Acin Patricia 5

5/26/2018 Acin Patricia 5

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DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA

FACULTAD DE BIOLOGA

UNIVERSIDAD DE BARCELONA

IDENTIFICACIN DE FEROMONAS Y PROTENAS

IMPLICADAS EN LA PERCEPCIN FEROMONAL DELEPIDPTEROS PLAGA

Directoras Tutora

Doctoranda


2/59

4. ESTUDIO DE LA COMPOSICIN FEROMONAL DE LAVARIEDAD DE Spodoptera exiguaENCONTRADA EN

ESPAA


3/59


4/59

Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 47

4.1. INTRODUCCIN

Spodoptera exigua


5/59

48 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa

Figuras 4.1-3. S. exigua

Z E

Z E

Z E Z Z

Z Z Z Z

Z Z

Z E Z Z Z

Z Z Z Z

Z E Z Z E Z

Z E

ZZ E Z

1 2 3


6/59


Z E Z

E Z Z

Z

Z E Z

S. exigua


7/59


4.2. MATERIAL Y MTODOS

4.2.1. Material biolgico

S. exigua


8/59



9/59


4.2.2. Compuestos qumicos

Tabla 4.1.

Z E Z E 1

Z Z 2

Z Z 3

Z E Z E 4

Z Z 5

Z Z 6

7

Z Z 8

Z E Z E 9

1 7 8 9

2 3 4 5 6


10/59


Figura 4.4.

4.2.3. Anlisis de la composicin feromonal

4.2.3.1. Observacin del comportamiento de llamada

1

2

3

4

5

6

7

8

9


11/59


4.2.3.2. Extractos glandulares

1 2 3 4 5 7

6 8 9


12/59


4.2.3.3. Recogida de voltiles

Solid Phase Microextraction

1 6

4.2.4. Estudios electrofisiolgicos

4.2.4.1. EAG


13/59


1

5 1 4 2 6 3

2 1 5 3

1 2 3 4 5 6

4.2.4.1.1. Efecto de las mezclas binarias en la respuesta antenal

1

1 5

1 2 1 3

1


14/59


Tabla 4.2.

Cantidad total

de compuesto 1

MEZCLA A

1 (ng) 5 (ng)

MEZCLA B

1 (ng) 2 (ng)

MEZCLA C

1 (ng) 3 (ng)

1 g

100 ng

10 ng

4.2.4.1.2. Efecto de las mezclas ternarias en la respuesta antenal

1 5 2 3

1 5 2

1 5 3

1 53


15/59


Tabla 4.3.

Cantidad total

de compuesto 1

MEZCLA D

1 (ng) 5 (ng) 2 (ng)

MEZCLA E

1 (ng) 5 (ng) 3 (ng)

MEZCLA F

1 (ng) 5 (ng) 3 (ng)

1 g

100 ng

10 ng

4.2.4.2. GC-EAD

Pheromone Biosynthesis Activating

Neuropeptide


16/59


1 6

4.2.4.3. SSR

4.2.5. Tnel de viento


17/59


18/59


1 5

Tabla 4.5. 1 5

1

Porcentaje 1 (ng) 5 (ng)

(80:20)

(60:40)

(40:60)

(20:80)

(0:100)

1 5

2 3

1 5 3

1


19/59


Tabla 4.6.1

Mezcla 1 (ng) 5 (ng) 3 (ng) 2 (ng) Porcentaje

A

D

E

F

4.2.5.3. Efecto de otros compuestos

4 6

1 5

1

1

4.2.6. Pruebas de campo

1 5 3


20/59


Figura 4.5.

4.2.6.1. Campaa 2006


21/59


Tabla 4.7.

