的表达量。

——糖原磷酸化酶同工酶种类确证：分离粗提糖原磷酸化酶同工

酶，采用糖原底物酶原法（荧光光度法，λex =350 nm、λem=470 nm）

测定同工酶活性，进行酶活、同工酶磷酸化水平相关性分析，明确肌

肉糖原磷酸化酶同工酶的种类。

（2）肌肉糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点鉴定及对酶活作用研

究方案

采用磷酸化蛋白质组学、代谢组学和生物信息学手段，鉴定糖原

磷酸化酶同工酶磷酸化位点，并通过原位模型验证，具体方案如下：

——糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点鉴定：分析肌肉糖原磷酸

化酶同工酶的 nano-HPLC ESI-CID/ETD-MS/MS 质谱图，以谱图库为

基础，解析质谱图的磷酸化特征谱；采用糖原磷酸化酶同工酶与

F-actin 免疫共沉淀技术，确证糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点。分

析磷酸化位点与酶活力的相关性，明确磷酸化典型位点。

——糖原磷酸化酶同工酶磷酸化位点验证：构建宰后肌肉糖酵

解磷酸化差异样品的原位模型，采用蛋白激酶上调和碱性磷酸酶下调

模型中糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化水平，分析糖原磷酸化酶同工酶

的 nano-HPLC ESI-CID/ETD-MS/MS 质谱图，确证糖原磷酸化酶同工

酶磷酸化位点。分离测定同工酶的活性，分析磷酸化位点与酶活力的

相关性，确定调控酶活的磷酸化位点。

（3）激酶和磷酸酶对糖原磷酸化酶同工酶磷酸化影响的研究方

案

采用蛋白质免疫共沉淀、蛋白质荧光染色、生物信息学和底物酶

原等手段，鉴定激酶、磷酸化对糖原磷酸化酶同工酶磷酸化修饰和活

性的作用，并通过原位模型和离体模型验证，具体方案如下：

——上调磷酸化对同工酶磷酸化位点和活性作用：在宰后糖酵

解差异肌肉样品和纯化的糖原磷酸化酶同工酶离体模型中加入蛋白

激酶和磷酸化酶激酶，定量、定向上调糖原磷酸化酶同工酶磷酸化水

平，采用 PRO-Q Diamond 和 SYPRO Ruby 荧光染色法测定糖原磷酸

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化酶同工酶磷酸化水平，采用 nano-HPLC ESI-CID/ETD-MS/MS 鉴定

法确定磷酸化位点的变化；测定同工酶活性，阐明上调磷酸化后糖原

磷酸化酶同工酶磷酸化位点和活性的关系。

——下调磷酸化对同工酶磷酸化位点和活性作用：在宰后糖酵

解差异肌肉样品和纯化的糖原磷酸化酶同工酶离体模型中加入碱性

磷酸酶，定量、定向下调糖原磷酸化酶同工酶磷酸化水平，采用

PRO-Q Diamond 和 SYPRO Ruby 荧光染色法测定糖原磷酸化酶同工

酶磷酸化水平，采用 nano-HPLC ESI-CID/ETD-MS/MS 鉴定法确定磷

酸化位点的变化；测定同工酶活性，阐明下调磷酸化后糖原磷酸化酶

同工酶磷酸化位点和活性的关系。

（4）内源因子对磷酸化修饰后糖原磷酸化酶同工酶活性影响的

研究方案

采用蛋白质高压层析、蛋白质荧光染色和底物酶原等手段，分析

磷酸化修饰后糖原磷酸化酶同工酶对催化底物、代谢产物、磷酸化基

团供体等内源因子的作用，并通过原位模型和离体模型验证，具体方

案如下：

——催化底物和代谢产物对同工酶的作用：在宰后糖酵解潜力

差异肌肉样品中加入不同浓度的葡萄糖、磷酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡

萄糖，通过低场核磁测定代谢产物；分离、纯化肌肉糖原磷酸化酶同

工酶，采用底物酶原法测定葡萄糖、磷酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡萄糖

对同工酶活性的影响；在原位模型和离体模型中加入磷酸化酶激酶上

调糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化水平，验证葡萄糖、磷酸-1-葡萄糖、

磷酸-6-葡萄糖对同工酶的作用。

——AMP、ATP 对糖原磷酸化酶同工酶的作用：在宰后糖酵解

潜力差异肌肉样品中加入不同浓度的磷酸化基团供体 AMP、ATP，

通过低场核磁测定代谢产物；分离、纯化肌肉糖原磷酸化酶同工酶，

采用底物酶原法测定 AMP、ATP 对同工酶活性的影响；在原位模型

和离体模型中加入磷酸化酶激酶上调糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化

水平，验证 AMP、ATP 对同工酶的作用。

（5）磷酸化修饰对肌肉糖原磷酸化酶同工酶构象影响的研究方

案

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采用蛋白质图谱采集和生物信息学分析手段，解析糖原磷酸化酶

