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切切切切切切切切片片片片片片片片面面面面面面面面积积积积积积积积和和和和和和和和厚厚厚厚厚厚厚厚度度度度度度度度压压压压压压压压缩缩缩缩缩缩缩缩以以以以以以以以及及及及及及及及切切切切切切切切片片片片片片片片变变变变变变变变形形形形形形形形

杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟 向宇向宇向宇向宇向宇向宇向宇向宇 郭洋郭洋郭洋郭洋郭洋郭洋郭洋郭洋 许薇许薇许薇许薇许薇许薇许薇许薇

川川川川川川川川北医学院北医学院北医学院北医学院北医学院北医学院北医学院北医学院 形态定量形态定量形态定量形态定量形态定量形态定量形态定量形态定量研究室研究室研究室研究室研究室研究室研究室研究室 [[教授教授教授教授教授教授教授教授主任主任主任主任主任主任主任主任]]

电话电话电话电话电话电话电话电话: : (0817) 2242778; (0817) 2242778; EE--mail: mail: zwyang@nsmc.edu.cnzwyang@nsmc.edu.cn电话电话电话电话电话电话电话电话: : (0817) 2242778; (0817) 2242778; EE--mail: mail: zwyang@nsmc.edu.cnzwyang@nsmc.edu.cn

体视学网页体视学网页体视学网页体视学网页体视学网页体视学网页体视学网页体视学网页: : http://forum.nsmc.edu.cn/stereology/http://forum.nsmc.edu.cn/stereology/

20192019年年年年年年年年88月于昆明月于昆明月于昆明月于昆明月于昆明月于昆明月于昆明月于昆明 [[中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第中国解剖学会第3535届学术年会届学术年会届学术年会届学术年会届学术年会届学术年会届学术年会届学术年会]]

切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变切片前处理中的物理改变//形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变

�� 与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比与活体器官的组织结构相比

�� 组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理 [[固定固定固定固定固定固定固定固定//脱水等脱水等脱水等脱水等脱水等脱水等脱水等脱水等] ] 并包埋后并包埋后并包埋后并包埋后，，，，组织块的组织块的组织块的组织块的并包埋后并包埋后并包埋后并包埋后，，，，组织块的组织块的组织块的组织块的

组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变组织结构发生形态改变 [[形状形状形状形状形状形状形状形状//分布分布分布分布分布分布分布分布//尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变]]

切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变切片制备中的物理改变//形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变形态改变

组织块组织块组织块组织块组织块组织块组织块组织块改改改改改改改改 变变变变变变变变

组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片//

�� 与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比与包埋组织块的组织结构相比

�� 切片切片切片切片切片切片切片切片//染色并封片后染色并封片后染色并封片后染色并封片后，，，，切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形染色并封片后染色并封片后染色并封片后染色并封片后，，，，切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形切片的组织结构发生形

态改变态改变态改变态改变态改变态改变态改变态改变 [[形状形状形状形状形状形状形状形状//分布分布分布分布分布分布分布分布//尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变尺寸改变]]

组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片改改改改改改改改 变变变变变变变变

组组组组组组组组织织织织织织织织结结结结结结结结构构构构构构构构改改改改改改改改变变变变变变变变了了了了了了了了有有有有有有有有什什什什什什什什么么么么么么么么影影影影影影影影响响响响响响响响 ??•看到的可能不是真的看到的可能不是真的看到的可能不是真的看到的可能不是真的 •定量研究可能有问题定量研究可能有问题定量研究可能有问题定量研究可能有问题

切片后

切片后

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切片后

切片后

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器官体积

器官体积

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真实结果为真实结果为真实结果为真实结果为真实结果为真实结果为真实结果为真实结果为 64 N64 NVV 如果计算为如果计算为如果计算为如果计算为如果计算为如果计算为如果计算为如果计算为 100 N100 NVV 意味着高估意味着高估意味着高估意味着高估意味着高估意味着高估意味着高估意味着高估 56%56%

