1

Doc. dr. sc. Ana Galov Zavod za animalnu fiziologiju

Biološkog odsjeka Prirodoslovno-matematičkog fakulteta

Sveučilišta u Zagrebu

Alternative korištenju laboratorijskih životinja

2

1959. W. Russel i R. Burch „Načela humanih pokusnih tehnika” („The Principles of Humane Experimental Technique”) Princip “3 R-a”: -poboljšanje (refinement) -smanjenje (reduction) -zamjena (replacement) POBOLJŠANJE (Refinement) - svaka metoda koja smanjuje ili isključuje nanošenje boli životinjama tokom pokusa, te

koja poboljšava uvjete i procedure držanja i brige u situacijama kada je upotreba životinja neizbježna - ne koristi samo životinjama, nego i povečava kvalitetu rezultata istraživanja - upotreba „nižih” vrsta SMANJENJE (Reduction) - korištenje manjeg broja životinja u pokusu - broj životinje ne smije biti toliko mali da ugrožava dobivanje relevantnih rezultata ZAMJENA (Replacement) - upotreba metoda koje ne koriste životinje

Alternativni pristupi

3

1978. David Smyth - fiziolog - “Alternatives to Animal Experiments” (Alternativni pristupi u pokusima na životinjama) - uveo pojam „alternative” za alternativne pristupe korištenju laboratorijskih životinja -svaka metoda ili postupak koji ima za posljedicu ili potpuno zamjenu životinja, ili smanjenje broja korištenih životinja, ili poboljšanje postupaka kojima se smanjuje patnja životinja - Smythov izraz „alternative” je zapravo sinonim s Russell i Burchovim „3 R”

Alternativni pristupi

4

1. Etički razlozi i društvena zabrinutost

2. Zakonski propisi

3. Dobra znanost

4. Praktični i ekonomski dobitci

5. Zahtjevi institucija koje financiraju istraživanja i znanstvenih časopisa da se istraživanja provode u

skladu s principima 3 R-a

Zašto uopće zamijeniti životinje?

5

1. Etički razlozi i društvena zabrinutost

Životinje su sposobne osjećati bol i stres.

Upotreba životinja u eksperimentima izaziva zabrinutost javnosti.

Unutar znanstvene zajednice jača svijest o važnosti izbjegavanja nepotrebne patnje životinja.

Dobrobit životinja je postala moćan politički faktor unutar Europske Unije

(npr. osnivanje Europskog središta za potvrđivanje alternativnih metoda – ECVAM,

osnivanje mnogobrojnih centara za alternative i izvan EU)

Zašto uopće zamijeniti životinje?

6

2. Zakonski propisi

U mnogim zemljama se zakonski regulira upotreba životinja u znanstvene svrhe, te postoje pravilnici koji

zahtijevaju pridržavanje principa 3R:

- Direktiva 2010/63/EU naglašava potrebu za alternativnim pristupima upotrebi životinja i

potiče razvoj alternativnih metoda

-u V. Britaniji znanstvenici moraju pokazati da su istražili alternativne metode i moraju

podastrijeti dokaze da pogodne alternativne metode ne postoje

Međunarodne organizacije koje reguliraju testiranja u svojim smjernicama npr. OEDC (Organization for

Economic Coordination and Development) guidelines for chemical testing i European Pharmacopeia

guidlines for testing vaccines navode obavezu primjene 3 R-a

Zašto uopće zamijeniti životinje?

7

3. Dobra znanost

Istraživači koji razvijaju metode zamjene životinja često naglašavaju znanstvene prednosti tehnika koje

razvijaju:

- dobivanje vrijednih informacija o molekularnim i staničnim događajima (koja provedu prije no što

prijeđu na istraživanja na životinjama) koje su važne za znanstveni napredak

- veću vrijednost korištenja humanih tkiva ili ljudskih volontera od animalnih modela, pri istraživanjima

ljudskog zdravlja i raznim testiranjima sigurnosti

Primjeri radova u kojima se raspravljaju prednosti alternativnih metoda:

• Animal models of asthma: value, limitations and opportunities for alternative approaches. Holmes, A.M., Solari, R. & Holgate, S.T. Drug Discovery Today, Vol 16, 659-670 (2011).

• Opportunities to Replace the Use of Animals in Sepsis Research. Langley, C. et al. Alternatives to laboratory Animals, Vol 33, 641–648 (2005).