同工酶活性和构象的相互关系，具体方案如下：

——糖原磷酸化酶同工酶构象差异解析：纯化糖原磷酸化酶同

工酶，采用傅立叶变换红外光谱和圆二色谱等测定糖原结合域的 α-

螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲结构差异；采用三维随机锥形数

据采集法在冷冻电子显微镜下扫描数据，在埃米水平上成像并解析同

工酶三级和四级构象的不同。

——磷酸化调节对糖原磷酸化酶同工酶构象的作用：采用磷酸

化酶激酶调节糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化水平，采用傅立叶变换红

外光谱和圆二色谱等测定糖原结合域的 α-螺旋、β-折叠结构差异及氢

键、范德华力的变化；采用三维随机锥形数据采集法在冷冻电子显微

镜下分析同工酶三级和四级构象的动态变化；在纯化的糖原磷酸化酶

同工酶离体模型中分别单独加入糖原、磷酸-1-葡萄糖、AMP、ATP，

分析其对同工酶构象的影响；分析以上结果，综合分析磷酸化修饰对

糖原磷酸化酶构象的作用。

3.2 技术路线

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糖原酵解差异显著的背最长肌样品

科学问题一：确证糖原磷酸化酶同工酶种类和磷酸化位点

糖原磷酸化酶同工酶确证

原位模型

磷酸化蛋白质组学、底物酶原法

科学问题二：磷酸化修饰对糖原磷酸化酶同工酶活性和构象的影响

激酶和磷酸酶对同工酶磷酸化修饰的作用

内源因子对同工酶活性的影响

磷酸化修饰对同工酶构象的

影响

蛋白激酶上调磷酸化水

平对位点或酶活的作用

碱性磷酸酶下调磷酸水

平化对位点和酶活作用

磷酸化修饰前后同工酶

а-

螺旋、β

-

折叠差异

磷酸化修饰前后同工酶

三级和四级构象解析

离体模型验证外源因子

对同工酶构象作用

荧光光度法测定糖原磷酸化酶活性*差异样品同工酶磷酸化水平及表达量*糖酵解过程同工酶磷酸化水平、活性同工酶活性与磷酸化水平相关性分析

质谱、核磁共振、磷酸化蛋白质免疫印迹

糖原磷酸化酶同工酶活性相关磷酸化位点鉴定

同工酶磷酸化质谱图库的建立及解析

验证同工酶磷酸化位点

酶活相关磷酸化位点统计分析及确证

原位模型离体模型

催化底物对磷酸化前后

同工酶的作用

磷酸化基团供体对同工

酶的作用

注：“*”已完成。

3.3 实验手段及关键技术

（1）蛋白质磷酸化水平检测技术：利用等电聚焦电泳和蛋白质

免疫印迹相结合的方法分析糖原磷酸化酶同工酶的种类和表达量，采

用 PRO-Q Diamond 和 SYPRO Ruby 荧光染色法测定糖原磷酸化酶同

工酶磷酸化水平。

（2）磷酸化位点鉴定技术：采用二氧化钛富集技术提取经胰蛋

白酶消化及二甲基标记的磷酸化及非磷酸化肽段，nano-HPLC

ESI-CID/ETD-MS/MS 质谱结合免疫共沉淀技术，分析糖原磷酸化酶

同工酶磷酸化位点。

（3）磷酸化修饰蛋白质结构分析技术：采用傅里叶红外光谱、

圆二色谱、三维冷冻电镜等技术采集和解析糖原磷酸化酶同工酶构象

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和空间动态变化。

3.4 可行性分析

（1）前人和本项目组前期研究结果表明：宰后畜禽肌肉糖原磷

酸化酶的活性受到磷酸化修饰调控，影响早期糖酵解水平（Chen et al.,

2016; Li et al., 2017; Browner and Fletterick, 1992；D'Alessandro et al.

2012a, 2012b ；Huang et al. 2011）；动物脑、肝脏和肌肉中存在不同

的糖原磷酸化酶同工酶，其磷酸化水平存在差异（Buchbinder et al.,

2001；Schmid et al., 2009；Montori-Grau et al., 2009; Pöso and

Puolanene（2005）。上述研究表明，开展蛋白质磷酸化调控宰后肌肉

糖原磷酸化酶同工酶活性机理研究，理论上可行。

（2）通过对国家自然科学基金“糖酵解酶 N 端丝氨酸基团磷酸

化调控钙蛋白酶活性机理（31471604）”项目的研究，建立了磷酸化

蛋白质组学研究平台，采用磷酸化蛋白质组、免疫共沉淀和电镜分析

的方法，解析了蛋白质磷酸化修饰对肌肉滴水损失、µ-钙蛋白酶活性、

肌纤维结构蛋白降解能力、3-磷酸甘油醛脱氢酶活性、肌红蛋白卟啉

环定位疏水区域肽链结构的影响；揭示了嫩度差异肌肉中糖原磷酸化

酶同工酶类型及磷酸化修饰规律；发现糖原磷酸化酶存在 7 种磷酸化

亚型，并且 7 种亚型的磷酸化水平存在显著性差异（P < 0.05），上述

研究为本项目的研究奠定了基础。因此，本项目研究方法可行。

（3）磷酸化蛋白质组、蛋白质免疫印迹、磷酸化蛋白质免疫印

迹、电镜、蛋白质结构傅立叶变换红外光谱和圆二色谱解析、三维冷

冻电镜数据采集、生物信息学等技术已相当成熟，有大量的研究可以

借鉴。项目组成员已经掌握了磷酸化蛋白质组学、磷酸化蛋白质免疫

印迹、磷酸化免疫共沉淀、激光共聚焦显微镜、傅立叶变换红外光谱

及圆二色谱等分析蛋白质磷酸化修饰水平、修饰位点、蛋白酶酶活、

蛋白质构象以及分子生物学特性方面的相关实验方法（参见申请人简

介论著目录：Chen et al., 2016; Li et al., 2016a, b; Li et al., 2017），在蛋

白质磷酸化修饰、蛋白质结构解析、肉品品质形成的物质基础研究方

面具有较强的工作基础。

（4）项目组成员专业涉及食品科学、食品生物技术、蛋白质组

学和光谱分析等，共有成员 6 名，其中博士 2 人、硕士 1 人、博士生

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2 人、硕士生 1 人，其中，高级职称 1 人、中级职称 2 人，专业搭配

合理，人员素质较高，科研水平较强。项目依托单位是中国农业科学

院下属的唯一从事农产品加工技术研究与开发的国家级科研机构，软

硬件设施先进，拥有 5 个国家级研究平台。因此，本项目的人员及实

验条件能够保障本项目的顺利实施。

总之，蛋白质磷酸化调控糖原磷酸化酶同工酶活性机理研究切实

可行，能够取得预期的研究成果。

4．本项目的特色与创新之处；

（1）以蛋白质磷酸化修饰为研究的切入点，采用磷酸化蛋白质

组学技术，阐明糖原磷酸化酶同工酶活性的磷酸化修饰调控机理，完

善和发展经典的 Ser14 磷酸化调控糖原磷酸化酶 A（激活态）和糖原

磷酸化酶 B（钝化态）理论，为畜禽宰后早期肌肉糖酵解调控技术研

发提供理论借鉴和参考。

（2）以往对酶活机理的研究，通常从蛋白质化学和酶活动力学

方程的角度，研究温度、pH 值、底物浓度等环境因子对酶活的作用，

本项目对调控磷酸化水平的内源酶、内源因子和同工酶结构进行系统

研究，阐明其调控酶活的内在机理，具有较强的创新性。

5．年度研究计划及预期研究结果（包括拟组织的重要学术交流

活动、国际合作与交流计划等）。

5.1 年度研究计划

（1）2018 年度：研究糖原酵解显著差异样品的糖原磷酸化酶的

活性、表达量、磷酸化水平和变化规律；确证糖原磷酸化酶同工酶的

种类，分析磷酸化修饰对糖原磷酸化酶同工酶活性的影响；发表中文

核心期刊论文 1 篇；参加国内肉类科技大会 1 人·次。

（2）2019 年度：研究糖原磷酸化酶同工酶的磷酸化位点，建立

同工酶的磷酸化图谱库；研究糖原磷酸化酶同工酶活性对糖原及代谢

产物的作用，并通过原位模型验证二者的结合效果；发表 SCI 论文 1

篇，邀请美国爱荷华大学 Huff-Lonergan 教授到申请人所在单位开展

蛋白质磷酸化调控糖酵解酶活性机理学术交流 1 次。

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（3）2020 年度：研究蛋白激酶、磷酸化酶激酶、碱性磷酸酶对