切片改变的切片改变的切片改变的切片改变的切片改变的切片改变的切片改变的切片改变的影响小影响小影响小影响小影响小影响小影响小影响小++研究少研究少研究少研究少研究少研究少研究少研究少, , 这个报告只是这个报告只是这个报告只是这个报告只是这个报告只是这个报告只是这个报告只是这个报告只是“抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉抛砖引玉”

切片切片切片切片切片切片切片切片 [[裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后]] 石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块 [[刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片]]切片切片切片切片切片切片切片切片 [[裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后裱片后]] 石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块石蜡块 [[刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片刚切片]]

切片改变切片改变切片改变切片改变切片改变切片改变切片改变切片改变 [[切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化切片裱片后切片内组织结构有什么变化] ?] ?

整体整体整体整体整体整体整体整体: : 切片形状切片形状切片形状切片形状切片形状切片形状切片形状切片形状 / / 面积面积面积面积面积面积面积面积 / / 厚度厚度厚度厚度厚度厚度厚度厚度 [[体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩体现结构总的压缩 / / 膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀]]局部局部局部局部局部局部局部局部: : 切片变形切片变形切片变形切片变形切片变形切片变形切片变形切片变形 [[不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩不同区域结构不同程度的压缩 / / 膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀膨胀]]

研究难度

研究难度

研究难度

研究难度

研究难度

研究难度

研究难度

研究难度: :

切片边界

切片边界

切片边界

切片边界

切片边界

切片边界

切片边界

切片边界//

定位定位定位定位定位定位定位定位

研研研研研研研研究究究究究究究究难难难难难难难难度度度度度度度度: :

切切切切切切切切片片片片片片片片过过过过过过过过

可以研究可以研究可以研究可以研究可以研究可以研究可以研究可以研究: : 切片面积切片面积切片面积切片面积切片面积切片面积切片面积切片面积 / / 厚度厚度厚度厚度厚度厚度厚度厚度 / / 变形变形变形变形变形变形变形变形 [[不同切面不同切面不同切面不同切面不同切面不同切面不同切面不同切面//厚度区域厚度区域厚度区域厚度区域厚度区域厚度区域厚度区域厚度区域或或或或或或或或不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征不同切片方向的结构特征, , 假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域假设结构本无区域//方向差异方向差异方向差异方向差异方向差异方向差异方向差异方向差异]]

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(Xiang et al. Image Anal (Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.)12.)

难以研究难以研究难以研究难以研究难以研究难以研究难以研究难以研究: : 直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构直接对比切片里与组织块内的显微结构

怎 怎怎怎怎 怎怎怎样 样样样样 样样样测 测测测测 测测测切 切切切切 切切切片 片片片片 片片片长 长长长、 、、、宽 宽宽宽、 、、、面 面面面

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也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相也 可 显 微 照 相

睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩睾丸石蜡切片面积压缩 [[封片后封片后封片后封片后封片后封片后封片后封片后, , 与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比]]

•• 8 8 µµµµµµµµm m 厚厚厚厚厚厚厚厚, , 减少减少减少减少减少减少减少减少 31%31% [[杨杨杨杨杨杨杨杨 & & 崔崔崔崔崔崔崔崔. . 川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报川北医学院学报 1989; 4(4): 41989; 4(4): 4--7.]7.]

•• 55−−−−−−−−10 10 µµµµµµµµm m 厚厚厚厚厚厚厚厚, , 减少减少减少减少减少减少减少减少 5%5%−−−−−−−−99%% [[Xiang et al. Image Anal Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.12.]]

睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩睾丸石蜡切片压缩 [[封片后封片后封片后封片后封片后封片后封片后封片后, , 与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比与相应组织块切面相比]]••切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片方向上的切片的切片的切片的切片的切片的切片的切片的切片的FeretFeret直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩 6%6%−−−−−−−−99%%••垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的FeretFeret直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩 1%1%−−−−−−−−22%%

不同试验不同结果不同试验不同结果不同试验不同结果不同试验不同结果：：：：可能与石蜡可能与石蜡可能与石蜡可能与石蜡、、、、切片刀有关切片刀有关切片刀有关切片刀有关

••垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的垂直于切片方向上的FeretFeret直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩直径直径直径直径，，，，压缩压缩压缩压缩 1%1%−−−−−−−−22%%[[Xiang et al. Image Anal Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.12.]]