Formulacin 1 (g) 5 (g) 3 (g) 2 (g) 4 (g) Porcentajes(100% total)

F1

F2

F3

4.2.6.2. Campaa 2008

1

2 3 5


22/59


Tabla 4.8:1

Formulacin 1 (g) 5 (g) 3 (g) 2 (g)Porcentajes(100% total)

F2

F4

F5

F6

F7

4.2.7. Immunohistoqumica

S.

exigua


23/59


4.2.7.1. Procedimiento seguido (protocolo Whole-mount)

Figura 4.6. S.exigua

Ratn Anti -sinapsina de Drosophila

sinapsina

Cabra Anti-ratn

Fluorforo (AlexaFluor 488)


24/59


4.2.7.2. Microscopa confocal


25/59


4.3. RESULTADOS

4.3.1. Comportamiento de llamada

Hora de la escotofase

Po

rcentajedehembrasen

llamada(%)

Figura 4.7. S. exigua


26/59


4.3.2. Anlisis de la composicin feromona

4.3.2.1. Extractos glandulares

1 2 3 4 5

Z 6

Figura 4.8.Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5

7 S.exigua

Z 6

1 5 7 6 8 9

A

B

4

7

5

231


27/59


6 8

Z 8

Figura 4.9. 1 9 Z E1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5 Z 6 7 Z

8 Z E 9S. exigua


28/59


Figura 4.10. Z E ZZ

2

1

67.12


29/59


Figura 4.11. Z E ZZ

5

4

6

5


30/59


1 4

2 6 3

5 1 4 2 6 3

Figura 4.12.

S. exigua

4.3.2.2. Recogida de voltiles

1 2 5

3 4

6

6


31/59



Z E 1 Z 2 Z 5 Z3

1

2

5

125

3

3

Estndares

Estndares

Voltiles

Voltiles

4

6


32/59


4.3.3. Estudio de la respuesta antenal de machos mediantetcnicas electrofisiolgicas

4.3.3.1. EAG

Edad

Respuesta(mV)

N=11

N=10

Figura 4.14. S.exigua Z E

N=16


33/59


Hora del fotoperiodo

Respuesta(mV

)


4.3.3.1.1. Actividad de las mezclas encontrada en glndulas y en voltiles

N=10N=10

N=8

N=16

N=10

N=11

N=12


34/59



4.3.3.1.2. Actividad de los compuestos feromonales por separado

1

1

S. exigua1

2 4 3 6

Mezcla sinttica

Respuesta(m

V)

d

c c

b

a

ab


35/59


Figura 4.17. S. exiguaZ

E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5 Z 6

Dosis

Respuesta(mV)

Figura 4.18. S. exigua Z E

Compuesto feromonal

Respuesta(m

V)

aa

bb

d

gfg

de

b

fg

e

c

f ffg

cdede

g

N=10

N=10 N=16

N=10

N=10


36/59


4.3.3.1.3. Actividad de las mezclas binarias

1

1

2 3 5

1

1

1

5

Figura 4.19. S. exiguaZ E 1) Z5) Z 3) Z 2) 1 5 1 2 1 3

4.3.3.1.4. Actividad de las mezclas ternarias

1 5 2 3

Agente estimulante

Respuesta(mV)

bcab

bc

bcab

bc

ab

bc

c

ab

bc

a


37/59


Figura 4.20. S. exigua1 5 1 5 2 1 5 3 1 5 3

Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5

4.3.3.2. GC-EAD

4 6 1

4 5

6

3

Agente estimulante

Res

puesta(m

V)

b

a

aba

b

a

b

aba

b

aa


38/59



Z E 1 Z 2 Z 3) Z E4 Z 5) Z 6

4.3.3.3. SSR

Z

Z

A

2

EAD

1

5 12

4

3

6

45 63

FID

B


39/59


Z E

Z E

Z

Z E

Z E Z

1 2 Z

Z

Z E

Figura 4.22.Z E 1

Z 2 Z5 Z E

4

A

B

C

D

1 seg

1 seg

1 seg

1 seg


40/59


Figura 4.23.Z E 1

Z 5


41/59


Figura 4.24.Z E 1

Z 2Z 3

Tabla 4.9. S. exigua.