糖原磷酸化酶同工酶磷酸化水平、位点、酶活的作用；分析葡萄糖、

磷酸-1-葡萄糖、磷酸-6-葡萄糖、AMP、ATP 对糖原磷酸化酶同工酶

活性的作用；发表 SCI 论文 1 篇；参加世界肉类科技大会 1 人·次。

（4）2021 年度：研究蛋白质磷酸化调控糖原磷酸化酶同工酶催

化调节域、糖原结合域构象的作用，分析糖原、磷酸-1-葡萄糖、AMP

及 ATP 添加对同工酶构象的作用；阐明蛋白质磷酸化调控糖原磷酸

化酶同工酶活性机理；总结研究成果，发表 SCI 论文 1 篇、中文核心

期刊论文 1 篇；参加国内肉类科技大会 1 人·次。

5.2 预期研究成果

（1）确证糖原磷酸化酶同工酶的种类及其磷酸化位点，揭示糖

原磷酸化酶同工酶与激酶、磷酸酶、内源因子的相互作用规律，以及

磷酸化修饰对同工酶构象的改变规律，阐明蛋白质磷酸化调控宰后肌

肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理，完善和丰富肌肉糖酵解理论；

（2）发表学术论文 5-6 篇，其中 SCI 收录论文 3-4 篇，培养博

士研究生 2 名、硕士研究生 1 名。

（二）研究基础与工作条件

1．研究基础（与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工

作成绩）；

（1）项目组及项目组所在团队中国农业科学院农业科技创新工

程肉品加工与品质调控创新团队，在宰后肌肉代谢、肌肉蛋白质修饰、

蛋白质结构解析、肉品品质形成的物质基础研究方面具有较强的工作

基础，曾主持国家自然科学基金、科技支撑、863、公益性行业（农

业）科研专项、十三五重点研发专项等相关课题 20 余项，发表论文

100 余篇，出版专著 5 本，获得授权专利 45 项，为本项目的完成奠

定了坚实的前期基础。

（2）项目组长期从事肌肉生物学和肉品科学研究，通过实施国

家自然科学基金 “糖酵解酶 N 端丝氨酸基团磷酸化调控钙蛋白酶活

性机理（31471604）”项目，已掌握了磷酸化蛋白质组学、磷酸化蛋

白质免疫印迹、磷酸化免疫共沉淀、激光共聚焦显微镜、傅立叶变化

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红外光谱、圆二色谱等技术分析蛋白质相对含量、蛋白酶酶活、蛋白

质构象以及生物学特性方面的相关实验方法（参见申请人简介论著目

录： Chen et al., 2016; Li et al., 2016a, b; Li et al., 2017; He et al.,

2016），在蛋白质磷酸化修饰方面积累了较强的工作基础。

（3）项目组通过实施国家自然科学基金“糖酵解酶 N 端丝氨酸

基团磷酸化调控钙蛋白酶活性机理（31471604）”，开展了磷酸化修

饰与畜禽宰后肌肉嫩度、持水力作用的研究，发现高滴水损失组的肌

浆蛋白质磷酸化水平高，进一步分析发现磷酸化的糖酵解酶主要为糖

原磷酸化酶、烯醇化酶、醛缩酶、3-磷酸果糖激酶等（如图 3 所示）；

在此基础上，采用蛋白质磷酸化修饰方法对不同嫩度肌肉样品的蛋白

质磷酸化水平进行了分析，发现宰后肌肉成熟过程中，糖原磷酸化酶

存在 7 种亚型（图 4），且都能发生磷酸化修饰（图 5）；成熟 24 小

时内，7 种糖原磷酸化酶的磷酸化水平逐渐减弱，同时 7 种亚型的磷

酸化水平存在显著性差异（P <0.05）（图 6、图 7）。

上述工作为开展本项目研究打下了坚实的研究基础。

图 3 不同滴水损失肌肉样品蛋白质磷酸化水平

注：左图（ Pro-Q Diamond 染色）；右图（SYPRO Ruby 染色）。

1-2：低滴水损失组，3-4：高滴水损失组，H：黄淮山羊，B：波尔山羊，L：崂山山羊。

(He et al., 2016, Food Science and Biotechnology)

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图 4 糖原磷酸化酶同工酶双向电泳分离图

（Chen et al., 2016, Journal of the Science of Food and Agriculture）

图 5 成熟 0.5 h 后糖原磷酸化酶同工酶磷酸化修饰结果


图 6 不同嫩度肌肉糖原磷酸化酶同工酶磷酸化随成熟时间的变化


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图 7 糖原磷酸化酶同工酶灰度值随成熟时间的变化

“*”代表同组间差异显著。（Chen et al., 2016, Journal of the Science of

Food and Agriculture）

2．工作条件（包括已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟

解决的途径，包括利用国家实验室、国家重点实验室和部门重点实验

室等研究基地的计划与落实情况）；

中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所）是中国

农业科学院下属的唯一从事农产品加工技术研究与开发的国家级科

研机构，是根据科技部、财政部、中编办国科发政字[2002]356 号文

件精神，在原原子能利用研究所基础上组建的研究所，研究所现拥有

农业部农产品加工重点实验室、农业部农产品加工质量安全风险评估

实验室、农业部农产品加工质量安全监督检验测试中心等五个国家级

研究平台。其中，仅农业部农产品加工重点实验室近五年经费投入就

超过 3000 万元，10 万元以上的设备 70 余台（套），包括：双向电泳、

多角度激光光散射仪、傅立叶变换红外光谱仪、圆二色谱仪、扫描电

镜、透射电镜、HPLC-MS、MALDI-TOF-MS、酶标仪等仪器设备，

具备从事蛋白质纯化、蛋白质组分鉴定、蛋白质化学结构解析、蛋白

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质成分相互作用分析、磷酸化蛋白质组研究、肌肉超微结构成像研究