压缩压缩压缩压缩: 与切片时切片刀压力有关与切片时切片刀压力有关与切片时切片刀压力有关与切片时切片刀压力有关, 压缩情况肉眼难以感觉到压缩情况肉眼难以感觉到压缩情况肉眼难以感觉到压缩情况肉眼难以感觉到

切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的切片方向上的球形精子细胞核轮廓的 FeretFeret直径直径直径直径直径直径直径直径[[与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比与垂直于切片方向上的直径相比]]

实验实验实验实验实验实验实验实验1: 1: 减少减少减少减少减少减少减少减少 1.5%1.5%−−−−−−−−2.3% 2.3% 实验实验实验实验实验实验实验实验2: 2: 减少减少减少减少减少减少减少减少 7.2%7.2%−−−−−−−−8.9%8.9%

[[Xiang et al. Image Anal Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.12.]]裱片后立即裱片后立即裱片后立即裱片后立即裱片后立即裱片后立即裱片后立即裱片后立即: : 在在在在在在在在 3737°°°°°°°°C C 热板上热板上热板上热板上热板上热板上热板上热板上烤干烤干烤干烤干烤干烤干烤干烤干… … 竖放切片竖放切片竖放切片竖放切片竖放切片竖放切片竖放切片竖放切片 + 37+ 37°°°°°°°°C C 恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱… …

细胞核压缩可能相对较少细胞核压缩可能相对较少细胞核压缩可能相对较少细胞核压缩可能相对较少，，，，与切片干燥时间有关与切片干燥时间有关与切片干燥时间有关与切片干燥时间有关

怎怎怎怎怎怎怎怎样样样样样样样样测测测测测测测测切切切切切切切切片片片片片片片片厚厚厚厚厚厚厚厚度度度度度度度度 ??

切厚厚厚厚厚厚厚厚

切片上表面聚焦

油镜下油镜下油镜下油镜下, 切片厚度切片厚度切片厚度切片厚度 = 切片切片切片切片 [染透染透染透染透] 上表面与下表面的间距上表面与下表面的间距上表面与下表面的间距上表面与下表面的间距

指针测微计

指针测微计

指针测微计

指针测微计

指针测微计

指针测微计

指针测微计

指针测微计M

icrocaterM

icrocater

（（（（精密的位移测量仪

精密的位移测量仪

精密的位移测量仪

精密的位移测量仪

（（（（精密的位移测量仪

精密的位移测量仪

精密的位移测量仪

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片度度度度度度度度

切片下表面聚焦

Microcater

Microcater

精密的位移测量仪

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精密的位移测量仪））））

精密的位移测量仪

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精密的位移测量仪））））

[[杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟. . 中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析 2013; 18(3):2 492013; 18(3):2 49--54.]54.]

切切切切切切切切片片片片片片片片厚厚厚厚厚厚厚厚度度度度度度度度改改改改改改改改变变变变变变变变的的的的的的的的研研研研研研研研究究究究究究究究问问问问问问问问题题题题题题题题

••观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度，，，，要与从组织块切下的要与从组织块切下的要与从组织块切下的要与从组织块切下的观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度观测切片组织的厚度，，，，要与从组织块切下的要与从组织块切下的要与从组织块切下的要与从组织块切下的

切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度切片组织的厚度 [[组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离组织块的推进距离] ] 相比相比相比相比相比相比相比相比

[[后者的厚度后者的厚度后者的厚度后者的厚度后者的厚度后者的厚度后者的厚度后者的厚度, , 一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准一般以切片机设定的厚度为准]]

••切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的切片机设定厚度的平均的

估计估计估计估计：：：：估计估计估计估计：：：：= = 用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得估计估计估计估计：：：：估计估计估计估计：：：：= = 用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得用游标卡尺测得

的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚的切掉的组织块的总厚

÷÷÷÷÷÷÷÷连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数连续切片的总数

[[问题问题问题问题问题问题问题问题: : 游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是游标卡尺的精度是

否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比否能与切片机的精度相比]]

• Reichert OMU3 切片机切片机切片机切片机：：：：

切片机设定切片机设定切片机设定切片机设定 1.5 µµµµm, 游标卡尺估计游标卡尺估计游标卡尺估计游标卡尺估计 1.528 µµµµm [多多多多1.9%]

[Yang et al. Biol Reprod 1990; 43(4): 629-35.]