• Volunteer studies in pain research — Opportunities and challenges to replace animal experiments. Langley C. et al. NeuroImage, Vol 42, 467–473 (2008)

Zašto uopće zamijeniti životinje?

8

4. Praktični i ekonomski dobitci

• upotreba alternativnih metoda može donijeti značajne financijske uštede (npr. zbog veće brzine

dobivanja rezultata ili zbog smanjenih troškova uzgoja mikroorganizama ili staničnih kultura, u

usporedbi s troškovima uzgoja i održavanja životinja)

primjer: in vitro testovi za visoko-protočne (high-throughput) screening programe za otkrivanje

novih lijekova u farmaceutskoj industriji (potraga za tvarima koje imaju sposobnost interakcije s

određenim molekularnim metama, među milijunima kemijskih struktura)

• mnoge organizacije financiraju istraživanja čiji je konačni cilj zamjena životinja

• postoji i potencijalna komercijalna isplativost, ako se alternativna metoda patentira

• institucije i kompanije koje pokazuju posvećenost alternativnim metodama stvaraju bolji „image” u

javnosti

Zašto uopće zamijeniti životinje?

9

5. Zahtjevi institucija koje financiraju istraživanja i znanstvenih časopisa da se istraživanja provode u skladu s

principima 3 R-a

• većina organizacija koje financiraju istraživanja zahtijeva pridržavanje principa 3 R-a, barem u V. Britaniji -

njihova očekivanja su propisana u priručniku: “Responsibility in the use of animals in bioscience

research: Expectations of the major research council and charitable funding bodies”

“All experimental work should seek where possible to avoid the use of animals if the work

has the potential to cause animals pain, suffering, distress or lasting harm.”

• neki znanstveni časopisi zahtijevaju od autora izjavu o upotrebi alternativa

npr. časopis Psychoneuroendocrinology zahtijeva izjavu: „all efforts were made to utilise alternatives”

Zašto uopće zamijeniti životinje?

10

Poticaj za razvoj alternativnih metoda -etičke prirode -ali i praktične: upotreba laboratorijskih životinja je skupa eksperimenti traju dugo i teško se standardiziraju Istraživanja pri kojima se vodi briga o dobrobiti životinja vode do boljih znanstvenih rezultata !! Alternativne metode je lakše uvesti u fundamentalna ili inovativna istraživanja nego u primijenjena istraživanja: -večina primijenjenih istraživanja (npr. testiranje sigurnosti) zahtijeva stroge standardne procedure i

regulatorne smjernice -uvođenje alternativnih metoda u područja primijenjenih istraživanja zahtijeva odobrenje od različitih

nacionalnih regulatornih agencija (npr. Food and Drug Administration) ili međunarodnih organizacija (npr. Svjetske zdravstven organizacije ili OECD – Organization for Economic Coordination and Development)

Alternativni pristupi

11

Za dobivanje odobrenja relevantnih organizacija za regulatorna testiranja: - svaka alternativna metoda mora proći provjeru (validaciju) prije no što može zamijeniti postojeću metodu - validacija – proces kojim se dokazuje da je metoda testiranja prihvatljiva za ono čemu je namijenjena - osnovni koraci za zamjenu postojećeg regulatornog testa novom metodom su: -razvoj testa (kojemu su vjerojatno prethodila bazična istraživanja) -predvalidacija -validacija -recenzija (neovisna procjena) -regulatorno prihvaćanje

Alternativni pristupi

12

-u današnje vrijeme se razvija, a i postoji, sve veći broj metoda koje rezultiraju ili zamjenom, ili smanjenjem, ili poboljšanjem upotrebe životinja

-prvo “poboljšanje”: upotreba anestetika -1846. eter upotrijebljen na ljudskom pacijentu -ubrzo nakon toga – upotreba na životinjama u eksperimentima -od 1876. – u Velikoj Britaniji je obavezna upotreba anestetika za eksperimente u kojima životinje osjećaju bol (Zakon o okrutnosti prema životinjama, Cruelty to Animals Act) -do danas je razvijeno nekoliko alternativnih pristupa koji se zasnivaju na „zamjeni” – uključuju metode i postupke

koji ne koriste životinje:

Alternativni pristupi

13

Alternativi pristupi – “zamjena”