的条件，基本可以满足本项目研究所需的实验条件。本项目开展蛋白

质三维结构和功能分析研究，项目依托单位尚缺冷冻电镜平台，可以

通过共享方式，有偿使用国家蛋白质科学研究（北京）清华基地冷冻

电镜予以解决，保障本项目开展相关研究的需要。

3．正在承担的与本项目相关的科研项目情况（申请人和项目组

主要参与者正在承担的与本项目相关的科研项目情况，包括国家自然

科学基金的项目和国家其他科技计划项目，要注明项目的名称和编

号、经费来源、起止年月、与本项目的关系及负责的内容等）；

项目名称编号经费来源起止年月与本项目的关系负责内容

糖酵解酶 N

端丝氨酸基

团磷酸化调

控钙蛋白酶

活性机理

3147

1604

国家自然

科学基金

面上项目

2015/01-20

18/12

通过对糖酵解酶

磷酸化水平的分

析，发现了 7 种糖

原磷酸化酶同工

酶，建立了磷酸化

蛋白质组学分析

方法，为本项目奠

定了前期基础和

方法支撑。

申请人主

持

4．完成国家自然科学基金项目情况（对申请人负责的前一个已

结题科学基金项目（项目名称及批准号）完成情况、后续研究进展及

与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结

摘要（限 500字）和相关成果的详细目录）。

（1）完成情况

申请人完成国家自然科学基金面上项目 1 项，题目：高密度 CO2

致死 E.coli 的相关蛋白质确证及其结构变化（31171774），2012 年 1

月至 2015 年 12 月，已结题。本项目以实验室获得的 1 株耐高密度

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CO2（DPCD）的 E.coli 突变株为对象，采用高通量测序、双向电泳

和基因敲除等方法筛选获得 E.coli 突变株与野生株间的差异表达基

因及其编码的蛋白质和酶，以突变株存活的原因反证并确证 DPCD

致死 E.coli 野生株的相关蛋白质和酶；同时以 E.coli 野生株为模板，

经基因克隆、过量表达、分离、纯化获得与细胞死亡相关的蛋白质和

酶，研究了其在 DPCD 中的结构变化，揭示了 DPCD 致使其变性和

失活的分子机理。研究结果在 Food Engineering Reviews、现代食品

科技等杂志上发表论文 4 篇。

（2）后续研究进展及与本申请项目的关系

后续研究主要采用蛋白质磷酸化修饰的方法，检测鉴定高密度

CO2致死 E.coli 的相关蛋白质的磷酸化水平和磷酸化位点，阐释磷酸

化修饰与致死 E.coli 的相关蛋白质功能的关系。已有研究发现糖原能

够抑制 E.coli 的的生长，而糖原磷酸化酶同工酶对糖原降解起重要作

用，因此糖原磷酸化酶同工酶与致死 E.coli 的相关蛋白质在结构和功

能方面很可能存在相关性。

另外，通过“高密度 CO2致死 E.coli 的相关蛋白质确证及其结构

变化（31171774）”的执行，建立了磷酸化蛋白质组学、磷酸化蛋白

质免疫印迹、磷酸化免疫共沉淀、激光共聚焦显微镜、傅立叶变化红

外光谱、圆二色谱等蛋白质相对含量、蛋白酶酶活、蛋白质构象以及

生物学特性分析技术和检测平台，对于顺利开展“蛋白质磷酸化调控

宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理”研究奠定了基础。

（3）研究工作摘要

采用蛋白质组学技术分析突变菌株与原始菌株在 DPCD 胁迫前

后的蛋白质组变化，研究表明 DNA 结合蛋白 H-NS、锰超氧化物歧

化酶、外膜蛋白 F 表达上调与突变菌株的 DPCD 耐受性提高有关。

通过同位素标记相对和绝对定量技术，鉴定到差异表达蛋白质 420

个，显著富集在核糖体、三羧酸循环、双组分系统、氧化磷酸化以及

核苷酸剪切修复等 38 条信号通路。分析表明，外膜蛋白 Slp、γ-氨

基丁酸逆向转运蛋白、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶以及核糖体、氧化磷

酸化、DNA 损伤修复等通路涉及的差异表达蛋白质对保护细胞抵御

DPCD 胁迫有关；突变菌株与原始菌株相比，共检测到显著差异基因

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141 个，显著富集在鞭毛装配、细菌趋化性、组氨酸代谢、双组分系

统以及丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢 5 条信号通路。编码小分子

热休克蛋白的基因 ibpA、编码酸休克蛋白的基因 asr 以及与组氨酸代

谢相关的基因都与细菌的 DPCD 耐受性相关；对突变菌株进行全基

因组重测序，确定突变菌株存在 3 处插入位点、10 处单核苷酸多态

性位点变异。其中，1 处插入位点、7 处单核苷酸多态性位点位于外

显子编码区域。

（4）研究成果

Szerman N., Rao W. L., Li X., Yang Y., Vaudagna S. & Zhang D.

Q*. Effects of the application of dense phase carbon dioxide treatments

on technological parameters, physicochemical and textural properties and

microbiological quality of lamb sausages. Food Engineering Reviews，

2015, 7:241-249.

杨扬，李欣，饶伟丽，陈丽，张德权*. 高压二氧化碳杀灭大肠

杆菌过程中蛋白质变化研究. 现代食品科技, 2014, 30(5):118-124.

杨扬，李欣，饶伟丽，陈丽，张德权*. 高密度二氧化碳杀菌技

术及其在肉品工业中的应用. 食品工业科技, 2014, 35(13):387-391.

杨扬, 李欣, 饶伟丽, 何凡, 陈丽, 张德权*. 高密度二氧化碳诱

变的大肠杆菌突变菌株脂肪及蛋白质组分析. 中国食品学报（已接

收）.