• Leica RM2235 切片机切片机切片机切片机：：：：

切片机设定切片机设定切片机设定切片机设定 25 µµµµm, 游标卡尺估计游标卡尺估计游标卡尺估计游标卡尺估计 24.2 µµµµm [少少少少3.2%]

[Xiang et al. Image Anal [Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.]12.]

对于百分之三五以内的厚度改变对于百分之三五以内的厚度改变对于百分之三五以内的厚度改变对于百分之三五以内的厚度改变，，，，注意谨慎对待注意谨慎对待注意谨慎对待注意谨慎对待

切片压缩切片压缩切片压缩切片压缩：：：：切片压缩切片压缩切片压缩切片压缩：：：：15.6% (15.6% (肺肺肺肺肺肺肺肺))、、、、、、、、18.6% (18.6% (心脏心脏心脏心脏心脏心脏心脏心脏))、、、、、、、、19.4% (19.4% (肝脏肝脏肝脏肝脏肝脏肝脏肝脏肝脏))、、、、、、、、

22.1% (22.1% (睾丸睾丸睾丸睾丸睾丸睾丸睾丸睾丸))、、、、、、、、27.8% (27.8% (脊髓脊髓脊髓脊髓脊髓脊髓脊髓脊髓))，，，，，，，，不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异不同器官间有显著性差异

[[彭彭彭彭彭彭彭彭, , 等等等等等等等等. . 中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析 2012; 17(3): 2192012; 17(3): 219--25.]25.]

压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩 19.4%19.4%

[[向向向向向向向向, , 等等等等等等等等. . 中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析2015; 20(1): 522015; 20(1): 52--7.]7.]

压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩 19.4%19.4%

压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩 47.3%47.3%

压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩压缩 55.5%55.5%

热板上烤片温度

热板上烤片温度

热板上烤片温度

热板上烤片温度

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Xiang & Yang. Xiang & Yang. J J HistolHistol HistopatholHistopathol 2014; 1: 10.2014; 1: 10.

热板上烤片温度

热板上烤片温度

热板上烤片温度

热板上烤片温度

10 10 µµµµµµµµmm厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片厚睾丸石蜡切片室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小室温下压缩小,, 5454°°°°°°°°CC热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩热板烤片压缩 17%17%

GuoGuo et al 2016. J et al 2016. J HistolHistol HistopatholHistopathol 2016; 3: 4.2016; 3: 4.

Xiang et al 2018. Image Anal Xiang et al 2018. Image Anal StereolStereol 2018; 37: 2052018; 37: 205--12.12.

55--10 10 µµµµµµµµmm厚厚厚厚厚厚厚厚睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩 3.1%3.1%--5.0%5.0%

XuXu et al 2019. Is there section deformation resulting in et al 2019. Is there section deformation resulting in differential change of nuclear numerical densities differential change of nuclear numerical densities

along the z axis of thick methacrylate or along the z axis of thick methacrylate or

14 14 µµµµµµµµmm厚厚厚厚厚厚厚厚睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩 1.4%1.4%25 25 µµµµµµµµmm厚厚厚厚厚厚厚厚睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩 13.2%13.2%

30 30 µµµµµµµµmm厚厚厚厚厚厚厚厚睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片睾丸石蜡切片厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩 2.7%2.7%40 40 µµµµµµµµmm厚厚厚厚厚厚厚厚睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片睾丸甲基丙烯酸树脂切片厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩厚度压缩 26.5%26.5%

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切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变切片厚度改变, , 总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩总的来讲是压缩, , 但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大但压缩程度变异大… …