TEST PIROGENE AKTIVNOSTI

PIROGEN - organska tvar koja uzrokuje porast tjelesne temperature - najčešći pirogeni su komponente staničnih stijenki bakterija (bakterijski endotoksini iz Gram-negativnih bakterija) - zaostaju i nakon sterilizacije pripravaka -farmaceutski proizvodi koji se daje parenteralno - obavezno testiranje da ne sadrže pirogen

14

Alternativi pristupi – “zamjena”

TEST PIROGENE AKTIVNOSTI

Test pirogene aktivnosti – in vivo – kunići -injiciranje u vene – prati se tjelesna temperatura -danas – stotine tisuća kunića godišnje (najviše za proizvode koji se nemogu testirati LAL testom)

15

LAL test (Limulus Amoebocyte Lysate) - hemolimfa praklještara Limulus polyphemus (horseshoe crab, potkovičasti rak) - 1970-tih -hemolimfa se pomiješa s test-uzorkom -ako su bakterijski pirogeni prisutni u uzorku – zgrušavanje -veća osjetljivost od testa na kunićima -oko 30.000 jedinki godišnje ugiba kao posljedica uzimanja hemolimfe (oko 1/3 V se uzima) -ponekad daje lažno negativne rezultate, ponekad precijenjuje sadržaj pirogena -ne detektira pirogene koji nisu bakterijski endotoksini (npr. Gram-pozitivne egzotoksine, viruse, gljivice)

Alternativi pristupi – “zamjena”

TEST PIROGENE AKTIVNOSTI

16

Test pirogene aktivnosti na ljudskoj krvi (WBT, whole blood test) -1996. -potpuno zamijenjuje upotrebu životinja -razrijeđenoj ljudskoj krvi se dodaje tvar koja se testira – prisutnost pirogena će potaknuti otpuštanje citokina (npr. IL-1β) iz monocita u krvi -razina proizvedenih citokina se kvantitativno određuje pomoću enzimskog imunotesta (ELISA) -jeftiniji i osjetljiviji od testa na kunićima, može detektirati čitav niz različitih pirogena (za razliku od LAL testa) -2005. je test internacionalno validiran od strane ECVAM-a (European Centre for the Validation of Alternative Methods)

Alternativi pristupi – “zamjena”

TEST PIROGENE AKTIVNOSTI

17

Alternativi pristupi – “zamjena”

TEST PIROGENE AKTIVNOSTI

18

Alternativi pristupi – “zamjena”

PROIZVODNJA MONOKLONSKIH PROTUTIJELA

Monoklonska protutijela - široka primjena - proizvodnja – hibridoma stanice - u 1. koraku se koristi miš - kasnije se odabrani hibridomi propagiraju

19

Alternativi pristupi – “zamjena”

PROIZVODNJA MONOKLONSKIH PROTUTIJELA

Propagacija hibridoma – in vivo (miš ili štakor) - u trbušnu šupljinu životinje se injicira neka

iritirajuća tvar (mineralno ulje), nakon toga se injiciraju hibridoma stanice

- hibridomi se umnožavaju i izlučuju monoklonska protutijela u ascitesnu tekućinu koja se nakuplja u trbušnoj šupljini – snažna nelagoda, bol

- ascitesna tekućina se sakuplja pomoću igle i šprice, a životinja se nakon toga humano usmrćuje

Propagacija hibridoma – in vitro (kultura stanica) - protutijela se pročišćavaju iz medija za kulturu

stanica - napredak u tehnikama staničnih kultura - u Europi – zabrana ascitesne metode

20

Alternativi pristupi – “zamjena”

TESTIRANJE FOTOTOKSIČNOSTI

Fototoksičnost -akutni toksični odgovor nakon izlaganja kože kem. tvarima, a nakon toga vidljivoj ili UV svjetlosti Standardni test fototoksičnosti – zamorčići -prati se razvoj upale i oticanja -ne daju se analgetici (da ne bi umanjili mogući razvoj upalne reakcije) Alternativna metoda – stanice kože miševa uzgojene u kulturi -tvar koja se testira se dodaje stanicama -stanice se izlažu UV svjetlosti -bojaju vitalnom bojom -razlika u obojenosti stanica koje su bile izložene svjetlosti i onih koje su se držale u mraku - mjera razine fototoksičnosti testirane tvari -ovaj zamjenski test - brz i jeftin, odobren od OECD (Organization for Economic Coordination and Development)