（三）其他需要说明的问题

1. 申请人同年申请不同类型的国家自然科学基金项目情况（列

明同年申请的其他项目的项目类型、项目名称信息，并说明与本项目

之间的区别与联系）。

同年申请国家自然科学基金项目类型：“国家杰出青年科学基金

项目”。

项目名称：肉品质学:肉食用品质形成与调控

与本项目的区别：本项目研究“蛋白质磷酸化调控宰后肌肉糖原

磷酸化酶同工酶活性机理”，揭示磷酸化修饰对糖原酵解起始酶糖原

磷酸化酶同工酶结构和功能作用的分子机理；国家杰出青年科学基金

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“肉品质学:肉食用品质形成与调控”，揭示磷酸化对糖酵解限速酶

ATP 结合及活性催化域、肌原纤维蛋白 PEST 区、肌球蛋白-肌动蛋

白横桥结合域、肌红蛋白卟啉环中心二价铁离子区域等结构和功能的

作用，以便阐明蛋白质磷酸化对肉嫩度、持水力、色泽作用的分子机

理，为肉食用品质调控提供理论基础。二者研究内容不同。

与本项目的联系：两个项目研究手段、方法基本一致，研究思路

相通，相互借鉴，研究结果相互验证。两个项目都是从磷酸化的角度，

结合磷酸化免疫组化、磷酸化蛋白质组学、结构化学等方法，阐明磷

酸化修饰对肉食用品质相关蛋白质和酶功能作用的分子机理。

2. 具有高级专业技术职务（职称）的申请人或者主要参与者是

否存在同年申请或者参与申请国家自然科学基金项目的单位不一致

的情况；如存在上述情况，列明所涉及人员的姓名，申请或参与申请

的其他项目的项目类型、项目名称、单位名称、上述人员在该项目中

是申请人还是参与者，并说明单位不一致原因。

无。

3. 具有高级专业技术职务（职称）的申请人或者主要参与者是

否存在与正在承担的国家自然科学基金项目的单位不一致的情况；如

存在上述情况，列明所涉及人员的姓名，正在承担项目的批准号、项

目类型、项目名称、单位名称、起止年月，并说明单位不一致原因。

无。

4. 其他。

无。

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张德权简历

中国农业科学院原子能利用研究所，畜产品加工研究室，研究员

教育经历（从大学本科开始，按时间倒序排序；请列出攻读研究生学位阶段导师姓名）：

1.1997/09–2000/07，中国农业大学，农产品加工及贮藏工程，博士，导师：吕飞杰

2.1994/09–1997/07，西北农林科技大学，农产品加工及贮藏工程，硕士，导师：陈锦屏

3.1990/09–1994/07，河南科技学院，农产品加工及贮藏工程，学士，导师：高愿军

科研与学术工作经历（按时间倒序排序；如为在站博士后研究人员或曾进入博士后流动站（或工作站）从事研究，请列出合作导师姓名）：

1.2009/01-至今，中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所），畜产品加工研究室，研究员，博士生导师

2.2007/09-2008/02，加拿大食品检疫局，渥太华食品化学实验室，访问学者

3.2003/10-2008/12，中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所），食品科学中心，副研究员，硕士生导师

4.2000/07-2003/09，中国农业科学院，作物科学研究所，助理研究员，副研究员

曾使用其他证件信息（申请人应使用唯一身份证件申请项目，曾经使用其他身份证件作为申请人或主要参与者获得过项目资助的，应当在此列明）：

主持或参加科研项目（课题）及人才计划项目情况：

1.国家自然科学基金面上项目，31471604，糖酵解酶N端丝氨酸基团磷酸化调控钙蛋白酶活性机理，2015/01-2018/12，90万元，在研，主持

2.公益性行业（农业）科研专项，201303083，畜禽宰后减损、分级技术装备研究与示范，2013/01-2017/12，1666万元，在研，主持

3.国家自然科学基金面上项目，31171774，高密度CO2致死E.coli的相关蛋白质确证及其结构变化，2012/01-2015/12，25万元，已结题，主持

代表性研究成果和学术奖励情况

（请注意：①投稿阶段的论文不要列出；②对期刊论文：应按照论文发表时作者顺序列出全部作者姓名、论文题目、期刊名称、发表年代、卷（期）及起止页码（摘要论文请加以说明）；③对会议论文：应按照论文发表时作者顺序列出全部作者姓名、论文题目、会议名称(或会议论文集名称及起止页码)、会议地址、会议时间；④应在论文作者姓名后注明第一/通讯作者情况：所有共同第一作者均加注上标“#”字样，通讯作者及共同通讯作者均加注上标“*”字样，唯一第一作者且非通讯作者无需加注；⑤所有代表性研究成果和学术奖励中本人姓名加粗显示。）

一、期刊论文

1. 通讯作者论文（勿与第一作者论文重复）

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(1) Li Meng ，Li Xin，Xin Jianzeng，Li Zheng，Li Guixia，Zhang Yan，Du(#)

，Manting，Shen Qingwu ，(*)

Dequan Zhang(*)

Effects of protein phosphorylation on，，，：304~310color stability of ground meat Food Chemistry 2016.09.24 219

(2) Li Zheng ，Li Xin，Gao Xing，Shen Qingwu，Du Manting，(#)

Zhang Dequan(*)

，Phosphorylation prevents in vitro myofibrillar proteins degradation by，，，：455~462μ-calpain Food Chemistry 2016.09.08 218

(3) Du Manting ，Li Xin，Li Zheng，Li Meng，Gao Lingling，(#)

Zhang Dequan(*)

，Phosphorylation inhibits the activity of μ-calpain at different incubation，，temperatures and Ca2+ concentrations in vitro Food Chemistry 2017.02.03

(4) Chen Lijuan ，Li Xin，Ni Na，Liu Yue，Chen Li，Wang Zhenyu，Shen(#)

，Qingwu，Zhang Dequan(*)

Phosphorylation of myofibrillar proteins in post-mortem，ovine muscle with different tenderness Journal of the Science of Food and

，，：1474~1483Agriculture 2016.3.01 96

(5) ，Gao Xing ，Li Xin，Li Zheng，Du Manting，(#)

Zhang Dequan(*)

Dephosphorylation of myosin regulatory light chain modulates actin-myosin interaction

，adverse to meat tenderness International Journal of Food Science and，Technology 2016.12.03

(6) ，Li Zheng ，Li Xin，Gao Xing，Du Manting，(#)

Zhang Dequan(*)