切切切切切切切切片片片片片片片片变变变变变变变变形形形形形形形形 (section deformation)(section deformation)

不不不不不不不不同同同同同同同同切切切切切切切切片片片片片片片片 [[组组组组组组组组织织织织织织织织]] 区区区区区区区区域域域域域域域域 [[XYXY 平平平平平平平平面面面面面面面面上上上上上上上上或或或或或或或或 ZZ轴轴轴轴轴轴轴轴方方方方方方方方向向向向向向向向上上上上上上上上]][[ ]]

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研研研研研研研研究究究究究究究究难难难难难难难难度度度度：：：：对对对对度度度度：：：：对对对对照照照照照照照照或或或或或或或或““““没没没没““““没没没没有有有有有有有有变变变变变变变变形形形形形形形形的的的的的的的的切切切切切切切切片片片片””””片片片片””””

某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照：：：：不同制备方法不同制备方法不同制备方法不同制备方法某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照某种方法制备切片变形研究的对照：：：：不同制备方法不同制备方法不同制备方法不同制备方法

赵赵赵赵赵赵赵赵. . 组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理组织处理

对形态定量研对形态定量研对形态定量研对形态定量研对形态定量研对形态定量研对形态定量研对形态定量研

究的影响究的影响究的影响究的影响究的影响究的影响究的影响究的影响 ((硕硕硕硕硕硕硕硕

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A: A: 石蜡包埋石蜡包埋石蜡包埋石蜡包埋；；；；石蜡包埋石蜡包埋石蜡包埋石蜡包埋；；；； B: B: 甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋甲基丙烯酸树脂包埋

一张切片上一张切片上一张切片上一张切片上，，，，切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变：：：：研究球形结构研究球形结构研究球形结构研究球形结构一张切片上一张切片上一张切片上一张切片上，，，，切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变切片方向上的结构改变：：：：研究球形结构研究球形结构研究球形结构研究球形结构

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[[Xiang et al. Image Anal Xiang et al. Image Anal StereolStereol 2018;37:2052018;37:205--12.12.]]

ZZ轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究轴方向变形研究: : 对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度对比观测厚切片内不同深度结构的特征结构的特征结构的特征结构的特征（（（（针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构））））结构的特征结构的特征结构的特征结构的特征（（（（针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构针对贯穿切片的同一种结构））））

切片上表面切片上表面切片上表面切片上表面切片上表面切片上表面切片上表面切片上表面

切片下表面切片下表面切片下表面切片下表面切片下表面切片下表面切片下表面切片下表面

重要体视学技术重要体视学技术重要体视学技术重要体视学技术：：：：光学体视框光学体视框光学体视框光学体视框重要体视学技术重要体视学技术重要体视学技术重要体视学技术：：：：光学体视框光学体视框光学体视框光学体视框 [optical disector][optical disector]————厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子厚切片内直接计数一定体积的切片组织内的粒子

[[例如细胞核例如细胞核例如细胞核例如细胞核例如细胞核例如细胞核例如细胞核例如细胞核] ] 的数量的数量的数量的数量的数量的数量的数量的数量 [[杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟杨正伟. . 生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量生物组织形态定量研究基本工具研究基本工具研究基本工具研究基本工具研究基本工具研究基本工具研究基本工具研究基本工具: : 实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法实用体视学方法. . 科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社, , 2012]2012]

最近最近最近最近最近最近最近最近 有研究认为有研究认为有研究认为有研究认为，，，，石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯有研究认为有研究认为有研究认为有研究认为，，，，石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯石蜡或甲基丙烯酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的酸树脂切片的 上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面上表面或下表面10%10%

33

1010

一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测一般在切片中间测, , 例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下例如从切片上表面下3 3 µµµµµµµµmm聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的聚焦平面开始的55−−−−−−−−10 10 µµµµµµµµm m [[切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题切片上或下表面附近区域结构的制片质量或辨认可能有问题……………………]]

10%10%

厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核厚度区域的细胞核数密度高数密度高数密度高数密度高数密度高数密度高数密度高数密度高10%10%−−−−−−−−60%60%