21

Alternativi pristupi – “zamjena”

Ljudske stanice i tkiva u kulturi

-sve veći značaj u razvoju metoda za zamjenu ima upotreba ljudskih stanica i tkiva u kulturi -kultura tkiva je također alternativni pristup s dugom povijesti: -1885. Wilhelm Roux je uspio održati stanice kokošjeg embrija živima u toploj fiziološkoj otopini -1907. Ross Harrison opisao rast stanica in vitro -tehnike kulture stanica i tkiva su značajno napredovale upotrebom antibiotika -danas se razvijaju i sintetičke otopine za uzgoj, koje bi mogle zamijeniti serumske faktore (poput hormona, koji

značajno variraju u različitim serumima) -procijenjuje se da se oko 1,000,000 goveđih fetusa godišnje žrtvuje za dobivanje fetalnog goveđeg seruma za

uzgoj stanica u kulturi

22

Alternativi pristupi – “zamjena”

Ljudske stanice i tkiva u kulturi

-često relevantniji podaci – nema razlike među vrstama -razvoj novih lijekova, testiranje sigurnosti i učinkovitosti različitih tvari i proizvoda (hrane, pesticida, cijepiva,

kozmetičkih proizvoda i proizvoda za kućanstvo) -banke humanog tkiva za istraživanje (koža, oči, jetra, placenta, pluća, bubrezi, srčani zalisci, krvne žile i krvne stanice)

UK Human Tissue Bank

“Posvećeni smo etičkom razvoju ovog servisa koji će učinkovito pridonositi poboljšanju kvalitete ljudskog zdravlja, a istovremeno će olakšavati provođenje “tri R” koncepta u testovima koji koriste laboratorijske

životinje.” “We are commited to the ethical development of the service as an effective contributor to the improvement of human health, whilst facilitating the refinement, reduction and replacement of animal tests.” http://www.ukhtb.org/en/Home

23

Alternativi pristupi – “zamjena”

Ljudske stanice i tkiva u kulturi

-testovi iritacije i korozije kože -testira se lokalizirani toksični učinak koji nastaje

nakon izlaganja kože određenoj kemijskoj tvari -ranije su se provodili na životinjama

-danas za njih postoje prihvaćene metode koje se

zasnivaju na “zamjeni” životinja -koriste se modeli ljudske kože – EpiDerm

(MatTek), EpiSkin i SkinEthic RHE model (L’Oreal), koji su dobiveni od stanica ljudske kože u kulturi

-prihvaćene metode u EU i Kanadi

-2010 OECD (Organization for Economic Coordination and Development) je publiciralo Test Guideline 439 koji opisuje novu proceduru za in vitro identifikaciju iritirajućih kem. tvari

24

Alternativi pristupi

Vakcine – smanjenje, zamjena, poboljšanje

-znatno smanjen broj životinja u proizvodnji i testiranju vakcina -većina vakcina se danas proizvodi bez upotrebe životinja (virusi se uzgajaju u staničnim kulturama i

oplođenim kokošjim jajima) -kulture dobivene iz životinjskog tkiva (za koje je potrebno usmrtitit životinje) zamijenjene kulturama

staničnih linija -kod proizvodnje vakcina: – testovi sigurnosti (safety tests) – modificirani tako da se koristi manje

životinja, uvođenje GMP-a (dobre proizvođačke prakse) je smanjilo mogućnost da se u vakcinama uopće nađu nečistoče

(od 1997. Europska Pharmacopoeia ne zahtjeva testiranje sigurnosti vakcine za difteriju, tetanus i pertusis)

– testovi učinkovitosti (potency tests) – koristi imunološke tehnike za praćenje razvoja imunološkog odgovora testiranih životinja

25

Alternativi pristupi

Vakcine – zamjena

MIMIC – Modular IMmune In vitro Construct -surogat za ljudski imunološki sustav -za razvoj vakcina – zamijenjuje neke korake koji inače koriste životinje -aplikacije -istraživanje imunogeničnosti vakcina i adjuvanta -predviđanje imunotoksičnosti -testiranje učinkovitosti vakcina (clinical trial in a test tube) http://www.vaxdesign.com/mimic-technology

26

Alternativi pristupi

In silico

In silico – biološki eksperimenti koji se u potpunosti provode na računalu, pomoću računalnih simulacija

