Nombres:

Delgado Ramírez Anna L. González Torres Karen Mayorga Medina José Eduardo Miranda Pintle Fabián Palacios Cabriales Diana Montserrat Vargas Vargas Leslie Lizet

Manual de Practicas

Fecha de entrega: 13-10-2015

Carrera: QFBT

Doctora: Olga Martínez

Pared de Vegetales

OBJETIVO

- Observar las células vegetales y su morfología mediante el microscopio. - Distinguir y comprender orgánelos asi como estructuras características de

una célula vegetal.

FUNDAMENTOS

La safranina tiene afinidad muy marcada por la lignina y algo menor por la suberina, tiñe de rojo intenso los tejidos que presentan lignina, como es el xilema y las distintas células que forman los tejidos esqueléticos de la planta

Al ser teñidas con Safranina prácticamente la célula se tiñe de color rojo, ya que es un colorante catiónico que aporta color rojo a las estructuras histológicas. Es muy usada en histología vegetal donde tiñe de rojo los núcleos y la lignina de las paredes celulares secundarias. Esto da una mejor delimitación a la célula ya que esta toma un color más denso en la pared celular que el resto que conforma la célula, también al núcleo lo podemos distinguir a simple vista porque este se tiñe de rojo intenso.

MATERIALES - Microscopio - Bisturí - Porta objetos- Cubre objetos - Safranina (reactivo)- Barniz

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METODOLOGÍA

1. Quitar la primera hoja Interna de la cebolla, desprender dos veces la delgada membrana que esta adherida en la cara inferior cóncava.

2. Depositar los fragmentos de membrana en cada porta objeto.

3. Añadirle una gota de agua destilada al primer porta objetos.

4. Al segunda muestra añadirle una gota del colorante de safranina.

5. colocamos nuestros cubre objetos y eliminamos el exceso de colorante, observamos al microscopio (40x)

RESULTADOS

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Observamos el segundo porta objetos c/n colorante safranina.

Donde observamos la morfología de la eperdimes de la cebolla.

Identificamos el núcleo, la pared celular, el citoplasma y su membrana celular.

La safranina es un colorante catiónico que aporta color rojo a las estructuras histológicas.

CONCLUSIÓN

Como punto final de la práctica el equipo llego al objetivo principal, el cual era distinguir a la perfección la pared celular de las células vegetales, así como también se lograron ver sus núcleos, al realizar la disección de la capa más fina de la cebolla, se podía observar los núcleos de la célula y sus paredes celulares, se pudo distinguir a primera instancia la pared celular ya que esta estaba denotada por un gris más fuerte, y recubría toda la célula delimitando a otras. Al ponerle colorante safranina da una mejor delimitación a la célula ya que esta toma un color más denso en la pared celular que el resto que conforma la célula, también al núcleo lo podemos distinguir a simple vista porque este se tiñe de rojo intenso, y está protegido por la pared celular.

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Frotis Sanguineo

Objetivo

Realizar el procedimiento adecuado para elaborar un frotis sanguíneo así como investigar las diferentes tipos de células sanguíneas.

Introducción

Glóbulos Rojos

A los glóbulos rojos se las conoce como eritrocitos o hematíes. Transportan oxigeno hacia las demás células del cuerpo y gracias al componente hemoglobina en su estructura, de la misma manera transporta dióxido de carbono hacia los pulmones.

Glóbulos Blancos

Los glóbulos blancos o leucocitos forman parte de los efectores celulares del sistema inmunológico, y son células con capacidad migratoria que utilizan la sangre como vehículo para tener acceso a diferentes partes de la anatomía. Los leucocitos son los encargados de destruir los agentes infecciosos y las células infectadas, y también secretan sustancias protectoras como los anticuerpos, que combaten a las infecciones.

Según las características microscópicas de su citoplasma (tinto riales) y su núcleo (morfología), se dividen en:

1. Granulocitos o células polimorfo-nucleares: son los neutrófilos, basófilos y eosinófilos; poseen un núcleo polimorfo y numerosos gránulos en su citoplasma, con tinción diferencial según los tipos celulares, y

2. A granulocitos o células monomorfo-nucleares: son los linfocitos y los monocitos; carecen de gránulos en el citoplasma y tienen un núcleo redondeado.

1. Granulocitos o células polimorfo-nucleares

a) Neutrófilos, presentes en sangre entre 2.500 y 7.500 células por mm³. Son los más numerosos, ocupando entre un 55% y un 70% de los leucocitos. Se tiñen pálidamente, de ahí su nombre. Se encargan de fagocitar sustancias extrañas (bacterias, agentes externos, etc.) que entran en el organismo. En situaciones de infección o inflamación su número aumenta en la sangre. Su núcleo característico posee de 3 a 5 lóbulos separados por finas hebras de cromatina, por lo cual antes se los denominaba "polimorfo-nucleares" o simplemente "poli-nucleares", denominación errónea.