XuXu et al (2019) et al (2019) 的研究表明的研究表明的研究表明的研究表明：：：：的研究表明的研究表明的研究表明的研究表明：：：：1414−−−−−−−−29 29 µµµµµµµµm m 厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同厚切片内不同深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度深度的球形精子细胞核的数密度, , 没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响没有多大差异或影响

XuXu W, et al. Is there section deformation resulting in W, et al. Is there section deformation resulting in differential change of nuclear numerical densities differential change of nuclear numerical densities

along the z axis of thick methacrylate or along the z axis of thick methacrylate or paraffin sections? paraffin sections? MicroscMicrosc Res Tech 2019Res Tech 2019

•脱蜡后脱蜡后脱蜡后脱蜡后 90℃℃℃℃烤片烤片烤片烤片30分钟分钟分钟分钟：：：：染色有些变浅染色有些变浅染色有些变浅染色有些变浅, 清晰度也有些变差清晰度也有些变差清晰度也有些变差清晰度也有些变差

•脱蜡后脱蜡后脱蜡后脱蜡后 140℃℃℃℃烤片烤片烤片烤片30分钟分钟分钟分钟：：：：组织结构有一定程度的破坏组织结构有一定程度的破坏组织结构有一定程度的破坏组织结构有一定程度的破坏

[[向宇向宇向宇向宇向宇向宇向宇向宇, , 等等等等等等等等. . 中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析中国体视学与图像分析2015; 20(1): 522015; 20(1): 52−−−−−−−−77.]

切片变形的极端表现切片变形的极端表现切片变形的极端表现切片变形的极端表现：：：：结构破坏结构破坏结构破坏结构破坏切片变形的极端表现切片变形的极端表现切片变形的极端表现切片变形的极端表现：：：：结构破坏结构破坏结构破坏结构破坏

••石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后石蜡切片水浴裱片后立即立即立即立即立即立即立即立即 5454℃℃℃℃℃℃℃℃烤片烤片烤片烤片（（（（平放切片平放切片平放切片平放切片））））烤片烤片烤片烤片（（（（平放切片平放切片平放切片平放切片））））

2 2 小时小时小时小时，，，，导致切片组织损害导致切片组织损害导致切片组织损害导致切片组织损害：：：：小时小时小时小时，，，，导致切片组织损害导致切片组织损害导致切片组织损害导致切片组织损害：：：：轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的轻者见生精小管之间的

间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大（（（（多数切片多数切片多数切片多数切片），），），），间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大间隙或生精小管腔增大（（（（多数切片多数切片多数切片多数切片），），），），

重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失（（（（重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失重者见生精小管翻转或消失（（（（1/3 1/3 的切片的切片的切片的切片））））的切片的切片的切片的切片））））

Guo Y, Xiang Y, Yang ZW. Drying paraffin sections on hotplate Guo Y, Xiang Y, Yang ZW. Drying paraffin sections on hotplate Guo Y, Xiang Y, Yang ZW. Drying paraffin sections on hotplate Guo Y, Xiang Y, Yang ZW. Drying paraffin sections on hotplate

unadvisable. Journal of Histology & Histopathology 2016; 3:4.unadvisable. Journal of Histology & Histopathology 2016; 3:4.

水浴水浴水浴水浴水浴水浴水浴水浴

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立即立即立即立即立即立即立即立即

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Xiang & Yang. Xiang & Yang. Detachment of methacrylateDetachment of methacrylateembedded sections from microscope slides can embedded sections from microscope slides can be prevented by heating on hotplate. Journal be prevented by heating on hotplate. Journal

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Detachment of methacrylateDetachment of methacrylate--embedded sections from microscope slides can embedded sections from microscope slides can be prevented by heating on hotplate. Journal be prevented by heating on hotplate. Journal

of Histology & Histopathologyof Histology & Histopathology 2014; 1: 10.2014; 1: 10.

甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后甲 基 丙 烯 酸 树 脂 包 埋 睾 丸 切 片 不 同 温 度 烤 片 后