-in silico pristup u medicini ima potencijal znatno ubrzati pronalazak novih lijekova, a znatno smanjiti

laboratorijski rad i upotrebu životinja -modeli tuberkuloze, astme -računalni modeli ljudskog metabolizma, kardiovaskularnih bolesti, modeli za procjenu toksičnosti

lijekova -ipak, novi potencijalni lijekovi se još uvijek moraju potvrditi u animalnim testovima, te na ljudima

27

Alternativi pristupi

-lutke za testiranje sigurnosti u prometnim nesrećama (crash test dummies) -sadrže unutarnje senzore i kameru -zamijenile žive životinje (svinje) koje su se ranije koristile u te svrhe -prva je napravljena još 1949. godine, a kontinuirano se poboljšavaju -simulatori za obuku vojnika (TraumaMan i Combat Trauma Patient Simulator) -simuliraju krvarenje, prijelome, amputacije i opekline -ranije su se tim traumama podvrgavale životinje -koriste ih i studenti medicine

28

- Istraživanja na životinjama - u skladu sa zakonskim odredbama Europske unije - Zakonske odredbe postoje još od 1986. - Direktiva 86/609 - 22. rujna 2010. EU usvojila novu Direktivu 2010/63/EU - 1. siječnja 2013 Direktiva 2010/63/EU stupila na snagu u potpunosti

Alternativi pristupi

Europska unija – zakonske odredbe

29

Direktiva 2010/63/EU Europskog parlamenta i vijeća o zaštiti životinja koje se koriste u znanstvene svrhe

(DIRECTIVE 2010/63/EU OF THE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE COUNCIL on the protection of animals used for scientific purposes)

Zašto nova Direktiva 2010/63/EU ? -nakon 20 godina upotrebe, Direktiva 86/609 (iz 1986.) više nije odražavala sve znanstvene promjene koje su se

dogodile, uključujući današnju upotrebu transgeničnih životinja, sofisticiranije znanstvene metode i više alternativnih metoda

-stoga je postojala potreba da se direktiva prilagodi novim razmišljanjima i novoj tehnologiji, da se postave europski standardi koji će pomoći u stvaranju jednakih uvjeta po cijeloj Europi i koji će omogućiti provedbu dobrog upravljanja i brigom o životinjama

Koji su ključni ciljevi Direktive 2010/63 ? -osigurava da se životinje koriste prema određenim standardima, i samo u krajnjoj nuždi (zato što nema alternativne

metode) -osigurava da istraživači provode istraživanja po principu „3R”

Alternativi pristupi

Europska unija – zakonske odredbe

30

Kome je namijenjena Direktiva 2010/63 ? -uključuje gotovo svaki sektor koji koristi životinje za istraživanje i razvoj proizvoda (npr. kemijska i farmaceutska

industrija), te one koji razvijaju kozmetiku i različite proizvode za kućanstva -ne utječe samo na istraživače, nego daje zakonske smjernice za uzgajivače laboratorijskih životinja i osobe uključene u

transport laboratorijskih životinja Koje su najvažnije promjene u novoj Direktivi 2010/63, u odnosu na staru Direktivu 86/698 ? -najznačajnija promjena u tekstu direktiva je promjena iz preporuke, neobavezne najbolje prakse (po izboru) u

obavezne procedure Poboljšane stare odredbe: -svaki istraživački projekt mora proči etičku recenziju - mora se dokazati da je predloženi projekt znanstveno opravdan i da će se provoditi po principu „3R”-a

- dio recenzije sada uključuje i procjenu štetnosti i koristi (cost/benefit analiza), u kojoj se mora procijeniti kolika je korist za pacijenta ili potrošaća nasuprot šteti koja se čini životinjama

-tekst o upotrebi alternativa je postao jasniji -upotreba primata je ograničena samo na esencijalna biomedicinska istraživanja

Alternativi pristupi

Europska unija – zakonske odredbe

31

Poboljšane stare odredbe: -sada se spominje i osoblje koje se brine o dobrobiti životinja, a uloga veterinara i službenika za dobrobit životinja je

ojačana -tako da sada postoji uvjet da unutar istraživačke organizacije postoji savjetodavno tijelo za dobrobit životinja, koje

među ostalim savjetuje o „3R” principima, držanju, njezi i dobrobiti životinja, te o različitim procedurama koje su na raspolaganju