Effect ofinhibition of μ-calpain on the myofibril structure and myofibrillar proteins

，，degradation in ovine muscle Journal of the Science of Food and Agricultrue 2016.09.01

(7) ，Wang Zhenyu ，He Fan，Rao Weili，Shen Qingwu，(#)

Zhang Dequan(*)

Proteomic analysis of goat longissimus dorsi muscles with different drip loss values

，，，：1~7related to meat quality traits Food Science and Technology 2015.12.8 25

(8) Zhang Caixia ，Wang Zhenyu，Li Zheng，Shen Qingwu，Chen Lijuan，Gao(#)

，Lingling，Zhang Dequan(*)

Phosphoproteomic profiling of myofibrillar and，sarcoplasmic proteins of muscle in response to salting Food Science and

，，：993~1001Biotechnology 2016.08.31 25（4）

(9) Liu Yue ，Du Manting ，Li Xin，Chen Li，Shen Qingwu，Tian Jianwen，(#) (#)

Z

，hang Dequan(*)

Role of the ubiquitin-proteasome pathway on proteolytic activity，in postmortem proteolysis and tenderisation of sheep skeletal muscle Internati

，，：2353~2359onal Food Research and Technology 2016.06.10 51

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(10) ，Li Zhongwen ，Li Xin，Wang Zhenyu，Shen Qingwu ，(#) (*)

Zhang Dequan(*)

Antemortem stress regulates protein acetylation and glycolysis in postmortem

，，，：94~98muscle Food Chemistry 2016.7.1 202

(11) ，Wang Zhenyu ，Xu Weiwei，Kang Ning，Shen Qingwu，(#)

Zhang Dequan(*)

Microstructural, protein denaturation and water holding properties of lamb under

，，，：132~138pulse vacuum brining Meat Science 2016.3.01 113

(12) Shen Qingwu ，Swartz Darl R，Wang Zhenyu，Liu Yue，Gao Yuan，(#)

Zhang

，Dequan(*)

Different actions of salt and pyrophosphate on protein extraction，from myofibrils reveal the mechanism controlling myosin dissociation. J Sci

，，Food Agric 2015.6.17 52（6）

(13) Ni Na ，Wang Zhenyu，He Fan，Wang Linchen，Pan Han，Li Xin，Wang(#)

，Qiang，Zhang Dequan(*)

Gel properties and molecular forces of lamb myofibrillar，，protein during heat induction at different pH values Process Biochemistry 201

，：631~6364.1.27 49

(14) Ni Na ，Wang Zhenyu，Wang Linchen，He Fan，Liu Jinkai，Gao Yuan，(#)

Zha

，ng Dequan(*)

Reduction of sodium chloride levels in emulsified lamb sausages:the effect of lamb plasma protein on the gel properties, sensory

，，，characteristics, and microstructure Food Science Biotechnology 2014.08.31 23：1137~1143（4）

(15) Szerman Natalia ，Rao Weili，Li Xin，Yang Yang，Vaudagna Sergio R.，(#)

，Zhang Dequan(*)

Effects of the application of dense phase carbon dioxidetreatments on technological parameters, physicochemical and textural properties

，，and microbiological quality of lamb sausages Food Engineering Reviews 2015.6.，：241~24918 7（2）

(16) ，陈立娟，李欣，李铮，李培迪，李仲文，(#)

张德权(*)

蛋白质磷酸化调控羊肉，，，：1360~1370肌原纤维蛋白的功能中国农业科学 2016.12.15 49（7）

(17) ，高星，李欣，李铮，杜曼婷，张彩霞，，丁武(#)

张德权(*)

宰后肌肉中肌球蛋，，，：3199~32白磷酸化调控肌动球蛋白解离作用机制中国农业科学 2016.04.15 49（16）

07

(18) ，杜曼婷，李欣，李铮，高星，张彩霞，(#)

张德权(*)

不同嫩度羊肉中钙蛋白酶，，，：3425~3432的差异中国农业科学 2016.4.7 47（17）

(19) ，张艳，李欣，李铮，李蒙，刘永峰，(#) (*)

张德权(*)

冰温贮藏对肌肉蛋白质磷，，，：4429~4440酸化水平的影响中国农业科学 2016.08.05 49（22）

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(20) ，陈立娟，李欣，杨扬，陈丽，倪娜，(#)

张德权(*)

不同嫩度羊肉肌浆蛋白质磷，，，：95~101酸化水平随宰后成熟时间变化的研究现代食品科技 2015.01.30 31（4）

(21) ，张彩霞，王振宇，李铮，杜曼婷，(#)

张德权(*)

腌制温度对羊肉蛋白质磷酸化，，，：215~221水平的影响现代食品科技 2016.03.31 32（11）

(22) ，高星，李欣，李铮，丁武，(#)

张德权(*)

肌动球蛋白磷酸化对肌动球蛋白解离，，的影响食品科学 2016.08.26

(23) ，李铮，李欣，杜曼婷，李蒙，(#)

张德权(*)

肌原纤维蛋白磷酸化对其被μ-钙蛋，，白酶降解的影响研究食品科学 2016.11.14

(24) ，何凡，王振宇，张彩霞，葛长荣，(#)

张德权(*)

不同品种羊肉滴水损失与肌肉，品质的关系研究中国食品学报

2. 既非第一作者又非通讯作者论文

(1) Huang Feng ，Huang Ming，Zhang Hong，Zhang Chuanjiang，，(#)

Zhang Dequan

，Zhou Guanghong(*)

Changes in apoptotic factors and caspase activation pathways，，，：110~during the postmortem aging of beef muscle Food Chemistry 2016.1.1 190

114

(2) Huang Feng ，Huang Ming，Zhang Hong，Guo Bin，，Zhou(#)

Zhang Dequan

，Guanghong(*)

Cleavage of the calpain inhibitor, calpastatin, during postmortem，，，：1~6ageing of beef skeletal muscle Food Chemistry 2014.4.1 148

(3) Li Yin ，Jia Wei，Zhang Chunhui ，Li Xia，Wang Jinzhi，(#) (*)

Zhang Dequan，，Mu Guofeng Fluctuated low temperature combined with high-humidity thawing to

，reduce physicochemical quality deterioration of beef Food and Bioprocess，，：3370~3380Technology 2014.05.28 7（12）