Tipo %Tamao

despolarizacin1 2 3 4 5

I

II

III

IV

V

VI

A

B

C

1 seg

1 seg

1 seg


42/59


4.3.4. Estudios de comportamiento en tnel de viento

S. exigua

4.3.4.1. Mezclas halladas en glndulas y voltiles


Fuente de atraccin

Respuesta(%

a

bb

c

a

c

bab

bab

a

c


43/59


4.3.4.2. Combinaciones binarias

1

Z E

Z

1

2 3

5


44/59


Figura 4.26. S. exiguaZ E 1

1 5 1 2 1 3 Z 2 Z 3 Z 5

4.3.4.3. Combinaciones ternarias

1 5

Z 1 5 2 Z 1 5 3

1 5 3

Fuente de atraccin

Respuesta(%

)

a

b

b

b

a a

b

b bc bcc

b

c


45/59



1 5 1 5 2 1 5 3 1 5 3 Z E1 Z 2 Z 3 Z 5

4.3.4.4. Efecto de los compuestos no encontrados en voltiles

4

6

Fuente de atraccin

Respuesta(%)

a a aba a a

cd

ab bc

c

ab

b

d

d

e

f

de

c

e

e


46/59


Figura 4.28. S. exigua1 5

Z E 1 Z E4 Z 5 Z 6

4.3.4.5. Estudio de la proporcin ms atractiva

5

1

1 5

Fuente de atraccin

Respuesta(%

a a a a a aab

aab ab

cde

bc

de debcdcd

ef

cdde

f

)


47/59


Figura 4.29. S. exiguaZ E 1 Z 5 1

5

4.3.5. Pruebas de campo

4.3.5.1. Campaa 2006

Fuente de atraccin

Respuesta(%)

aabbc

d

a abbc

d

a abbc

de

cd

efef

g

d

ef

fg


48/59



1 5 1 5 31 5 2 4 Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z

5


1 5 1 5 3 1 5 2 4Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5

Formulacin

Mediademachoscapturados/trampa

*

Formulacin

Mediademachoscaptura

dos/trampa

*


49/59


4.3.5.2. Campaa 2008


1 5 3 1 51 5 1 5 2 1 5 3 Z E 1 Z 2 Z

3 Z 5

Formulacin


ab

a

abc

bcc

abc

c


50/59



1 5 31 5 1 5 1 5 2 1 5 3

Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5

2

1 5

Formulacin

Mediademachoscapturados/trampa a

aab

ab b b

b


51/59



1 5 31 5 1 5 1 5 2 1 5 3

Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5

4.3.6. Estudio de los lbulos antenales-Immunohistoqumica

Formulacin


ab

abcbc bc

c

a

bc


52/59



Ca

SOG

OLAMMC

ALLa Me

Lo

A B


53/59


Figuras 4.36. S. exigua

B

D

F

A

C

E

A

C

E


54/59


4.4. DISCUSIN

S. exigua Z Z E Z E

Z Z Z

S. exigua

Z

Z Z

Z Z

Z E Z

Z Z

Z Z

Z E Z E

Spodoptera eridania Z

Heliothis subflexa


55/59


Heliothis micaceae

H.

subflexa

Z E

Z

Z E Z E

Z E Z

Z E

Z E Z

Z

Z


56/59


Argyrotaenia velutinana Grapholita

molesta Trichoplusia ni

S. exigua Z E

Z E

Z

Z E

Z

Z


57/59


Z E Z

Z E

Z Z Z

Z

Z Z

Z Z E Z Z Z

Z

Z E Z Z

Z E Z Z


58/59


Z E Z

Z E Z

Z

Z E

Z Z Z

Z E

Z

Z E Z

Z E

Z

Z Z E

Z E Z Z


59/59


Z

S. exigua

Z E

Z

Z Z

S. littoralis

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