9. Fluorometría
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7/23/2019 9. Fluorometra
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9.Espectrofotome
tra
deuorescencia
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LUMINISCENCIA MOLECULAR
I. Fuorescencia
II. Fosforescencia
III.!uimiouminiscencia
Fotones
Rx.
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Fuorescencia
Fundame
nta
E"citado
# $
#%
$
Fuorescencia de
resonancia
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Fundame
nta
E"citado
# $
#&
$
Desplazamiento deStokes
Fuorescencia
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Estados singulete y triplete
Sin'ueteFundame
nta
Sin'uete
E"citado
(ripete
E"cita
do
FLUORESCEN
CIA
FOSFORESCENC
IA
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A)sorci*n + emisi*n ener'aradiante
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,rocesos de desacti-aci*n
Relajacin vibracional
A
/
/
/
/
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A)sorci*n + emisi*n ener'aradiante
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,rocesos de desacti-aci*n
Conversin interna
E"citado$
E"citado
#
0E
Nivelesenergticos
prximos
Solapamientonivelesvibracionales
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,rocesos de desacti-aci*n
Conversin interna
E"citado$
E"citado
#
Ener'ae/ui-aente aenace d1)i
Con-ersi*n interna
predisociaci*n
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,rocesos de desacti-aci*n
Conversin interna + Relajacinvibracional
E"citado$
E"citado
#
Fundame
nta
# $
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,rocesos de desacti-aci*n
Conversin interna + Relajacin
vibracional
Espectros de e"citaci*n + emisi*n de una
disouci*n de /uinina
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A)sorci*n + emisi*n ener'aradiante
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,rocesos de desacti-aci*n
Cruce entre sistemas
Sin'uete2
(ripete2
r, I, O
2
lofavorecen
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Factores /ue afectan auorescencia
Rendimiento 3o e4ciencia5
cu6ntico3a5 %
%fotones
7uorescentes8fotones totaesa)sor)idosEstructur
aAm)ient
e
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(RANSICIONESELEC(RNICAS
2#::: ; #:: s
n2; #:0?s
kces
0
2 & kcesn0
2
ces % cruce entre
sistemas
ESin'uete2=(rip
ete2
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ES(RUC(URA@condensaci*n anios
,iridina (iofenoFurano
!uinoinaIndo
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ES(RUC(URA@ sustitu+entes
(omado de Soo' +B
n 0 2 & 02
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ES(RUC(URA@ ri'ide
#.::.$
Con-ersi*n
interna
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ISOLDEN(
E
CC$0 I
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p@
resonancia
Sustitu+entes 6cidos 3o
)6sicos5@ estado i*nico % f
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CONCEN(RACIN
A
/
/
/
/
A
A
A
AA
A
autoamorti'ua
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CONCEN(RACIN
autoa)sorci*n
A A
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ES,EC(ROS E
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ES,EC(ROS E
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ES,EC(ROS E
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Instrumentaci*n uorometra
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INS(RUMEN(OS E OLE AK
omado de Skoog ! cols "#$
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ES,EC(ROFLUORME(RO
Arco
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apicaciones
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ANLISIS CUAN(I(A(IDO
Kr + Sn
Ri)oa-ina 3-it
$5
N = N
OH
OH
SO3
N
aA@ F0
Granate de aliarina R
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ANLISIS CUAN(I(A(IDO
ARENALINA
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ANLISIS CUAN(I(A(IDO
EJempo ! muestra de ! " de cereal se tratcon #cido y una $e%ue&a cantidad de '(nO)
$ara o*idar la riboavina ,Rb- $resente. Ele*ceso de '(nO)fue eliminado con H/O/.
0a disolucin anterior se trans1ri a unmatra de 2 m0 y se diluy 4asta la marca.
5na al6cuota de /2 m0 de esta disolucin setrans1ri a una celda7 se a"re" una $e%ue&acantidad de ditionita de sodio $ara convertirla Rb8o*idada a Rb y se ley la uorescencia
relativa7 en un e%ui$o $reviamente ajustado
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0a lectura de intensidad de emisin relativa7re"istrada como R95 en el e%ui$o fue de unidades para e )anco y ? unidadespara a muestra.
5na se"unda de /) m0 tomada a $artir de la
disolucin de la muestra o*idada7 se adicioncon ! m0 de una disolucin est#ndar de Rb de.2 ":m0.
Esta al6cuota se trans1ri a una celdae%uivalente a la em$leada $ara el blanco y lamuestra sin adicin de est#ndar7 y fue tratadacon ditionita de sodio $ara obtener Rb. 0a
lectura de esta fue de 9? unidades.
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ANLISIS CUAN(I(A(IDO
EJempo $ una $astilla antimalaria esanaliada $ara determinar laconcentracin de %uinina. ;ara tal$ro$sito una tableta de !.
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;osteriormente7 una disolucin $atrn de%uinina de concentracin e%uivalente a
! $$m $ro$orciona una lectura de #P:unidades7 cuando es tratada y le6da bajolas mismas condiciones %ue la muestra$roblema.
Calcular la masa7 en m"7 de %uinina$resente en la tableta farmacutica.
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ANLISIS CUALI(A(IDO
Fuorocromo marcador colorantecon ca$acidad de uorescer al sere*citado a una en $articular.
Fuor*foro "ru$o funcional de
una molcula ,fuorocromo- %ue leim$arte la $ro$iedad deuorescencia.
&ttp'(())).medic.ula.ve(&istologia(anexos(microscop)eb(*+
N+,-(capitulo/
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ANLISIS CUALI(A(IDO
&ttp'(())).medic.ula.ve(&istologia(anexos(microscop)eb(*+
N+,-(capitulo/
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ANLISIS CUALI(A(IDO
Fi'. I. Espectros e"citaci*n ; emisi*nEs$ectro e*citacin ,l6nea continua- y es$ectro deemisin ,l6nea $unteada- de uoresce6na y
rodamina.
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Microscopia de uorescencia
@>;AB aul
G9;B verde
RO@>(AN>BrojoFi'. II.
C1ua en
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,rocesos ceuares
Fi'. III. Ca$T. Gradientes de Ca/+en un leucocito7monitoriados con 9ura / ,i%uierda-. (odi1cacin "radiente de
Ca/+$or %uimiota*is ,derec4a-
omado de 0odis& ! cols. iol. 1elular !*olecular "#$ edic%
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E"presi*n '1nica
cNA %exas2red3enoma 4
F51
omado de 1orval6n 7. "899/%. :er;les de expres. gnica en decisiones
Fi'. ID. ;er1l de e*$resin "nica7 an#lisis
tumoral
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FOSFORESCENCIA
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FOSFORESCENCIA,rocesos de desacti-aci*n. 1ruce
entre sistemas
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Fosforescencia@ caractersticas
,ro)a)iidad
t#=$#:0Q;#:s
Re/uiere
(
-iscosidad
Sin'uete2
(ripete2
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!uimiouminiscencia
0uminol"qumica
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!uimiouminiscencia
R"
/umica
ener"6a
Anaito
lu
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!uimiouminiscencia
eterminaci*n Nor'6nico
muestra
##:: C NO O
LUK NO$
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!uimiouminiscencia
NO
cataiad
or
CO$0
CO$0
N$
u
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