Nove odredbe: -države članice su obavezne provoditi određeni broj inspekcija godišnje, od kojih neke moraju biti nenajavljene -postoje novi, detaljni standardi o kavezima i držanju životinja -kroz nove odredbe se vrlo jasno upućuje na ”3R” principe, bez ikakvih dvosmislenosti -povećava se transparentnost istraživanja – istraživačka prijava po novoj odredbi mora sadržavati i sažetak koji je pisan

za laike, a mora uključivati metode i ciljeve projekta (ako se projekt odobri, taj sažetak se stavlja na internet) U konačnici, nove odredbe su mnogo snažnije nego prije, a uključuju i globe za nepridržavanja. Sve države članice su prevele novu direktivu, te su je trebale početi nacionalno primjenjivati s početkom 2013.

Alternativi pristupi

Europska unija – zakonske odredbe

32

EURL – Referentni laboratorij Europske unije (European Union Reference Laboratory) ECVAM – Europsko središte za potvrđivanje alternativnih metoda (European Centre for the Validation of Alternative Methods), osnovano

1991.

Nova Direktiva 2010/63/EU bi trebala ojačati ulogu EURL ECVAM-a. (Stupila je na snagu 1.1.2013.)

Njezine dužnosti i zadaci, definirani Člankom 48/Aneksa VII, su: a. Koordiniranje i promicanje razvoja i korištenja alternativnih pristupa, i u području bazičnih i primijenjenih

istraživanja i regulatornih testiranja b. Koordiniranje utvrđivanja valjanosti alternativnih pristupa na razini EU c. EURL ECVAM bi trebao djelovati kao ključno mjesto za razmjenu informacija o razvoju alternativnih pristupa d. Osnivanje, održavanje i upravljanje javnim bazama podataka i informacijskim sustavima o alternativnim pristupima

i njihovim fazama razvoja e. Promicanje dijaloga između zakonodavaca, regulatora, i svih relevantnih zainteresiranih osoba ili skupina, posebno

industrije, znanstvenika u biomedicini, organizacija potrošaća i grupa za zaštitu živoitnja, vezanih za razvoj, potvrdu, regulatorno prihvaćanje, međunarodnu prepoznatljivost i upotrebu alternativnih pristupa. EURL će također sudjelovati i u samom utvrđivanju valjanosti alternativnih pristupa.

Alternativi pristupi

Europska unija – zakonske odredbe

33

EURL – European Union Reference Laboratory ECVAM – European Centre for the Validation of Alternative Methods (EURL ECVAM – European Union Reference Laboratory on Alternatives to Animal Testing)

Alternativi pristupi

Europska unija

http://ecvam.jrc.it/index.htm

34

EURL – European Union Reference Laboratory ECVAM – European Centre for the Validation of Alternative Methods (EURL ECVAM – European Union Reference Laboratory on Alternatives to Animal Testing)

Scientifically Validated Methods • Carcinogenicity • Eye irritation • Monoclonal antibodies production • Haematotoxicity • Reproductive toxicity

Alternativi pristupi

Europska unija

http://ecvam.jrc.it/index.htm

35

EURL – European Union Reference Laboratory ECVAM – European Centre for the Validation of Alternative Methods (EURL ECVAM – European Union Reference Laboratory on Alternatives to Animal Testing) >Scientifically Validated Methods >Regulatory Acceptance Acute aquatic toxicity Acute oral toxicity Eye irritation Genotoxicity Phototoxicity Pyrogenicity Skin absorption Skin corrosion Skin irritation Skin sensitisation Vaccines: potency and safety testing

Alternativi pristupi

Europska unija

http://ecvam.jrc.it/index.htm

36

Eye irritation • Isolated Chicken Eye (ICE) test method Regulation:

– Commission Regulation (EC) No 440/2008 – OECD Test Guideline 438: adopted on 7th September 2009

• ESAC Statement: – 27 April 2007: The ESAC Statement is based on the U.S. ICCVAM retrospective study

• Remarks: – Partial replacement of the in vivo rabbit eye irritation test. The OECD TG 438 recommends ICE for the use as part of a tierd-testing strategy for regulatory

classification and labelling within a specific applicability domain. However, test substances can be classified as ocular corrosives or severe irritants under certain circumstances and with specific limitations without further testing in rabbits. A substance that tests negative would need to be tested in rabbits using a sequential testing strategy as outlined in OECD TG 405 corresponding to the Method B.5 of the Council Regulation (EC) No 440/2008.