二、授权发明专利

(1) ，，何凡，陈立娟，陈丽，王振宇，杨扬，倪娜，夏安琪，刘越张德权(#)(*)

一种，，，适用于反刍动物骨骼肌全蛋白制备及双向电泳技术 2017.02.08 中国 ZL2014103365835

三、获得学术奖励

(1) （1/19），，，张德权(#)

羊肉加工增值关键技术创新与应用中华农业科技奖科技，，进步省部一等奖 2015.9.18

（，张春晖，陈丽，王振宇，靳烨，高远，张泓，李欣，沈清武，倪娜，丁楷，张德权(#)

穆国锋，辛海波，徐义民，周学河，张春江，李侠，贾伟，黄峰）

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(2) （1/14），，，张德权(#)

羊肉加工增值关键技术创新与应用中国商业联合会科技，，进步其他 2014.12.1

（，张春晖，陈丽，王振宇，靳烨，高远，张泓，李欣，沈清武，倪娜，丁楷，张德权(#)

穆国锋，辛海波，徐义民）

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除非特殊说明，请勿删除或改动简历模板中蓝色字体的标题及相应说明文字

参与者简历

李铮，中国农业科学院原子能利用研究所，畜产品加工研究室，助理

研究员

教育经历（从大学本科开始，按时间倒序排序；请列出攻读研究生学

位阶段导师姓名）：

2011/9 - 2014/6，中国农业大学，食品科学与营养工程学院，博士，导师：罗

永康

2013/2-2014/2，加拿大阿尔伯塔大学，农业、生命与环境科学学院，国家留

学基金委公派，联合培养博士，导师：吴建平

2009/9 - 2011/6，中国农业大学，食品科学与营养工程学院，硕士，导师：冯

力更

2005/9 - 2009/6，西北大学，化工学院，学士，导师：曹伟

科研与学术工作经历（按时间倒序排序；如为在站博士后研究人员或

曾进入博士后流动站（或工作站）从事研究，请列出合作导师姓名）：

2016/11-至今，中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所），畜

产品加工研究室，助理研究员

2014/7 – 2016/10，中国农业科学院，原子能利用研究所(农产品加工研究所)，

博士后，合作导师：张德权

曾使用其他证件信息（申请人应使用唯一身份证件申请项目，曾经使

用其他身份证件作为申请人或主要参与者获得过项目资助的，应当在

此列明）

无。

主持或参加科研项目（课题）及人才计划项目情况（按时间倒序排序）：

1. 国家自然科学基金青年基金，31601499，蛋白质磷酸化调控宰后肌肉肌

原纤维蛋白降解机理，2017/01-2019/12，21万元，在研，主持

2. 中国博士后科学基金面上项目，2015M571176，磷酸化调控宰后钙蛋白

酶降解肌原纤维蛋白的作用机制，2015/06-2016/12，5万元，已结题，主持

3. 中国博士后科学基金特别资助，2016T90154，磷酸化修饰调控钙蛋白酶

系统活性机理，2016/06-2016/12，15万元，已结题，主持

代表性研究成果和学术奖励情况（每项均按时间倒序排序）

（请注意：①投稿阶段的论文不要列出；②对期刊论文：应按照论文发表时作

者顺序列出全部作者姓名、论文题目、期刊名称、发表年代、卷（期）及起止

页码（摘要论文请加以说明）；③对会议论文：应按照论文发表时作者顺序列

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出全部作者姓名、论文题目、会议名称(或会议论文集名称及起止页码)、会议

地址、会议时间；④应在论文作者姓名后注明第一/通讯作者情况：所有共同第

一作者均加注上标“#”字样，通讯作者及共同通讯作者均加注上标“*”字样，

唯一第一作者且非通讯作者无需加注；⑤所有代表性研究成果和学术奖励中本

人姓名加粗显示。）

1. 第一作者论文（仅不列此项时可删除该标题）

(1) Li Zheng(#)，Li Xin，Gao Xing, Du Manting, Zhang Dequan(*)，Effect

of inhibition of μ-calpain on the myofibril structure and myofibrillar

proteins degradation in ovine muscle，Journal of the Science of Food and

Agriculture，2016，DOI: 10.1002/jsfa.8018, accepted

(2) Li Zheng(#)，Li Xin，Gao Xing, Shen Qingwu, Du Manting, Zhang

Dequan(*) ， Phosphorylation prevents in vitro myofibrillar proteins

degradation by μ-calpain，Food Chemistry，2016.09.08，218，455~462

(3) Li Zheng(#)，You Juan，Luo Yongkang(*)，Wu Jianping(*)，Purification

and characterization of parvalbumin isotypes from grass carp

(Ctenopharyngodon idella)，Journal of Agricultural and Food Chemistry，

2014.05.27，62（26）：6212~6218

(4) Li Zheng(#)，Luo Yongkang(*)，Feng Ligeng，Effects of Maillard

reaction conditions on the antigenicity of α-lactalbumin and

β-lactoglobulin in whey protein conjugated with maltose，European Food

Research and Technology，2011.07.07，233（3）：387~394

(5) Li Zheng(#)，Jiang Mizu，You Juan，Luo Yongkang(*)，Impact of Maillard

reaction conditions on the antigenicity of parvalbumin, the major

allergen in grass carp，Food and Agricultural Immunology，2013.10.02，

25（4）：486~497

(6) Li Zheng(#)，Luo Yongkang(*)，Liao Ping，Feng Ligeng，Effect of

Maillard reaction conditions on antigenicity of β-lactoglobulin and the

properties of glycated whey protein during simulated gastric digestion，

Food and Agricultural Immunology，2013.12.01，24（4）：433~443

(7) Li Zheng(#)，Luo Yongkang(*)，Jiang Mizu，Effects of heat treatment

on the antigenicity and allergenicity of grass carp muscles，Journal of

Aquatic Food Product Technology，2016，25（3）：350~357

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除非特殊说明，请勿删除或改动简历模板中蓝色字体的标题及相应说明文字