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b) Basófilos: se cuentan de 0,1 a 1,5 células por mm³ en sangre, comprendiendo un 0,2-1,2% de los glóbulos blancos. Presentan una tinción basófila, lo que los define. Segregan sustancias como la heparina, de propiedades anticoagulantes, y la histamina que contribuyen con el proceso de la inflamación. Poseen un núcleo a menudo cubierto por los gránulos de secreción.

c) Eosinófilos: presentes en la sangre de 50 a 500 células por mm³ (1-4% de los leucocitos) Aumentan en enfermedades producidas por parásitos, en las alergias y en el asma. Su núcleo, característico, posee dos lóbulos unidos por una fina hebra de cromatina, y por ello también se las llama "células en forma de antifaz".

2. Agranulocitos o células monomorfo-nucleares

a) Monocitos: Conteo normal entre 150 y 900 células por mm³ (2% a 8% del total de glóbulos blancos). Esta cifra se eleva casi siempre por infecciones originadas por virus o parásitos. También en algunos tumores o leucemias. Son células con núcleo definido y con forma de riñón. En los tejidos se diferencian hacia macrófagos o histiocitos.

b) Linfocitos: valor normal entre 1.300 y 4000 por mm³ (24% a 32% del total de glóbulos blancos). Su número aumenta sobre todo en infecciones virales, aunque también en enfermedades neoplásicas (cáncer) y pueden disminuir en inmunodeficiencias. Los linfocitos son los efectores específicos del sistema inmunológico, ejerciendo la inmunidad adquirida celular y humoral. Hay dos tipos de linfocitos, los linfocitos B y los linfocitos T.

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Material Reactivos

Portaobjetos PBS

Mechero bunsen Giemsa

Cristalizado Etanol

Puente

Microscopio

Lanceta

Metodología

1. Agregar en etanol los portaobjetos durante 15 minutos ya transcurrido ese tiempo añadirlos en agua destilada durante 10 minutos.

2. Dejar secar los portaobjetos.

3. Limpiar el dedo con alcohol para pincharlo con una lanceta.

4. Agregar la segunda gota de sangre en un portaobjetos (se harán dos muestras).

5. Expandir la sangre con otro portaobjeto hasta que abarque todo el portaobjeto.

6. Dejar secar la muestra Ya seca la muestra agregar a la primera muestra Giemsa y a la segunda muestra PBC con Giemsa dejar de 15 a 20 minutos.

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Resultados

Monocitos

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Linfocito Un linfocito es un tipo de células blancas de la sangre y que por lo tanto, está presente en la misma. Los glóbulos blancos ayudan a proteger

el cuerpo contra las enfermedades y combatir las infecciones.

NeutrófiloLos neutrófilos son un tipo de glóbulo blanco, de tipo de granulocito, cuya principal función es fagocitar y destruir a bacterias y participar en el inicio del proceso inflamatorio.

Puede pasar a los tejidos, lleva a cabo la fagocitosis puede actuar como célula presentadora de antígenos.

Discusión

Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una buena diferenciación de las estructuras celulares de los leucocitos, definición completa de los hematíes y de la usencia de precipitados que dé lugar a artefactos no deseados.

Todos los colorantes anteriormente descritos pueden producir resultados poco satisfactorios en la coloración del frotis, siendo algunas de las causas de estos malos resultados como: Tiempo prolongado, dando lugar a sobre tinción, Lavado insuficiente porta objetos mal esterilizados.

Conclusión

Se extrajo sangre para realizar dos laminillas con dos tipos de tinción diferente, una solo con giemsa y la segunda con un mililitro de giemsa por nueve de pbs.

La laminilla teñida con giemsa se identificó todas las células de la sangre ya que, la técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como tinte ácido, lo que da una amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante meta cromático, de ahí que muchas estructuras se tiñan de púrpura y no de azul, esto hizo visualizar eritrocitos, leucocitos y plaquetas.

En la siguiente laminilla se utilizó tinción de Wright cuyo colorante está compuesto de azul de metileno, que tiñe de color azul las partes ácidas de las células y eosina que tiñe las partes alcalinas, disueltos en metanol, que permite la fijación de las células, adicionando a la preparación buffer de fosfatos, que rehidrata a las células después de la exposición con metanol.

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