• Site Internal Links: – Validation Study Documents – INVITTOX Protocol (ICE)

•

• The Bovine Corneal Opacity and Permeability test methods (BCOP) Regulation: – Commission Regulation (EC) No 440/2008 – OECD Test Guideline 437: adopted on 7th September 2009

• ESAC Statement: – 27 April 2007: The ESAC Statement is based on the U.S. ICCVAM retrospective study

• Remarks: – Partial replacement of the in vivo rabbit eye irritation test. The OECD TG 437 recommends BCOP for the use as part of a tierd-testing strategy for regulatory

classification and labelling within a specific applicability domain. However, test substances can be classified as ocular corrosives or severe irritants under certain circumstances and with specific limitations without further testing in rabbits. A substance that tests negative would need to be tested in rabbits using a sequential testing strategy as outlined in OECD TG 405 corresponding to the Method B.5 of the Council Regulation (EC) No 440/2008.

• Site Internal Links: – Validation Study Documents – INVITTOX Protocol (BCOP)

Alternativi pristupi

Europska unija

http://ecvam.jrc.it/index.htm

37

Alternativi pristupi

Europska unija

ECVAM vodič za pretraživanje je razvijen da bi informirao i podržao korisnike baza podataka o alternativnim pristupima korištenju laboratorijskih životinja u pronalaženju visoko vrijednih informacija o relevantnim alternativnim strategijama i metodama na jednostavan, ali sistematski i učinkovit način

-olakšava planiranje visoko kvalitetnog medicinskog istraživanja -2011. -besplatan -pdf verzija: http://bookshop.europa.eu/en/the-ecvam-search-guide-

pbLBNA24391/?CatalogCategoryID=.u6ep2IxwqYAAAEuJV8BgSLq

38

Alternativi pristupi

Europska unija

Sadrži slijedeće teme:

39

Alternativi pristupi

http://www.ccac.ca/en_/threer http://3rs.ccac.ca/en/testing-and-production/alternative-test-methods/

40

Alternativi pristupi

u edukaciji

Cilj upotrebe laboratorijskih životinja u edukaciji je: -usvajanje znanja -stjecanje vještina (npr. kirurških) Cilj upotrebe laboratorijskih životinja u edukaciji nije potvrđivanje znanstvenih hipoteza! Stoga su eksperimenti na životinjama u edukaciji zapravo ponavljanja ranijih eksperimenata! Zato se vrlo lako mogu zamijeniti! Alternativne metode u edukaciji: -upotreba kompjuterskih modeliranja -zamjena kralješnjaka nižim vrstama -upotreba in vitro sustava -upotreba ljudskih modela (npr. BIOPAC) -upotreba otpadnog materijala iz klaonica ....

41

Alternativi pristupi

u edukaciji

Međunarodna mreža za humanu edukaciju – InterNICHE (International Network for Humane Education) -promiče humano, ali istovremeno i visokokvalitetno obrazovanje sudenata medicinskih (uključujući i

veterinarske) i bioloških znanosti -podupire napredne metode podučavanja i alternativne pristupe korištenju životinja Zavod za animalnu fiziologiju PMF- Sveučilišta u Zagrebu: -više od desetljeća provodi princip „3 R” u nastavi -smanjen broj životinja koji se koristi -nastava iz Imunologije, Fiziologije – npr. Dondersov model pluća, BIOPAC, PhysioEx, serum i krv iz

klaonice ...