参与者简历

陈丽，中国农业科学院原子能利用研究所，畜产品加工研究室，助理

研究员

教育经历（从大学本科开始，按时间倒序排序；请列出攻读研究生学

位阶段导师姓名）：

2008/09-2011/07，中国农业科学院，研究生院，硕士，导师：张德权

2004/09-2008/07，西北农林科技大学，园艺学院，学士，导师：弋顺超

科研与学术工作经历（按时间倒序排序；如为在站博士后研究人员或

曾进入博士后流动站（或工作站）从事研究，请列出合作导师姓名）：

2014/07-至今，中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所），

畜产品加工研究室，助理研究员

2011/07-2014/06，中国农业科学院原子能利用研究所（农产品加工研究所），

畜产品加工研究室，研究实习员

曾使用其他证件信息（申请人应使用唯一身份证件申请项目，曾经使

用其他身份证件作为申请人或主要参与者获得过项目资助的，应当在

此列明）

无。

主持或参加科研项目（课题）及人才计划项目情况（按时间倒序排序）：

国家自然科学基金青年基金项目，31501411，基于嫩度的关键磷酸化糖酵解

酶确证及其活性调控机理，2016/01-2018/12，21万元，在研，主持

代表性研究成果和学术奖励情况（每项均按时间倒序排序）

（请注意：①投稿阶段的论文不要列出；②对期刊论文：应按照论文发表时作

者顺序列出全部作者姓名、论文题目、期刊名称、发表年代、卷（期）及起止

页码（摘要论文请加以说明）；③对会议论文：应按照论文发表时作者顺序列

出全部作者姓名、论文题目、会议名称(或会议论文集名称及起止页码)、会议

地址、会议时间；④应在论文作者姓名后注明第一/通讯作者情况：所有共同第

一作者均加注上标“#”字样，通讯作者及共同通讯作者均加注上标“*”字样，

唯一第一作者且非通讯作者无需加注；⑤所有代表性研究成果和学术奖励中本

人姓名加粗显示。）

一、期刊论文（仅不列此项时可删除该标题）

1. 既非第一作者又非通讯作者论文（仅不列此项时可删除该标题，序号按

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实际情况编排）

(1) Chen Lijuan(#), Li Xin, Ni Na, Liu Yue, Chen Li, Wang Zhenyu, Shen

Qingwu, Zhang Dequan(*), Phosphorylation of myofibrillar proteins in

post-mortem ovine muscle with different tenderness, Journal of the

Science of Food and Agriculture, 2015.05.15, 96(5): 1474~1483

(2) Liu Yue(#), Du Manting, Li Xin, Chen Li, Shen Qingwu, Tian Jianwen,

Zhang Dequan(*), Role of the ubiquitin-proteasome pathway on proteolytic

activity in postmortem proteolysis and tenderisation of sheep skeletal

muscle, International Journal of Food Science and Technology, 2016.06.10,

51: 2353~2359

二、专著（仅不列此项时可删除该标题，标题序号按实际情况编排）

张德权，王振宇，陈丽，冷却羊肉加工技术，中国农业出版社，92千字，2014

三、授权发明专利（仅不列此项时可删除该标题，标题序号按实际情况编

排）

张德权，陈丽，高远，陈旭华，饶伟丽，王振宇，张春晖，李欣，刘岳，一

种调理烧烤羊排的方法，2015.02.18，中国，ZL201310456911.0

张德权、陈丽、丁楷、王振宇、高远、饶伟丽、李欣、刘岳，高钙羊肉卷，

2014.05.28，中国，ZL2013206462734

张德权，陈丽，张春晖，饶伟丽，王培培，薛丹丹，丁楷，刘岳，一种羊胴

体产量的无损分级方法，2013.12.18，中国，ZL201111256776.6

四、会议报告（仅不列此项时可删除该标题，标题序号按实际情况编排）

陈丽，牛羊肉加工业现状及战略选择，辽宁省第九届学术年会暨阜新农产品

加工业产业发展论坛，中国，阜新，2015年9月16-18日

五、获得学术奖励（仅不列此项时可删除该标题，标题序号按实际情况编

排）

（1）陈丽(3/19)，羊肉加工增值关键技术创新与应用，中华农业科技奖，

科学技术奖，一等奖，2015。（张德权，张春晖，陈丽，王振宇，靳烨，高远，

张泓，李欣，沈清武，倪娜，丁楷，穆国锋，辛海波，徐义民，周学河，张春江，

李侠，贾伟，黄峰）

（2）陈丽(3/14)，羊肉加工增值关键技术创新与应用，中国商业联合会，科

学技术奖，特等奖，2014。（张德权，张春晖，陈丽，王振宇，靳烨，高远，

张泓，李欣，沈清武，倪娜，丁楷，穆国锋，辛海波，徐义民）

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附件信息

序号附件名称备注附件类型

1 sci1 Food Chemistry 代表性论著



4 sci4 Food Science and Biotechnology 代表性论著

5 sci5Journal of the Science of Foodand Agriculture

代表性论著

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第 41 页


版本：17010000003771356

签字和盖章页(此页自动生成,打印后签字盖章)

申请人：张德权依托单位：中国农业科学院原子能利用研究所

项目名称：蛋白质磷酸化调控宰后肌肉糖原磷酸化酶同工酶活性机理

资助类别：面上项目亚类说明：

附注说明：常规面上项目

申请人承诺：

我保证申请书内容的真实性。如果获得资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守国家自然科学基

金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，认真开展工作，按时报送有关材料。若填报失实和违反

规定，本人将承担全部责任。

签字：

项目组主要成员承诺：

我保证有关申报内容的真实性。如果获得资助，我将严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定

，切实保证研究工作时间，加强合作、信息资源共享，认真开展工作，及时向项目负责人报送有关材料

。若个人信息失实、执行项目中违反规定，本人将承担相关责任。

编号姓名工作单位名称每年工作

时间（月）签字

1 李铮中国农业科学院原子能利用研究所

4

2 陈丽中国农业科学院原子能利用研究所

5

3 杜曼婷中国农业科学院原子能利用研究所

10

4Dadji StephaneSerge Bonny

中国农业科学院原子能利用研究所

10

5 曹立创中国农业科学院原子能利用研究所

10

6

7

8

9

依托单位及合作研究单位承诺：

已按填报说明对申请人的资格和申请书内容进行了审核。申请项目如获资助，我单位保证对研究

计划实施所需要的人力、物力和工作时间等条件给予保障，严格遵守国家自然科学基金委员会有关规

定，督促项目负责人和项目组成员以及本单位项目管理部门按照国家自然科学基金委员会的规定及时

报送有关材料。

依托单位公章

日期：

合作研究单位公章1

日期：

合作研究单位公章2

日期：


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