42

Alternativi pristupi

u edukaciji

http://www.interniche.org/en/alternatives

43

Alternativi pristupi

u edukaciji

http://www.interniche.org/en/alternatives

44

Alternativni pristupi

svjetski kongresi

45

Alternativni pristupi

svjetski kongresi

46

Alternativni pristupi

svjetski kongresi

http://www.wc9prague.org/index.html

47

Alternativni pristupi

ZNANSTVENI ČASOPISI

Znanstveni častopisi koji objavljuju radove vezane uz alternativne pristupe i koncept "3 R" Three Rs Journals The following peer-reviewed journals publish research related to the Three Rs: ALTEX (Alternatives to Animal Experiments) publishes research on the development and promotion of alternatives to animal experiments. English summaries of the articles are published on the Altweb website. Animals is an international and interdisciplinary scholarly open access journal. It publishes reviews, regular research papers, communications, and short notes that are relevant to any field of study that involves animals, including zoology, ethnozoology, animal science, animal ethics and animal welfare. Animal Welfare publishes scientific research and technical studies related to the welfare of animals on farms, in zoos, in laboratories, as companions or living in the wild. Applied Animal Behaviour Science is an international journal reporting on the application of ethology to animals managed by humans, and publishes relevant information on the behaviour of animals used for a variety of purposes. Topics covered include: behaviour of farm, zoo and laboratory animals in relation to animal management and welfare; behaviour of companion animals in relation to behavioural problems; applied studies of the behaviour of wild animals; and methodological studies in relevant fields.

48

ATLA (Alternatives to Laboratory Animals) publishes research covering all aspects of the development, validation, introduction and use of alternatives to laboratory animals in biomedical research and toxicity testing. Comparative Medicine publishes scholarly articles about animal models, animal biology, laboratory animal medicine, laboratory animal pathology, animal behaviour, animal biotechnology and other related topics. ILAR Journal Online is the quarterly publication of the Institute for Laboratory Animal Research (ILAR). Invited authors provide information for all who use, care for, and oversee the use of laboratory animals. Issue themes and article topics are pertinent for investigators in biomedical and related research, institutional officials for research, veterinarians, and members of animal care committees. JAAWS (Journal of Applied Animal Welfare Science) publishes articles and reports discussing methods of experimentation, husbandry and care that enhance the welfare of animals in laboratories, farms, homes and the wild. Laboratory Animals is an international journal that covers all aspects of laboratory animal science in biomedical research. Particular emphasis is given to research that reduces the number of animals used, or refinements for animal-based procedures, leading to improvements in animal welfare. Toxicology In Vitro publishes original research papers and reviews on the application and use of in vitro systems for assessing or predicting the toxic effects of chemicals and elucidating their mechanisms of action.

Alternativni pristupi

ZNANSTVENI ČASOPISI

49

Alternativni pristupi

ZNANSTVENI ČASOPISI

Međunarodni časopis o znanosti o laboratorijskim životinjama i njihovoj dobrobiti -publicira recenzirane originalne radove i pregledne članke o svim aspektima upotrebe životinja u biomedicinskim istraživanjima -časopis promovira poboljšanja vezana uz dobrobit životinja koje se koriste, a posebno se fokusira na istraživanja koja smanjuju broj korištenih životinja ili koja zamjenjuju animalne modele s alternativama in vitro The international journal of laboratory animal science and welfare The international journal of laboratory animal science and welfare, Laboratory Animals publishes peer-reviewed original papers and reviews on all aspects of the use of animals in biomedical research. The journal promotes improvements in the welfare or well-being of the animals used, it particularly focuses on research that reduces the number of animals used or which replaces animal models with in vitro alternatives.

50

Alternativni pristupi

Glavna područja djelovanja JRC-a: FOOD, CHEMICALS AND HEALTH Supporting safety standards for food and consumer products Validating alternatives to animal testing Analysing chemical exposure risks Pioneering science for healthier living ENVIRONMENT AND SUSTAINABILITY Predicting, monitoring, damage assessments in Europe and the world Working towards sustainable energy Helping reduce emissions from transport Combating global warming NUCLEAR SAFETY AND SECURITY ... http://webcast.ec.europa.eu/eutv/portal/_v_fl_300_it/player/index_player_documentary.html?id=9453&userlocale=en

51

“Upotreba životinja u istraživanju, podučavanju i testiranju je prihvatljiva samo u slučaju kada obećava da će pridonijeti razumijevanju osnovnih bioloških principa, ili znanju za koje se vjeruje da će biti od koristi ljudima ili životinjama.

Životinje se koriste samo u slučaju kada istraživač nije u svom najboljem nastojanju uspio naći alternativni pristup.

Također je nužno kontinuirano razmjenjivanje znanja, pregledavanje literature i pridržavanja Russell-Burchovih “3R” postavki.

Oni koji koriste životinje trebali bi koristiti najhumanije metode i na najmanjem mogućem broju životinja da bi dobili relevantne informacije.”

HVALA NA PAŽNJI !